Propiedades

fsicas

de

la

molcula

de

DNA

* Viscosidad: El DNA es una molcula muy grande y por lo tanto, muy frgil. Las
soluciones de fragmentos largos de DNA son muy viscosas a consecuencia del
tamao grande de las molculas; esta viscusidad disminuye al disminuir el tamao
de los fragmentos en solucin, ya sea porque se utilicen mtodos energticos de
extraccin, al agitar mecnicamente o al tratar con ultrasonido la molcula de
DNA.
*Desnaturalizacin: Es el proceso mediante el cual se rompen los puentes de
hidrgeno que unen a las cadenas complementarias, por lo tanto, las cadenas se
separan, se produce cuando se introducen condiciones drsticas como un pH
elevado o altas temperaturas.

Renaturalizacin: El DNA que se desnaturaliza por calor, tiende a formar

nuevamente la doble cadena cuando la solucin se enfra lentamente.
*
Espectro
de
absorcin
del
DNA:
Las bases nitrogenadas tienen su mximo de absorcin a 260 nm, es por
ello, que el DNA (que tiene nucletidos, constituidos a su vez por bases
nitrogenadas), absorbe a dicha longitud de onda.

Discusin:
La cantidad y pureza del DNA obtenido dependen directamente del correcto
seguimiento de la metodologa, para poder obtener un DNA sin protenas e
interferencia, adems, del manejo correcto de las micropipetas.
La solucin de TE pH 7.8 al adicionarlo por primera vez fue con el propsito de
lavar el medio de cultivo, de peptonas y algunos productos metablicos. La
segunda vez que se adiciono este reactivo fue para regular el pH y proporcionarle
las condiciones adecuadas a la RNAsa. Al momento de adicionar la RNAsa , esta
no estaba activa por lo cual se incubo para poder activarla.
Para la lisis de la membrana se utilizo lisozima y el SDS ,pudiendo as, actuar la
RNAsa sobre el RNA. Con la ayuda de NaCl se aumenta el poder de ionizacin,
aumentando la solubilidad del DNA, provocando la precipitacin de las protenas. (
Disminuye la solubilidad de las protenas con el agua ).
Para obtener una de DNA puro, se eliminaron las protenas presentes con fenol
saturado y con cloformo-alcohol isoamlico (El cloroformo es una molcula no
polar por lo cual separa protenas no polares y lpidos) y para eliminar a las
protenas polares se utilizo fenol saturado. El fenol tiene una absorcin mxima a
270nm, por lo cual a 270nm en el espectro de absorcin se observa una
absorbancia alta.

Para poder precipitar el DNA se deshidrato a la molcula, con isopropanol fro y

con etanol al 70% para remover las sales y restos del isopropanol.
En la tabla 1. Se puede observar la pureza de nuestro DNA que fue de 1.85, considerado
como buena ya que un valor entre 1.8 y 2 se considera que el DNA aislado de E. Coli
W3350 es puro ( con poca cantidad de protenas). En la los valores de concentracin del
DNA aislado fueron diferentes con cada formula , esto es porque una es la concentracin
terica y la otra es una concentracin prctica.
En el espectro de absorcin se observa que entre 250 y 270 nm se presenta una
absorbancia mayor a las dems , esto debido a que el pico mximo de absorcin del DNA
es de 260 nm (257nm) , ya que las bases nitrogeneadas posen resonancia y le confieren
la propiedad al DNA de absorber a 260 nm.
En el ejercicio de Tm y los del DNAMAN se observ que la Tm s depende de la cantidad
de uniones G-C y A-T, para A-T se necesita menos energa que para G-C esto debdo a
los puentes de hidrogeno que se tendrn que desnaturalizar. A mayor cantidad de G-C
mayor es la Tm.
En el segundo experimento con el programa DNAMAN (influencia de la variacin de la
secuencia de nucletidos) en el cual se generan dos primers de ADN con el mismo
tamao y la misma relacin GC pero diferente secuencia, se observa que si los
nucletidos GC se encuentran cerca, aumenta la Tm del primer. Por lo tanto la forma en
que se encuentren distribuidos los pares GC afecta la temperatura de fusin de la cadena
de ADN.

Bibliografia

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Klug W. M. y M. R. Cummings. 1999. Conceptos de gentica. 5 Ed.
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Lehninger, A. Principios de Bioqumica. 2 Ed. Editorial Omega, Espaa
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