VR

valoracin de residuoS

Fabricacin
de bioalcohol a
partir de la vaina
del algarrobo (y II)
Fermentacin alcohlica del extracto
acuoso
Se presenta, en esta segunda parte del
artculo sobre la obtencin de bioalcohol a
partir de la vaina del fruto del algarrobo,
el estudio experimental de la fermentacin
alcohlica del extracto acuoso. El presente
artculo pretende mostrar que es posible
realizar la transformacin alcohlica de los
azcares extrados de una forma sencilla y
con una velocidad y rendimiento aceptable.
D. de Juan Garca,
L. J. Lozano Blanco y
S. Snchez Segado
Dpto. Ingeniera Qumica
y Ambiental, Universidad
Politcnica de Cartagena

198 Ingeniera Qumica

EN TRABAJOS PREVIOS POR nuestro grupo de investigacin [1 y 2]

se ha propuesto la preparacin de
bioalcohol a partir de la vaina del
fruto del algarrobo, desarrollando
un mtodo operativo para realizar
la extraccin acuosa de los azcares
solubles en agua en ella contenidos.
El siguiente paso lgico a realizar
para comprobar la certeza de nuestra
aseveracin inicial es conseguir realizar la transformacin alcohlica de
los azcares extrados de una forma
sencilla, y con una velocidad y rendimiento, tanto industrial como econmico, aceptable.
El propsito del presente artculo es mostrar que esta transformacin de los azcares extrados es
industrialmente posible.

1. Metodologa adoptada

En un principio se pens en utilizar

los licores azucarados preparados
cuando se realiz la caracterizacin
de estos licores [2], pero desgraciadamente y pese a todas las precauciones utilizadas para realizar su
esterilizacin, nos encontramos con
la sorpresa de que esta muestra media haba fermentado (existencia de
abundante CO 2 en el contenedor
utilizado y consiguiente disminucin de su riqueza Brix).
Por otra parte, era necesario encontrar un mtodo de control y seguimiento de la reaccin de fermentacin que nos permitiera determinar el rendimiento operativo.

1.1. Preparacin de los

extractos azucarados

Ante el problema del almacenamiento de los licores azucarados se pas

a realizar la operacin de extraccin
especficamente para cada operacin; para ello se pona en contacto
la vaina del algarrobo premolida a
k80 < 2 mm con agua, a temperatura ambiente, con una relacin slido/lquido = 1/2,5 y mediante agitacin mecnica y durante un tiempo
mnimo de 30 min.
Esto da lugar a que en cada operacin de fermentacin se utilice
una disolucin azucarada con una
riqueza ligeramente variable.
Las fases se separan cribando a
travs de un tamiz vibratorio, con
una luz de malla de 0,05 mm.
El residuo slido se desprecia,
mientras que a la disolucin azucarada, tras ser comprobada que su
riqueza en azcares era del orden
de 20Brix, se le adicionan unos
N 459

Fabricacin de bioalcohol a partir de la vaina del algarrobo (y II)

cin de Gay Lussac [3], que podemos esquematizar como sigue:

Existe una buena

correlacin
entre densidad
y contenido
alcohlico
de las disoluciones

C6H12O6 + levadura
2 CO2 + 2 C2H5OH +
+ nuevos organismos + calor

nutrientes inorgnicos, fosfato

amnico neutro (8,0 g/l), sulfato
potsico (2,5 g/l) y sulfato magnsico (4,5 g/l ), se le ajusta el pH,
mediante disolucin diluida de cido sulfrico, y se calienta a la temperatura de ebullicin. Una vez
esterilizada la disolucin se enfra
rpidamente y se pasa a un reactor
de fermentacin termostatizado
(reactor cilndrico de vidrio, con
tapa de inoxidable, de 3 l., agitado,
con agitador de velocidad regulable, provisto de sondas para tomar
muestras y controlar la temperatura
y el pH).

1.2. Mtodo de seguimiento

del rendimiento de la
fermentacin

La reaccin bioqumica que se realiza en la fermentacin anaerobia de

la glucosa es la conocida como reac-

(1)

Aunque tambin puede realizarse un proceso aerobio, cuya reaccin

responsable es la siguiente:
C6H12O6 + levadura 6 CO2 +
+ nuevos organismos + calor

(2)

Por otra parte, al ser una reaccin

bioqumica, se produce un crecimiento de los microorganismos componentes de la levadura (Saccharomyces
cerevisiae).
Esto nos indica que la reaccin
se puede seguir:
- Siguiendo el crecimiento del
nmero de microorganismos en el
tiempo, lo cual no nos proporciona
informacin alguna sobre la cantidad de alcohol formado.
- Mediante la disminucin del
contenido en azcar de la disolucin
frente al tiempo, lo cual, teniendo
en cuenta que sabemos que la disolucin azucarada es una mezcla de,
por lo menos, mono y disacridos,
con distinto rendimiento en alcohol,
y que en principio su discriminacin

Figura 1 Relacin entre la densidad de las disoluciones hidroalcohlicas

y su contenido en alcohol en g/l

relacin densidad-g/l alcohol

Poly (relacin densidad-g/l alcohol

g/l alcohol = -10.219 * (densidad)2 + 14.520 * (densidad)2 - 4.327

r2 = 0,999

Mayo 2008

y cuantificacin no es fcil y la posibilidad de una reaccin aerbica,

tampoco nos proporciona un sistema efectivo de seguimiento.
- Mediante la medida de la cantidad de CO2 desprendido frente al
tiempo. Este mtodo presenta los
mismos inconvenientes que el anterior y adems se puede presentar una
reaccin de fermentacin aerobia en
que los azcares se transforman directamente en CO2.
- Mediante el aumento de la cantidad de alcohol formado a lo largo del
tiempo. Este mtodo parece ser el ms
efectivo para realizar el seguimiento
del proceso de fermentacin.
De acuerdo con estas consideraciones, optamos por realizar el
seguimiento de la reaccin de fermentacin mediante dos sistemas
analticos:
Variacin de la poblacin de levaduras con el tiempo.
Variacin del contenido alcohlico con el tiempo.
- Poblacin microbiana:
Se ha empleado el mtodo descrito por [4] con la cmara cuentaglbulos de Neubauer, utilizando
una dilucin de 1 ml a 200 ml.
- Contenido alcohlico de la disolucin
Varias son las posibilidades para
realizar esta valoracin:
Mediante HPLC. Se presentan
varios problemas:
La muestra tiene un alto contenido en slidos muy finos, lo que
obliga a una manipulacin muy
ardua y dificultosa, lo que en una
muestra como la nuestra que est
evolucionando con el tiempo conduce a resultados no muy fiables.
Mediante colorimetra visible
[5].
Este mtodo conlleva, adems
de los problemas que plantea el mtodo cromatogrfico, el aadido del
color propio de la muestra, que es
funcin del pH, por lo que tampoco
lo consideramos muy fiable.
Mediante medida de la densidad de las disoluciones hidroalcohlicas.
De sobra es conocido el hecho
de que las disoluciones hidroalcohlicas presentan una densidad caracterstica, que es funcin de su contenido en alcohol. Si se procede a una
recuperacin del alcohol mediante
destilacin y posterior aforado del
destilado a un volumen determinado, se puede conocer la riqueza alcohlica de la muestra.
Ingeniera Qumica 199

Fabricacin de bioalcohol a partir de la vaina del algarrobo (y II)

Tabla 1

Resultados experimentales de la calibracin de la relacin existente entre

densidad de las disoluciones hidroalcohlicas y su contenido a 25 C
Etanol

Matraz vaco (ml)

Matraz con alcohol (g) Matraz lleno (g)

Alcohol (g/l)

Densidad

52,07

52,07

151,7

0,9961

59,42

60,98

158,9

15,52

0,9949

52,66

56,58

151,4

39,00

0,9869

47,64

54,08

145,9

64,08

0,9824

11

57,00

65,65

155,0

86,07

0,9796

14

55,21

66,35

152,6

110,8

0,9736

17

52,97

66,39

150,1

133,5

0,9716

20

53,39

69,15

150,2

156,8

0,9676

25

53,19

72,92

149,3

196,3

0,9612

40

52,89

84,34

146,7

312,9

0,9379

55

54,28

97,36

145,2

428,6

0,909

60

52,99

100,2

142,9

469,24

0,8993

75

46,52

105,6

132,9

588,1

0,8638

90

52,29

123,1

134,4

704,7

0,8207

100

16,13

35,75

35,75

780,9

0,7848

Este mtodo, modificacin del

presentado en [6], presenta la ventaja adicional de que se eliminan todos
los problemas propios de la muestra,
ya que desde el primer momento procedemos a su calentamiento, con lo
que conseguimos esterilizarla. Por lo
tanto, este es el mtodo que vamos a
preparar para realizar el seguimiento
de la evolucin de la fermentacin de
los licores azucarados.

- Mtodo densimtrico para determinacin del contenido alcohlico de los licores fermentados.
Para preparar un mtodo densimtrico que nos permita estudiar
la riqueza alcohlica de los licores
fermentados, hemos procedido en
una primera fase a encontrar la relacin existente entre la concentracin alcohlica y la densidad de la
disolucin.

Figura 2 Relacin entre la densidad de las disoluciones hidroalcohlicas

y su contenido en alcohol en g/l

Para ello, sobre matraces aforados de 100 ml secos y tarados, se

han adicionado diversa cantidades
de alcohol absoluto (99,5%), determinando su peso. Se han enrasado
los matraces con agua destilada y se
ha procedido a un nuevo tarado,
todo ello con los resultados de la
Tabla 1.
Llevando estos resultados a una
representacin grfica, se obtiene la
Figura 1, donde se puede observar
que existe una buena correlacin
entre densidad y contenido alcohlico de las disoluciones, con un coeficiente de correlacin prcticamente
la unidad.
A partir de estos ensayos se han
preparado una serie de experiencias
en las que, operando como sobre
una muestra real, vamos a tratar de
establecer la relacin existente entre
el alcohol adicionado y el determinado analticamente.
Se toman 50 ml de disolucin hidroalcohlica, con un contenido determinado de alcohol, determinado
mediante pesada.
Este mtodo operativo nos permite relacionar la concentracin y
la densidad de las disoluciones hidroalcohlicas mediante la siguiente expresin:
g/l alcohol = -10.219 * (densidad)2 +

g/l alcohol = 0,99 * g/l alcohol teorico 0,620

r2 = 0,997
Mayo 2008

+ 14.520 * (densidad)2 4327 (3)

Ingeniera Qumica 201

Fabricacin de bioalcohol a partir de la vaina del algarrobo (y II)

Tabla 2

Podemos
esperar que
la operacin
de fermentacin
de los licores
azucarados
se pueda
realizar
de un modo
relativamente
fcil

Relacin entre concentracin terica y experimental

de las disoluciones hidroalcohlicas destiladas en
presencia de 15 g/l de sacaromices cerevisae
Ensayo
Alcohol (g/l)

terico

Alcohol (g/l)
experimental

Diferencia
terico - experimental

-0,2

0,2

15,52

9,0

6,5

39,00

37,9

1,1

64,08

79,4

-15,4

86,07

91,6

-5,6

110,8

105,2

5,7

133,5

128,5

5,0

156,8

156,1

0,7

196,3

184,1

12,2

10

312,9

310,9

2,0

11

428,6

433,6

-4,9

12

469,2

467,5

1,8

Se pasa a un matraz aforado de

250 ml, de fondo plano, y se le adicionan aproximadamente 0,75 g de
levadura. Se realiza la destilacin de
ms del 60% del licor hidroalcohlico y el condensado se recoge en un
matraz aforado de 50 ml y previamente tarado.
Se afora y se atempera el matraz a
25C. Se determina la densidad de la
nueva disolucin mediante pesada del
matraz lleno. Con ayuda de la expresin que relaciona densidad y concentracin de la Figura 1, se ha calculado
el contenido alcohlico de la disolu-

cin previa, con los resultados de la

Tabla 2 y la Figura 2.
Como podemos ver en la Figura 2,
realizada representando los resultados
experimentales frente a los tericos,
los resultados se apoyan sobre la diagonal del primer cuadrante, lo cual
nos habla de la bondad del mtodo.

2. Fermentacin de los
extractos azucarados
Una vez el extracto azucarado en las
condiciones indicadas en el apartado 1.1, se atempera a la temperatura

del ensayo y se procede a realizar la

siembra de la levadura.
En nuestro caso hemos utilizado
tres cepas comerciales distintas y con
distintas adiciones.
En la Tabla 3 podemos comprobar que, de entre los tipos de levadura utilizados, dos son muy similares,
la A y la B, mientras que la C presenta un contenido microbiano bastante inferior, lo cual se refleja en los
resultados de la fermentacin.
A partir de la Figura 3 se puede
comprobar lo afirmado anteriormente, y como una vez se ha consumido todo el alimento, los azcares,
por los microorganismos, su nmero
comienza a decrecer, lo cual no sucede en el caso del tipo de levadura
C, ya que, debido a su escasa pobla-

Tabla 3

Condiciones iniciales de los ensayos de fermentacin y adicin de

levaduras

A - 1

A - 2

A - 3

B - 1

B - 2

C - 1

C - 2

C-3

Adicin levadura g/l

10

15

25

15

30

15

15

7,5

T C

35

35

35

35

35

35

35

35

pH

Brix inici.
N cel.ini./ml
Poblacin
miles clulas/g
Poblacin media

3,57

3,63

3,32

3,60

3,82

3,90

3,83

3,69

18,25

19,5

19,5

18,75

20,0

21,75

20,75

21,50

143.000

200.000

338.000

200.000

390.000

63.000

72.000

40.000

14,3

13,3

13,5

13,3

13,0

4,2

4,8

5,3

13,7

13,2

4,8

Se utilizan tres cepas de levaduras comerciales, A, B y C.

En todos los casos el contenido inicial de los licores azucarados es 0 g/l.

Mayo 2008

Ingeniera Qumica 203

valorizacin de residuos

Figura 3 Evolucin de la poblacin microbiana con el tiempo en cada

al ser
una reaccin
bioqumica
se produce
un crecimiento
de los
microorganismos
componentes
de saCcHaromyces
cerevisiAe

uno de los ensayos realizados

Figura 4 Evolucin del contenido alcohlico con el tiempo en cada uno

de los ensayos realizados

cin inicial, no se realiza el consumo

total de los azcares.
En las Figuras 4 y 5 se puede comprobar que en el caso de las levaduras
A y B, an con bajos inculos, se consigue alcanzar un alto rendimiento
operativo, superior al 80%, en tiempos relativamente cortos, y del orden
del 100% en menos de 30 horas.
Con estos resultados podemos
esperar que la operacin de fermentacin de los licores azucarados procedentes de la extraccin acuosa de
la vaina del fruto del algarrobo se
pueda realizar de un modo relativamente fcil.
Bibliografa
[1] de Juan Garca, D., Lozano Blanco, L.J. y Snchez Segado, S. "La vaina del fruto del algarrobo
(ceratonia siliqua), una nueva materia prima para la fabricacin de un biocombustible".

Figura 5 Evolucin del rendimiento alcohlico con el tiempo en los

diversos ensayos realizados

[2] de Juan Garca, D., Lozano Blanco, L.J. y

Snchez Segado, S. "Extraccin acuosa de los
azcares solubles de la vaina de la ceratonia siliqua como primer paso para la fabricacin de
bioalcohol".
[3] Jacques, K., Lyons T.P. y Kelsall D.R. "The
ethanol textbook.- Nottingham University Press.
(1999),
[4] Surez Pelegrn, E. "Manual tcnico de anlisis clnico". Ed. Prieto (1966).
[5] Rahim, S. A. y Geeso S.G. "Colorimetric determination of etanol in the presence of methanol
and other species in aqueous solution.. Talanta,
vol 39, n 11, pp 1489 1491 (1992)
[6] Agroinformacin; "Mtodos oficiales de anlisis de vinos".

Agradecimientos
El presente trabajo se ha realizado merced a un
contrato de investigacin suscrito entre el Grupo
de Investigacin Inquica, de la UPCT, y el Mondial Carob Group, al que agradecemos su colaboracin econmica.

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