PROCEDIMIENTO DE ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA:

1. Nos aseguramos de usar guantes durante la manipulacion de las muestras , los

reactivos y el equipo.
2.Se armo los geles de agarosa al 8%, se dejo polimerizar por 10 min.
aproximadamente , luego se sumergi el sistema conteniendo los geles polimerizados
en su tanque ( cmara electrofortica) con el buffer TBE 1X para ADN . Al momento de
sumergir los geles en el tanque nos aseguramos que los pocillos del gel estn
totalmente saturados de buffer.
3.Sobre un pedazo de lamina extensible de parafina, se preparo una mezcla de 1 ul
ADN con 1 ul de buffer cargas repartidas en alcuotas de acuerdo al nmero de
muestras que colocamos en los pocillos (considerar el uso de un marcador de peso
molecular estndar de ADN).
4.Con el uso de puntas de 20 ul se procedi a cargar cuidadosamente la muestra en
los pocillos del gel de agarosa evitando la contaminacin del pocillo contiguo.
5.Finalizada la colocacin de las muestras de ADN en los pocillos , se cubri el tanque
con la tapa y se conecto los cables de los electrodos en la fuente de poder .luego se
encendi la fuente de poder y procedimos a seleccionar el voltaje adecuado ( puede
estar comprendido entre 75 a 120 voltios).
6.Luego que seleccionamos las condiciones de voltaje , se inicio el proceso de la
electroforesis. Durante el proceso se evidenciaran dos frentes de corrida de diferente
color y distancia de migracin .Ambos colores , azul oscuro y azul claro corresponden a
los colorantes azul de bromo fenol y xilenecianol que conforman el buffer de la muestra.
El xilenecianol en geles de poliacrilamida al 8% migra de manera similar a un
fragmento de ADN de 160 pares de base (pb) mientras que el azul de bromo fenol a
esta misma concentracin de poliacrilamida es equivalente a un fragmento de 45 pb.
7.Transcurrido el tiempo de corrida de electroforesis se procedi al desmontaje del
equipo empezando con la desconexin de los electrodos de la fuente de poder ,
removiendo el sistema que contiene el gel de agarosa.
8.Se removi el gel de uno de los vidrios, para realizar este proceso se requiere tener
mucho cuidado pues el gel de poliacrilamida es muy frgil y puede romperse con
facilidad . Se desplazo el gel hacia un envase limpio para su respectiva tincin con
nitrato de plata.
9. Los vidrios los espaciadores y el tanque se lavaron con abundante agua destilada y
se seco a temperatura ambiente o en una estufa a 37*C.

10.En una bandeja conteniendo solucin de fijacin , se coloco el gel de poliacrilamida

y se incubo en agitacin constante durante 5 minutos .Luego se retiro el gel de la
solucin d fijacin y se coloco en un recipiente con agua destilada (Se repiti tres veces
esta operacin).
11. Se retiro el gel del recipiente y se coloco el gel en la solucin de tincin ,luego se
agito constante durante 5-7 minutos.
12.Se retiro el gel d la solucin de tincin y se lavo en agua destilada durante 5
segundos.
13.Inmediatamente se coloco el gel en la solucin de revelado y se dejo en agitacin
constante hasta que empiecen a aparecer las bandas.
14.Se seco el gel para registrar el resultado final.
15. Luego se observo los resultados obtenidos y se discuti.