Diarreognica Escherichia Coli Que Llevan Genes De

Virulencia Suplementario Son Una Causa Importante

De Enfermedad Moderada A Severa Diarreicas En
Mxico.
Introduccin
Enfermedades diarreicas son una causa importante de mortalidad y morbilidad entre
los nios menores de 5 aos de edad que representa 711,800 muertes y 1.731
millones de casos, con una incidencia de 2,7 episodios de diarrea por nio por ao
en 2011. En Mxico, la enfermedad diarreica contina siendo un problema de salud
nacional. Es la segunda causa de morbilidad y la quinta causa de mortalidad entre
los nios menores de cinco aos de edad. En 2010, se registraron ms de 5,5
millones de casos de diarrea para una tasa nacional de 5,264.24 por cada 100.000
habitantes; la mayora de estos casos ocurren en nios pequeos. La carga es
especialmente alto en el estado de Yucatn, que ocupa el tercer lugar en la
mortalidad por diarrea asociada a nivel nacional.
La prevalencia de diferentes patgenos entricos vara entre los pases y reas
geogrficas. La importancia para la salud pblica de los grupos de Escherichia coli
diarreognicas (DEC) ha adquirido una mayor relevancia en los ltimos aos. DEC
infecciones se han asociado con la diarrea aguda y persistente (> 14 das), as como
con retrasos de crecimiento y retraso del crecimiento, que a su vez puede conducir
a deterioro cognitivo a largo plazo. Por otra parte, varios estudios sugieren que
diciembre es responsable de hasta un 30% -40% de los episodios de diarrea aguda
en nios.
Diciembre se han clasificado tradicionalmente en seis grupos en funcin de los
rasgos clnicos, epidemiolgicos y de virulencia: E. coli enterotoxignica (ETEC), E.
coli enteropatgena tpico y atpico (tepec, aEPEC), enteroinvasiva E. coli (EIEC),
enteroagregativa E. coli (CEEA), difusamente adherente E. coli (DAEC) y Shigaproductora de la toxina de E. coli (STEC). ETEC produce lbil termo (Lt) y
termoestable (ST) toxinas y STEC produce toxinas shiga-1 (stx1) y 2 (Stx2). EIEC
invade las clulas eucariotas, y EPEC y algunas cepas STEC inducir
transmembrana de sealizacin celular a travs de la intimina translocado intimina
y su receptor, lo que lleva a la formacin de adhesin y borrado (A / E) lesiones. En
contraste, DAEC y cepas CEEA continan siendo identificados por sus patrones
caractersticos de adherencia en clulas HEp-2 y no por la produccin de toxinas
conocidas o marcadores moleculares asociados con la virulencia. De manera
similar, las cepas aEPEC se definen nicamente por la presencia de la intimina y la
ausencia de formacin de haz tanto pilus (BFP) y las toxinas shiga. Aunque los tres
ltimos grupos DEC han sido asociados con aguda, as como la diarrea prolongada
y persistente, todava no existe un consenso sobre los marcadores de virulencia

especficos para estas cepas; ya que las propiedades de adherencia o presencia de

genes especficos por s solos no siempre distinguen entre los aislamientos
patgenos y no patgenos. En vista de la alta prevalencia de cepas DEC entre los
nios enfermos y adultos de todo el mundo, hay una clara necesidad de identificar
los genes de virulencia clave asociados con la enfermedad.
Aparte de los genes de virulencia que definen cada dism, se han reportado varios
otros, particularmente en CEEA. Dispersando, Dispersando sistema translocador
Aat, plsmido toxina codificada (PET) y enteroagregativa termoestable toxina 1
(EAST1), por ejemplo, fueron descritos por primera vez en cepas CEEA.
Dispersando, una protena anti-agregacin secretada, que acta para dispersar las
bacterias a travs de la capa de moco producido por el husped en respuesta a la
infeccin CEEA, se transloca por la protena transportadora de anti-agregacin
CEEA (AAT). Pet induce la contraccin del citoesqueleto y East 1 estimula el
receptor de guanilato ciclasa en una manera similar tanto a ETEC St toxina y
guanilina. Dos toxinas que causan apoptosis se han identificado en otros grupos
DEC. Toxina de hinchamiento citoletal (CDT), que induce una detencin del ciclo
celular irreversible, y subtilasa citotoxina (SubAB), lo que provoca el estrs retculo
endoplsmico grave y sin resolver, se han descrito, respectivamente, en EPEC y un
subconjunto de cepas de STEC.
A pesar de que la enfermedad diarreica contina siendo una causa importante de
muerte y morbilidad en nios mexicanos, se han realizado pocos estudios de
epidemiologa molecular en diciembre Como consecuencia, el verdadero impacto
de diciembre como un agente de la diarrea aguda en Mxico es unknown.We
recientemente mostraron que CEEA y aEPEC fueron los grupos DEC ms
frecuentes identificadas en nios con diarrea de Yucatn, Mxico. En el presente
estudio, se determin la prevalencia de diciembre entre los enteropatgenos
bacterianos (Shigella, Salmonella, Vibrio y Campylobacter) recuperadas de los
nios con diarrea aguda en Yucatn, as como la presencia de genes de virulencia
en cepas suplementarias DEC. Tambin se determin la gravedad y la edad de
distribucin clnica en nios con diarrea asociada a diciembre Adems de la
distribucin de DEC episodios grupos diarrea por la estacionalidad, la precipitacin
y la temperatura.
Materiales Y Mtodos
Declaracin De tica
Este estudio fue aprobado por el Comit de tica del Hospital O'Horn y el Comit
de Biotica CINVESTAV para la Investigacin Humana. Se requieren tutores legales
de los nios que participan en este estudio que firme un formulario de
consentimiento informado. Todos los nios recibieron tratamiento mdico para la
diarrea de acuerdo a los protocolos hospitalarios.
Sitio De Estudio Y Pacientes

El estudio fue realizado en el Hospital General O'Horn, un hospital pblico de tercer

nivel se encuentra en Yucatn, en el sureste de Mxico. Yucatn cuenta con un
clima clido y hmedo debido a su proximidad al Golfo de Mxico. La temperatura
media anual mxima es de 33 C (91 F), que van desde 28 C (82 F) en enero
a 36 C (97 F) en mayo, pero las temperaturas suelen elevarse por encima de 38
C (100 F) en este momento. Las bajas temperaturas oscilan entre los 18 C (64
F) en enero a 23 C (73 F) en mayo y junio. La temporada de lluvias es de junio
a octubre. La precipitacin media anual es de 115 centmetros (45 pulgadas), siendo
ms pesada durante los meses de verano.
Despus de escrito el consentimiento informado se obtuvo de los tutores de los
nios, las muestras de heces se recogieron de los nios con diarrea que requiera
hospitalizacin aguda adquirida en la comunidad en la sala de emergencia
peditrica. La diarrea se define como tres taburetes oms lquidos o semilquidos
aprobadas en un perodo de 24 h. La gravedad de la enfermedad se basa en la
clasificacin de la Organizacin de la Salud theWorld de deshidratacin. Los nios
sin deshidratacin fueron clasificados como diarrea leve y aquellos con
deshidratacin leve a moderada fueron clasificados como diarrea moderada.
Sndrome disentrica tambin fue clasificado como moderado basado en la
experiencia en nuestro hospital que ningn episodios son causadas por Shigella
dysenteriae tipo 1. Los nios que requieren tratamiento intravenoso para la
correccin de la deshidratacin y / o trastornos electrolticos fueron clasificados
como graves.
Las Muestras De Heces Y Anlisis Bacteriolgico
Las muestras de heces se recogieron en recipientes estriles que contienen medio
Cary Blair y analizadas para detectar la presencia de Salmonella spp, Shigella spp,
Escherichia coli, Campylobacter spp y Vibrio spp. mediante procedimientos
estndar. En pocas palabras, se inocularon muestras sobre XLD, Hektoen entrica,
verde brillante, Cefex, TCBS y MacConkey agar y tetrationato, Rappaport y caldos
peptona alcalina, y se incubaron a 37 C durante 18 a 24 h. Caldos se subcultivaron
a XLD, placas de agar verde brillante y TCBS y se incubaron durante otra 18-24 h.
Identificacin de Salmonella, Shigella y Vibrio aislamientos se realizaron con
pruebas bioqumicas convencionales y se confirma con tiras API 20E (BioMerieux,
Marcy l'Etoile, Francia). Aislamientos de Campylobacter se confirmaron
morfolgicamente con el microscopio de contraste de fase y de la oxidasa y catalasa
pruebas. Cinco colonias de E. coli similares fueron seleccionados de cada placa de
agar MacConkey, caracterizado por pruebas bioqumicas convencionales y se
sometieron a la prueba de PCR.
Ensayos De PCR Para La Identificacin De E. Coli Diarreognica
Para los propsitos de este estudio, DEC fue definida como una cepa de E. coli que
contena el conjunto de genes que definen para un grupo especfico tal como se
describe en la literatura cientfica, por la presente se hace referencia como "gen
DEC-definir". Una cepa no diciembre fue una cepa de E. coli que no contena el

conjunto de genes que definen pero podra albergar un gen de virulencia diferente,
por la presente se refiere como "gen de virulencia complementaria". Todos los
aislamientos de E. coli fueron sometidos a varios ensayos de PCR para identificar
los genes diciembre definitorias y los genes de virulencia complementarias (SVG).
Para todos los ensayos de PCR, lisados bacterianos se prepararon resuspendiendo
una sola colonia en 1 ml de agua desionizada (MilliQ) en un tubo de polipropileno,
seguido por ebullicin durante 1 min. Dos ensayos de PCR mltiplex descritos
anteriormente se utilizaron para la identificacin de genes que definen DEC-(Tabla
1). PCR 2 tambin identifica dos de los SVG, AAP y los genes que codifican para la
AATA Dispersando y su translocador Aat, anteriormente conocido como sonda de
AA, respectivamente [38]. Cepas STEC se caracterizaron adicionalmente para la
expresin del gen del antgeno lipopolisacrido O157 y enterohemolisina (hlyA)
utilizando un kit de aglutinacin de partculas de ltex (Oxoid Limited, Basingstoke,
Reino Unido), y PCR, respectivamente.
Desarrollo de un ensayo de PCR para la identificacin de cuatro genes de la toxina
de E. coli
Hemos desarrollado un tercer multiplex PCR para identificar otros cuatro E. coli SVG
utilizando cebadores descritos anteriormente para Asta, cdt, mascotas y SubAB que
codifican toxinas EAST1, CDT, mascotas y subtilasa, respectivamente. Para fines
de normalizacin, se utiliz ADN de cepas de referencia CEEA 042 (ASTA,
mascota) y EPEC O86: H34 (CDT). Tambin utilizamos el ADN de 98NK2 cepa
(SubAB), proporcionada por el Dr. Pablo Okhuysen (Universidad de Texas,
Houston). Los mejores resultados se obtuvieron utilizando una mezcla de cebadores
en las siguientes concentraciones: 16 pmol de cebadores Asta, 6 pmol para
mascotas, 10 pmol de SubAB y 5 pmol tanto Cdt1 y Cdt2 conjunto de cebadores.
En resumen, cada tubo de PCR contena 21 l de mezcla de reaccin de las
siguientes concentraciones: 2 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 MEDTA, 100 MDTT, 50%
(vol / vol) de glicerol, MgCl2 1,6 mm, 0.75U / 25 l Ampli Taq polimerasa (Invitrogen)
y 200 Meach dATP, dCTP, dGTP y dTTP (Invitrogen); 2 l de la mezcla de cebador
y 2 l de lisado bacteriano. Los tubos de PCR se sometieron a continuacin a las
siguientes condiciones de ciclo: 95 C (1 min, 1 ciclo); 95 C, 62 C (1 min a cada
temperatura) y 72 C, 1 min 20 s todo durante 35 ciclos; y una etapa de extensin
final (10 min, 72 C) en un termociclador (Bio-Rad). 5l de productos de PCR se
visualizaron despus de la electroforesis en un gel de agarosa 3% en tampn de
etidio y tincin con bromuro de Trisacetate- EDTA. Slo la presencia de la del
tamao correcto producto (s) de genes se interpret como una prueba positiva. Fig.
1 ilustra los tamaos de amplificacin de productos de PCR para todos los loci 4
utilizando una mezcla de control de ADN que contena 1,5 l de lisado bacteriano de
042 y O86: H34 cepas, adems de 0,5 l de ADN subtilasa en una concentracin
final de 0,212 g / l.

El Anlisis Estadstico
Los grupos se compararon mediante la prueba de chi-cuadrado de dos colas.
Cuando el anlisis se vio limitado por los valores bajos esperados, se emple la
prueba exacta de Fisher. Odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC)
para la probabilidad de co-deteccin se calcularon utilizando el software GraphPad
PRISM1version 5.0b.
RESULTADOS
La Prevalencia De Enteropatgenos Bacterianos Y Grupos DEC
Un total de 831 nios menores de cinco aos de edad fueron reclutados entre enero
de 2007 a enero de 2009 y desde enero de 2010 a diciembre de 2011. Uno o ms
enteropatgenos bacterianos fueron identificados en 463 (56%) nios; Dec el grupo
ms prevalente bacteriana (28%), seguido por Salmonella spp (12%), mientras que
los no-O1 Vibrio cholerae (2%) era el menos prevalente (Fig. 2A). De los 232 nios
con diciembre, estaban coinfectados 61 con otras bacterias patgenas (Salmonella,
27; Shigella, Campylobacter; 24, 6; Vibrio, 4).
La distribucin de los grupos DEC aisladas a partir de 232 nios se muestra en la
Fig. 2B; una gran proporcin de estos DAEC albergado (35%) y los grupos de la
CEEA (24%), mientras que los grupos EIEC y STEC eran raros. Ninguna de las
cepas STEC O157 eran. La mayora de los nios tenan infecciones simples DEC
(infecciones en las que slo un grupo dec aislado de heces del paciente).

El diez por ciento de los pacientes haba mezclado infecciones DEC (ms de un
grupo DEC el mismo paciente). De los 23 nios con infecciones mixtas, seis
albergaba DAEC + cepas CEEA, cinco DAEC + ETEC, cinco + ETEC CEEA y tres
DAEC + aEPEC. Adems, se identificaron CEEA + aEPEC, ETEC + aEPEC y ETEC
+ tepec cepas en un paciente cada uno, y un nio estaba infectado con tres cepas

diferentes (DEC DAEC + CEEA + ETEC). Otros tres nios (1%) tenan infecciones
hbridos causadas por cepas de E. coli que llevan genes que definen por ms de un
diciembre; dos pacientes llevaban una cepa DAEC-CEEA y un nio llevaron a una
cepa aEPEC-ETEC.
En la mayora de los pacientes con infecciones simples DEC, al menos tres de las
cinco cepas de E. coli recogidos por paciente fueron positivos para los genes
diciembre definitorias. Esto se observ en el 67%, 64%, 62,5%, 62% y 59% de los
pacientes positivos para tepec, DAEC, CEEA, aEPEC y ETEC, respectivamente.
Distribucin De Grupos DEC Por Edad
De los 831 nios, el 17% eran menores de 6 meses, el 31% tenan entre 6-12
meses, el 32% tenan entre 13-24 meses y el 20% eran mayores de 24 meses. Los
episodios de diarrea DEC se produjeron con una frecuencia similar en todos los
grupos de edad: 23%, 30%, 27% y 31%, respectivamente (Tabla 2). Hubo una
asociacin estadsticamente significativa entre la edad y la infeccin con un grupo
especfico de diciembre de la siguiente manera: 1) la diarrea CEEA se observ con
mayor frecuencia entre los nios en los 6-24 meses de edad que los nios menores
de seis meses de edad (8,3% vs. 2,1% , P = 0,008, OR = 4,2; IC del 95%, 1,3-13,9)
y 2) los nios en el grupo de edad de 13-24 meses tenan infecciones DEC menos
mixtos que los nios de los otros grupos de edad (0,7% vs 3,7%, P = 0,012, OR =
0,19; IC del 95%, 0,04-0,8) (Tabla 2). Se observ una tendencia para los nios
menores de 6 meses de edad que estn infectados con mayor frecuencia con cepas
tepec (2,8% vs 0,72%, p = 0,052, OR = 4,2 IC 95%, 1,3-14).
Distribucin De Grupos DEC Por La Estacionalidad, Las Precipitaciones Y La
Temperatura
La distribucin de los grupos de DEC por la estacionalidad, las precipitaciones y la
temperatura para el perodo de cuatro aos (promedio) se muestra en la figura. 3.
Durante los cuatro aos los casos DAEC eran ms frecuentes en primavera (31/81,
38%), la temporada con las ms altas temperaturas y la precipitacin ms baja
(precipitacin promedio = 34,4 mm). Por el contrario, ETEC (11/21, 52%) CEEA
(20/56, 36%) y EPEC (16/46, 35%) fueron ms frecuentes durante el verano, que
es la temporada de lluvias (precipitacin promedio = 169 mm) en Yucatn.
La gravedad de la DEC episodios diarreicos datos clnicos completos estaban
disponibles para 126 nios con infecciones simples o mixtas DEC (ningn otro
patgeno bacteriano). Dieciocho nios (14%) tenan diarrea severa que requiere
rehidratacin intravenosa y 14 (11%) tenan diarrea sanguinolenta con fiebre
(DAEC, 7; CEEA, 5 y EPEC, 2). Episodios diarreicos graves se observaron con
mayor frecuencia en nios con EPEC (26%) y DAEC (18%). La mayora de los nios
(71%) fueron hospitalizadas por menos de 24 horas, pero 7 (6%) fueron ingresados
durante ms de 72 horas (Tabla 3).

Distribucin De Los Genes De Virulencia Complementarias Entre Diciembre Y

Cepas DEC No
Un total de 3100 cepas de E. coli fueron aisladas de 621 (75%) de las "muestras de
heces de los nios; 840 cepas DEC fueron aisladas de 232 nios de los cuales 298
(36%) tenan uno o ms genes de virulencia complementarias (SVG). Dos mil
sesenta y DEC no cepas de E. coli fueron aisladas de los 389 nios restantes; 589
(26%) de estos, aislado de 147 nios, lleva a SVG. Diciembre aislamientos tenan
significativamente ms SVG que las cepas no-DEC, 36% vs. 26%, (P <0,0001, OR
= 1,5; IC 95%, 1,3-1,8).

La distribucin de diciembre y las cepas no-DEC llevan SVG se muestra en la tabla

4. Ni el cinco (0,6%) EIEC o tres (0,35%) SVG cepas STEC albergado y slo uno
de los 9 aislamientos hbridos llevaron a dos de estos genes. Como se muestra en
la Tabla 4, de las 297 cepas restantes DEC con SVG, el gen ORIENTE 1 toxina
(ASTA) fue identificado en los 4 grupos de DEC, y se encontr con mayor frecuencia
entre CEEA, ETEC y tepec asla que en aEPEC y cepas DAEC ( P <0,0001, OR =
9; IC del 95%, 6-15). En contraste, el gen que codifica AAP para Dispersando fue
significativamente ms comn en CEEA de ETEC o DAEC (P <0,0001, OR = 214;
IC del 95%, 63-728, OR = 449; IC del 95%, 181-1113, respectivamente) y no se
encontr en ningn cepas EPEC. Adems, el gen que codifica para la AATA
Dispersando sistema translocador Aat solamente fue identificado en aislamientos
CEEA. Entre las 208 cepas CEEA llevan SVG, la combinacin de genes aap-AATA
fue el ms frecuentemente identificado (85,5%). Las cepas que albergaban el gen
de la toxina de mascotas (pet), slo se identificaron en grupos CEEA y EPEC, ms
frecuentemente entre este ltimo grupo (P = 0.0183, OR = 2,5; IC del 95%, 01/06).

El gen que codifica la toxina CDT (CDT) se encuentra exclusivamente en EPEC

asla, principalmente en tepec (P <0,0001, OR = 20,3; IC del 95%, 4,1-99,1). Es de
destacar que slo el 14 (4%) cepas DAEC albergaban SVG.
astA fue el SVG ms frecuente entre las cepas-DEC no (21%). Esta tasa de
prevalencia fue menor que los encontrados en CEEA, ETEC y tepec asla pero
mayor que en aEPEC y DAEC (P <0,0001, OR = 5; IC 95%, 3,3-7,7). Tanto aap y
genes AATA fueron significativamente ms frecuentes en CEEA aislamientos que
en cepas no-DEC, (AAP: 89% vs.13%, P <0,0001, OR = 51,3; IC 95%, 33,3-79,2;
AATA: 82% vs .1.3%, P <0,0001, OR = 340; IC del 95%, 207-559). Por el contrario,
de las cepas 589 no-DEC llevan SVG, slo tres (0,5%) llevaron a la combinacin de
genes aap-AATA. Cepas Positivo-mascotas fueron ms a menudo en EPEC que los
no-diciembre, 11% frente a 1,3%, respectivamente, (p <0,0001, OR = 9,3; IC del
95%, 5,1-16,9). Del mismo modo, las cepas cdt-positivos se encontraron entre 6,4%
EPEC asla vs 0,6% de las cepas no-DEC (P <0,0001, OR = 11,8; IC del 95%, 5,226,9).

Los Nios Con Infecciones Simples DEC Y Cepas SVG Portadoras

Como se muestra en la Tabla 5, de los 56 nios infectados con CEEA, 54 (96%)
cepas albergaba con SVG; los nicos dos nios cuyos aislamientos no llevar ningn
SVG eran menores de 12 meses. La mayora de los nios (85%) tenan cepas CEEA
que realizaron simultneamente los genes para Dispersando y su translocador
(AAP-AATA). Estas cepas se distribuyeron entre todos los grupos de edad, mientras
que las cepas CEEA-pet positivo slo se encontraron en el grupo de 13-24 meses.
Aparte de cepas CEEA, no hay otras cepas DEC llevaron a la combinacin de genes
aap-AATA. El porcentaje de nios que alberga tepec (33%) y aEPEC (27%) cepas
con SVG fue similar y hubo una tendencia clara para la presencia de SVG con la
edad (Tabla 5). cepas tepec albergan SVG fueron significativamente ms frecuentes
en nios mayores de 24 meses en comparacin con los menores de 24 meses (66%
vs. 29%) (p = 0,023, OR = 8,8, IC del 95%, 1,4-56,2). Adems, los pacientes
portadores de cepas EPEC cdt-positivas se encuentran exclusivamente en los nios
mayores de 24 meses. No se observaron asociaciones con la edad de SVG en
ETEC y DAEC.

DISCUSIN
A pesar de la gran cantidad de informes cientficos sobre las enfermedades
diarreicas en nios menores de cinco aos de edad, este estudio es uno de los
pocos que incluir la identificacin de patgenos bacterianos de rutina y los seis
identificado con frecuencia patgeno bacteriano en nios con diarrea. Las posibles
explicaciones para estas diferencias geogrficas incluyen variaciones en las
condiciones socioeconmicas, infraestructura de laboratorio y climticos. Nuestro
estudio encontr fuertes patrones estacionales para casi todos DEC-grupos. DAEC
fue altamente prevalente durante los meses calurosos y secos, mientras que ETEC,
CEEA y EPEC fueron ms frecuentes durante la estacin de lluvias, que es con
otros estudios realizados en Mxico.

Inesperadamente, DAEC fue aislado de 10% de nuestros sujetos de estudio con

diarrea, seguidos por CEEA (7%) y aEPEC (4,5%). Spano et al., Encontr que
DAEC fue el grupo diciembre superior (18,3%) a una sala de emergencia peditrica
en Brasil, seguido por aEPEC (5,5%) y la CEEA (4,6%). Asimismo, en un estudio
de cohorte realizado en nios de una zona periurbana de Lima, Per, Ochoa et al.,
Identificado CEEA como el diciembre ms frecuente (15,1%), seguido de EPEC

(7,6%) y DAEC (4,6%), respectivamente. El papel de ETEC como agente etiolgico

de la enfermedad diarreica en nios de Amrica Latina parece estar disminuyendo.
Slo el 2,5% de nuestros sujetos de estudio tena diarrea ETEC en comparacin
con 3,2% en los estudios de Brasil y Per. Con la excepcin de Argentina y Chile,
STEC sigue siendo poco comn en la mayora de los pases de Amrica Latina.
Slo un nio (0,1%) en nuestro estudio tuvo este grupo diciembre en comparacin
con el 0% y el 0,5% en Brasil y Per, respectivamente.
Nuestros resultados, como los de otros investigadores, muestran claramente que
los grupos de DEC son los principales agentes etiolgicos de las enfermedades
diarreicas en los nios. Casi la mitad de los nios con diarrea DECassociated en
este estudio fueron de moderada a severamente enfermos. Cabe destacar que el
11% presenta diarrea sanguinolenta con fiebre, con mayor frecuencia en nios
infectados por el DAEC. Cepas DAEC producen diarrea sanguinolenta se ha
informado por otros. Recientemente hemos informado el caso de los nios con
diarrea con sangre ayoung prolongado asociado con DAEC en que la hiptesis de
que esta presentacin clnica podra haber sido causado por el desmontaje de las
protenas de unin asociada ajustados y la induccin de citoquinas.
Los estudios realizados en zonas endmicas han informado de aislamiento de
cepas de DEC, particularmente CEEA, DAEC y aEPEC, en proporciones similares
de los dos nios con diarrea y controles sanos. Estos estudios, sin embargo, slo
informan presencia o ausencia fecha de dic. Un estudio reciente, que el ADN medido
mediante PCR cuantitativa en tiempo real a partir de heces EPEC-positivos de los
nios con y sin diarrea, mostr que la carga EPEC fue significativamente mayor en
los nios enfermos, demostrando as que la alta carga bacteriana se correlaciona
con la enfermedad. Aunque la carga bacteriana no se determin en el presente
estudio, se observ que la mayora de los pacientes DEC tenan tres o ms cepas
de E. coli que lleva genes diciembre definitoria de las 5 cepas que fueron
seleccionados por paciente. Una posible correlacin entre la proporcin de cepas
diciembre-positivos por paciente y la carga bacteriana diciembre en heces queda
por establecer. Se observ una mayor gravedad de la enfermedad en DAEC y
diarrea EPEC-asociado. En estos grupos de DEC, la gravedad podra estar
relacionado con la mayor frecuencia de diarrea sanguinolenta, y deshidratacin
grave, respectivamente.
Nuestro estudio revel asociaciones interesantes entre grupos especficos de DEC
y edad. Diarrea CEEA, por ejemplo, era ms comn en nios de 6-24 meses de
edad que los de los grupos de edad ms jvenes o ms viejos. En el estudio de
cohorte peruana, diarrea CEEA tambin fue mayor en los nios mayores de 6
meses. Los nios menores de seis meses pueden ser protegidos de la infeccin
diciembre por la lactancia materna y estar menos expuestos a patgenos
bacterianos ya que la mayora tienen introduccin limitada a los alimentos slidos y
que todava no han empezado a gatear. CEEA tambin fue ms frecuentemente
aislado de los nios menores de 2 aos en la India. La menor prevalencia en nios
mayores es probablemente debido a la inmunidad relacionada con la edad, lo que

hemos observado para otros patgenos como Salmonella y Campylobacter en

nuestra poblacin.
Dado que la mayora de la SVG buscado en este estudio se identificaron por primera
vez en CEEA y EPEC como se esperaba, que eran muy frecuentes en nuestra
CEEA (93%) y tepec (53%) de las cepas. El SVG tambin estuvieron presentes en
alrededor de una cuarta parte de nuestra ETEC (31%), aEPEC (22%) y las cepas
no-diciembre (26%). El gen que codifica EAST1 fue ampliamente distribuido en los
cuatro grupos de DEC. Desde EAST1 acciones qumicas y similitudes funcionales
con la ETEC Sta, se ha sugerido que las cepas que llevan Asta-podran haber
aumento de la virulencia ETEC. El gen astA ha sido identificada en cepas de ETEC
que posee principales adhesinas que son patgenos para los seres humanos. Por
otra parte, la mayora de los casos recientes de diarrea ETEC en Amrica Latina,
incluyendo Mxico, se han asociado con cepas lt-positivo mientras que los aislados
st-positivos predominaron en el pasado. Un aumento de la virulencia conferida por
EAST1 podra explicar este cambio epidemiolgico. aislamientos Asta-positivos de
la CEEA y aEPEC tambin se han asociado con la diarrea.
El ochenta por ciento de nuestras cepas CEEA albergaba simultneamente AAPAATA, los genes que codifican para Dispersando y su sistema de translocador
AATA. Nuestros resultados coinciden con los hallazgos previos para aislamientos
CEEA recogidos de otras regiones de Mxico y el mundo. Parece haber una alta
conservacin del locus AGGR-AAP-AATA en el plsmido de virulencia grande pAA,
como se ha demostrado para el prototipo 042 cepa. Entre diciembre aislamientos,
el gen AATA se encontr nicamente en cepas CEEA, (82%), y en el 1,3% de las
cepas no-DEC. La combinacin AAP-AATA, sin embargo, fue slo se encuentra en
0,17% de los no-DEC asla. cepas aap-positivos fueron significativamente ms
frecuentes entre los aislados CEEA que en otro diciembre o cepas no-DEC (P
<0,0001). Queda demostrado si Dispersando es en realidad secretada por cepas
DEC no CEEA. Si es as, podemos suponer que no sera a travs del sistema
translocador Aat, ya que ninguna de estas cepas lleva el gen AATA.
cepas cdt-positivos slo se identificaron en nuestros pacientes EPEC como ha sido
descrito por otros. Aunque la toxina Pet fue descrita por primera vez en las cepas
CEEA, mascota era el SVG principal identificado en pacientes aEPEC, una
caracterstica que puede aumentar su virulencia. De inters, los nios que albergan
cepas tepec y aEPEC llevan SVG se encontraron con mayor frecuencia entre los
pacientes mayores de 24 meses de edad. Desde nios en entornos altamente
endmicos adquieren inmunidad protectora frente a enfermedades diarreicas
alrededor de 24 meses, es probable que los agentes patgenos necesitaran un
mayor nmero de genes de virulencia para causar la enfermedad en huspedes de
mayor edad.
Una proporcin significativa de nuestras cepas no-DEC tena SVG (26%); de estos,
86,5% lleva un gen que codifica para una toxina, ms frecuentemente astA.
Cuarenta y tres por ciento lleva ms de un gen complementario y el 13% de las
cepas no-DEC realizadas gen AAP. Las cepas no-DEC tambin se han asociado

con diarrea en nios japoneses sugieren fuertemente que estas cepas tienen el
potencial de causar enfermedades.
La presencia de SVG, tanto en diciembre y no diciembre cepas son indicativos de
la transferencia horizontal de genes continua entre cepas de E. coli. El intercambio
gentico entre cepas patgenas y no patgenas que comparten el mismo nicho
ecolgico tambin se ha demostrado en otros gneros bacterianos. Una
comparacin entre el comensal humano y de genomas de Neisseria patgenos,
revel que el ex sirven como reservorios de genes de virulencia y de participar
activamente en la transferencia horizontal de genes con sus homlogos patgenos.
Del mismo modo, los estudios evolutivos de Streptococcus pneumoniae y sus
parientes cercanos comensales han demostrado que ambos linajes bacterianos
probablemente evolucionaron de un ancestro patgeno que perdi ciertos genes de
virulencia durante la adaptacin de acogida a un estilo de vida comensal. La
transferencia gentica horizontal en cepas de E. coli, presumiblemente, pueden dar
lugar a resultados diferentes, incluyendo: 1) cepas hbridas DEC como el aislado
virulento hbrido CEEA-STEC, E. coli O104: H4, que caus un gran brote en Europa
en 2011, 2) cepas con mayor virulencia que pueden causar grandes cambios
epidemiolgicos en la diarrea diciembre (posiblemente-lt producir ETEC), y 3) las
cepas virulentas que no pertenece a ningn grupo diciembre bien definido, como es
probable en el caso de muchos no-diciembre aislamientos recuperados de
pacientes con diarrea.
En resumen, nuestros resultados muestran que los grupos DEC son una causa
importante de moderada a diarrea grave en los nios mexicanos. La presencia de
mltiples SVG en estas cepas, que son ms frecuentes en nios mayores, sugiere
que la capacidad patgena de estas cepas puede ser conferida por una
combinacin de genes de virulencia en lugar de la presencia o ausencia de un solo
gen.