Gentica Tema 5

Cada cepa que se forme las sembramos en medio mnimo, las que crezcan sern
colonias de levaduras que contengan el plsmido con el gen silvestre. Siempre que
podamos analizar el fenotipo mutante celularmente y no pluricelularmente. Valido para
encontrar genes implicados en rutas metablicas. Homologa= Levadura + Levadura
Heterloga = Levadura + Humana
Por ejemplo, cogemos la de levadura enferma y un humano sano y as clonarlo (en
genes muy conservados, las protenas humanas funcionan igual de bien en levaduras)
Tenemos una genoteca de DNA humano que hemos pasado a E.coli o al fago lamda
(plsmidos o halos de lisis) se utilizaban placas de Petri muy grandes para analizar. En
el filtro tenemos una rplica que tratamos para desnaturalizar el DNA e hibridarlo con
una sonda radiactiva, si algn fago o bacteria contena el gen se hibrida y se queda
unida al filtro de nitrocelulosa, podemos utilizar sondas heterlogas (aunque la
hibridacin no sea perfecta podemos conseguir que hibride si la Tem. no es demasiado
alta) u homologas. Detectamos con una placa fotogrfico y comparo en mi placa Petri
las colonias que tienen el gen de inters (ejemplo insulina)
Transposon: son genes que saltan y si se colocan en la secuencia de un gen pueden
cambiar o eliminar la funcin de ese gen.
Podemos seleccionar las bacterias en las que ha saltado el transposon. Me interesa saber
cual es el gen que media en la luz, por lo que el posible transposon altera ese gen.
La trasposasa es la protena que reconoce unas secuencias cortas de trasposones esto lo
podemos utilizar para introducir genes. Necesitamos la entrada de los dos plasmidos en
el nucleo de un blastodermo.
Esto tambin nos sirve para saber los genes que participan en el desarrollo es decir en
que momento concreto expresan el gen introducido. Se pueden buscar fenotipos
concretos o patrones de expresin.
Como sabemos la secuencia del transposn sabemos su sitios de corte. Si por ejemplo es
EcoRI tenemos un corte en el transposon y bien a la izquierda o a la derecha o en los
dos o cortar con una enzima que sepamos que no corta en el transposn entonces
tendremos un fragmento que englobe al transposon, son los dos mtodos para obtener
un fragmento que incluya el gen de inters. Recirculamos los fragmentos haciendo
ligacin con una concentracin muy baja de ADN en un volumen amplio. Solo uno de
los fragmentos lleva el gen de resistencia por lo tanto cuando se implanten en E.coli
podemos tratar con kanamicina por ejemplo y seleccionar el plasmido para observar el
gen donde ha saltado el transposon, tambin podemos hacer una PCR inversa con
cebadores para que amplifiquen la secuencia adyacente del gen donde se ha incrustado
el transposon. Con la PCR no necesitamos el gen de resistencia a kanamicina. poca
pre-genmica
El primer anlisis de metagenmica se hizo en agua marina, ahora el anlisis de la flora
microbiana est de moda.

ORFs mejor mtodo para buscar genes de procariotas, existen diversas fases de lectura,
lo que tenemos que buscar es un tramo de lectura abierta sin codones de stop en la fase
+2 que es la que menos stops tiene buscamos el ATG de inicio permitiendo na protena
con un tamao bueno, para un minimo de 100 aa.
Buscar secuencias con complementariedad interna que permita adoptar esa estructura
tpica, en los transferentes es bastante fcil.