DETERMINACIN DE LOS COEFICIENTES DE RENDIMIENTO DE

Saccharomyces cereviciae EN SISTEMAS POR LOTE.

DETERMINATION OF THE COEFFICIENTS OF PERFORMANCE OF
Saccharomyces cereviciae IN BATCH SYSTEMS.
Camacho Tarsis, Carvajal Cristian
tarsis_92_93@hotmail.com cristian_car_2102@hotmail.com

UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOS
CARRERA DE INGENIERA BIOQUMICA
Ambato, Tungurahua, Ecuador
11, Junio del 2014

Resumen
Este proyecto de investigacin se basa en un anlisis del crecimiento de la levadura
(Saccharomyces cerevisiae) la cual fue aislada y se cultiv en un medio de cultivo
lquido YEPD, en donde se obtiene levaduras con ausencia de contaminacin, se
Yx /s y Yp /s , para esto se estim el
determin de los coeficientes de rendimiento
incremento de la masa celular y por ende el consumo de sustrato en la cual fue
determinado por la cuantificacin de los azucares reductores, el principal objetivo de
este trabajo de investigacin es la extraccin de la invertasa producida por este
microorganismo ya que la invertasa en este caso es un producto de las distintas
reacciones metablicas de este microorganismo.
Palabras claves: Saccharomyces cerevisiae, coeficientes de rendimiento ( Yx /s
Yp /s , azucares reductores, invertasa.

Abstract
This research project is based on an analysis of the growth of yeast (Saccharomyces
cerevisiae) which was isolated and cultivated in YEPD liquid medium, where no
contamination with yeast is obtained, we determined the coefficients of performance (
Yx /s y Yp /s , for this increased cell mass was estimated and thus the
consumption of substrate which was determined by quantification of reducing sugars,
the main objective of this research is the extraction of invertase produced by this
microorganism as invertase in this case is a product of various metabolic reactions of
this microorganism.
Keywords: Saccharomyces cerevisiae, rates of yield ( Yx /s
sugars, invertase.
I.

INTRODUCCIN

II.

La levadura
de
panificacin
(Saccharomyces cerevisiae), es

Yp /s , reducing

hongo unicelular,
tipo
de levadura utilizado
industrialmente en la fabricacin
de pan, cerveza y vino. El ciclo de

III.

IV.

vida de las levaduras alterna dos

formas,
una haploide y
otra diploide. Ambas formas se
reproducen de forma asexual
por gemacin. S. cerevisiae es uno
de los modelos ms adecuados para
el estudio de problemas biolgicos
porque
posee
un
rpido
crecimiento. Una ventaja adicional
de este microorganismo consiste en
que se conoce la secuencia
completa de su genoma y se
mantiene en constante revisin

V.

Las caractersticas bioqumicas de

la invertasa es que puede estar
presente en diversas isoformas, las
cuales desempean
la misma
funcin de hidrlisis; pero, difieren
en
tamao,
propiedades
bioqumicas y localizacin celular.
Por su localizacin subcelular, la
invertasa puede clasificarse en:
extracelular;
intracelular,
peri
plasmtica vacuolar, en el caso de
plantas (VARGAS, 2004).

(Canter, 1998).

VI.

Las invertasas dependiendo de su

pH ptimo se pueden clasificar en:
acidas, bsicas o neutras. El rango
de pH ptimo reportado en la
literatura es de 3.5-7.8; su
temperatura ptima se encuentra
entre 50-60C (SANCHEZ, 1999).

VII.

La
sacarosa
es
hidrolizada
enzimticamente por la invertasa.
El nombre oficial de la invertasa es
-fructofuranosidasafructohidrolasa
(E.C. 3.2.1.26) tambin conocida
como beta-fructosidasa o sacarasa.
Acta sobre el enlace 0 glicosdico
de
la
sacarosa
produciendo una mezcla equimolar
de los monosacridos
-Dglucopiranosa y -D-fructofuranosa
en
cantidades
equivalentes
(CANTER, 1998).

Las fuentes de carbono utilizadas

por estas levaduras varan desde
los
carbohidratos
hasta
los aminocidos.
Adems,
la
capacidad de utilizar ciertos tipos
de
azcares
ha
sido
tradicionalmente empleada para la
caracterizacin de las distintas
razas que esta especie presenta.
Entre los azcares que puede
utilizar estn monosacaridos como
la glucosa, fructosa, manosa y galac
tosa, entre otros. Tambin son
capaces de utilizar disacridos
como la maltosa y la sacarosa y
trisacridos como la rafinosa. La
invertasa es producida de manera
comercial
principalmente
por
Saccharomyces cerevisiae y por
cepas de hongos del gnero
Aspergillus como A. niger, A.
oryzae y A. ficcum (VARGAS,
2004).
Tanto en la bacterias como hongos
la invertasa puede ser intracelular o
extracelular. En Saccharomyces
cerevisiae la enzima extracelular
tiene
un
peso
molecular
aproximado de 270 KDa y la
intracelular es de 60 KDa
(SANCHEZ, 1999).

VIII.

IX.

Figura 4. Reaccin de hidrlisis de

sacarosa por la enzima invertasa
.Los procedimientos operativos
estandarizados POE describen una
secuencia especfica de eventos
para ejecutar una actividad,
aseguran la estandarizacin de

XII.

Determinar las condiciones de

crecimiento de Saccharomyces
cerevisiae para la produccin
de invertasa como producto
metablico.

XV. MATERIALES Y MTODOS

XVI.
XVI.1. Preparacin del medio YEPD
XVII.
XVII.1.1.
ml):

Medio

lquido

(1200

XVIII. Se disolvi los componentes del

medio en agua caliente, se enfri
y se regul el pH del medio con
HCl 1M hasta un valor final de
5.4.
XVIII.1.1.

Condiciones de cultivo

XIX. Se utiliz una temperatura de

crecimiento: 20C (Temperatura
ambiente),
pH
5.4,
una
velocidad de agitacin alta
(agitador
magntico),
una
velocidad de alimentacin para
el sistema por lote alimentado:
0,5 ml/min.
XIX.1.1.
XX.

X.
XI.

levadura, que se obtuvo en la

prctica anterior, y se inocul30
ml del medio de cultivo estril.

XIII. OBJETIVO
XIV.

operaciones durante el proceso, y

establecen
lmites
operativos,
monitoreo de procedimiento y
acciones. (SANZ, 2010).

Obtencin del inculo

Se utiliz un asa estril para

tomar una porcin de clulas de

XXI. Se tap con papel aluminio e

incub a temperatura ambiente
aproximadamente a 20C toda la
noche con una agitacin
mediante el empleo de una
plancha de agitacin magntica.
XXI.1. Estimacin del incremento de
la masa celular
XXII. Las concentraciones de levadura
X (g/l o g/kg) determinadas para
la obtencin de la curva de
crecimiento, se utiliz el clculo
del coeficiente de rendimiento
de biomasa y para estimar la
velocidad de crecimiento celular.
XXII.1.
Determinacin
consumo de sustrato

del

XXIII. En los sobrenadantes de la

prctica anterior determinamos
la cantidad de azcar consumido
de la siguiente manera:
XXIV. Se diluy los sobrenadantes de
las muestras tomadas a los
tiempos especificados y se
determin el contenido de
azucares reductores con solucin
de DNS.
XXIV.1.
Cuantificacin
azucares reductores

de

XXV.
Preparacin de la solucin de DNS
(l00 ml): se disolvi 1 g de DNS
(solido) en 40 ml de agua destilada
con ayuda de un agitador magntico.
Se aadi 20 ml de solucin de
NaOH 1M. A continuacin se
agreg lentamente 30 g de tartrato
de sodio y potasio. Se agit hasta
que se disolvi. Se afor la solucin
a 100ml.
XXVI.
b Determinacin del contenido de
azucares reductores: se coloc 0.6
ml de los sobrenadantes (diluidos si
necesario) en tubos de vidrio
resistentes al calor. Se aadi 0,6 ml
de solucin de DNS y se mezcl
bien. Se hirvi la mezcla por
minutos en un bao mara a
ebullicin, transcurrido este tiempo,
se enfri en un bao de agua fra. Se
diluy la solucin con 6 ml de agua
destilada, se agit bien y se ley la
absorbancia a 540 nm.

XXVII.
Preparacin de la curva estndar de
glucosa: se calent la glucosa por 4
h a 60C y se enfri en un
desecador. Se prepar 25 ml de
solucin de glucosa de una
concentracin igual a 1 mg/ml
(solucin madre). A partir de esta
solucin se prepar una curva
estndar de la siguiente manera: en
tubos secos, se pes las alcuotas de
la solucin madre de glucosa de
0.l2, 0.24, 0.36, 0.48 y 0.60 ml; se
aadi 0.48, 0.36, 0.24, 0.12 y 0.0
ml
de
agua
destilada,
respectivamente, y se determin el
peso de la mezcla. Se prepar
adems un blanco con 0.5 ml de
agua destilada. A cada tubo,
incluyendo el blanco se aadi 0.6
ml de solucin de DNS y se
procedi como se describe en el
paso b.

XXVII.1.
Extraccin
de
la
invertasa (producto metablico)
XXVIII.
XXVIII.1.1. Preparacin
de
tampones de actividad (100ml)
y Tampn de Extraccin
(100ml)
XXIX.

NaCl para que la concentracin en

el tampn sea 0.5 M.
XXXI.
XXXI.1.1.
Obtencin
de
un
extracto crudo de invertasa a
partir del cultivo de levadura.

a. Tampn de actividad. Se prepar

200 ml de acetato de sodio 0.1 M y
100 ml de cido actico 0.1 M, se
aadi bajo agitacin a 120 ml de la
solucin de acetato, el cido actico
hasta que el pH del tampn sea 5.0.
XXX.
b. Tampn de extraccin. se mido
100 ml de tampn de actividad y se
aadi la cantidad necesaria de

XXXII.
Se centrifug el caldo de
cultivo obtenido durante el
crecimiento
durante
el
crecimiento de la levadura, en
tubos de centrifugacin tarados,
para separar las clulas de
levadura del sobrenadante (se
registr los pesos de la
levadura). Se utiliz 2 de los
tubos para determinar el peso
seco de la levadura. A
continuacin se removi la

levadura sedimentada y se
coloc sobre un mortero. Se
mezcl la levadura con arena
lavada y seca en proporcin 1:1
y se moli. Se suspendi la
mezcla en el tampn de
extraccin utilizando 7.5 ml por
cada gramo de levadura
utilizado en la molienda. Se
agito la mezcla durante 15
minutos con un agitador
magntico, se centrifugo y
despus se tom el sobrenadante
como extracto enzimtico.
XXXIII.
XXXIII.1.1. Cuantificacin de la
actividad de la invertasa en el
extracto crudo
XXXIV.
a. Preparacin
del
sustrato
(Sacarosa 0,2M). Se pes la
cantidad necesaria de sacarosa para
obtener 25 ml de solucin, el
diluyente de la solucin ser el
tampn de actividad.
XXXV.

b. Determinacin de la actividad. Se
etiqueto 6 tubos de ensayo como b0,
1, 2, 3, 4 y 5, y se coloc 0.45 ml de
solucin de sacarosa. Y se incubo a
55 C por 10 minutos. Se aadi al
sustrato 0.15 ml del extracto de la
levadura que contiene la actividad
de la invertasa para que el extracto
hidrolice la sacarosa. Se incubo cada
tubo por tiempos variables (las
cuales se determin en un ensayo
preliminar). Se detuvo la reaccin
mediante la adicin de 0.6 ml de
solucin de DNS. Se hirvi por 5
minutos
y se dej enfriar
inmediatamente en un bao de agua
fra. Se aadi 5.0 ml de agua
destilada,
se
determin
la
absorbancia a 540 nm
y se
determin la actividad enzimtica de
la invertasa.
XXXVI.
XXXVII.
XXXVIII.
XXXIX.
XL.
XLI.
XLII. RESULTADOS
XLIII.
XLIV.
XLV.
XLVI.
XLVII.
Tabla N2: Datos obtenidos sobre la concentracin de clulas de
levaduras en los diferentes intervalos de tiempo durante el proceso de
Fermentacin

XLIX. P.
T L.
u
XLVIII.
b
Tiempo
o
V
.
LVIII.
LIX.
g
LX.
h
r
LXIX. 5,
4 LXX.
LXVIII.
8
0
0
1

LI.
P.
tu
bo
+
m
gr

18,
08
7

LXXVIII.LXXIX. 5, LXXX. 17,

M
u LII.
P.
e
tu
s
bo
t
+
r
res
a
LXI.
g
LXII. gr
r
LXXI. 1
2
, LXXII. 5,4
6
94
0
2
6
9
LXXXI. 1 LXXXII.

LVI.
LIII.
residuo

LXIII.
gr

LV.
LIV.

X
me
dia

LXIV.

gr/ LXV.
L

gr/
L

de
LVII.
sv.
Es
ta
nd

LXVI.

de
sv.
Re
l.

LXVII.

LXXIV. 1,1 LXXV. 1,0 LXXVI. 0,0

18
93
35
LXXIII.
LXXVII.
43
37
43
0,0141
3,24083845
51
90
46
4
6
5
LXXXIII.LXXXIV.

LXXXV.

LXXXVI.

LXXXVII.

4
8
1
5

LXXXVIII.
LXXXIX.
1
5,4593

55
65

XC.

XCIX. 5,
4 C.
XCVIII.
1
1
4
8
CIX.
CVIII.
2

5,
4 CX.
4
9
2

CXIX. 5,
CXX.
CXVIII.
4
2
7
9

15,
53
95

15,
49
43

15,
50
15

15,
73
01

CXXIX. 5,
4 CXXX. 15,
CXXVIII.
4
53
3
9
92
6

CXXXVIII.
CXXXIX.
3
5,463

CXL.

CXLIX. 5,
4 CL.
CXLVIII.
5
4
0
3
CLVIII. CLIX.
4

5, CLX.
4
1
6
7

15,
47
99

15,
45
85
15,
42
41

2
,
0
7
5
XCI.
1
0
,
0
8
0
2
CI.
1
0
,
0
7
9
5
CXI.
1
0
,
0
5
2
3
CXXI. 1
0
,
2
5
1
1
CXXXI. 1
0
,
0
8
9
6
CXLI. 1
0
,
0
1
6
9
CLI.
1
0
,
0
0
8
2
CLXI. 1
0
,
0
0
7

5,4944

0,0129

1,06832298

XCIV. 1,0 XCV.

21
80
51
2

XCII.

5,4
XCIII.
69
0,0103
6

CII.

5,4
CIII.
26
0,0115
3

1,1
40
92
96
1

5,4
CXIII.
62
0,0129
1

CXIV. 1,2
83
28
84

CXXII. 5,4
CXXIII.
92
0,0136
6

CXXIV. 1,3
26
68
68
9

CIV.

CXII.

CXXXII.
5,4645

CV.

CXV.

CVI.

5,4
CLIII.
68
0,0179
2

CXLIV. 1,9
76
65
94
5

CXXV.

CLIV.

1,7
88
53
34

CLXII. 5,4 CLXIII. CLXIV. 1,9

36 0,0198
78
5
53
58
8

CXLV.

CLV.

CLXV.

CVII.

1,3 CXVI. 0,0 CXVII. 2,3

04
30
51
98
68
54
76
73
46
5
7
3

CXXVI.

CXXXIII. CXXXIV.
CXXXV.
0,0149 1,47676816 1,7267138

CXLII. 5,4
CXLIII.
82
0,0198
8

CLII.

1,0 XCVI. 0,0 XCVII. 7,7

81
84
89
36
23
55
73
37
74
7
3
6

CXXVII.

CXXXVI.
CXXXVII.
0,35347652 20,4710543

CXLVI.

1,8 CLVI.
83
53
46
4

CXLVII.

0,1 CLVII. 7,1

34
32
35
97
20
43
4
3

CLXVI.

CLXVII.

4
CLXIX. 5,
CLXXI. 9
4 CLXX. 15,
,
CLXVIII.
2
35
9
5
1
09
2
9
9
CLXXVIII.
CLXXIX. CLXXX.
CLXXXI.
5
5,4564
15,5056
10,0492
CXCI. 9
,
CXC. 15,
CLXXXVIII.
CLXXXIX.
9
45
6
5,4707
8
58
5
1
CCI.
9
CXCIX. 5,
,
4 CC.
15,
CXCVIII.
9
6
41
6
4
9
65
6
6
9
CCXI. 1
CCIX. 5,
0
5 CCX. 15,
,
CCVIII.
1
57
0
7
0
43
6
6
3
7
CCXXI. 1
CCXIX. 5,
0
4 CCXX. 15,
,
CCXVIII.
4
47
0
7
0
83
3
4
7
9
CCXXVIII.
CCXXIX. CCXXX.
CCXXXI.
8
5,4486
15,4746
10,026
CCXLI. 1
0
CCXL. 15,
,
CCXXXVIII.
CCXXXIX.
59
1
8
5,4782
7
1
8
8
CCLI. 9
,
CCL. 15,
CCXLVIII.
CCXLIX.
9
39
9
5,4814
1
38
2
4
CCLXI. 9
CCLIX. 5,
,
4 CCLX. 15,
CCLVIII.
6
9
12
9
3
2
46
1
8
8
CCLXVIII.

CLXXII.
5,4478
CLXXXII.
5,4822

CLXXV.2,5
87
CLXXIII. CLXXIV.
CLXXVI.
CLXXVII.
94
0,0259 2,6085205
0,02909882 1,12439899
45
2
CLXXXIII.
CLXXXIV. CLXXXV. CLXXXVI. CLXXXVII.
0,0258 2,56736855

CXCII. 5,4
CXCIII.
99
0,0292
9

CXCIV. 2,9 CXCV. 2,6 CXCVI. 0,4

24
13
39
CXCVII.
35
29
91
16,8337198
72
10
40
9
5
9
CCIV.

CCII.

5,4
CCIII.
92
0,0229
5

CCXII. 5,5
CCXIII.
49
0,039
6

2,3
02
22
48
1

CCV.

CCVI.

CCVII.

CCXIV. 3,8 CCXV. 3,6 CCXVI. 0,3

75
51
16
CCXVII.
31
16
99
8,68210567
42
29
78
5
4
2

CCXXII.
5,4748

CCXXIII. CCXXIV.
CCXXV.
0,0344 3,42701163

CCXXXII.
5,4724

CCXXXIII.
CCXXXIV. CCXXXV. CCXXXVI. CCXXXVII.
0,0238 2,37382805 2,42223837 0,06846254 2,82641612

CCXLII.5,5
CCXLIII. CCXLIV.
03
0,025 2,47064869
2

CCLII. 5,5
CCLIII.
07
0,0262
6

CCXLVI.

CCXXVII.

CCXLVII.

CCLIV. 2,6 CCLV. 2,4 CCLVI. 0,2 CCLVII. 9,3

43
79
31
52
15
20
86
40
40
07
49
91
3
2
9
3

CCLXII.5,5
CCLXIII. CCLXIV.
15
0,0223 2,31524741
1

Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL

CCLXIX.Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

CCXLV.

CCXXVI.

CCLXV.

CCLXVI.

CCLXVII.

CCLXX.

CCLXX.1. Clculo de la velocidad de crecimiento mxima, con la seccin de la

grfica con tendencia lineal.
CCLXXI.
CCLXXII. Tabla N2: Datos tomados para graficar la curva de crecimiento y
obtener los datos para la obtencin de la velocidad mxima de crecimiento.
CCLXXIII. CCLXXIV. CCLXXV.
Tiempo (h)
x media
Ln x media
CCLXXVI. CCLXXVII. CCLXXVIII.
1,09337906 0,08927296
0
CCLXXXI.
CCLXXIX. CCLXXX.
1
1,08136737 0,07822632
CCLXXXII. CCLXXXIII. CCLXXXIV.
1,30498765 0,26619358
2
CCLXXXV. CCLXXXVI. CCLXXXVII.
3
1,7267138 0,54622006
CCXC. 0,6
331
CCLXXXIX.
CCLXXXVIII.1,88353464
501
4,5
4
CCXCIII.
CCXCII.
CCXCI. 6
2,58794452 0,95086394
CCXCIV.
8
CCXCVII.
10

CCXCV.2,6
132
910
5
CCXCVIII.
3,65116294
CCCI.

CCC.

23

CCCIII. 30

2,4
222
383
7

CCCIV. 2,4
792
007
2

CCXCVI.
0,96061037
CCXCIX.
1,29504573
CCCII. 0,8
846
920
6
CCCV. 0,9
079
362
2

CCCVI. Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL

CCCVII. Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

CCCVIII.
CCCIX. Grafica N1: Curva de Crecimiento de Saccharomyces Cerevisiae

Curva de crecimiento
1.4
1.2
f(x) = 0.28 ln(x) + 0.23
R = 0.64

1
0.8

Ln x 0.6
0.4
0.2
0

10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32

Tiempo (h)

CCCX.
CCCXI. Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL
CCCXII. Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

CCCXIII.
CCCXIV.

CCCXV.

Velocidad de crecimiento mxima:

lnX =lnXo+ t

CCCXVI.
CCCXVII.

lnX ln Xo
t

CCCXVIII.

0.9508+0.2661
62

CCCXIX.

=0.1711 h1

CCCXX.
CCCXX.1.
CCCXXI.

Clculo del nmero de generaciones de Saccharomyces cerevisiae:

CCCXXII.

n=3.32log (

X
)
Xo

CCCXXIII.

n=3.32log (

2.5879
)
1.3048

CCCXXIV.

n=0.9873

CCCXXV.
CCCXXV.1. Clculo del tiempo de duplicacin de los microorganismos
(Saccharomyces cerevisiae):

CCCXXVI.
CCCXXVII.

G=

t
n

CCCXXVIII.

G=

62
0.9873

CCCXXIX.

G=4.0514 h

CCCXXX.
CCCXXXI.
CCCXXXI.1. Cuantificacin de glucosa (Curva estndar):
CCCXXXII.
CCCXXXIII. [Glc] = 1.5426*Abs + 0.0128
CCCXXXIV.
CCCXXXV. Tabla N3: Concentraciones de glucosa y Absorbancia

CCCLVII.

Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL

CCCLVIII.

Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

CCCLIX.

CCCLX.

Grafico N2: Realizacin de la grfica Glucosa vs Tiempo de

reaccin
CCCLXI.

Glucosa vs Tiempo
1.2
f(x) = 0.22x - 0.02
R = 1

1
0.8

[Glc] mg/ml 0.6

0.4
0.2
0
0.5

1.5

2.5

3.5

t (min)

CCCLXII.

Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL

CCCLXIII.

Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

CCCLXIV.
CCCLXV.
CCCLXVI.
CCCLXVII.

Calculo para cantidad total de Actividad:

CCCLXVIII.
CCCLXIX.
VT
0,50 ml
CCCLXX. CCCLXXI.
VE
0,10 ml
CCCLXXII.CCCLXXIII.
Vextracto
6,00 ml
CCCLXXIV.

4.5

5.5

CCCLXXV.
mgGlc
342 mg Sac
ml min
1mmol Sac
360 mgGlc
103 umol Sac
342mg Sac
0.5 ml mezcla Rx
1 mmol Sac
0.2243
1
0.10 ml de invertasa

CCCLXXVI.

3.1152

U invertasa
ml extracto de enzima

CCCLXXVII. Cantidad total de Actividad (UE)=

3.1152

UI
6 ml En=18.6912unit . de invertasa
ml En.

CCCLXXVIII.
CCCLXXVIII.1.
Clculo del rendimiento en funcin del sustrato consumido
CCCLXXIX.
CCCLXXX. Tabla N4: Concentraciones de glucosa y Absorbancia
CCCLXXXV.CCCLXXXVI.
CCCLXXXIII. P
P. leva.
P. leva.
CCCLXXXII.
.t + lev. CCCLXXXIV.
Sec
Centr
CCCLXXXI. Pt. Vacio
Centri. Pt+ lev.seca
a
i.
CCCLXXXVII.
CCCLXXXVIII.
CCCLXXXIX. 6 CCCXC.
CCCXCI. CCCXCII.
Peso 1
5,4658
,2968
0,831
CCCXCIII. CCCXCIV. CCCXCV.
6 CCCXCVI. CCCXCVII. CCCXCVIII.
Peso 2
5,4245
,2542
0,8297
CCCXCIX. CD.
5,4
CDII. 5,6 CDIII. 0,1 CDIV. 0,858
Peso 3
753 CDI. 6,334
307
554
7
CDV. Pes CDVI. 5,4
CDVIII.
CDIX. 0,0 CDX. 0,541
o4
794 CDVII. 6,0208
5,5781
987
4
CDXI.

Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL

CDXII. Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

CDXIII.
CDXIV.

0.1554
g levadura seca
=0.1809
0.8587
g de levaduraempaquetada

0.0987
g levadura seca
CDXV. 0.5414 =0.1823 g de levaduraempaquetada
CDXVI.

CDXVII.

Promedio=0.1816

g de levadura seca
g de levadura empaquetada

CDXVIII.
CDXIX.

Suma de los gramo de levadura empaquetada 1 y 2

CDXX.

0.831+.8297= 1.6607 g de levaduras empaquetadas

CDXXI.
1.6607 g de levadura
CDXXI.1.
CDXXII.

empaquetada0.1816 g de levadura seca

=0.3015 g de levadura seca
1 g de levaduraempaquetada

Calculo del rendimiento de las unidades de invertasa

Yp /x=

18.6912uI
0.3015 g de levadura seca
61.9940

CDXXIII.

uI
g de levadura seca

CDXXIII.1. Calculo total de las unidades de invertasa

CDXXIV.
CDXXV.

0.831 + 0.8297 + 0.8587 + 0.5414 = 3.0608 g de levaduras empaquetadas

3.0608 g de levadura

CDXXVI.
CDXXVII.

61.9940

empaquetadas0.1816 g de levadura seca

1 g de levaduraempaquetada
0.5558 g de levadura seca

uI
0.5558 g de levadura seca=34.4562 uI
g de levadura seca

CDXXVIII.
CDXXVIII.1. Clculo del rendimiento en funcin del sustrato consumido
CDXXIX.
CDXXX.
CDXXXI.
[Glc] = 1.5426*Abs + 0.0128
CDXXXII.
CDXXXIII. Tabla N5: Concentraciones de sacarosa y Absorbancia
CDXXXIV.

CDXXXV.
T (h)

CDXXXVIII.
Abs
CDXL. [Sa
pr
c]
CDXXXVI. CDXXXVII.
o CDXXXIX.
mg/
Abs 1
Abs 2
m.
F.D
ml

CDXLVI.
CDXLIV.
CDXLV.
4,073694
0,5265
5,00
5
CDL. 0,
CDLII. 4,1
CDXLVII. CDXLVIII. CDXLIX.
53 CDLI. 5,
084
1
0,515
0,547
1
00
03
CDLIV.0, CDLV. 0, CDLVI.0,
CDLVIII.
46
46
46 CDLVII.
3,595488
CDLIII.2
5
4
45
5,00
5
CDLX. 0,
CDLXIV.
CDLIX.
40 CDLXI.
CDLXII.
CDLXIII.
2,909031
3
6
0,345
0,3755
5,00
5
CDLXX.
CDLXV.
CDLXVI. CDLXVII. CDLXVIII. CDLXIX.
2,060601
4,5
0,254
0,277
0,2655
5,00
5
CDLXXI. CDLXXII. CDLXXIII. CDLXXIV. CDLXXV. CDLXXVI.
6
0,255
0,251
0,253
5,00
1,964189
CDLXXXII.
CDLXXVII. CDLXXVIII. CDLXXIX. CDLXXX. CDLXXXI. 1,489839
8
0,194
0,189
0,1915
5,00
5
CDLXXXVIII.
CDLXXXIII. CDLXXXIV. CDLXXXV. CDLXXXVI. CDLXXXVII. 1,096476
10
0,146
0,135
0,1405
5,00
5
CDXC. 0,
CDXCIV.
CDLXXXIX.
19 CDXCI.
CDXCII.
CDXCIII.
1,597821
23
8
0,213
0,2055
5,00
5
D.
0,8
CDXCV.
CDXCVI. CDXCVII. CDXCVIII. CDXCIX.
766
30
0,13
0,094
0,112
5,00
56
CDXLI.
0

CDXLII.
0,549

CDXLIII.
0,504

DI.

Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL

DII.

Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

DIII.
DIV.
DV.
DVI.
DVII.
DVIII.
DIX.
DX.

Grafico N3: Curva de concentracin de sacarosa vs. tiempo

DXI.

[Sacarosa] vs tiempo
4.5
4
3.5
3

[Sac]

2.5
2
1.5
1
0.5
0

10

15

20

25

30

35

T (min)

DXII.
DXIII.

Fuente: Laboratorio de Ingeniera de las fermentaciones. FCIAL

DXIV.

Elaborado por: Camacho T., Carvajal C.

DXV.
Yp /s=

18.6912 uI
mg Sac
4,10841,0964
330 ml
ml

DXVI.

DXVII.

Yp
uI
=0,0188
s
mg Sac

DXVIII.
DXIX. DISCUSIN
DXX. La fermentacin alcohlica es
un proceso anaerbico, realizado
por las levaduras y algunas
clases
de
bacterias.
Las
levaduras son microorganismos
que convierten el azcar en
alcohol etlico y dixido de
carbono.
El tiempo
de
generacin (tg) de la levadura S.
cerevisiae es de 90 minutos, 1.5
horas o 1 hora 30 minutos y una
velocidad
mxima
de
crecimiento (max) de 0,27 h-1
(ZAPATA, 2000). En base a los
datos experimentales se evalu

los parmetros cinticos y de

rendimiento de la levadura de
panificacin S. Cerevisiae en un
proceso de fermentacin para la
produccin de un metablito
secundario, como una enzima,
que en este caso fue la invertasa.
La levadura se someti a un
medio de cultivo apto para su
ptimo desarrollo, as como se le
proporcion las condiciones
adecuadas
como
el
pH,
temperatura y humedad, para
obtener una buena produccin.
Los parmetros cinticos fueron
calculados en base a datos del
peso de alcuotas de la levadura

obtenidos durante el proceso de

fermentacin por lote continuo,
ya que los datos obtenidos por
lote no permitieron determinar
de
manera
correcta
los
parmetros cinticos, dichos
valores fueron interpolados para
permitir la realizacin de una
correcta curva de crecimiento.
En la tabla N1 se indic los
datos obtenidos sobre la
concentracin de clulas de
levaduras en los diferentes
intervalos de tiempo durante el
proceso de fermentacin por lote
durante 30 horas. En base a
estos datos se calcul la
velocidad
de
crecimiento
mxima
que
fue
de
=0.1711 h1 , de donde se
realiz la curva de crecimiento
microbiano como se mostr en
el grafic N1 y que se bas en
los datos de la TablaN2,
mostrando una tendencia lineal
en la fase exponencial. El
nmero de generaciones fue de
0.9873 y con un tiempo de
generacin de 4.0514h. La
cantidad total de actividad
fueron 18.6912 unidades de
invertasa que es la cantidad de
enzima invertasa que hidroliza la
sacarosa en glucosa y fructosa
por minuto. Y en base a los
gramos de levadura seca
(61.9940g) se hall 34.456
unidades de invertasa. Para la
determinacin
de
las
concentraciones de glucosa y
absorbancia se tom en cuenta a
la ecuacin descrita en los
resultados a partir de la cual

tabul las mismas en la Tabla

N3. Para la curva de
concentracin del sustrato, en
este caso la sacarosa se elabor
en base a las concentraciones y
las lecturas de absorbancia del
sustrato, como se indic en el
grafico N3, en base a la tabla
N5. Finalmente el rendimiento
del producto en funcin al
sustrato se obtuvo 0.0188
unidades de invertasa por
miligramos de sacarosa.
DXXI.
DXXII.
CONCLUSIONES
Se determin las condiciones de
crecimiento de Saccharomyces
cerevisiae para la produccin de
invertasa
como
producto
metablico. En el experimento se
proporcion todas las condiciones
adecuadas para las levaduras,
especficamente la Saccharomyces
Cerevisiae para que se de dicho
proceso con el fin de obtener la
enzima invertasa. Adems se valor
su metabolismo basndose en
parmetros cinticos, como la
velocidad de crecimiento, el tiempo
de generacin y los rendimientos,
los mismos que se compar con
valores bibliogrficos.
La
velocidad
especfica
de
crecimiento del microorganismo
muestran el tiempo en el que este
tiene su ptimo desarrollo y fue
evaluada a partir de la curva cintica
de crecimiento que se realiz con
los pesos en funcin al tiempo. La
velocidad de crecimiento obtenida
en el laboratorio es relativamente
correcta comparada con el dato
bibliogrfico, lo cual indic que las

condiciones proporcionadas para el

proceso fueron las adecuadas. As
mismo se calcul el tiempo de
generacin, el cual comparado con
el dato bibliogrfico de 1.5h, no es
muy ptimo ya que nos muestra que
la divisin celular sucedi en un
tiempo mayor, y por lo tanto fue
ms lento su crecimiento.
El proceso de fermentacin es un
mtodo apropiado para la obtencin
de productos, que sean tiles para la
industria, especialmente cuando son
extracelulares ya que su obtencin
no requiere de otros procedimientos.
En el caso de este proyecto no se
obtuvo fcilmente la invertasa, que
es un metablito secundario
extracelular, ya que existi una
serie de errores experimentales y
aleatorios, por fallas en los
instrumentos y equipos, y por falla
humana.
DXXIII.
DXXIV.
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DXXXIV.