Juro S. y cols.

Efecto cicatrizante de las diferentes formas farmacuticas tpicas elaboradas con el extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels nogal en ratones albinos

ARTCULO ORIGINAL

Efecto cicatrizante de las diferentes formas farmacuticas

tpicas elaboradas con el extracto hidroalcohlico de Juglans
neotropica Diels nogal en ratones albinos
Healing effect of different topic presentations formulated with hydroalcoholic extract
of Juglans neotropica Diels nogal in albino mice
Susy Juro1, Valmi Flores2, Yanet Mendoza3, Carla del Carpio4
RESUMEN
Introduccin: el nogal (Juglans neotropica Diels) crece en valles de tierras profundas y arenosas, de clima templado y lluvioso, en zonas
como Cusco, Arequipa y Cajamarca. El objetivo fue determinar el efecto cicatrizante de diferentes formas farmacuticas de aplicacin
tpica elaboradas con el extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels en ratones albinos. Material y mtodos: se usaron hojas
recolectadas en la localidad de Urubamba. Se realizaron cortes de 1cm2 en el rea dorsal escapular de ratones, a quienes en una primera
fase del estudio se les aplic el extracto a diferentes concentraciones (2.5%-40%), durante 21 das, luego de lo cual fueron sacrificados e
inmediatamente se realiz la prueba del tensimetro propuesto por Vaisberg. En la segunda fase, se formularon cinco formas farmacuticas
tpicas (pomada, emulsin agua en aceite (A/O), emulsin aceite en agua (O/A), pasta e hidrogel) las que se evaluaron segn prueba
del tensimetro, en comparacin al frmaco patrn (Cicatrin). Resultados: la concentracin mnima efectiva cicatrizante fue de 5%,
encontrndose una relacin concentracin-cicatrizacin en el rango de 2.5% a 30% y una relacin formulacin-cicatrizacin, pues las
presentaciones en emulsin O/A e hidrogel obtuvieron mayor resistencia a la fuerza de tensin, incluso mayor a la del frmaco patrn.
Los resultados fueron corroborados con el estudio histolgico. Conclusin: tanto el extracto hidroalcohlico al 5% como las formas
farmacuticas de emulsin O/A e hidrogel presentanro muy buena actividad cicatrizante.
Palabras clave: Extracto hidroalcohlico, Juglans neotropica Diels, Efecto cicatrizante, Formas farmacuticas tpicas.

SUMMARY
Background: walnut (Juglans neotropica Diels) grows in deep valleys and sandy land, in temperate and rainy weather, in areas such
as Cusco, Arequipa and Cajamarca. The objective was to determine the healing effect of different pharmaceutical presentations and
concentrations for topical application from the hydroalcoholic extract of Juglans neotropica Diels in albino mice. Methods: we used leaves
collected in the town of Urubamba. 1cm2 cuts were made in the dorsal scapular area of mice, who in the first phase of the study were
administered the extract at different concentrations (2.5-40%) for 21 days, after which they were sacrificed and immediately performed
the tensiometer test proposed by Vaisberg. In the second phase five topical dosage forms (ointment, water in oil (W/O) emulsion, oil in
water (O/W) emulsion, pasta and hydrogel) were evaluated by tensiometer test, and assessed the effect of these forms compared with
standard drug (Cicatrin). Results: minimal effective healing concentration was 5%, with a concentration-healing effect relationship in
the range of 2.5% to 30% and a presentation-healing effect relationship, since the O/A emulsion and hydrogel were more resistant to
tensile strength, even higher than the standard drug. Results were corroborated by histology. Conclusion: both hydroalcoholic extract at
5% and pharmaceutical presentations O/W emulsion and hydrogel have a good healing activity.
Key words: Hydroalcoholic extract, Juglans neotropica Diels, Healing effect, Topic pharmaceutical presentations.

1
2
3
4

Qumico-farmacutico.
Mdico patlogo, Departamento de Anatoma Patolgica. Hospital Antonio Lorena. Cusco-Per.
Biloga, Laboratorio de Microbiologa. Facultad de Medicina Humana-Universidad Nacional de San Antonio Abad. Cusco-Per.
Qumico-farmacutico, Centro de Investigacin en Farmacia, Ambiente y Recursos Naturales (CINFAR). Facultad de Ciencias
Qumicas, Fsicas y Matemticas-Universidad Nacional de San Antonio Abad. Cusco-Per.
Correspondencia: Carla del Carpio a delcarpiojc_daqf@unsaac.edu.pe

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Juro S. y cols. Efecto cicatrizante de las diferentes formas farmacuticas tpicas elaboradas con el extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels nogal en ratones albinos

INTRODUCCIN
El empleo de las plantas medicinales con fines
curativos es una prctica que se ha realizado desde tiempos
inmemoriales. Durante mucho tiempo los remedios naturales,
y sobre todo las plantas medicinales, fueron el principal
e incluso el nico recurso de que disponan los antiguos
mdicos1. En nuestro pas el uso de plantas medicinales est
muy arraigado, tanto en la poblacin rural como en la urbana,
llegando incluso a integrar este conocimiento ancestral a la
teraputica de muchas enfermedades prevalentes2.
El nogal (Juglans neotropica Diels) se encuentra en valles
de tierras profundas y arenosas y de clima templado y lluvioso3;
sus hojas y corteza contienen gran cantidad de taninos glicos
y catquicos, lo que hace que tengan marcada accin astringente, la juglona adems le confiere enrgica accin antisptica, antiinflamatoria y queratinizante4. Pertenece a la familia
Juglandaceae, pequea familia de rboles y arbustos caducifolios y monoicos, que comprende de siete a ocho gneros y alrededor de 60 especies originarias de las regiones subtropicales y
templadas del norte y sur de Amrica, Asia y Europa. El gnero
Juglans comprende 15 especies nativas del sureste de Europa,
Asia y Amrica, algunas especies de este gnero son: Juglans
regia L., Juglans nigra L., Juglans cinerea L., Juglans ailanthifolia Carrire, y Juglans neotropica Diels (nogal peruano)5.
En los ltimos aos se ha observado un nuevo inters
hacia el empleo de las plantas medicinales, especialmente
en la investigacin de la flora medicinal de pueblos como el
nuestro, pues a travs de muchos estudios se ha demostrado
que el uso de dichas plantas tiene un fundamento cientfico
basado en el contenido de principios activos susceptibles de
ser aislados, purificados y posteriormente modificados con
fines de aplicacin teraputica.
Existe diversa evidencia sobre plantas que presentan
un buen efecto cicatrizante, por este motivo y teniendo en
cuenta la informacin sobre el uso de las hojas de nogal como
una alternativa curativa para heridas con difcil cicatrizacin,
decidimos realizar la evaluacin del efecto cicatrizante del
extracto hidroalcohlico de las hojas de nogal. Se plantearon
los siguientes objetivos: determinar la concentracin
efectiva cicatrizante del extracto hidroalcohlico al 70% de
Juglans neotropica Diels nogal; disear diferentes formas
farmacuticas de aplicacin tpica (emulsiones, pasta, gel,
pomada) a partir del extracto hidroalcohlico al 70% usando
la dosis efectiva determinada, y evaluar comparativamente
el efecto cicatrizante de las formas farmacuticas elaboradas
frente a un patrn de cicatrizacin.

MATERIALES Y METODO
Animales de experimentacin: se utilizaron 100
ratones albinos machos de la raza Mus musculus cepa Balb/C
de 2-3 meses de edad con un peso promedio de 25 gramos,

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provenientes del bioterio del Instituto Nacional de Salud de

Lima, alojados en jaulas individuales durante 21 das. Los
animales se mantuvieron con libre acceso al agua y alimento.
Todos los animales fueron depilados 24h antes de realizar un
corte en la regin escapular, en una rea de 1cm2, que incluy
piel y tejido celular subcutneo.
Material vegetal: las hojas de Juglans neotropica Diels
fueron recolectadas en la localidad de Urubamba, al norte de
la ciudad del Cusco, a orillas del ro Vilcanota, a 2950 m.s.n.m.
Preparacin del extracto: se maceraron 500g de polvo
de hojas de Juglans neotropica Diels en 100mL de etanol al
70% durante siete das, posteriormente el lquido filtrado
fue concentrado a 40C. El ensayo de solubilidad se realiz
empleando solventes de polaridad creciente: n-hexano,
cloroformo, acetato de etilo, butanol, etanol, metanol y agua.
Finalmente la deteccin de los constituyentes qumicos del
extracto etanlico se realiz siguiendo la marcha fitoqumica
general6.
Procedimiento experimental: en la primera fase de
la investigacin se aplic, diariamente y por un perodo de
21 das, el extracto disuelto a las concentraciones de 2.5,
5, 10, 20, 30 y 40% en las heridas abiertas y bajo el efecto
anestsico con 50mg/kg de pentobarbital sdico en grupos
de seis animales para cada concentracin, calculando el
porcentaje de eficacia de cicatrizacin usando la frmula:
Gramos para abrir cicatriz
Porcentaje de eficacia
=
x 100
gramos para abrir piel intacta
de cicatrizacin

En la segunda fase se aplicaron cinco formulaciones

elaboradas con extracto al 5%: pomada, emulsin agua en
aceite (A/O), emulsin aceite en agua (O/A), pasta e hidrogel.
Se observ el tiempo de aparicin y cada de la costra y
cicatrizacin del rea durante todo el perodo experimental.
Al finalizar el tratamiento de las dos fases los animales
fueron sacrificados mediante sobredosis de anestesia e
inmediatamente se realizaron las pruebas de resistencia a la
tensin planteada por Vaisberg7. En la tercera fase se compar
el efecto cicatrizante de las formulaciones con mejores
resultados frente a placebo (agua destilada) y al frmaco
patrn (Cicatrin), utilizando la prueba de resistencia a la
tensin (gramos de arena necesarios para abrir una herida)
y un posterior estudio histolgico con cortes longitudinales
de la piel regenerada. Las muestras de tejido con cicatrices
experimentales fueron obtenidas inmediatamente a la muerte
de los animales, seccionando un rea de 1cm2 que incluy
adems parte de la piel sana tomada como referencia para las
observaciones histolgicas. Dichos fragmentos fueron fijados
en formol neutro al 10% y procesados para su inclusin en
parafina. Las coloraciones se realizaron con hematoxilina eosina para su observacin y evaluacin histolgica.

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Tabla III. Cicatrizacin de las diferentes dosis de extracto hidroalcohlico de Juglans

neotropica Diels.

RESULTADOS
Los resultados obtenidos en los ensayos de solubilidad
y en la marcha fitoqumica se pueden observar en las Tablas
I y II. El extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels,
present marcada solubilidad en solventes polares, lo que indica
una presencia mayoritaria de compuestos de alta polaridad.
Igualmente se observ presencia de aminocidos, flavonoides,
taninos y saponinas como componentes mayoritarios, y
compuestos fenlicos y lactonas en menor cantidad.

Concentracin

Resistencia a la
tensin (g)

Eficacia de la
cicatrizacin (%)

2.5%
5%
10%
20%
30%

124.920.10
156.900.13
150.470.38
107.870.20
65.270.23

55.56
69.40
66.90
47.95
29.00

Tabla I. Solubilidad del extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels.

Solubilidad
+++
+++
++
++
+
+
+
+
+

+: poco soluble, ++: soluble, +++: muy soluble.

Tabla II. Metabolitos secundarios presentes en el extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels.

Metabolitos secundarios
Glicsidos
Aminocidos
Compuestos fenlicos
Flavonoides
Quinonas
Taninos
Resinas
Alcaloides
Saponinas
Lactonas

Reactivo
Benedict
Ninhidrina
Cloruro frrico
Shinoda
Borntrager
Gelatina-sal
Acetato de cobre
Dragendorff y Mayer
Espuma
Hidroxamato frrico

Presencia
+++
++
+++
+
+++
+
+++
++

-: ausencia, +: escasa cantidad, ++: moderada cantidad, +++: abundante

cantidad.

En la primera fase de la investigacin se encontr

diferencia estadsticamente significativa (p<0.05) en el
tiempo de cicatrizacin y en la resistencia de la herida a la
fuerza de tensin entre los animales tratados a diferentes
concentraciones del extracto, determinndose que a la
concentracin al 5% tuvo mejor efecto cicatrizante Tabla III y
Grfico 1. El extracto a la concentracin de 40% no present
efecto cicatrizante ni de formacin de costra.

100

Porcentaje de heridas curadas

Solvente
Agua
Metanol
Etanol 70%
Acetona
Acetato de etilo
ter etlico
Cloroformo
Benceno
Hexano

90

30%

80

20%

70

2.5%

60

10%

50

5%

40
30
20
10
0
Da 16

Da 17

Da 18

Da 19

Da 20

Da 21

Grfico 1. Porcentaje de heridas cerradas durante el tiempo de tratamiento con las diferentes
dosis del extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels.

En la segunda fase de la investigacin se encontr

diferencia estadsticamente significativa (p<0.05) en el
tiempo de cicatrizacin y en la resistencia de la herida a
la fuerza de tensin entre los animales tratados con las
diferentes formulaciones elaboradas con el extracto de
Juglans neotropica Diels nogal (Tabla IV y Grfico 2).
Tabla IV. Porcentaje de eficacia de cicatrizacin de las diferentes formas farmacuticas elaboradas con extracto de Juglans neotropica Diels al 5%.

Formulacin
Pomada
Emulsin O/A
Emulsin A/O
Pasta grasa
Hidrogel

Resistencia a la
tensin (g)
189.750.24
212.200.21
198.420.34
171.100.13
211.130.12

Eficacia de cicatrizacin
(%)
84.39
94.40
88.07
76.11
93.86

O/A: Aceite en agua; A/O agua en aceite

En la tercera fase de la investigacin tambin se encontr

diferencia estadsticamente significativa (p<0.05) en el tiempo
de cicatrizacin y en la resistencia de la herida a la fuerza de
tensin entre las dos formulaciones elaboradas (emulsin O/A
e hidrogel) y Cicatrin (Tabla V). Las composiciones en detalle
de dichas formulaciones se presentan en la Tabla VI.

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Juro S. y cols. Efecto cicatrizante de las diferentes formas farmacuticas tpicas elaboradas con el extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels nogal en ratones albinos

Porcentaje de heridas curadas

100
90

Pomada

80

Emulsin O/A

Tabla VI. Composicin de las formulaciones empleadas en la tercera fase.

20

Emulsin O/A
Cera de abeja
Aceite mineral
Borato de sodio
Agua
Extracto

10

O/A: aceite en agua

Emulsin A/O

70

Pasta grasa

60

Hidrogel

50
40
30

Da 14

Da 15

Da 16

Da 17

Da 18

Da 19

Da 20

Da 21

O/A: aceite en agua; A/O agua en aceite.

Grfico 2. Porcentaje de heridas cerradas durante el tiempo de tratamiento con las diferentes
formas farmacuticas preparadas con el extracto hidroalcohlico al 5%.
Tabla V. Eficacia de cicatrizacin de las formas farmacuticas con mejores resultados y del
frmaco patrn.

Tratamiento

Resistencia a la
tensin (g)

Eficacia de cicatrizacin
(%)

Emulsin O/A
Hidrogel
Cicatrin
Agua destilada

212.20.25
211.30.25
185.10.15
140.20.26

94.40
93.96
82.34
62.37

Hidrogel
Carboximetilcelulosa
Glicerina
Agua
Extracto

13.0%
21.5%
0.5%
60.0%
5.0%

1.0%
18.0%
76.0%
5.0%

Al realizar la observacin microscpica de los cortes

histolgicos, se pudo apreciar que las formas farmacuticas
elaboradas con el extracto tuvieron similares resultados,
y mejores frente al grupo tratado con Cicatrin (frmaco
patrn) y con agua destilada (Tabla VII).
A la histologa de la piel tratada con emulsin O/A
al 5% de Juglans neotropica Diels se observ un tejido
epidrmico regenerado y engrosado bajo la nueva epidermis,
con abundante tejido de granulacin compuesto por capilares
en neoformacin, presencia de macrfagos abundantes y
fibroblastos, as como otras clulas en dermis. Se observ
tambin continuidad en la piel, gran proliferacin celular,
reparacin por tejido de granulacin, angiognesis y presencia

O/A: aceite en agua

Tabla VII. Histologa de las formulaciones en emulsin O/A e hidrogel, del frmaco patrn y placebo.

Formulacin

Epidermis
En regeneracin
Hiperplsica
Hiperplsica
En regeneracin
Hiperplsica

Inflamacin
Escasa
Leve
Leve
Moderada
Moderada

Fibroblastos
++
+++
+++
++
+++

Fibras colgenas
++
+++
+++
++
+++

Neoformacin de vasos
Moderado
Abundante
Abundante
Moderado
Abundante

Hidrogel

Hiperplsica
Hiperplsica
En regeneracin
En regeneracin
Hiperplsica

No
Escasa
Leve
Escasa
Leve

+++
+++
++
+++
++

+++
++
++
+++
++

Abundante
Moderado
Moderado
Abundante
Moderado

Frmaco patrn

Adelgazada
Leve hiperplasia
Leve hiperplasia
Adelgazada

Crnica
M/S superficial
M/S superficial
Crnica

+
+
+
+

+
+
+
+

Escasos
Escasos
No
Escasos

Placebo

Leve hiperplasia
Leve hiperplasia
Adelgazada
Adelgazada

Escasa
M/S superficial
M/S superficial
Escasa

+
++
++
+

++
++
+

Escasos
Escasos
Escasos
Escasos

Emulsin O/A

M/S: moderada/severa

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de colgeno con escasos leucocitos, cuya funcin es eliminar

el tejido necrtico y fibrina. No se apreciaron hematomas ni
infeccin, la costra ya se haba desprendido (Fotografa 1).

Fotografa 1. Corte histolgico de cicatriz experimental tratada con emulsin O/A al 5% de

Juglans neotropica Diels. Continuidad en la piel, gran proliferacin celular, reparacin por tejido
de granulacin, angiognesis y presencia de colgeno. HE 40X.

En la piel tratada con hidrogel al 5% de Juglans neotropica Diels se hall aumento del grosor de los bordes de la epidermis, debido a la actividad mittica de las clulas basales.
Igualmente se observ angiognesis, presencia de macrfagos
y abundantes fibroblastos y fibras de colgeno; la epidermis
haba formado una solucin de continuidad. Debajo de la epidermis se observaba un proceso de reparacin con la presencia
de tejido de granulacin. Las clulas basales de la epidermis
proporcionaban una solucin de continuidad con tejido conectivo denso; la fibrina se haba desprendido (Fotografa 2).

de clulas inflamatorias a predominio linfomononuclear con

proliferacin de clulas fibroblsticas, presencia de fibrina y
colgeno incipientes y angiognesis.

Fotografa 3. Corte histolgico de cicatriz experimental tratada con el frmaco patrn. Abundante presencia de fibrina, incipiente proliferacin, migracin celular y formacin de colgeno.
HE 40X.

Finalmente en la histologa de la piel tratada con placebo

(Fotografa 4), observamos que el tejido epidrmico haba
formado una solucin de continuidad; debajo de la epidermis
se produca reparacin mediante tejido de granulacin, con
leve inflamacin.

Fotografa 4. Corte histolgico de piel tratada con placebo. Presencia de fibrina, incipiente
proliferacin y migracin celular, y leve inflamacin. HE 10X.

Fotografa 2. Corte histolgico de cicatriz experimental tratada con hidrogel al 5% de Juglans

neotropica Diels. Solucin de continuidad en tejido epidrmico y reparacin mediante tejido de
granulacin. HE 40X.

En el caso de la piel tratada con el frmaco patrn se

observ abundante presencia de fibrina (costra), incipiente
proliferacin y migracin celular y colgeno incipiente
(Fotografa 3). Se observ as mismo que las clulas
epidrmicas basales haban proporcionado una solucin
de continuidad con tejido conectivo denso; haba infiltrado
inflamatorio linfomononuclear. Haba tambin agrupamiento

DISCUSIN
Los resultados del ensayo de solubilidad indican que
el extracto hidroalcohlico de Juglans neotropica Diels
presenta marcada solubilidad en solventes polares, es decir
una presencia mayoritaria de compuestos de alta polaridad;
igualmente haba presencia de aminocidos, flavonoides,
taninos y saponinas como componentes mayoritarios. La
marcha fitoqumica pudo adems evidenciar compuestos
fenlicos y lactonas en menor cantidad.

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La actividad cicatrizante del extracto fue expresada

como resistencia a la tensin, demostrando una resistencia
de 156.9g. La eficacia del extracto al 5% fue de 69.40%, el
ms alto porcentaje mostrado, constituyndose por ello en
la dosis mnima efectiva, habiendo logrado adems el mayor
porcentaje de heridas cerradas durante todo el perodo de
tratamiento.
De las diferentes formulaciones elaboradas con la dosis
mnima efectiva la emulsin O/A y el hidrogel tuvieron mejores
resultados, con una eficacia de cicatrizacin de 94.40% y
93.86% respectivamente, adems ambas formulaciones
alcanzaron un 100% de cicatrizacin al da 21. Es necesario
notar que el tipo de formulacin juega un papel importante
en la respuesta farmacolgica, en este caso vemos que las
formulaciones con contenido acuoso resultaron ser los
mejores vehculos para el extracto que previamente demostr
tener metabolitos polares en mayor cantidad.
La emulsin O/A tuvo una resistencia a la tensin
de 212.2g y el hidrogel de 211.3g, valores muy similares,
mientras que el frmaco patrn alcanz un valor inferior
de 185.1g y el placebo 140.2g. Tanto en el grupo tratado
con el frmaco patrn como en el placebo muri un animal
de experimentacin, mientras que en los grupos tratados
con las formulaciones a base de Juglans neotropica Diels

no muri ningn animal. Se sabe que esta especie adems

de contener taninos glicos y catquicos, que le confieren
actividad cicatrizante y queratinizante, contiene compuestos
con accin antibacteriana y antimictica, lo cual podra
haber evitado la infeccin de las heridas abiertas.
Los datos estadsticos se corroboraron con el estudio
histolgico, donde se observ que las formulaciones
elaboradas con el extracto al 5% producan mayor cantidad
de tejido de granulacin, neovasos, fibroblastos y presencia
de tejido colgeno, al compararla con el frmaco patrn y el
placebo. Por lo tanto la aplicacin de las formas farmacuticas
elaboradas con el extracto influye favorablemente sobre el
cierre de las heridas, favoreciendo la cicatrizacin.

CONCLUSIN
Se realiz la evaluacin de las formas farmacuticas
elaboradas con el extracto de Juglans neotropica Diels
nogal a la concentracin del 5% en ratones machos
albinos, concluyndose que la emulsin aceite en agua y
el hidrogel presentaron mayor actividad cicatrizante frente
a las otras formulaciones y al frmaco patrn, lo que pudo
corroborarse con el estudio histolgico.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1.
2.
3.
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