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Transesterificacion.
TRIGLICERIDO + ALCOHOL------- GLICERINA + METIL ESTERES
Las grasas de animales y plantas estn hechas tpicamente de triglicridos, que son steres
de cidos grasos libres con glicerol. En el proceso, el alcohol es deprotonado (removido de
un catin hidrgeno de una molcula) con una base para formar un nuclefilo (anin con un
par de electrones libres) ms fuerte. Comnmente son usados etanol y metanol. Como se ve
en el diagrama, la reaccin no tiene otros reactivos ms que el triglicrido y el alcohol.
En condiciones ambientales normales, la reaccin puede no ocurrir o hacerlo de manera muy
lenta. Se usa el calor para acelerar la reaccin, adems de un cido o una base.
LA BASE AADIDA, El hidrxido debe ser muy seco: cualquier cantidad de agua en el
proceso aumenta las probabilidades de saponificacin, y producir jabones consumiendo
la base. Una vez hecha la mezcla de alcohol ybase, es agregada al triglicrido.
El tomo de carbono del grupo carbonilo del ster del triglicrido soporta una densidad de
carga positiva y el tomo de oxgeno del grupo carbonilo, ms electronegativo, presenta una
mayor densidad de carga, con lo cual el enlace se encuentra polarizado <debilitado>.
Esta polarizacin del grupo C=O da lugar a que el anin alcxido (RO-) ataque al centro
positivo del enlace.
R1
Atraccin polarizada |
RO- > C=O
|
O-CH2-CH-CH2-O-C=O
|
|
O-C=O
R3
|
R2
R1
|
RO-C=O
+
-O-CH2-CH-CH2-O-C=O
|
|
O-C=O
R3
|
R2
El proceso se repite para los otros dos steres restantes unidos al glicerol. Esta reaccin tiene
unos factores limitantes:
1. El grupo RO- tiene que encajar en el espacio donde est la carga positiva en el grupo
carbonilo.
2. Al aumentar el tamao de la cadena del alcohol la Velocidad de reaccin disminuye.
Este fenmeno es llamado efecto estrico y es la razn primaria del uso
de alcoholesde cadenas cortas.
3. Pueden ocurrir muchas otras reacciones diferentes, por esto, se agrega un exceso
de alcohol para asegurar que la transesterificacin ocurra.
La lipasa es una enzima que se usa en el organismo para disgregar las grasas de los
alimentos para que se puedan absorber. Se han hecho una gran cantidad e investigaciones
usando enzimas como catalizador. Las mismas muestran que se puede obtener un muy buen
rendimiento. El uso de lipasas hace la reaccin menos sensible a grandes cantidades de AGL
(que son un problema en la produccin comn).
ARTICULO
1. Introduccin
El biodiesel, una alternativa al combustible fosisl continua ganado atencin de
los investigadores debido a su naturaleza ambientalmente amigable, entre
otras ventajas. Es una mezcla de metilesteres de acidos grasos (FAME) que se
ha producido convencionalmente a partir de trasesterificacion alcalina de
aceites animales y vegetales. En investigaciones avanzadas, se ha desarrollado
un mtodo de dos pasos de esterificacin de aceite que cintienenacidos grasos
libres con catalizadores acidos antes de la tranesterificacion con el catalizador
biodiesel y estos von frecuencia contienen altos niveles de acidos grasos libres
como tambin fosfolpidos, haciendo al sustrato de aceite aunmas complicado.
Se sabe que los fosfolpidos aceleran la inhibicin de la lipasa con la formacin
de micelas recersas que alteran la naturaleza de la mezcla de reaccion. El
desgomado del aceite crudo se ha propuesto para resolver este problema sin
embargo, esto agrega costo adicional, aumenta los pasos de procesamiento y
causa perdida de materia prima. Varias lipasas comunes se han utilizado para
la conversin de aceite vergetal refinado a biodiesel pero su aplicacin exitosa
en aceites que contienen fosfolpidos aun no se ha investigado ADACHI y otros
reportaron la utilizacin exitosa de la lipasa de C-RUGOSA para la hidrolisis de
aceite de soya para una convesion de biodiesel en dos pasos. Oda y otros tm
reportaron la utilizacin de una lipasa regioespecifica en sn-1,3 donde la
migracin del acilo se facilito aumentando el contenido de agua resultando en
un produccin de efectiva de FAME. Debido a las propiedades nicas de las
lipasas individuales, el concepto del coctel de lipasa que involucra la
combinacin de dos o mas lipasas ha conducido a resultados interesantes. LEE
y otros encontraron que una convinacion de las lipasas de C-rugosa y R. orizae
en un dixido de carbono supercrtico mejoro la produccin en comparacin
con el uso de una sola lipasa. Una combinacin de CaIT,RML y CaIB mejoraron
la produccin de conversin de aceite de oliva hasta un 95% en 18 horas, en
comparacin con lipasa individual que fue CaIB,
mientras que una
combinacin entre CaIT y RML mejoro la conversin del aceite de palma en un
80%. En la etanolisis de aceite de palma usado, la utilizacin combinada de la
lipasa AY y la lipasa AK dio una produccin mayor de biodiesel que la
utilizacin de AK solamente en este trabajo, se empleo el concepto del coctel
de lipasas para reducir la carga total de lipasa para reducir a su vez el costo de
la lipasa. La primera parte se ocupa de la seleccin de 6 lipasas utilizadas
comnmente en la industria de alimentos, y se exploro su aplicabilidad en la
produccin de biodiesel a partir de aceites que contienen fosfolpidos. Despus
de esto, se llevo a cabo una anlisis comparativo de varios cocteles de lipasa y
se selecciono la mejor combinacin de lipasa basndose en la velocidad de la
reaccion, la produccin final de FAME y la composicin de glicridos parciales
residuales. Finalmente, se demostr el mejoramiento de la velocidad de
reaccion para una produccin eficiente de fame a partir de aceite que contenia
fosfolpidos.
MATERIALES Y METODOS.
MATERIALES Y CEAS DE LIPASA
La calera trans ll, una formulacin liquida de la lipasa de T-lanuginosus (KIT) se
obtuvo de novosimiens. Dinamarca, las lipasas pulverizadas DF y MER DE RORIzae, ai de candida-cilindracea (anteriormente conocida como C-rugosa), R
de penizilium, y A de aspergillus nigel se obtuvieron de Amano . la lipasa
pulverizada A-10D de la especie Risopus, se obtuvo de nagaseenzimes. El
Resultados y anlisis
1.Evaluacion de la actividad de la lipasa.
En las reacciones de metanolisis que involucran lipasas se sabe que alguna
enzimas hidrolizan a los triglicridos en acidos grasos libres ( FFA) lo cual luego
es seguido por la esterificacin de loa acidos grasos libres en metilesteres de
acido graso ( FAME). En otros casos los acidos grasos de los triglicridos son
transesterificados directamente a metilesteres de acidos grasos. Esto ,uestra
que algunas lipasas tienen mayor actividad hacia la hidrolisis que hacia la
transesterificacion y viceversa. Para verificar esto para las 6 lipasas, se
emplearon 2 metodos diferentes para la determinacin de la actividad de la
lipasa ( tabla1). En prueba de la primera actividad se utilizo p nitrofenilbutirato
como el sustrato para la transesterificacion, la actividad de la lipasa depende
2.Seleccin de la lipasa
Aunque se han determinado las actividades de estas lipasas, el rendimiento de
la lipasa en el sustrato verdadero de materia prima de biodiesel puede variar
debido a la variacin de las regio-especificidades de las lipasas. Se utiliz para
seleccionar las lipasas para la produccin de biodiesel, aceite de soya refinado,
que se sabe que es un sustrato de alta calidad para la produccin de biodiesel
(Fig. 1). Los resultados de esta seleccin claramente muestran la mayor
preferencia para la hidrlisis sobre la transesterificacin para AY en las etapas
finales de la reaccin. En el transcurso de las primeras 3 horas, la produccin
de FAME alcanz solamente el 29% mientras que la produccin de FFA alcanz
ms del 45%. Esta es una indicacin de, que en las condiciones de reaccin, la
lipasa AY promueve considerablemente la preferencia de absorcin de agua
que el metanol, conduciendo a la formacin de ms FFA en vez de FAME.
Tericamente, un equivalente de 1 molar de etanol produce un mximo de 33%
de FAME. Bajo las condiciones de reaccin dadas, hay una posibilidad, de que
despus de que la mayor parte del metanol agregado inicialmente, se ha
utilizado en la produccin de FAME, la lipasa AY con una alta actividad de
hidrlisis, siga convirtiendo los triglicridos a FFA. Los cidos grasos libres
producidos fueron convertidos a FAME rpidamente en 6 horas duplicando la
cantidad de FAME hasta alrededor de 60% que tambin es la cantidad ms alta
entre las lipasas probadas. Se sabe que la mayora de las lipasas exhiben un
mayor rendimiento en los sustratos ricos en cidos grasos libres tales como los
residuos de aceite de cocina que con los aceites ricos en TAG (No. 2011). Esto
permiti una conversin ms rpida a FAME, alcanzando casi el 60% en 6
horas. No obstante, al final de la reaccin, la cantidad de FFA restante en el
sistema de reaccin fue mayor al 20%. Esto indica la limitacin de la lipasa AY
para convertir efectivamente todo el FFA producido a FAME. La Fig. 1 tambin
muestran que los glicridos parciales permanecieron bajos durante toda la
reaccin con AY indicando una liberacin rpida de cidos grasos desde el
segmento principal del gricerol. La lipasa DF, la cul se conoce como una lipasa
regioespecfica del sitio enzimtico sn.1,3, tambin mostr una velocidad de
produccin de FAME relativamente buena. Tuvo la velocidad de reaccin inicial
ms alta entre las lipasas probadas, alcanzando alrededor de 33% en 3 horas.
Sin embargo, sta velocidad se redujo en las siguientes 3 horas. Esto se
esperaba a causa de que la cantidad de cidos grasos en las posiciones 1 y 3
en la mezcla de reaccin, se haba reducido bastante y con una concentracin
reducida de reactivo, la velocidad de la reaccin se redujo. La Fig. 1b muestra
una produccin inicial de una pequea cantidad de cido graso libre lo cul
significa que, aunque la lipasa DF tiene algo de efecto de hidrlisis, es mas
favorable a la esterificacin. Con esto, cantidades significativas de glicridos
parciales pudieron observarse a lo largo del progreso de la reaccin con una
meseta de 9 horas que puede ser un resultado de las limitaciones de la
regioespecificidad. Se observ un patrn similar para las lipasas A-10D y MER
con una velocidad de reaccin y produccin final de FAME ligeramente inferior.
La lipasa R, que es una lipasa especfica del sitio , tiene una
regioespecificidad similar a la de la lipasa MER. Sin embargo se observ que la
lipasa MER tiene un rendimiento significativamente mejor que la lipasa R,
aunque la lipasa R muestra una actividad ms alta de transesterificacin (Tabla
1). Esto nuevamente muestra el efecto que tienen las longitudes de cadena de
los cidos grasos sobre la efectividad de las lipasas. La lipasa MER
efectivamente hidroliza cidos grasos de cadena larga, media y corta y esto le
permite actuar sobre una mayor variedad de longitudes de cadena en
comparacin con la lipasa R la cul es especfica solamente de cidos grasos
de cadena corta y media. Ya que la materia prima del biodiesel tiene longitudes
variables de cadena de cido graso, incluyendo C16 y C18, es mas efectivo
utilizar lipasas que tengan la habilidad de romper enlaces de longitud variable
de cadena de cido graso. Aunque, a partir de la Tabla 1, la lipasa A tuvo la
actividad hidroltica ms alta, casi no produjo nada durante toda la reaccin.
Esto puede deberse a la poca tolerancia al metanol de la lipasa A bajo las
condiciones de reaccin dadas.
de la lipasa AY (p/p de aceite refinado) fue la carga de lipasa mayor que fue
incapaz de asimilar efectivamente el equivalente molar inicial de 1:1 de
metanol a aceite en la conversin de aceite a FAME (Fig. 1 complementaria).
De aqu que, se llevaron a cabo nuevos experimentos combinando 0,1% de
CaIT con 0.4% de otras lipasas individuales (Fig. 3). Bajo esta condicin de
coctel de lipasa y reduccin de la carga total de lipasa, La produccin de FAMEy
y las velocidades de reaccin fueron generalmente ms altas. De modo
interesante, el poco rendimiento de AY en un aceite que contiene fosfolpidos
ha mejorado con la adicin de CaIT. La mejora de la produccin d FAME, al
mezclar la lipasa AY con CaIT probablemente se debe a la habilidad de CaIT
para convertir efectivamente los triglicridos en FAMEs an en presencia de
fosfolpidos. Se sabe que CaIT tiene una alta velocidad de conversin inicial del
cido graso sn-1,3 lo cul est asociado con un consumo rpido de metanol.
Esto resulta en una reduccin ms rpida del metanol, que est solubilizado en
el interior de las micelas reversas fosfolpidas. Con la rpida reduccin del
metanol polar de la localidad de la localidad del la lipasa AY dentro de las
micelas reversas, el riesgo de la inhibicin por el metanol disminuye
considerablemente. Esta eliminacin de la inhibicin habilita as a la lipasa AY
para contribuir con el proceso de produccin de FAME conduciendo a una
mejora sobre la utilizacin de la lipasa AY sola en un medio de reaccin
altamente polar. Adems, el coctel de lipasa AY-CaIT result en la reduccin
drstica de los glicridos parciales residuales y cidos grasos libres (Fig. 3b). la
alta actividad de hidrlisis y la no especificidad de la lipasa AY pueden haber
contribuido con la liberacin eficiente de cidos grasos conduciendo a la
ausencia de di- y monoglicridos los cules mas bien persistieron en otras
combinaciones o cuando se utiliz solamente CaIT. Aunque los di- y triglicridos
son buenos sustratos para la conversin por parte de CaIT, la baja carga de
CaIT puede ser la razn de la persistente cantidad mas alta de di- y
triglicridos para la utilizacin de slo CaIT por 24 horas. Tambin se
encontraron altas cantidades de FFA, MAG, DAG y TAG en los productos del
coctel DF-CaIT y del coctel de lipasa A10D-CaIT. Estas sin embargo, fueron
inferiores que en el caso de 0.1% de CaIT a causa de que la presencia de la
lipasa DF o A10-D contribuy adicionalmente a la conversin total de los
glicridos parciales y los cidos grasos libres a FAME. El rendimiento del coctel
DF-CaIT fue significativamente mejor que el del coctel A10-D-CaIT lo cual
corresponde con la mayor actividad de la lipasa DF en comparacin con la
lipasa A10D. aunque la especificidad de la lipasa A10D no es bien conocida,
este resultado sugiere que podra ser una lipasa especfica de sn-1,3 debido a
las altas cantidades de MAG restantes en forma similar a la lipasa DF. Los MAGs
y DAGs son molculas higroscpicas que absorben humedad del ambiente. Su
presencia en el biodiesel incrementa el contenido de humedad en el mismo, lo
cual es una propiedad indeseable. Se han recomendado respectivamente
concentraciones menores a 0.2% y 0.8%. la ausencia de estos componente en
la conversin que utiliza la lipasa AY-CaIT es una ventaja adicional de utilizar
este coctel.
CONCLUSIONES