In: Practical Transfusion Medicine, Feldman B.F. and Sink C.A. (Eds.).

Publisher: Teton
NewMedia, Jackson, WY, USA (www.tetonnm.com/). Internet Publisher: International Veterinary
Information Service, Ithaca NY (www.ivis.org), Last updated: 21-Jul-2008; A4805.0708.ES

Mtodos
B.F. Feldman 1 and C.A. Sink 2
1 Dept of Biomedical Sciences & Pathobiology, VA-MD - Regional College of Veterinary Medicine, Blacksburg, VA, USA
(Deceased). 2 Laboratory Diagnostic Services, VA-MD - Regional College of Veterinary Medicine, Blacksburg, VA, USA.

Traducido por: L. Delgadillo Keenan, Clnica Veterinaria Sr. Dog's, Guadalajara, Jalisco, Mxico. (25-Jan-2010).
ndice
Preparacin de sangre entera fresca
Preparacin de eritrocitos y plasma fresco congelado
Preparacin de crioprecipitado y plasma pobre en crioprecipitado
Preparacin de plasma rico en plaquetas
Procedimiento de pruebas cruzadas
Suspensin de clulas lavadas
Calificando las reacciones
Procedimiento de reemplazo con solucin salina
Templando la sangre entera, los eritrocitos o descongelando el plasma fresco congelado, crio o plasma pobre
en crio
Calibracin de la centrfuga
Consejos tiles:
A lo largo de este texto encontrar los siguientes smbolos para ayudarle a enfocarse en lo que realmente es importante.
Esta es una caracterstica de rutina del sujeto en discusin. Hemos tratado de resumirlo.
Esta es una caracterstica importante. Usted debe recordar esto.
Algo serio pasar si usted no recuerda esto.

Preparacin de sangre entera fresca

Caninos
Una vez que se ha colectado una unidad de sangre entera, debe ser almacenada a 1-6 C hasta que sea posible procesarla.
Una unidad de sangre entera es considerada Sangre entera fresca durante un perodo de 24 horas posteriores a la
flebotoma.
La sangre entera fresca contiene todos los elementos de la sangre.
Preparacin de sangre entera fresca
1. Para iniciar el procesamiento de la unidad de sangre, repasar presionando la lnea en la cual estaba anteriormente
unida la aguja. Esto asegurar que el contenido de esta lnea est adecuadamente anticoagulado. Este paso es
importante porque esta lnea ser ahora sellada en segmentos que sern luego usados como muestras de sangre del
donador para pruebas de compatibilidad.
Cada bolsa de sangre tiene un grupo de nmeros de identificacin en la lnea de recoleccin. Coloque el primer
sello despus del nmero de identificacin que est localizado en la parte superior de la bolsa, a un lado de los
puertos, (ver Figura 2-4). De esta manera, si los segmentos son separados de manera inadvertida de la bolsa de
sangre durante el almacenamiento, los segmentos pueden ser comparados con la bolsa de sangre para confirmar
la identificacin.
2. Doble los segmentos orilla con orilla y coloque una liga para mantenerlos unidos (ver Figura 2-5).
3. Si no se va a hacer absolutamente ningn componente de esta unidad de sangre entera fresca, selle y separe las
bolsa satlite y deschelas.

 Si se va a recuperar Plasma a ms de 6 horas de la flebotoma, deje las bolsas satlite adheridas.

Nota: Si se va a realizar Plasma fresco congelado, el plasma debe ser separado de los eritrocitos y
congelado completamente dentro de las 8 horas de la recoleccin si el anticoagulante-conservador es
CPD, CP2D o CPDA-1. Si el anticoagulante-conservador es ACD, la separacin y congelamiento debe
ocurrir dentro de las 6 horas de la flebotoma
El Plasma puede ser recuperado en cualquier momento durante la vida de almacn de la unidad.
4. Etiquete el producto con el nombre del producto, volumen y fecha de caducidad.
5. La sangre entera fresca debe refrigerarse entre 1 - 6C.
La sangre entera designada a la preparacin de plaquetas debe permanecer a temperatura ambiente hasta que
se remuevan las plaquetas.
Felinos
Cuando se recolecta una jeringa de sangre entera, debe ser transfundida lo ms pronto posible.
Si es inminente una demora significativa, almacene el producto entre 1-6C hasta que sea posible la transfusin.
Cuando se utilice el equipo de jeringa de recoleccin doble para pequeos animales, por favor consulte las instrucciones
proporcionadas por el Banco de Sangre Animal.

Preparacin de eritrocitos y plasma fresco congelado

Caninos
Una vez que se ha recolectado una unidad de sangre entera, debe ser refrigerada a 1 - 6C hasta que sea posible la
preparacin de los componentes.
Si se va a realizar Plasma fresco congelado, el plasma debe ser separado de los eritrocitos y congelado por completo
dentro de 8 horas de la recoleccin si el anticoagulante-conservador es CPD, CP2D o CPDA-1. Si el anticoagulanteconservador es ACD, la separacin y congelamiento deben ocurrir dentro de las 6 horas de la flebotoma.
La sangre entera fresca usada para la preparacin de los componentes plaquetarios debe permanecer a temperatura
ambiente hasta que sean removidas las plaquetas.
Separacin de los eritrocitos y el plasma
Preparacin para la centrifugacin
1. Para iniciar el proceso de la preparacin de los componentes, repasar presionando la lnea en la cual estaba
adherida la aguja. Esto asegurar que la lnea est adecuadamente anticoagulada. Este paso es importante porque esta
lnea ser ahora sellada en segmentos que sern luego usados como muestras de sangre del donador para pruebas de
compatibilidad.
Cada bolsa de sangre tiene un grupo de nmeros de identificacin en la lnea de recoleccin. Coloque el primer sello
despus del nmero de identificacin que est localizado en la parte superior de la bolsa, a un lado de los puertos,
(ver Figura 2-4). De esta manera, si los segmentos son separados de manera inadvertida de la bolsa de sangre durante
el almacenamiento, los segmentos pueden ser comparados con la bolsa de sangre para confirmar la identificacin.
2. Doble los segmentos orilla con orilla y coloque una liga para mantenerlos unidos (ver Figura 2-5). Esto puede
ayudar a prevenir que los segmentos se atoren en la cabeza de la centrfuga durante el procesamiento de la sangre.
3. 3. La bolsa que contiene la sangre entera debe ser etiquetada con el nmero del donador. Este es un buen momento
para anotar la fecha de la recoleccin y la de caducidad a la bolsa de sangre entera.
Las fechas de caducidad son determinadas por el tipo de anticoagulante y conservador utilizados. La Tabla 2
-1 contiene las guas para fechas de caducidad.
Las bolsas satlite deben tambin ser etiquetadas con el nombre del componente, la fecha de recoleccin, el nmero
del donador y la fecha de caducidad.
Se deben utilizar marcadores permanentes para que los nmeros no se laven y borren durante el
almacenamiento, calentamiento o descongelamiento.
4. La unidad entera de sangre y bolsas satlite adheridas deben pesarse. Este peso es usado exclusivamente para
balancear la centrfuga.
El balance apropiado de la centrfuga es importante para el desgaste del rotor de la centrfuga, el peso total en
vasos de lados opuestos deben ser iguales.
Cuando se procesa un nmero impar de unidades de sangre entera, el balance de la centrfuga puede lograrse
usando bolsas de recoleccin de sangre llenas con un peso igual de glicerina al 10%.
Las ligas y los discos de plstico ya pesados pueden usarse para variar los incrementos en peso.
Centrifugacin
5. Las bolsas de sangre deben colocarse en los vasos de la centrfuga con la etiqueta vista hacia afuera. Los vasos de
centrifugacin deben colocarse en la centrfuga con la etiqueta de la bolsa hacia afuera. Esto reduce la fuerza
centrfuga en los mrgenes sellados.
Las centrfugas con vasos que columpian proveen una mejor separacin entre el plasma y los eritrocitos.

6. La unidad de sangre entera debe centrifugarse usando altas revoluciones en una centrfuga refrigerada entre 1 y 6
C. Las revoluciones altas se definen como 5000 g por 5 minutos (ver "Calibracin de la centrfuga" en esta seccin
para mayor informacin relacionada con la velocidad y tiempo de centrifugacin).
Una vez que ha cesado la centrifugacin, es importante permitir que la centrfuga deje de girar sin la
intervencin del operador; cualquier paro brusco del rotor, incluyendo el uso de un freno, puede alterar la lnea
de eritrocitos/plasma y por lo tanto contaminacin del plasma con eritrocitos.
Separacin de los componentes
7. La unidad de sangre entera debe ser removida de la centrfuga sin agitacin, para no alterar a los eritrocitos y el
plasma y colocarse en un extractor de plasma (Fenwal; Plasma Separation Stand, Terumo.)
El extractor de plasma provee una base rgida en la cual se puedan colocar unidades de sangre entera. Se
sujeta un plato con bisagras a la base y puede ser soltado para aplicar presin a la unidad de la sangre entera de
manera que hace pasar el plasma dentro de una bolsa satlite (ver Figura 2-8).
8. Se debe colocar una bolsa satlite vaca en una bscula. El peso debe tararse a cero. El plasma ser forzado hacia
dentro de la bolsa satlite vaca.
El nmero de bolsas satlite adheridas depende del sistema de recoleccin de sangre que se est utilizando.
Para este tema en discusin, se usa una bolsa triple: hay dos bolsas satlite, una contiene Adsol, y una est
vaca.
9. Abrir el puerto plstico en la parte superior de la bolsa de recoleccin de sangre. Remover 230 - 256 gramos de
plasma soltando el plato con bisagras del extractor de plasma y aplicando presin a la bolsa que contiene la sangre
entera centrifugada. El plasma ser forzado hacia la bolsa satlite vaca.
La gravedad especfica del plasma es 1.023. Por lo tanto, el remover 230 - 256 gramos de plasma dejar la
unidad de eritrocitos con un hematocrito final de 70 - 80%.
Los eritrocitos pueden ser preparados en volmenes de paquete celular variados, ver la Tabla 2-3 para una
gua.
10. Una vez que se logra el peso deseado de plasma, use pinzas hemostticas para hacer un clamp en la lnea de la
bolsa que contiene el plasma cosechado. Luego, rompa el sello de la bolsa con Adsol y permtale fluir dentro de la
bolsa que contiene los eritrocitos. Selle y desprenda la bolsa que contiene los eritrocitos con Adsol de las bolsas con
el plasma. Suavemente mezcle los eritrocitos con el Adsol.
Separacin del plasma
11. Quedan dos bolsas satlite; una contiene 230 - 256 gramos de plasma con un volumen de 225 - 250 ml. El plasma
puede dejarse en una bolsa o bien dividirse de manera equitativa entre las dos bolsas.
El volumen de plasma final en la bolsa debe basarse en la talla de receptores ms comn y en la
disponibilidad de plasma.
Sellar la(s) bolsa(s) de plasma.
Determinacin del volumen
12. El volumen final del producto sanguneo se determina de la siguiente manera:
Tarar el peso de la bscula a cero. Pesar cada una de las bolsas de sangre llenas.
El peso de la bolsa vaca se resta del peso final del producto sanguneo. El peso final del producto dividido
entre su gravedad especfica iguala el volumen del producto en mililitros.
La gravedad especfica de los eritrocitos es de 1.080 - 1.090; la gravedad especfica del plasma es de 1.023.
13. El producto sanguneo debe etiquetarse con el nombre del producto y el volumen en mililitros.
Si se le ha aadido Adsol a los eritrocitos, debe anotarse en la bolsa./li>
Almacenamiento
14. Los eritrocitos deben refrigerarse entre 1 - 6C. El plasma fresco congelado debe almacenarse a -18C o menos.
Felinos
Para la preparacin de componentes de sangre felina, el Animal Blood Bank (enlistado en el Apndice 1) provee
tcnicas de preparacin de componentes sanguneos con la compra del Paquete de Recoleccin de Doble Jeringa para
Pequeos Animales.

Preparacin de crioprecipitado y plasma pobre en crioprecipitado

Caninos
El Factor Antihemoflico Crioprecipitado (AHF, tambin conocido como Crioprecipitado o Crio), se hace de una unidad
(225 - 250 ml) de Plasma Fresco Congelado.
El Crio es la porcin insoluble del plasma que precipita cuando una unidad de plasma fresco congelado es descongelada
entre 1 - 6C. El exceso de plasma se remueve del precipitado, creando el plasma pobre en crioprecipitado (plasma pobre
en crio)

 Para hacer el crioprecipitado, se necesita una unidad completa de (225 - 250ml) de plasma fresco congelado con al
menos una bolsa satlite adherida.
Cuando se cosecha el plasma fresco congelado de la unidad de sangre entera, permitir que el plasma fluya dentro de la
bolsa satlite. Sellar y retirar las dos bolsas, pero mantener la lnea entre ambas bolsas abierta.
Congelar la unidad de plasma como se especifica en el procedimiento para plasma fresco congelado.
El plasma debe estar completamente congelado y slido antes de realizar los pasos subsecuentes para obtener
crioprecipitado.
Separacin de crioprecipitado y plasma pobre en crioprecipitado.
Permitir que el plasma fresco congelado se descongele a 1-6C. Este proceso toma aproximadamente 8 horas.
1. Cosechar el crioprecipitado usando unos de estos dos procedimientos siguientes:
Cuando el plasma se torne blando o como aguanieve, colocar el plasma descongelado en un extractor de
plasma. Forzar el plasma lquido dentro de la bolsa satlite adherida integralmente. La bolsa satlite que
contiene el plasma lquido debe contener 90% del volumen original del plasma fresco congelado
O
Permitir que el plasma fresco congelado se descongele por completo. Centrifugar el Plasma fresco
congelado usando altas revoluciones. El crioprecipitado se precipitar y adherir a las paredes de la bolsa (ver
la Figura 2-11) Forzar el 90% del sobrenadante dentro de la bolsa satlite adherida.
Cualquier mtodo que se utilice, el plasma pobre en crioprecipitado se forzar dentro de la bolsa satlite y el
crioprecipitado permanece dentro de la bolsa donde originalmente estaba el plasma fresco congelado.
2. Sellar ambas bolsas.
3. Determinar el volumen final. Etiquetar el producto con el nombre del producto, volumen final y fecha de
caducidad.
La fecha de caducidad es de un ao desde la fecha de la flebotoma (no del da de la preparacin)
Almacenamiento
4. Congelar el crioprecipitado y el plasma pobre en crioprecipitado dentro de 1 hora de la preparacin. Ambos
productos deben almacenarse a -18C o menor.
NOTA:
Como una alternativa, el crioprecitado puede ser preparado de Plasma fresco congelado almacenado, al permitir que
se descongele (como se explic antes) y removiendo el plasma pobre en crio usando una jeringa. Como esto crea un
ambiente "abierto", el producto debe ser usado dentro de las siguientes 24 horas de su preparacin.

Preparacin de plasma rico en plaquetas

El Plasma Rico en Plaquetas se obtiene de una unidad de sangre entera fresca.

Para preparar el plasma rico en plaquetas, se necesita una unidad de sangre entera fresca con al menos una bolsa
satlite integralmente adherida. La unidad de sangre entera fresca debe mantenerse a 22 - 25C y ser procesada
inmediatamente para poder obtener plaquetas viables.
Separacin de eritrocitos y plasma rico en plaquetas
Preparacin para la centrifugacin
1. Para iniciar el proceso de preparacin del componente, repasar presionando la lnea en la cual estaba la aguja
adherida. Esto asegurar que la lnea est adecuadamente anticoagulada. Este paso es importante porque esta lnea
debe ahora ser dividida en segmentos que posteriormente sern usados como muestras de sangre del donador para la
pruebas de compatibilidad.
Cada bolsa de sangre tiene nmeros de identificacin en la lnea de recoleccin. Colocar el primer sello
despus del primer nmero de identificacin que est localizado en la parte superior de la bolsa, junto a los
puertos (ver la Figura 2-4). De esta manera, si los segmentos son separados de la bolsa de sangre
inadvertidamente durante el almacenamiento, los segmentos podrn ser comparados con la bolsa de sangre para
confirmar la identificacin.
2. Doblar los segmentos orilla con orilla y colocar una liga alrededor para mantenerlos juntos (ver Figura 2-5). Esto
ayudar a prevenir que los segmentos no se enreden en la cabeza de la centrfuga durante el procesamiento de la
sangre.
3. La bolsa que contiene la sangre entera debe etiquetarse con el nmero del donador. Es tambin el momento de
agregar las fechas de recoleccin y de caducidad a la bolsa de sangre entera.
Las fechas de caducidad se deben determinar de acuerdo al tipo de anticoagulante y conservador utilizados.
La Tabla 2-1 contiene las guas para la fecha de caducidad.
La(s) bolsa(s) satlite tambin debe ser etiquetada con el nombre del componente, fecha de recoleccin,
nmero de donador y fecha de caducidad.

 Se deben utilizar marcadores permanentes para que los nmeros no se laven y borren durante el
almacenamiento, calentamiento o descongelamiento.
4. Se deben pesar la unidad entera de sangre y bolsas satlite adheridas. Este peso se usa exclusivamente para
balancear la centrfuga.
El balance apropiado de la centrfuga es importante para el desgaste del rotor de la centrfuga; el peso total
de los vasos opuestos debe ser igual.
Cuando se procesan cantidades impares de unidades de sangre entera, el balance de la centrfuga debe
lograrse usando bolsas de recoleccin de sangre llenas con un peso igual de glicerina al 10%.
Se deben utilizar ligas y discos de plsticos ya pesados para variar los incrementos de peso.
Centrifugacin
5. Las bolsas de sangre deben colocarse en los vasos de la centrfuga con la etiqueta hacia afuera. Los vasos de la
centrfuga deben ser colocados en la centrfuga con la etiqueta de la bolsa hacia afuera. Esto reduce la fuerza
centrfuga en los mrgenes sellados.
Las centrfugas con vasos que columpian proveen una ms fcil separacin del plasma de los eritrocitos.
6. La unidad de sangre entera debe ser centrifugada utilizando pocas revoluciones en una centrfuga entre 22 - 25C.
Pocas revoluciones se definen como 2000 g por 3 minutos. (Ver "Calibracin de la centrfuga" en esta seccin, para
mayor informacin relacionada con la velocidad y tiempo de centrifugacin).
Una vez que ha cesado la centrifugacin, es importante permitir que la centrfuga se detenga sin la
intervencin del operador, ya que cualquier parada brusca del rotor, incluyendo el uso del freno, alterar la
lnea eritrocitos/plasma, por lo tanto contamina el plasma con eritrocitos.
Separacin de los componentes
7. 7. La unidad de sangre entera debe removerse de la centrfuga sin agitacin para no alterar a los eritrocitos y el
plasma y colocarse en le extractor de plasma (Fenwal; Plasma Separation stand. Terumo.)
El extractor de plasma provee una plataforma rgida en la cual se colocan las unidades de sangre entera. Un
plato con bisagras se sujeta a la base y puede soltarse para aplicarle presin a la unidad de sangre entera para
forzar el plasma dentro de una bolsa satlite (ver Figura 2-8).
8. Debe colocarse una bolsa satlite en una bscula. El peso debe tararse a cero. El plasma rico en plaquetas ser
forzado hacia dentro de la bolsa satlite vaca.
El nmero de bolsas satlite integralmente adheridas depender del sistema de recoleccin que se us. Para
este tema, se usa una bolsa triple: tiene dos bolsas satlite, una contiene Adsol, la otra est vaca.
9. Abrir el puerto plstico en la parte superior de la bolsa de recoleccin de sangre. Remover el plasma soltando el
plato con bisagras del extractor de plasma y aplicando presin a la bolsa que contiene la sangre entera centrifugada.
El plasma rico en plaquetas ser forzado hacia la bolsa satlite vaca.
La tarea de separar las plaquetas de la sangre entera centrifugada puede ser un reto, ya que los eritrocitos se
encuentran justo debajo de la capa de plaquetas (ver Figura 2-12). El plasma rico en plaquetas debe tener un
color amarillo claro y no debe contener contaminacin visible con eritrocitos.
10. Utilizando pinzas hemostticas, pinzar y separar la lnea de la bolsa que contiene el plasma recolectado y sellar.
Procesar los eritrocitos como se describe en la pgina 77.
Determinar el volumen
11. Calcular el volumen del plasma rico en plaquetas. Tarar el peso de la bscula en cero y pesar el plasma rico en
plaquetas. Se debe restar el peso de la bolsa vaca del peso final de la bolsa. Al dividir el peso final del producto entre
la gravedad especfica apropiada, se puede calcular el volumen en mililitros.
La gravedad especfica del plasma es de 1.023, as que 1 gramo de plasma es aproximadamente igual a 1
mililitro de plasma.
12. El producto final debe ser etiquetado con el nombre del producto y el volumen en mililitros.
Almacenamiento
13. 13. Para poder preservar la viabilidad de las plaquetas, el plasma rico en plaquetas debe dejarse reposar a
temperatura ambiente, con el lado de la etiqueta hacia abajo, por 1 - 2 horas y ser transfundida lo ms pronto posible
despus de esto.

Procedimiento de las pruebas cruzadas

Principio
Las pruebas cruzadas mayor y menor se realizan para asistir en la provisin de productos de eritrocitos compatibles y la
posibilidad de aminorar las reacciones adversas a la transfusin.
La prueba cruzada mayor se realiza para detectar anticuerpos en el suero del receptor que puedan aglutinar o lisar
los eritrocitos del donador.
Inversamente, la prueba cruzada menor detecta anticuerpos en el plasma del donador dirigidos contra los
eritrocitos del receptor.

 La prueba control puede detectar auto-anticuerpos.

Equipo
Solucin salina normal
Tubos para pruebas de 12 X 75 mm
Centrfuga (Figura 5-1)
Microscopio
Observador de aglutinacin (Figura 5-2) o rea bien iluminada
Bloque calentador de 37C (Figura 5-3)
Figura 5-1. Immufuge. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Figura 5-2. Observador de aglutinacin. (Imagen suministrada por y utilizada bajo permiso de Fisher
Scientific). - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Figura 5-3. Bloque calentador de 37C. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio
www.ivis.org . -

Procedimiento
1. 1. Preparar las muestras de sangre del donador y el receptor
Eritrocitos y plasma o suero del donador:
Para sangre entera o eritrocitos almacenados:
Las muestras de los donadores pueden obtenerse utilizando un segmento de la bolsa de sangre. Este segmento
es separado de la bolsa y cortado para abrirlo. Despus de dejar que esta muestra drene dentro de un tubo de
prueba etiquetado de 12 x 75 mm, la muestra de sangre del donador debe centrifugarse y el plasma
sobrenadante debe ser separado de los eritrocitos (Figura 5-4).
Para muestras de sangre obtenidas directamente del donador:
Para las pruebas de compatibilidad es suficiente con un tubo Vacutainer tm de 5 ml con tapn rojo y un tubo de
5 ml con EDTA. El de tapn rojo se centrifuga y el suero es separado de los eritrocitos. Los eritrocitos pueden
ser extrados de la porcin coagulada del tubo de tapn rojo o de la muestra con EDTA.
Eritrocitos y suero del receptor:
La muestra de sangre se obtiene directamente del receptor: un tubo Vacutainer tm de 5 ml con tapn rojo y un
tubo de 5 ml con EDTA son suficientes para las pruebas de compatibilidad. El tubo de tapn rojo se centrifuga
y el suero se separa de los eritrocitos. Los eritrocitos pueden obtenerse de la porcin coagulada del tubo de
tapn rojo o de la muestra con EDTA.
Figura 5-4. Fuentes de eritrocitos del donador. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase
al sitio www.ivis.org . -

2. Preparar suspensiones celulares de donador y receptor al 3 - 5% (Ver "Suspensin de clulas lavadas".

3. Prueba cruzada mayor:
Por cada donador, etiquetar un tubo de prueba de 12 x 75 mm con el nmero del donador y la palabra "mayor".
Agregar dos gotas del suero del paciente y una gota de la suspensin de clulas del donador apropiado.
4. Prueba cruzada menor:
Por cada donador, etiquetar un tubo de prueba con el nmero del donador y la palabra "menor". Agregar dos gotas de
suero del donador apropiado y una gota de la suspensin de clulas del paciente.
5. Autocontrol:
Para el paciente y cada donador, etiquetar un tubo de prueba con las letras "AC" y el nombre del paciente o el nmero
del donador. Agregar dos gotas de suero y una gota de gota de la suspensin de clulas correspondiente para cada
muestra.
En resumen:

PRUEBA

SUERO/PLASMA

CELULAS

Cruzada Mayor

Paciente

Donador

Cruzada Menor

Donador

Paciente

Autocontrol paciente

Paciente

Paciente

Autocontrol donador

Donador

Donador

6. Mezclar todos los tubos e incubar a 37C ( o la temperatura corporal "normal" especie especfica) por un mnimo de 15
minutos.
7. Centrifugar a revoluciones para centrifugacin salina (Ver Calibracin de Centrfuga
8. Leer macroscpicamente. Calificar las reacciones utilizando las guas de "calificacin de reaccin". Confirmar todas las
reacciones negativas con lectura microscpica.
9. Anotar los resultados.
Interpretacin
Las reacciones negativas en las pruebas cruzadas mayor y menor indican compatibilidad.
Una reaccin positiva indica incompatibilidad.
Los positivos en el autocontrol deben ser investigados. Los donadores que presentan una prueba de autocontrol positiva
deben ser excluidos.

Suspensin de clulas lavadas

Principio
Las muestras de eritrocitos usadas para las pruebas de compatibilidad deben ser lavadas de sustancias potencialmente
contaminantes que puedan interferir con el proceso de la prueba.
Reactivos
Solucin salina normal
Equipo
Tubos para pruebas de 12 x 75 mm
Pipetas de transferencia de plstico
Centrfuga
Procedimiento
1. Etiquetar un tubo de 12 x 75 mm con la identificacin apropiada.
2. Con una pipeta, colocar aproximadamente 250 microlitros de eritrocitos en el tubo etiquetado.

Los eritrocitos pueden obtenerse de:

Una muestra de sangre con EDTA recolectada del donador de sangre
La porcin coagulada de un tubo Vacutainer tm de tapn rojo recolectado del donador, o
Un segmento de la bolsa de sangre.
3.Llenar el tubo con aproximadamente 4 ml de solucin salina normal y mezclar bien, para preparar una suspensin
homognea de las clulas en la solucin salina.
4. Centrifugar a revoluciones para lavado.
5. Decantar o aspirar el sobrenadante de solucin salina.
6. Repetir pasos 3 - 5 de una a tres veces. La meta es lograr un sobrenadante claro e incoloro. (Figura 5-5)
7. Reconstituir las clulas lavadas con aproximadamente 3 ml de solucin salina normal. Esto aproximar a obtener una
suspensin de clulas al 3 - 5%.
Figura 5-5. El sobrenadante de lavado con solucin salina debe ser incoloro y claro (a la derecha). Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Calificando la reaccin
Principio
El grado de aglutinacin de los eritrocitos y/o hemlisis observado en cualquier procedimiento de pruebas en bancos de
sangre es significativo. El siguiente procedimiento marca un sistema para calificar las reacciones observadas.
Materiales
Especmenes para pruebas a ser evaluados ya centrifugados
Observador de aglutinacin o rea bien iluminada
Procedimiento
1. Remover la muestra de la cabeza de la centrfuga muy suavemente. No alterar el botn de clulas.
2. Evaluar la muestra para ver hemlisis observando el sobrenadante para detectar presencia de hemoglobina libre.
3. Manteniendo sostenido el tubo bajo el observador de aglutinacin (o el rea bien iluminada con un fondo blanco), agitar
suavemente el tubo para alterar el botn de eritrocitos. Este movimiento debe mover suavemente el sobrenadante una y otra
vez sobre el botn de las clulas usando un movimiento de agitacin o inclinacin.
4. Observar la forma en que los eritrocitos dejan el botn de clulas rojas.
5. Anotar la reactividad:
4+ Un solo agregado slido de clulas
3+ Muchos agregados grandes
2+ Aglutinaciones grandes y cogulos pequeos
1+ Muchas aglutinaciones pequeas y un fondo de eritrocitos libres
+/- Aglutinaciones Macro Dbiles vistas macroscpicamente. Muchas aglutinaciones microscpicamente.
+/- Ninguna Aglutinacin Micro vista macroscpicamente. Algunas aglutinaciones microscpicamente.
H Hemlisis
0 Negativo. No se observa ninguna aglutinacin ni macroscpica ni microscpicamente.
Favor de consultar la Figura 5-6.
Interpretacin
Cualquier aglutinacin y/o hemlisis observada indica una reaccin positiva. La presencia de rouleaux debe ser confirmada
usando el "Procedimiento de Reemplazo Salino".

Figura 5-6. Guas para calificacin de la reaccin. - Para ver esta imagen en su tamao completo,
dirjase al sitio www.ivis.org . -

Figura 5-6 (continuado). Guas para calificacin de la reaccin. - Para ver esta imagen en su tamao
completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Procedimiento de reemplazo salino

Principio
Los eritrocitos que presentan rouleaux aparentan ser "monedas apiladas" cuando se observan microscpicamente. Las
formaciones de rouleaux se dispersan con la adicin de solucin salina normal, mientras que la aglutinacin verdadera
permanece. Para las pruebas de compatibilidad, rouleaux es considerada una reaccin negativa. El siguiente procedimiento
es usado para distinguir rouleaux de una aglutinacin verdadera.
Materiales
Solucin salina normal
Microscopio
Pipeta
Portaobjetos
Procedimiento
1. Si se sospecha de rouleaux, volver a centrifugar la muestra usando revoluciones para salina. Decantar el suero o plasma
(Figura 5-7).
2. Agregar 2 gotas de solucin salina al botn de clulas. Mezclar con una agitacin suave hasta que el botn de clulas
est disperso.
3. Volver a centrifugar la muestra usando revoluciones para salina.
4. Agitar el tubo y alterar el botn de clulas dentro del tubo. Calificar la reaccin de acuerdo a la gua. Si no se observa
aglutinacin macroscpica, hacer la lectura microscpica.
5. Anotar los resultados.
Interpretacin
El rouleaux verdadero se dispersar con la adicin de solucin salina y NO se considera aglutinacin.
El rouleaux es comnmente exhibido en gatos y pacientes con hiperproteinemia.
Figura 5-7. Decantando suero/plasma para procedimiento de reemplazo salino. - Para ver esta imagen
en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Calentando la sangre entera, eritrocitos o descongelando plasma fresco congelado, crio o plasma pobre en
crio
La infusin rpida de productos sanguneos fros puede causar reacciones adversas en el receptor. Por lo tanto, la sangre
entera y eritrocitos deben calentarse previo a la transfusin y los productos congelados deben descongelarse y calentarse
antes de la transfusin.

 Para calentar los productos sanguneos se pueden utilizar artculos de calor seco, unidades de intercambio de calor a
contracorriente o circulacin en baos de agua.
Estos artculos no deben incrementar la temperatura de los eritrocitos al grado de causar hemlisis o incrementar la
temperatura de los productos de plasma que inactive las protenas plasmticas viables.
Para vigilar la temperatura de los artculos es til un termmetro visible o una alarma audible que suene si la
temperatura de calentamiento especificada es excedida.
Existen hornos de microondas especialmente diseados para descongelar plasma, disponibles comercialmente. Estos
artculos no estn diseados para usarse con eritrocitos.
Los baos de agua son comnmente utilizados para calentar sangre y descongelar plasma. Es importante usar un bao de
agua en circulacin para que la temperatura del agua sea distribuida equitativamente a travs del bao.
La temperatura del agua no debe exceder los 37C (o la temperatura "normal" especfica de la especie)
Puede ser de beneficio tener la temperatura del agua algunos grados ms fra que la temperatura ptima para
compensar por si ocurre cualquier fluctuacin de temperatura.
El agua para el bao debe ser limpia y libre de contaminacin bacteriana.
Los productos de sangre deben colocarse en una bolsa de plstico con cerradura de cierre o zipper para
mantener los puertos de la bolsa de sangre libres de posibles contaminaciones bacterianas por el agua del bao.
Si no se usan bolsas de plstico, los puertos de la bolsa de sangre deben mantenerse por arriba de la
superficie del agua para prevenir una posible contaminacin. Esto puede lograrse utilizando una aguja para
tejer o utensilio para brochetas limpias ensartadas a travs de las aberturas de la parte superior sellada de la
bolsa de sangre (Figura 5-8).
Asegurarse que el producto sanguneo est fsicamente separado del circulador mecnico para que el producto
sanguneo no se pueda atorar con l y pueda resultar potencialmente daado.
No coloque ningn producto sanguneo a calentar o descongelar a temperatura ambiente.
Recuerde que los productos sanguneos son un ambiente rico para el crecimiento de bacterias. El proceso de
calentamiento o descongelamiento y la subsiguiente transfusin deben ocurrir lo ms rpido posible.
Los eritrocitos deben ser transfundidos inmediatamente despus de haberlos calentado durante 15-20 minutos. Los
volmenes de plasma de 100 - 250 ml deben descongelarse dentro de 30 - 45 minutos y tambin deben ser transfundidos
inmediatamente despus del descongelamiento. El crio no debe exponerse a temperaturas de 30 - 37C por ms de 15
minutos (esto minimiza la degradacin del Factor VIII) y debe transfundirse inmediatamente despus del
descongelamiento.
Se debe realizar un chequeo visual a todo producto sanguneo antes de ser transfundido. Para productos de eritrocitos, la
coagulacin, cambios de color a morado oscuro o negro o hemlisis son indicativos de contaminacin bacteriana.
Figura 5-8. Calentando una unidad de sangre: los puertos deben mantenerse libres de contaminacin
bacteriana. Esto se logra mejor con una bolsa de plstico con cerradura de zipper o manteniendo los
puertos fuera del borde de la superficie del agua. - Para ver esta imagen en su tamao completo,
dirjase al sitio www.ivis.org . -

Calibracin de la centrfuga
En los Bancos de sangre, las centrfugas son usadas para la preparacin de los componentes y pruebas de compatibilidad; la
velocidad y revoluciones de la centrfuga son dos consideraciones importantes cuando se realizan estos procedimientos.
La velocidad de la centrfuga es usualmente especificada en los procedimientos de preparacin de los componentes
usando el valor conocido como fuerza centrfuga relativa o fcr.
La velocidad de la centrfuga vara segn el modelo y el fabricante.
La Immunofuge es una centrfuga ampliamente utilizada para las pruebas de compatibilidad; los tiempos de
centrifugacin en las pruebas de compatibilidad se especifican generalmente para el uso de este equipo.
Antes de usarse, las centrfugas usadas para la preparacin de componentes o pruebas de compatibilidad deben ser
evaluadas para asegurar su calidad.
El siguiente procedimiento resaltar el proceso de la calibracin de la centrfuga para la preparacin de componentes y

pruebas serolgicas. Una vez que los tiempos de centrifugacin son establecidos, deben confirmarse anualmente y despus
de reparaciones o ajustes a la centrfuga.
Calibracin de las centrfugas para preparacin de componentes
Los componentes sanguneos son preparados por separacin de sangre entera; este proceso puede acelerarse por el uso
de una centrfuga.
El tiempo de centrifugacin y la velocidad dependen de los tipos de componentes sanguneos que se van a realizar.
Se requieren 5 minutos de muchas revoluciones (5000 g) para la preparacin de eritrocitos
Se utilizan 3 minutos de pocas revoluciones (2000 g) en la preparacin de plasma rico en plaquetas.
Los tiempos de centrifugacin que se dan incluyen el tiempo de aceleracin, pero no incluyen el tiempo de
desaceleracin. La fuerza centrfuga relativa (en g) se calcula utilizando la siguiente frmula:
FCR (en g)= 28.38 X radio del rotor de la centrfuga en pulgadas X (rpm/1000) 2
La evaluacin del tiempo a altas revoluciones se obtiene realizando un control de calidad de los componentes que se
hicieron.
Los eritrocitos deben ser evaluados confirmando el hematocrito final de la unidad.
El crioprecipitado debe ser evaluado confirmando la actividad del fibringeno y el Factor VIII
La cantidad de revoluciones debe incrementarse o disminuirse de acuerdo al resultado de estas pruebas.
Las revoluciones por minuto (rpm) pueden confirmarse usando un tacmetro.
Calibracin de la centrfuga para pruebas de compatibilidad
La calibracin de las centrfugas usadas para pruebas serolgicas se realiza para asegurar que las revoluciones no causen
resultados ya sean falsos positivos o falsos negativos. Los siguientes procedimientos deben usarse para confirmar la
calibracin en centrfugas nuevas, anualmente o despus de cualquier ajuste o reparacin.
Por favor note que se evala el comportamiento de los eritrocitos, NO la fuerza de reaccin.
Centrifugacin salina
En las pruebas de compatibilidad, los eritrocitos que estn suspendidos en solucin salina requieren un tiempo de
centrifugacin basado en la reactividad de los eritrocitos en este medio. El siguiente procedimiento establece el
tiempo de centrifugacin salina.
Materiales necesarios
Suero que producir una reaccin 1+
Dos muestras de eritrocitos al 3 - 5%:
"Positivo" - Eritrocitos que reaccionarn con la muestra de suero antes mencionada
"Negativo" - Eritrocitos que no reaccionarn con la muestra de suero antes mencionada.
Tubos para la prueba de 12 x 75 mm
Pipetas
Observador de aglutinacin o rea bien iluminada
Centrfuga
Procedimiento
1. Colocar diez tubos para la prueba de 12 x 75 mm en una rejilla. Colocar dos gotas de suero en cada tubo.
2. En 5 de estos tubos, agregar una gota de eritrocitos "Negativos".
3. En los otros 5 tubos, agregar una gota de eritrocitos "Positivos".
4. Existen ahora 5 pares de tubos, cada uno conteniendo una muestra positiva y una negativa.
Centrifugar un par por 10 segundos, un par por 15 segundos, un par por 20 segundos, un par por 30 segundos y un
par por 40 segundos. Registrar los resultados en una hoja de trabajo similar a la que se muestra en la Tabla 5-1.

Tabla 5-1. Hoja de trabajo de calibracin de centrfuga serolgica

Para tiempo de revoluciones salina:
TIEMPO
EN
SEGUNDOS

SOBRENADANTE
CLARO?

BOTN DE
CLULAS
CLARAMENTE
DELINEADO?

CLULAS
FCILMENTE
RESUSPENDIDAS?

EL
POSITIVO
ES
POSITIVO?

EL
NEGATIVO
ES
NEGATIVO?

10
15
20
30
40
Para tiempo de revoluciones en lavado:
TIEMPO EN SEGUNDOS

SOBRENADANTE CLARO?

BOTN DE CLULAS
CLARAMENTE
DELINEADO?

30
45
60
90
120
Interpretacin
El tiempo de centrifugacin que debe usarse para centrifugacin salina es el tiempo de centrifugacin ms corto que
llene los siguientes criterios (tal y como se especifica por el American Association of Blood Banks):
1. El tubo positivo es 1+ positivo.
2. El tubo negativo es negativo.
3. El botn de clulas est claramente delineado.
4. El sobrenadante es claro.
5. El botn de clulas puede resuspenderse fcilmente.
NOTA: Si se utilizan aditivos (tales como albmina o solucin salina de baja fuerza inicao hipotnica) en las
pruebas cruzadas, este procedimiento debe ser modificado para establecer los tiempos de revoluciones. Esto debe
realizarse en un procedimiento separado del que se usa para establecer las revoluciones salinas. Se debe preparar un
juego de 5 muestras en pares como se explic en el procedimiento anterior. El aditivo apropiado debe incubarse con
cada par de tubos para el tiempo apropiado de incubacin y luego evaluado para el tiempo de las revoluciones.
Revoluciones para lavado
Los eritrocitos usados para las pruebas de compatibilidad deben ser lavados para remover las sustancias potencialmente
contaminantes, las cuales pueden interferir con los procedimientos de las pruebas. El siguiente procedimiento establece el
tiempo de centrifugacin para las revoluciones de lavado.
Materiales necesarios:
Espcimen de sangre con EDTA con un hematocrito normal
Solucin salina normal
Tubos para pruebas de 12 x 75 mm
Pipetas
Observador de aglutinacin o rea bien iluminada
Centrfuga
Procedimiento
1. Colocar cinco tubos para pruebas de 12 x75 mm en una rejilla.

2. Agregar al menos 250 microlitros del espcimen de sangre con EDTA a cada tubo.
3. Agregar aproximadamente 4 ml de solucin salina normal a cada tubo. Mezclar bien para homogenizar.
4. Centrifugar un tubo por 30 segundos (recordar balancear!), un tubo por 45 segundos, un tubo por 60 segundos, un
tubo por 90 segundos y un tubo por 120 segundos. Registrar los resultados en una hoja de trabajo similar a la Tabla 51.
Interpretacin
El tiempo de centrifugacin que debe usarse en las revoluciones para lavado es el tiempo de centrifugacin ms corto
que llene los siguientes criterios:
1. El sobrenadante es claro.
2. El botn de clulas est claramente delineado.
3. Los eritrocitos estn en un botn compacto.
Resultados
Los tiempos de revoluciones deben ser publicados y/o incluidos en los procedimientos para asegurar la uniformidad
en la prueba.
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