Contaminacin.

La contaminacin son todos aquellos

agentes biolgicos, qumicos y fsicos que
interfieren en el desarrollo y crecimiento
normal de una lnea celular.
El
da
de
hoy
hablaremos
de
la
contaminacin
causada
por
agentes
biolgicos.
Caracterizados principalmente por:
-Saturar el medio en el cual crece la lnea
celular.
-Una rata de crecimiento mayor a la de la
lnea celular llegando superar casi en 1000
veces el nmero de clulas.
Es importante
estudiar la prevencin,
deteccin
y
eliminacin
de
toda
contaminacin, debido al papel fundamental
que desempean los cultivos celulares en la
investigacin biolgica.
Las clulas eucariotas en cultivo crecen
lentamente, con tiempos de duplicacin
superiores en muchos casos a las 24 h. Sin
embargo, tanto las bacterias
como las
levaduras tienen una rata de crecimiento
superior. Si se presenta una contaminacin
causada por estos organismos pueden
provocar
la muerte del cultivo en poco
tiempo. Para evitarlo se usan tcnicas de
asepsia como: esterilizacin del material,
trabajar en ambientes estriles (cabina de
flujo laminar). Asimismo se utilizan ccteles
de sustancias antimicrobianas y anti fngicas
en el medio, aunque en muchas ocasiones
no son eficientes debido a la resistencia que
estos desarrollan.
Se denomina efecto citoptico (ECP) a los
cambios
bioqumicos,
moleculares,
morfolgicos y de viabilidad celular, visibles
a microscopa ptica, causados durante el
ciclo de replicacin viral.
Fuentes de contaminacin
La contaminacin en los medios de cultivo
puede ocurrir por diferentes causas.
Especialmente por malas prcticas de
laboratorio (asepsia). Que se presenta en las
siguientes situaciones:
1. Manipulacin y tcnicas del operador:
manejo
adecuado
de
reactivos,
pipetas y el adecuado protocolo de
descarte de materiales. Es importante
que el operador use la indumentaria

de la manera pertinente (guantes,

tapa
bocas
para
evitar
la
contaminacin,
cabello recogido
preferiblemente usar gorro, bata de
mangas largas.
2. Medio ambiente: Superficie de trabajo:
En ausencia de cmara de flujo
laminar
se
recomienda
que
la
superficie de trabajo este aislada y
alejada de lugares con frecuente
trnsito de personas y corrientes de
aire. Antes y despus de ser utilizada
debe ser desinfectada con alcohol al
70%. Y revisar la integridad de los
filtros de las cmaras regularmente
con ensayos microbiolgicos despus
de usarlos.
3. Instrumentos: pipetas, frascos de
cultivo, botellas de medio: los
instrumentos, materiales y reactivos
usados para
realizar
los cultivos
celulares deben estar previamente
autoclavados este autoclavado debe
ser
testeado
para
evitar
contaminacin,
siguiendo
un
protocolo adecuado de esterilizacin.
Estos deben ser almacenados
en
lugares
limpios.
Las
botellas
almacenadas se recomienda tener
tapas de papel aluminio.
4. Incubadoras
y
cuartos
de
refrigeracin: al incubar un cultivo, la
puerta
de
la
incubadora
sede
permanecer abierta el menor tiempo
posible, si se presenta algn reguero,
se debe limpiar inmediatamente para
evitar el crecimiento de algn agente
contaminante como moho.
Existen
incubadoras forradas en cobre que
reducen el crecimiento de hongos pero
estas son 20 a 30 % ms costosas que
las comunes, como opcin se usa
bandeja de cobre en la zona
humidificadora
que
inhiba
el
crecimiento. Incubadoras normales se
les deben limpiar regularmente con
anti fngicos o retardantes como: SDS,
rivoflavina o
Rocall al 10 %. La
frecuencia de la limpieza depender
de donde est ubicada la incubadora,
sin embargo una vez al mes es
suficiente si se encuentra en un cuarto

con filtros , si no se encuentra en un

cuarto con filtros , se desarrollan
renovaciones en el laboratorio o si la
incubadora est cerca de lugares con
concentraciones altas de esporas , se
debe ser ms riguroso y aumentar la
frecuencia de limpieza.
5. Para minimizar la contaminacin en
cultivos que requieran intercambio
gaseoso con co2, no se deben dejan
abiertos o semiabiertos, sino que se
usan tapas permeables, pero esto
aumenta los costos. El uso de
incubadoras hmedas aumentan el
riesgo de contaminacin puesto que
los cultivos estn ms expuestos por
estar abiertos, por lo cual requieren
ser mantenidos en un ambiente con
aire esttico, y para esto se debe
limitar en lo posible la frecuencia de
acceso.
6. Cuartos fros: En las paredes de los
cuartos de refrigeracin se acumulan
esporas debido a al condensacin de
las corrientes de aire que entran
contaminadas cada vez que se abren
y cierran las puertas. Por esto tambin
deben ser limpiadas frecuentemente
con anti fngicos.
7. Cuando se importa una lnea celular se
debe
verificar que este
sin
contaminacin, si se sospecha que
est contaminada se debe someter a
cuarentena,
por
lo
tanto
es
conveniente
certificar que la lnea
haya sido obtenida de una banco de
tejidos de confianza.
Sugerencias:
Protocolos de limpieza para superficies y
equipos
Mantenimiento promedio de los equipos
Para la cuarentena es necesario emplear un
lugar de laboratorio aislado preferiblemente
una cmara de flujo. Si no es posible,
podemos usar una cmara de uso general,
pero despus del uso se debe limpiar con
etanol al 70 % que contenga 2% de
desinfectante fenlico.
Contaminantes

Los contaminantes biolgicos que afectan a

los
cultivos
celulares
son:
bacterias,
levaduras, mohos y protozoarios. Cuando la
contaminacin es repetida o aparece
frecuentemente es necesario saber la
especie al igual que registrar el tipo de
contaminacin, como fue detectada, la
localizacin de donde el cultivo fue
manipulado la ltima vez y el nombre del
operador. El crecimiento rpido de los
contaminantes es un factor que ayuda a su
rpida deteccin y rpidamente el cultivo
puede ser descartado. El problema
es
cuando existe contaminacin criptica porque
son demasiados pequeos para ser vistos al
microscopio como el micoplasma o porque
tienen un bajo crecimiento que no permite
una rpida deteccin.
Figura
1.
Escherichia coli en celular FL, que se
encuentran densamente cubiertas por la
bacteria, presente alrededor del cultivo y
adherida en el vidrio, se observa en la
superficie celular, abundante en los bordes
de
las
clulas
Figura
2.
Cndida asociada a los bordes libres de las
clulas FL, localizadas intra y extracelular,
adherida
a
los
vidrios
Figura
3.
Aspergillus niger, hifas en formas de ramas
tubulares, divididas por intervalos regulares
llamados septos, que cubren densamente las
clulas, destruyndolas y se observa que
solo algunas clulas mamferas estn
adheridas al vidrio.
Levaduras: crecen con forma levuliforme
Mohos: forman hifas
Protozoarios:
Sntomas visibles de contaminacin
-Cambios repentinos de pH: decrece debido
a infecciones bacterianas, pequeos cambios
con
levaduras
e
incrementa
con
contaminacin fngica.
-Nubosidad en el medio, veces con una
ligera pelcula o espuma en la superficie o
manchas en la superficie de crecimiento que
se disipan cuando se mueve el matraz de
cultivo
-Espacios entre clulas brillan en presencia
de bacterias a observacin con microscopio a

100
x
(de
bacterias)
-Los hongos filamentosos producen delgados
micelios y, a veces, matas densas esporas.
-Con la infeccin txico, cierto deterioro de la
clulas sern evidentes, presencia de clulas
amorfas
-En la microscopa de alta potencia (~
400), puede ser posible resolver las bacterias
individuales y distinguir entre varillas y
cocos. La morfologa de las bacterias se
puede
resolver
en

1000
OJO
Infeccin microbiana puede confundirse con
precipitados de los componentes de los
medios (especialmente protenas) o con
restos de clulas, pero se pueden distinguir
por
su
regularidad
morfologa.
Los
precipitados pueden ser cristalinos o globular
y irregular y no son por lo general como
uniformes en tamao. Los grupos de
bacterias
pueden
confundirse
con
precipitados de protenas
MICOPLASMA
Es la palabra prohibida en cultivos celulares
y es la pesadilla de todo cultivador de
clulas, pues es un problema bastante serio
dado que el 50% o ms de lneas celulares
en todo el mundo contaminadas por
micoplasma, son propensas a tener errores
significativamente en la interpretacin de
los resultados biolgicos. Las primeras cepas
de micoplasma se aislaron en el Instituto
Pasteur en 1898, y hasta la fecha 20 de las
aprox. 190 especies que se han identificado
son contaminantes en el cultivo de clulas de
laboratorio.
Es considerada la ms simple de las
bacterias con un tamao minuto (~ 100 nm),
estructuralmente difieren de otras bacterias
en que carecen de una pared slida, en lugar
poseen un "plasma"
, nico tipo de
microorganismo que pertenece a la clase
de Mollicutes , es considerado el organismo
ms pequeo de vida libre ,es decir, con
propia replicacin, por su tamao es difcil de
detectar hasta alcanzar altas densidades y
cause deterioro celular, hasta entonces no
habrn seales visibles de infeccin. Debido
a sus genomas muy bsicos, son parsitos
que explotan las clulas husped para

satisfacer sus necesidades de energa y

biosntesis de sus componentes, adems son
resistentes a una serie de antibiticos de uso
comn,
tales
como
penicilina
y
estreptomicina.
El micoplasma no siempre revela su
presencia por medio de alteraciones
macroscpicas en las clulas o en el medio,
los cambios celulares morfolgicos y tasas
de crecimiento de cultivos de clulas pueden
ser mnimos o inaparente pues crecen
lentamente y no destruyen las clulas
hospederas,
pero
si
alteran
el
comportamiento y metabolismo de las
clulas en el cultivo de distintas formas,
debido a que el micoplasma se adhiere a la
superficie celular y toma la timidina del
medio , por tanto el cultivo muestra niveles
anormales con Timidina [3H].
Cientos de micoplasmas se pueden unir a
una nica clula eucariota, eventualmente
invaden el hospedero mediante la fusin con
la membrana celular, una vez dentro de la
clula, los micoplasmas se multiplican y
eluden las defensas de la clula para
sobrevivir, superando en nmero a las
clulas husped hasta por 1.000 veces.
La contaminacin suele proceder de suero
animal contaminado con M.arginini o de la
tripsina
de
cerdo
contaminada
con
M.hyorhinis, tambin la contaminacin por
micoplasma puede proceder de micoplasma
de la boca y la garganta humana, sin
embargo la mayor fuente de contaminacin
procede del uso de cultivos contaminados, se
citan datos de que alrededor del 50 al 95%
de las clulas utilizadas actualmente estn
contaminadas con micoplasmas.
Nota:
Cualquier contaminacin es rpidamente
extendida a otra lnea celular atreves de
dispersin de gotas y aerosol.
Los cultivos primarios suelen estar libres de
micoplasmas, pero muchas de las lneas
celulares
continuas
estn
infectadas
crpticamente por el uso de antibiticos.
Deteccin de micoplasma
-Microscopia Electrnica: A 100 X y luz bajas,
grnulos
intracelulares,
A
400X,
se

diferencian bacilos de cocos, la Morfologa

resulta a 1000x, cuidado con no confundir
con precipitados (cristalinas, granulares,
globulares e irregulares, no uniformes en
tamao), clulas destruidas y protenas. (En
caso de duda, sembrar en agar nutritivo)
-Bioqumicos: Mtodos que detectan enzimas
especficas de micoplasma como arginina
desaminasa y nucleosido fosforilasa.
-Cultivos
Microbiolgicos:
Ampliamente
usado en el control de calidad y validacin
de procedimientos, en el tratamiento y
produccin de alimentos, sin embargo estos
estudios deben ser llevados a cabo en
instalaciones aisladas con alto nivel de
experticia en microbiologa, pues estos M.O
son bastante exigentes, adems se debe
tener un cultivo de micoplasma vivo como
control positivo. Los cultivos de clulas son
sembrados en caldos, crecen por 6 das y se
trasladan a agar con nutrientes especiales. A
los ocho das las colonias tienen un tamao
aprox. de 200 um da y formas de huevo frito
como caractersticas principales. Hay kits
comerciales para la deteccin microbiolgica
disponibles Irvine Cientific.
-Hibridacin Molecular, Southern Blot :
Detecta infecciones de micoplasma por
hibridacin molecular convencional. Los kits
usan sondas y fragmentos de ADN hibrido
para su posterior deteccin por recuento de
centelleos
(Genprove
Fisher
cientific).
Southern blot, es un mtodo que detecta
infecciones
por
hibridacin
molecular
convencional, detecta la presencia de una
secuencia de ADN en una mezcla compleja
de este cido nucleico empleando la tcnica
de electroforesis en gel de agarosa con el fin
de separar los fragmentos de ADN de
acuerdo a su longitud usando enzimas de
restriccin y, despus, transfiriendo a una
membrana
en
la
cual
se
efecta
la hibridacin de la sonda.
-Autoradiografa: tcnica usa molculas
biolgicas, a las que le sustituye un
elemento, como un H2 o el I, por otro
elemento radiactivo, p.e H3 o I125, o bien
incorpora un elemento radiactivo, que las
clulas y los tejidos empleen, y as en un
momento determinado se interrumpe sus
procesos biolgicos mediante la fijacin,
quedando en ese momento la molcula con

el istopo radiactivo sorprendida en el lugar

de la clula o el tejido por donde estaba
pasando, o donde se almacena, dependiendo
del tiempo que media entre la administracin
del producto y la fijacin.
-Incorporacin de Timidina [3H]: La timidina
tritiada
(3H-timidina),
tiene
actividad
radiactiva y
es un nuclesido formado
cuando la base nitrogenada timina se enlaza
a
un
anillo
de desoxirribosa mediante
un enlace
glucosdico -N3.
Los
investigadores han utilizado la incorporacin
de 3H-timidina como una medida de la
proliferacin celular y cuantificacin de la
sntesis de ADN. Este mtodo requiere la
incubacin de las clulas con 3H-timidina
durante 16-24 horas despus del tratamiento
con
los
compuestos
o
factores
de
crecimiento o la muestra de prueba. Durante
esta incubacin, la 3H-timidina se incorpora
en el ADN recin sintetizado. La 3H-timidina
incorporada se suele cuantificar mediante un
contador de centelleo de las clulas
marcadas colectadas por aspiracin sobre
filtros de membrana. Dado que slo las
clulas que proliferan incorporan 3Htimidina, este mtodo es un indicador
preciso de la sntesis de ADN y representa un
estndar
adecuado
para
medir
la
proliferacin celular. Los cultivos incubados
con timidina tritiada, que es un material
radiactivo, si estn contaminados muestran
una seal autoradiogrfica fuera del ncleo,
por efecto de la degradacin de la timidina a
timina propia de muchos micoplasmas, pues
los micoplasmas captan la timidina de la
superficie celular.
Fluorescencia del citoplasma
Figura 1 y 2. Tcnica convencional de
Hoechst
Figura 3. ATCC un laboratorio de deteccin,
propone un mtodo directo para la deteccin
de micoplasmas que prescinde de 28 das y
usa Hoechst 33258, colorante fluorescente
que se une especficamente al ADN
La tincin fluorescente revela las infecciones
por micoplasma como partculas finas o
manchas filamentosas sobre la superficie
celular o algunas veces alrededor celular
cuando
hay
altas
densidades
de

contaminacin, en una amplificacin a 500

x.
Los ncleos de las clulas tambin se
mostraran teidos, por lo que sirven como
controles positivos de la prueba. El resto de
contaminantes tambin se tien por lo que
los pequeos organismos como micrococos
tambin pueden ser detectados.
Se observa con un objetivo de 50x, estas
partculas filamentosas de micoplasma son
de aprox. 0,1 a 1 um, suelen ser regulares de
tamao y forma.
Como se hace la tincin fluorescente ?
Fotos de las clulas indicadoras. Buscar
DEBRIS.
Hacer un diagrama del protocolo 19.2
Los cultivos de clulas en monocapa se fijan
y se tien directamente mientras los cultivos
que crecen en suspensin, al medio se debe
agregar una clula indicadora (Clulas Vero,
3T6,NRK Y A549) que puede ser en
monocapa, que sea conocida , este libre de
micoplasma, pero tambin que sea buen
hospedero del micoplasma y se propague
bien en el cultivo, de esta manera, el
citoplasma de la clula indicadora revelara
cualquier micoplasma adherido.
OJO
Se debe tener cuidado con el uso de clulas
indicadoras para evitar problemas con falsos
positivos derivados de restos que quedan
despus de la descongelacin o si la clula
proviene de cultivos primarios (con suero),
por lo cual si la clula indicadora o las clulas
evaluadas provienen de un cultivo primario o
fue descongelado previamente se deben
usar filtros estriles de 5 um o centrifugar a
100 g para eliminar los restos.
No todas las clulas necesariamente estn
infectadas, por lo cual la preparacin debe
ser escaneada en totalidad antes de declarar
que el cultivo no est infectado.
Es recomendable almacenar la preparacin
(seco y oscuridad), y analizar el examen el
da sgte, pues cuando la tincin es ligera o
muy reciente se observa el citoplasma de las
clulas
uniformemente
teido,
probablemente por la presencia del RNA en
gran cantidad en el citoplasma, por lo cual al
da sgte los resultados son ms claros.

Si hay dudas sobre la interpretacin de la

prueba, se debe repetir, y si la duda persiste
se deben hacer otros ensayos ms
especficos como PCR o ELISA.
Pruebas serolgicas
Si la prueba se disea para detectar un
antgeno, es un ELISA directo, porque busca
sustancias extraas en la muestra de cultivo
Si la prueba se disea para detectar un
anticuerpo, es un ELISA indirecto, porque
estos son producidos por las clulas en
presencia del contaminante que la clulas
crean en contra el antgeno.
Elisa Directo. Sandwich (1) Un anticuerpo
monoclonal o policlonal anti antgeno suele
estar ya unido o fijado a la placa. (2) se
incuba con la muestra problema. (3) se
aade el anticuerpo conjugado. (4) por
ltimo el sustrato. Todos los pasos van
precedidos de incubaciones y lavados. En
caso de reaccionar con el anticuerpo de la
placa, ser puesto en evidencia tras la
adicin del segundo anticuerpo marcado con
la enzima. Por ltimo, se aade el substrato
para revelar la reaccin.
Elisa indirecto. (1) El antgeno se pega a la
placa (2) Se aade el suero problema. (3)
posteriormente, el anticuerpo conjugado. (4)
y por ltimo, el sustrato. Consiste en
la inmovilizacin del antgeno a la placa de
ELISA (en los Kits ya viene fijado) del que
queremos conocer si en el suero problema
existen anticuerpos especficos. Se pueden
utilizar como antgenos, protenas virales o
bacterianas e incluso virus completos.
Cada da es ms frecuente utilizar
exclusivamente las protenas de inters
inmunolgico y no todas las protenas
antignicas.
Agregado del sustrato de la enzima.
*La enzima convierte el sustrato en un
compuesto coloreado (amarillo, en este
ejemplo).
*Prueba positiva. Se deja reaccionar y se lee
la
densidad
ptica
mediante
espectrofotometra.
VIRUS

Los virus son agentes microscpicos

infecciones que se apoderan de la
maquinaria replicativa de las clulas
hospederas. Su pequeo tamao dificulta su
deteccin en cultivo.
La contaminacin viral es un problema grave
pues su prevencin y eliminacin es
realmente difcil y se presentan cuando se
desconoce la composicin exacta o fuente
del medio del cultivo celular cuando se usa
suero o tripsina.
Adems representa un gran riesgo para la
salud
del
personal
del
laboratorio,
especialmente
si
el
cultivo
celular
contaminado es de clulas humanas o de
primates.
El suero bovino poda ser una fuente
importante de contaminacin por diferentes
virus (herpesvirus e influenza virus),los
sueros son controlados rutinariamente,
aunque la validez de estos ensayos es
limitada . La mejor manera de evitar los virus
es garantizar que las muestras son tomadas
de organismos libres de infecciones virales
conocidas, y procurar siempre usar medios
libres de suero.
Los virus pueden tener un efecto citoptico
marcado, pero los ms peligrosos son
aquellos que crecen a baja tasa o en tan solo
unas pocas clulas.
La infeccin viral de cultivos celulares puede
ser detectada por microscopia electrnica,
inmunotincin con anticuerpos o lo que es
aplicado en pruebas de ELISA, tambin PCR
alternativamente con apropiados primers
virales, la amplificacin analizada por
electroforesis puede ser difcil de validar,
por lo que se recomienda hacer un PCR
cuantitativo o en tiempo real con curva de
melting que garantice con ms precisin la
obtencin de amplicones virales dado su
grado de especificidad.
Empresa; BioReliance.
Figura 1
Cultivo celular. Las zonas no
teidas corresponden a clulas infectadas
con el poxvirus vaccinia que expresa
protenas del virus del SIDA.
Control de la contaminacin
Erradicacin de la contaminacin:

-Descartar cultivo, medio y reactivos usados

para su preparacin por incineracin.
-La descontaminacin solo se hace si es vital
para conservar las clulas, es decir si solo si
la lnea contaminada es irremplazable, debe
ser tratada en cuarentena y con la
supervisin de expertos, teniendo en cuenta
que cualquier intento de descontaminacin
es difcil lograrlo completamente, en especial
con levadura que generan resistencia
fcilmente.
-Si la contaminacin persiste, el cultivo y los
reactivos asociados deben ser autoclavado
tan pronto el fracaso sea evidente.
Erradicacin de Micoplasma y Virus:
-Agentes
antimicoplasmas:
Tilosina
,
Ciprofloxacina o MRA (agente de remocin de
micoplasmas ) en lugar de usar DBSS
(preparacin de antibiticos)
Contaminacin Persistente
Se debe al uso constante de antibiticos, que
genera una contaminacin crnica en los
cultivos, no se detecta en gran parte del
tiempo , por lo cual se debe evitar al mximo
el uso de antibiticos para evitar la
contaminacin criptica , adems ser muy
difcil determinar sus orgenes e imposible
eliminarla.
Contaminacin Cruzada
Presencia de clulas con tiempo de
duplicacin cortos y eficiencia de plantacin
alta,
caractersticas
que
las
hacen
potencialmente peligrosas para infectar otras
lneas celulares, ej : HeLa que contamina
otras clulas, este tipo de contaminacin ha
sido estudiada , documentada y establecida.
Lneas celulares de un banco de
renombre de buena reputacin con su
debida validacin y caracterizacin
celular
Frascos de cultivo para una sola lnea
celular
Manejar lneas de rpido crecimiento
como Hela
No usar la misma pipeta para
diferentes lneas celulares
No usar pipetas destapadas
No usar los mismos reactivos y frascos
para diferentes lneas celulares.

No poner las pipetas en frascos con

medios , tripsina , si se han usado
para manipular frascos con cultivos
celulares
Adicionar al frasco las clulas de
ultimo despus del medio y los dems
componentes
Revisar
continuamente
las
caractersticas del cultivo y sospechar
si de repente hay cambios en la
morfologa, tasa de crecimiento y
otros fenotipos.
CONCLUSIONES
- Ensayos peridicos en particular en lneas
celulares continuas.
Si se mantienen buenas prcticas de
laboratorio y de asepsia la contaminacin no
ser evitada completamente, pero si se
reducir y se detectara a tiempo.
- Seguir de la evolucin del cultivo
y
comprobar regularmente las caractersticas
de los cultivos contaminados como cambios
de color en el medio o usando microscopia
de
contraste
de
fases,
sospechar
inmediatamente si hay cambios en la
morfologa, tasa de crecimiento, entre otros
y para contaminacin con micoplasma se
recomienda evaluar con tincin fluorescente
o PCR.
- No usar antibiticos para evitar la
contaminacin criptica
- No intentar descontaminar un cultivo a
menos que sea insustituible, si es as,
hacerlo en condiciones de cuarentena y con
experticia
- No compartir los medios, reactivos o
cualquier otra solucin que haya sido usa en
cultivos que se encuentren contaminados.
- Las nuevas lneas celulares deben
caracterizarse inmediatamente despus del
aislamiento en lo posible (por huellas de
AND, o perfiles)
Once mycoplasmas have been detected,
discarding the contaminated cell line remains
the best recommended solution to eliminate
and prevent spreading. In important cases,

for instance to rescue a valuable cell line, an

effective mycoplasma eradication treatment
is needed. Some antibiotics that are
selectively active on mycoplasma are
currently available. Following treatment, they
have been shown to eliminate mycoplasma
and restore cell behavior and responses.
Monitoreo de la Contaminacin
Chequear la contaminacin visualmente,
con microscopio y adems realizar el teste
de micoplasma cada mes.
Si la contaminacin es sospechada pero no
es confirmada visualmente, en una campana
tome su cultivo y con una pipeta tome una
muestra y depostela en portaobjetos, llevar
a microscopio recomendado contraste de
fases. Si se confirma la contaminacin
descarte las pipetas, desinfecte la campana
con alcohol al 70 % y no utilice hasta el
prximo da.
Seguimiento del origen de la contaminacin
Si la contaminacin es nueva y no es
extendida descarte el medio de cultivo y los
agentes reactivos utilizados para alimentar
este cultivo que ha sido usado en conjunto
con otra lnea celular
Si hay contaminacin y es extendida, se
debe descartar todos los medios y las sales
stock y la tripsina.
Si el mismo tipo de contaminacin ha
ocurrido antes revise las soluciones stocks
con un test para contaminacin. Como
sembrando las soluciones en un medio sin
microorganismos.
Si la contaminacin es multi-especfica y
sobre crecimiento y repetitiva. Por tanto es
necesario
revisar
las
tcnicas
de
esterilizacin del laboratorio, tcnicas de
empacado y almacenamiento y la integridad
del cuarto de asepsia y a cmara de flujo
laminar.
No se recomienda descartar cultivos hasta
que sean reemplazables.