ENZIMAS

Sin Catalisis, las reacciones qumicas que son necesarias para mantener la vida, no
podran darse en una escala til de tiempo.
Las Enzimas tiene un gran poder cataltico y poseen un elevado grado de especificidad.
Muchos frmacos ejercen sus efectos biolgicos mediante su interaccion con enzimas.

6.1 Introduccion a las Enzimas

La Mayoria de las Enzimas son Proteinas
Con la excepcin de un pequeo grupo de de molculas de ARN cataltico, todas las
enzimas son protenas.
Hay enzimas que slo requieren de sus residuos aminoacidicos para realizar su actividad
cataltica. Otros requieren un componenete quimico adicional, llamado cofactor. El
Cofactor puede ser uno o varios iones inorgnicos (Fe2+, Mg2+, Mn2+ o Zn2+) o una
molecula organica o metalorganica deominada coenzima. Las coenzimas actan como
transportadores transitorios de grupos funcionales especficos.
Algunas enzimas requieren tanto una coenzima como iones metlicos para su actividad.
Una coenzima o ion metalico unido covalentemente o de manera muy fuerte a la
protena enzimtica se denomina Grupo Prostetico. Una enzima completa y
catalticamente activa junto con su coenzima y/o iones metlicos se denomina
Holoenzima.
Algunas enzimas son modificadas covalentemente por fosforilacion, glucosilacion y otros
procesos.

6.2 Funcionamiento de las Enzimas

Una enzima proporciona un ambiente especifico dentro del cual una reaccin
determinada puede transcrrir a mayor velocidad. Una raccion catalizada
enzimticamente tiene lugar dentro del Sitio Activo.
La molecula fijada en el Sitio activo y sobre la cual actua la enzima se denomina
Sustrato.
A menudo, el sitio activo recubre el Sustrato y lo secuestra completamnte de la
disolucin.
Las enzimas alteran las velocidades de reaccin pero no los equilibrios
La funcin de una catalizador es aumentar la
velocidad de una reaccin, los catalizadores no
modfican los equilibrios de reaccin.
La Energia en los Sistemas biolgicos se describe en
funcin de la Energia Libre, G. En El Diagrama de la
Cordenada se representa la energa libre del Sistema
frente al progreso de la reaccin (cordenada de la
reaccin). El punto de partida tanto para la reaccin
hacia la izquierda como hacia la derecha se denomina
Estado Basal, que es la contribucin a la energa
libre del sistema de una molecula promedio (S o P)
bajo un conjunto de condiciones dadas.

Figura 6-2 Diagrama de

la cordenada de reaccin.
Se representa la energa
libre del sistema frente al
progreso de la reaccin

Dado que en los sistemas biolgicos participa normalmente el H+ en concentraciones

muy lejanas de 1M, los bioqumicos definen la variacin de la energa libre estndar
bioqumica G, como la variacion de energa libre estndar a pH 7.
El equilibrio entre S y P refleja la diferencia en energa libre de sus estados basales. En el
ej. De la Figura 6-2, la energa libre del estado basal de P es inferior a la de S, por lo que
el G0 que da la reaccin es negativo y el equilibrio favorece a P. La posicin y direccin
de este equilibrio no estan afectados por ningn catalizador.
Un equilibrio favorable no indica que la conversin S-P sea rpida. La Velocidad de una
reaccin depende de otro parmetro. Existe una barrera energtica entre S-P que es
representada por la colinda energtica en la figura 6-2 y 6-3. Para que haya reaccin
las molculas han de superar esta barrera por lo
que se deben llevar a un nivel energtico
superior. En la cumbre de la colina energtica
existe un punto en el que la cada hacia el
estado S o P es igual de probable. Es lo que se
denomina el Estado de Transicin. El estado
de transicin es un momento molecular fugaz en
el que acontecimientos tales como rotura o
formacin de enlace y desarrollo de cargas han
legado al instante preciso en el que el colapso
hacia sustrato o producto es igualmente
Figura 6-3. Diagrama de cordenada
de reaccin en la que se comparan
probable. La diferencia entre los niveles de
las reacciones catalizadas por
Energia del Estado Basal y del Estado de
enzima y sin catalizar. En la reaccin S
Transicion se denomina Energia de
P, los intermedios ES y EP ocupan
Activacion, G#.
minimos en la curva. Los Terminos
#

G uncat y G cat corresponden a las

La velocidad de una reaccin refleja esta
energas de activacin de las reacciones
energa de activacin: a una energa de
sin catalizar y catalizada,
activacin mas elevada corresponde una
respectivamente. La energa de
reaccin mas lenta. Las velocidades de reaccin
pueden aumentarse incrementando la temperatura y/o la presin. De modo alternaivo,
se puede disminuir la energa de Activacion, aadiendo un catalizador. La catlisis
aumenta la velocidad de reaccin disminuyendo las energas de activacin.

No se gasta enzima en el proceso y el punto de equilibrio no queda afectado. No

obstante, la reaccin alcanza el equilibrio de una manera mucho mas rpida.
Cuando la reaccin S P esta catalizada por una enzima, los complejos ES y EP pueden
ser considerados intermedios de reaccin a pesar de que S y P sean especies qumicas
estables; los complejos ES y EP ocupan valles en el diagrama de cordenada de reaccin
(Fig. 6-3)
Cuando en una reaccin existen varios pasos, la velocidad global viene determinada por
el paso (o pasos) cuya energa de activacin es la mas elevada; este paso se denomina
paso limitante de velocidad.
Sin estas barreras energticas, las macromolculas complejas revertiran
espontneamente a formas moleculares mucho mas sencillas y no podran existir ni las
estructuras complejas y altamente ordenadas ni los procesos metablicos que tienen
lugar en las clulas.

Las velocidades de reaccin y los equilibrios tienen definiciones termodinmicas precisas

Los Equilibrios de reaccin estn relacionados a la variacin de energa libre estndar
de la reaccin, G0, mientras que las velocidades de reaccin estn unidas a la
energa de activacin, G#.
Un Equilibrio tal como S <--> P viene descrito como por una cte. De Equilibrio, Keq. En
las condiciones estndar la cte. De equilibrio se denota como Keq.
Keq = [P]/ [S]

(6-2)

Partiendo de la termodinmica, puede describirse la relacin entre Keq y G# mediante

la expresin

La cte. de eq. esta relacionada directamente con el cambio de energa libre global de la
reaccin. Un valor negativo grande de G0 refleja un equilibrio de reaccin favorable
aunque, esto no significa que la reaccin transcurra a una velocidad elevada.
La velocidad de una reaccin viene determinada por la concentracin de reactivo (o
reactivos) y por una cte. de Velocidad, k. Ecuacin de Velocidad:

En esta reaccin, una reaccion de Primer Orden, la velocidad slo depende de la

concentracion. El factor k es una cte. de proporcionalidad que refleja la probabilidad de
reaccion bajo un conjunto de condiciones (pH, tempertatura, etc). Aqu k es una cte. de
velocidad de 1er Orden y sus unidades son de Tiempos Inversos, s-1. Si una reaccion
de primer orden tiene una cte. de velocidad k de 0,03s-1 se puede interpretar
(cualitativamente) que 3% de sustrato adquirible sera convertido en P en 1 s.
En una reaccion de Segundo Orden, la velocidad depende de la concentracion de 2
compuestos diferentes, o si reaccionan 2 moleculas del mismo compuesto. El factor k
pasa a tomar las unidades de M-1.s-1 y la ecuacion de velocidad tien la forma de:

Aplicando la teoria del Estado de transicion se puede deducir una expresion que
relaciona la magnitud de la constante de velocidad con la energia de activacion
k= la cte de Bolztman
h= cte de Planck

El pto. Importante es que la relacion entre la cte. de Velocidad k y la Energia de

Activacion, G#, es inversa y exponencial. sta es la base de la afirmacion de que una
energia de activacion menor significa una velocidad de reaccion mayor.
Principios que explican el poder catalitico y la especificidad de las enzimas
Primero Los grupos funcionales cataliticos de las enzimas pueden formar enlaces covalentes
transitorios con un sustrato, activandolo para la reaccion, o bien puede transferirse
transitoriamente un grupo del sustrato a la enzima. Las interacciones covalentes entre enzimas
y sustratos hacen disminuir la energia de activacion (por lo que se acelera la reaccion),
proporcionando un camino de reaccion alternativo y de menor energia.
Segundo Interaccion no covalente entre la enzima y el sustrato El Factor que diferncia
realmente las enzimas de la mayoria de los catalizadores no enzimaticos es la formacion de un
complejo ES especifico. El establecimiento de c/interaccion debil en el complejo ES viene
acompaado por la liberacion de una pequea cantidad de energia libre que estabiliza la
interaccion. La energia procedente de la interaccion enzima-sustrato se denomina Energia de
Fijacion, GB. La Energia de Fijacion es la principal fuente de energia libre utilizada
por las enzimas para disminuir la energia de activacion de las reaccion.
Hay 2 principios fundamentales interrelacionados que explican como las Enzimas aprovechan la
energia de union No Covalente:
1- La mayor parte del poder catalitico de la enzima procede en ultimo termino de la Energia
Libre liberada al formarse los multiples enlaces debiles e interacciones entre una enzima y
un sustrato. Esta Energia de Fijacion contribuye tanto a la especificidad como a la
catalisis.
2- Las interacciones debiles estan optimizadas en el esado de trancision de la reaccion; los
sitios activos de la enzima son complementarios no a los sustratos, sino a los estados de
transicion.
Una enzima totalmente complementaria a su sustrato sera una enzima muy deficiente
Figura 6-5
En el complejo ES se forman algunas interacciones
debiles, pero complemento total de las
Interacciones debilesposibles entre sustrato y
enzima solo se forman cuando el sustrato alcanza
el estado de Transicion. La Energia Libe (Energia
de Fijacion) liberada por la formacion de esas
interacciones equilibra parcialmente la energia
requerida para llegar a la cima de la colina
energetica. La suma de la Energia de activacion
desfavorable (positica) G# y la Energia de
Fijacion GB favorable (negativa) da como
resultado una energia de activacion neta menor.
(Fig 6-6).
Las interacciones de fijacion debiles entre la
enzima y el sustrato proporcionan una fuerza
motriz sustancial para la catalisis enzimatica.
Las interacciones debiles formadas unicamente en
el estado de transicion son las que contribuyen de
modo principal a la catalisis.

Figura 6-6 Papel de la energa de

fijacion en la catalisis
Para disminuir la energia de activacion de
una reaccion, el sistema ha de adquirir una
cantidad de energia equivalente a la
cantidad en que disminuye G#. Gran parte
de esta energia proviene mayoritariamente
de la energia de fijacion () conseguida en la
formacion de interacciones no covalentes
debiles entre sustrato y enzima en el estado

La necesidad de multiples interacciones debiles para impulsar la catalisis es una de las razonaes
de que las enzimas

La energia de Fijacion contribuye a la especificidad de reaccion y a la catalisis

La misma energia de fijacion que aporta energia para la catalisis tambien hace que la enzima
sea especifica. La especificidad se refiere a la capacidad de una enzima de discriminar entre un
sustrato y una molecula competitiva.
La catalisis y la especificidad son dificiles de diferenciar experimentalmente porque surgen del
mismo fenomeno.
La especificidad proviene de la formacion de multiples interacciones debiles entre la enzima y su
sustrato.
Para que una reaccion tenga lugar. Entre los factores fisicos y termodinamicos principales que
contribuyen al valor de G# , la barrera para una reaccion se podrian incluir:
1- la entropia (libertad de movimiento) de las moleculas en disolucion, que reduce ia
posibilidad de que reaccionen entre ellas
2- la capa de solvatacion del agua unida por puentes de hidrogeno que rodea y ayuda a
estabilizar muchas biomoleculas en disohicion acuosa
3- la distorsion de los sustratos que ha de tener lugar en muchas reacciones
4- la necesidad de conseguir un alineamiento adecuado de los grupos funcionales cataliticos
en el enzima.
Se puede utilizar la energia de fijacion para superar todas estas barreras.
En primer lugar, una gran restriccion en los movimientos relativos de los dos sustratos que han
de reaccionar, o reduccin de entropia, es uno de los beneficios obvios de la fijacion a la enzima.
La energia de fijacion mantiene los sustratos en la orientacion correcta para reaccionar, lo que
es una contribucin muy importante a la catalisis ya que las colisiones productivas entre
moleculas en disolucion pueden ser extremadamente raras. Los sustratos se pueden alinear
sobre el enzima de forma precisa, generando un gran numero de interacciones debiles entre
ellos
En segundo lugar, la formacion de enlaces debiles entre enzima y sustrato tambien da lugar a la
desolvatacion del sustrato. Las interacciones enzima-sustrato reemplazan la mayoria de, o
todos, los enlaces de hidrogeno que puedan existir en disolucin entre el sustrato y el agua.
En tercer lugar, la energia de fijacin correspondiente a las interacciones debiles formadas
unicamente durante el estado de transicion de la reaccion ayuda a compensar
termodinamicamente cualquier distorsion, principalmente en forma de redistribucion electronica,
que debe experimentar el sustrato para reaccionar
Finalmente y cuarto, la propia enzima puede experimentar un cambio en la conformacion cuando
se fija el sustrato, tambien inducido por multiples interacciones debiles con el sustrato. Esta
situacion se conoce como encaje inducido. El encaje inducido puede servir para disponer grupos
funcionales especificos de la enzima en la orientacion adecuada para catalizar la reaccion. El
cambio de conformacion tambin permite la formacion de interacciones debiles adicionales en el
estado de transicion.

6.3 La cinetica enzimatica como

metodo para comprender el
mecanismo
El metodo mas antiguo para estudiar
mecanismos de reaccion enzimatica
consiste en la determinacion de la
velocidad de la reaccion y del modo
en que esta cambia en respuesta a
cambios en los parametros
experimentales, una disciplina conocida
como Cinetica Enzimatica.

Figura 6-10 Velocidades iniciales de las reacciones

catalizadas enzimaticamente
La velocidad de la reaccion catalizada por la enzima
desciende al irse convirtiendo el sustralo en producto. La
tangente de cada curva tomada a tiempo = 0 define la

Una aproximacion que sirve para simplificar los experimentos cineticos consiste en medir la
Velocidad Inicial, designada V0 (Fig. 6-10). En una reaccion tipica, la enzima puede estar
presente en concentraciones del orden nanomolar, mientras que [S] puede ser cinco o seis
ordenes de magnitud mayor. Si solo se toman datos del inicio de la reaccion (a menudo los
primeros 60 segundos o menos), los cambios en (S) se limitan a un pequeo porcentje y puede
considerarse que la concentracin permanece constante. A continuacion puede explorarse el
valor de V0 en funcion de [S], valor que es ajustado por el investigador. El efecto de la variacion
de [S] sobre V0 cuando se mantiene constante la concentracion de enzima se muestra en la
Figura 6-11. A concentraciones de sustrato relativamente bajas, V 0 aumenta casi linealmente con
el incremento de [S]. A mayores concentraciones de sustrato, V 0 aumenta a incrementos cada
vez menores en respuesta a incrementos de [S]. Finalmente, se alcanza un punto mas alla del
cual se dan incrementos muy pequeos de V0 a medida que aumenta [S]. Esta meseta es la
velocidad maxima, Vmax.

Velocidad Inicial, V0

La concentracion de sustrato a la que V0 es la mitad

de la maxima es Km, la cte. de Michaelis-Menten. En
un experimento de este tipo la concentracion de
enzima es generalmente muy baja [S] >> [E]

Leonor Michaelis y Maud Menten

postularon que el enzima se combina en
primer lugar de forma reversible con su
sustrato formando un complejo enzimasustrato en un paso reversible
[S]
relativamente rapido:
(mM)

El complejo ES se descompone
seguidamente en un segundo paso mas
lento dando el enzima Ubre y el producto
de la reaccion P:

La curva describe parte de una hiperbola rectangular

con una asintota en Vmax. Si se continuase la curva
por debajo de [S] = 0 se aproximaria a una asintota
vertical a [S] = -Km

Puesto que la segunda reaccion (Ec. 6-8)

es la mas lenta y limita, por tanto, la
velocidad de la reaccion global, dicha
velocidad global ha de ser proporcional a la concentracion de la especie que reacciona en el
segndo paso, es decir, ES.
En cualquier momento de una reaccion catalizada por una enzima, sta existe en dos formas, la
forma libre o sin combinar E y la forma combinada ES. A baja [S], la mayor parte del enzima
estara en la forma sin combinar E. Aqui la velocidad sera proporcional a [S] porque el equilibrio
de la ecuacion 6-7 sera empujado hacia la formacion de mas ES a medida que [SJ aumenta. La
velocidad inicial maxima de la reaccion catalizada (V max) se observara cuando virtualmente
todo el enzima este en forma de complejo ES y la concentracion de E sea extremadamente
pequera. En estas condiciones, la enzima est saturada con su sustrato de modo que el
aumento adicional de [S] no tendra efecto sobre la velocidad.
El efecto de saturacion es uma caracteristica distintiva de la catalisis enzimatica y es el
responsable de la meseta observada en la Figura 6-11.
Cuando el enzima se mezcla inicialmente con un gran exceso de sustrato, existe un periodo
inicial, denominado estado preestacionario, durante el cual aumenta la concentracion del
complejo ES. Normalmente el estado preestacionario es demasiado corto para que sea
observado facilmente y dura tan solo unos microsegundos, por lo que no aparece en la Figura 610.
La reaccion alcanza rapidamente un estado estacionario en el que [ES] (y la concentracion de
otros intermedios) permanece aproximadamente constante con el tiempo.

La V0 medida refleja generalmente el estado estacionario, aun cuando V0 se limite a los primeros
instantes de la reaccion, y el analisis de las velocidades iniciales se conoce como cinetica del
estado estacionario.

La relacion entre concentracion y velocidad de reaccion enzimatica se puede expresar

cuantitativamente
Michaelis-Menten dedujeron esta ecuacion a partir de su hipotesis basica de que el paso
limitante de velocidad en las reacciones enzimaticas es la descomposicion del complejo ES para
formar el producto y el enzima libre:

[S], V0 , Vmax y la cte. Km son terminos que se pueden medir facilmente experimentalmente.
En los primeros momentos de la reaccion, la concentracion del producto, [P], es despreciable y
se contempla la simplificacion de que puede ignorarse la reaccion inversa P --> S (descrita por k 2).

V0 viene determinada por la descomposicion de ES para dar producto, que viene fijada por [ES]:

Dado que [ES] de la Ecuacion 6-11 no se puede medir experimentalmente con facilidad, hemos
de empezar por encontrar una expresion alternativa para este termino. En primer lugar
introduciremos el termino [Et] que representa la concentracion total de enzima (la suma de
enzima libre y enzima unido al sustrato).
La enzima libre, o no fijada, se puede representar, por tanto, como [Et] - [ES]. Ademas, debido a
que [S] es ordinariamente mucho mayor que [Et], la cantidad de sustrato fijada por la enzima en
cualquier momento de la reaccion es despreciable comparado con la [S] total.

Esta es la ecuacion de Michaelis-Menten, la ecuacion de velocidad de una reaccion catalizada

enzimaticamente con un sustrato. Es una definicion de la relacion cuantitativa entre la velocidad
inicial V0, la velocidad maxima Vmax y la concentracin inicial de sustrato [S], todos ellos
relacionados a traves de la constante de Michaelis, Km. Observese que Km tiene unidades de
concenltracion. Se ajusta esta ecuacion a los hechos? Si, podemos confirmarlo considerando las
situaciones limite donde [S] es muy alta o muy baja, tal como muestra la Figura 6-12.
De la ecuacion de Michaelis-Menten emerge una relacin numerica importante en el caso
especial en que V0 es exactamente la mitad de Vmax (6-12). En ese caso

Al dividir x Vmax obtenemos:

Despejando Km obtenemos Km + [S] = 2[S], o:

Km es equivalente a la [S] a la cual V0 es la mitad de Vmax

Los parametros sineticos se utilizan para comparar actividades enzimaticas

Inerpretacion de Vmax y de Km
En la Figura 6-12 se muestra un metodo grafico sencillo para obtener un valor aproximado de Km. Un procedimiento mas
practico, utilizando una grafica doble reciproca, se presenta en el Recuadro 6-1. La Km puede variar considerablemente de una
enzima a otra, e incluso para diferentes sustratos de la misma enzima (Tabla 6-6). A veces el termino se utiliza (a menudo de
forma inadecuada) como una indicacin de la afinidad de una enzima por su sustrato. El significado real de Km depende de
aspectos especificos del mecanismo de reaccion tales como el numero y velocidades relativas de los pasos individuales de la
reaccion. Para reacciones de dos pasos.
6-24

Cuando k2 es limitante de velocidad, k2 << k-1 por lo que se simplifica a k-1/k1 que se define como constante de disociacion,
Kd, del complejo ES. Cuando se dan estas condiciones, representa una medida de la afinidad de la enzima por su sustrato en el
complejo ES. Sin embargo, esta situacion no es valida para la mayoria de las enzimas. A veces, k2 >> k-1 por lo que Km = k2/k1.
Km no se puede considerar como una medida sencilla de la afinidad por el sustrato. Aun son mas comunes los casos en los que
la reaccin transcurre a traves de multiples pasos despues de la formacion del complejo ES; en estas condiciones Km es una
funcion muy compleja de muchas constantes de velocidad.
Vmax tambien varia mucho de un enzima a otro. Si un enzima reacciona segun el mecanismo de Michaelis-Menten de dos pasos,
= /c2(Etl en donde k2 es el paso limitante de velocidad. No obstante, el numero de pasos en la reaccion y la