Introduccin

La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las

investigaciones biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite
comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene
una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida
de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que
parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que
pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del
infrarrojo.
La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la
energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de
onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos
aquellas longitudes de onda no absorbida.

Objetivos

Calcular la concentracin en mg% de bicromato de K en cada uno de los

tubos Standart (I-II-III-IV)

Encontrar las absorbancias de los cuatro tubo a 350 nm de longitud de
onda ( )

Marco Terico

La espectrofotometra se refiere a la medida de cantidades relativas de luz

absorbida por una muestra, en funcin de la longitud de onda. Cada
componente de la solucin tiene su patrn de absorcin de luz caracterstico.
Comparando la longitud de onda y la intensidad del mximo de absorcin de
luz de una muestra versus soluciones standart, es posible determinar la
identidad y la concentracin de componentes disueltos en la muestra (solucin
incgnita).
Los mtodos espectrofotomtricos se basan en la medida de la radiacin
electromagntica emitida o absorbida por la materia; los mtodos de emisin
utilizan la radiacin emitida cuando un analito es excitado por energa trmica,
elctrica o radiante; los mtodos de absorcin estn basados en la disminucin
de la potencia de la radiacin

electromagntica como consecuencia de la

absorcin que se produce en su interaccin con el analito. Si se aplica energa

a un tomo, esta puede ser absorbida y un electrn externo puede ser
promovido a una configuracin conocida como estado excitado; dado que ese
estado es inestable, el tomo retornara inmediatamente al estado fundamental,
emitiendo energa. La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e
infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para
cada sustancia qumica. Por lo tanto se dice que la espectrofotometra es
fundamental en el estudio de sustancias desconocidas.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la
energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de
las sustancias se debe a que estas absorben ciertas longitudes de onda de luz
blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas
longitudes de onda no absorbidas.
La espectrofotometra es realizada

utilizando un aparato denominado

espectrofotmetro, que es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve

para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una

misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Este
Instrumento

tiene

la

capacidad

de

manejar

un

haz

de

radiacin

electromagntica (REM), comnmente denominado luz, separadondolo en

facilitar la identificacin, calificacin y cuantificacin

de su energa. Su

eficiencia, resolucin, sensibilidad y rango espectral, dependern de las

variables de diseo y de la seleccin de los componentes pticos que lo
conforman.
Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de
sustancias y microorganismos.
Componentes de un espectrofotmetro:

Fuente de luz: La misma ilumina la muestra de la que se vaya a usar.

Debe cumplir con las condiciones de estabilidad, direccionalidad,
distribucin de energa espectral continua y larga vida. Las fuentes
empleadas son lmpara de tungsteno y lmpara de xenn.

Monocromador: Para obtener luz monocromtica, constituido por las

rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersin,
entre la rendija de entrada y salida se encuentra el colimador el cual es
un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud
de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de
ese haz y la longitud deseada se dirije hacia otra lente que direcciona
ese haz se hacia

la rendija de salida. El

radiaciones de longitud

monocromador asla las

de onda deseada que inciden o se reflejan

desde le conjunto.

Fotodetectores: En los instrumentos modernos se encuentra una serie

de 16 fotodetectores para percibir la seal en forma simultnea en 16
longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el tiempo
de medida, y minimiza las partes mviles del equipo

Ventajas de la espectrofotometra:

Las ventajas de la espectrofotometra sobre otros mtodos analticos de

laboratorio son varias: es rpida, verstil, fcil de usar y eficiente en costo.
Los espectrofotmetros se han mejorado en precisin y versatilidad en los
ltimos aos con los avances de tecnologa, y hoy se consideran
indispensables en un laboratorio de qumica analtica.
La espectrofotometra se usa para diversas aplicaciones como: anlisis
cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de
investigacin .Deteccin de niveles de contaminacin en aire y agua,
determinacin de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos entre otras.
Esta gran cantidad de ventajas se debe a que el espectrofotmetro tiene la
capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica (de una longitud de onda
particular) a travs de una muestra. Esto le permite al experimentador realizar
dos funciones:

Nos da in formacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.

Esto podemos lograrlo midiendo la absorbancia (ABS) a distintos largos
de onda(I) y graficar estos valores en funcin del largo de onda,
formando un espectrograma. Como cada sustancia tiene unas
propiedades espectrales nicas, distintas sustancias producen distintos
espectrogramas. Esto se debe a que cada sustancia tiene un arreglo de
tomos tridimensional particular que hace que cada sustancia tenga
caractersticas nicas.

Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa est presente
en la muestra. La concentracin es proporcional a la absorbancia, segn
la ley beer-Lambert: a mayor cantidad de molculas presentes en la
muestra, mayor ser la cantidad de energa absorbida por sus
electrones.

A=KCL

K: coeficiente de extincin molar

 C: concentracin
L: distancia que viaja la luz a travs de la muestra. (Normalmente es de 1 cm)

Una de las aplicaciones ms importantes de las leyes de Lambert-Beer es el

anlisis de mezclas. Mediante la realizacin de una espectrofotometra se
pueden calcular las concentraciones de los componentes de una mezcla. En
esta prctica se lleva a cabo el anlisis de una mezcla de Nitrato de Cobalto y
Nitrato de Nquel, por medio de la espectrofotometra, a las longitudes
mximas, de cada uno de los componentes por separados. Y con los
resultados obtenidos se obtienen fcilmente las concentraciones de Nitrato de
Cobalto y el Nitrato de Nquel presentes en la mezcla, por medio de las
siguientes ecuaciones:

AT ( 1)=EA ( 1) b x CA + EB ( 1) b x C
AT ( 2)=EA ( 2) b x CA + EB ( 2) b x CB

Siendo:
AT: El valor de absorbancia de la mezcla obtenido por el espectrofotmetro.
1: la longitud de onda mxima del nitrato de cobalto

2: la longitud de onda mxima del nitrato de nquel

EA ( 1): el coeficiente de extincin molar de nitrato de cobalto a ( 1)
EB ( 1): el coeficiente de extincin molar de nitrato de nquel a ( 1)
CA: concentracin de nitrato de cobalto en la mezcla
CB: concentracin de nitrato de Nquel en la mezcla
b: espesor de la cubeta (1 cm)

Procedimiento experimental

1. Se aade bicromato de potasio a los 4 tubos de ensayo.

2. A cada tubo con bicromato de potasio se le agrega 9ml de

agua.

3. Se coloca cada muestra en las celdas de muestreo usadas

para medir la cantidad de energa de la muestra.

4.

Luego presionamos el botn de ajuste de A y 100% de T

(100% T Zero A Control), el cual nos permite calibrar el
aparato y colocamos la celda con la muestra dentro del
aparato.

5. Luego presionamos el botn por segunda vez y una vez salido el

resultado lo apuntamos. Repetimos el proceso para cada muestra.

Conclusiones

Hemos calculado la concentracin en mg% de bicromato de K en cada

uno de los tubos Standart al mezclarlos con agua destilada.

Hemos encontrado las absorbancias de los cuatro tubos a 350 nm de
longitud de onda () en el espectrofotmetro contra el H2O destilada.

Cuestionario

1.- Explique el mecanismo de funcionamiento de un espectrofotmetro.

El funcionamiento de un espectrofotmetro consiste bsicamente en iluminar la
muestra con luz blanca y calcular la cantidad de luz que refleja dicha muestra
en una serie de intervalos de longitudes de onda. Lo ms usual es que los
datos se recojan en 31 intrvalos de longitudes de onda (los cortes van de 400
nm, 410 nm, 420 nm 700 nm). Esto se consigue haciendo pasar la luz a
travs de un dispositivo monocromtico que fracciona la luz en distintos
intrvalos de longitudes de onda. El instrumento se calibra con una muestra o
loseta blanca cuya reflectancia en cada segmento de longitudes de onda se
conoce en comparacin con una superficie de reflexin difusa perfecta.
La reflectancia de una muestra se expresa como una fraccin entre 0 y 1, o
como un porcentaje entre 0 y 100. Es importante darse cuenta de que los
valores de reflectancia obtenidos son valores relativos y, para muestras no
fluorescentes, son independientes de la calidad y cantidad de la luz usada para
iluminar la muestra. As, aunque los factores de reflectancia se midan usando
una fuente de luz concreta, es perfectamente correcto calcular los valores
colorimtricos para cualquier iluminante conocido.

2.- Qu diferencias existen entre un fotocolormetro y un espectrofotmetro?

Un espectrofotmetro lee en longitudes de onda que van desde el

ultravioleta hasta en infrarrojo, se utiliza generalmente para dosar
concentraciones en soluciones o caracterizar sustancias por su curva de
absorcin.

Un Fotocolormetro es un equipo similar, pero este lee en longitudes de

onda del rango "Visible", se utiliza generalmente para determinar con
exactitud el color de una substancia, ya sean soluciones o sustratos
slidos como tintas o pinturas.

3.- Qu relacin matemtica existe entre Absorbancia y Transmitancia?

El logaritmo:

Abs = -log T = -log (It/Io)

Donde Abs es absorbancia, T es transmitancia, I es intensidad transmitida (la

intensidad de la luz luego de atravesar la muestra) y Io es intensidad incidente
(la intensidad de luz antes de atravesar la muestra).