que es un carbapenemase beta-lactamasa - una enzima que hidroliza e inactiva estos antibiticos carbapenem.

superbacterias' Gram-negativas, tales como Nueva Delhi metalo-beta-lactamasa-1(NDM-bla1)produccin ing patgenos se han convertido en las
principales amenazas para la salud pblica del mundo. Desarrollo de estrategias moleculares que pueden rehabilitar los antibiticos viejos '' y
detener la resistencia a los antibiticos es un enfoque prometedor dirigirse a ellos. Presentamos macromolculas-membrana activa (MAMS) que
restauran la eficacia antibacteriana (mejora de> 80 a 1250 veces) de los antibiticos de tetraciclina hacia bla NDM-1 Klebsiella neumona y blaNDM-1
Escherichia coli aislados clnicos. Organsmicas estudios mostraron que las bacterias tenan un mayor y ms rpido absorcin de tetraciclina en
presencia de MAM que se atribuye al mecanismo de re-sensibilizacin. Por otra parte, las bacterias no desarrollaron resistencia a MAM y MAM
se estancaron el desarrollo de la resistencia al bacterifago a la tetraciclina. MAM muestra propiedades de membrana activa, tal como la
disipacin de potencial de membrana y la membrana de permeabilizacin que permiti mayor absorcin de tetraciclina en bacterias. En vivo los
estudios de toxicidad muestran buenos perfiles de seguridad y preliminares in vivo estudios de eficacia antibacteriana mostraron que los ratones
tratados con MAM en combinacin con antibiticos haban disminuido significativamente la carga bacteriana en comparacin con los ratones no
tratados. Este informe de la re-creacin de instancias de la eficacia de los antibiticos hacia bla NDM-1 patgenos utilizando molculas de
membrana activa aboga por su potencial para la co-administracin sinrgica de antibiticos para combatir superbacterias Gram-negativas.

Introduccin

Informe GlobalLa OMS sobre Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos 2014 dice que E. coli y K. pneumoniae se han
desarrollado ms de 50% de la resistencia a los medicamentos antibacte- rial comnmente utilizados en muchos entornos[1].De particular
preocupacin es el hecho de que K. pneumoniae tiene rrollo de resistencia a los carbapenmicos desa-, la ltima lnea de tratamiento disponible
en todas las regiones de la OMS[1]manuscrito.

Esta explosin continua de resistentes a mltiples frmacos gramnegativos'superbacterias 'incluyendo el Nueva Delhi metalo-beta-lactamasa-1
(blaNDM-1)la produccin de bacterias, junto con la escasez de antibiticos representa una amenaza para la salud pblica mundial[2-4].Ms
importante an, las bacterias resistentes a carbapenem tales como blaNDM-1 E. coli y blaNDM-1 K. pneumoniae se han vuelto resistentes a la
altamente txico y el antibitico de ltimo recurso, la colistina[2,3].Otro antibitico, la tigeciclina aunque til en infecciones de tejidos, es menos
til en infecciones sistmicas. El desarrollo de resistencia a la tigeciclina en bacterias Gram-negativas estn reportados en entornos clnicos es
una cuestin de preocupacin
[4].La aparicin de las bacterias Gram-negativas resistentes a la cacerola con las drogas se ha convertido en una
realidad, necessi- litar la exploracin de municiones alternativas para luchar contra ellos.
Una de las estrategias prometedoras para resistentes (MDR) bacterias multi-frmaco diana es mediante el uso del ther EIcombinacin de dos antibiticos o combinacin de antibiticos y antibiticos no / adyuvantes[5-16].La combinacin de dos o ms antibiticos se
ha encontrado para fomentar el desarrollo
de la resistencia bacteriana a los antibiticos individuales[17].Un enfoque ideal combinacin
tendra al menos un agente con menor tasa de aparicin de resistencia bacteriana. Molculas Aduaneros geting la
membrana celular de las bacterias han sido conocidos por poseer baja propensin para desencadenar el desarrollo de resistencia bacteriana[1824].Recientemente hemos informado de poli cuaternizada (isobutileno-alt-N- (N ', N'-aminopropil alquilo N'-dimetil) -maleimida) derivados con
propiedades-branas activa miembros que tienen una excelente eficacia antibacteriana frente a un panel de bacterias resistentes a los
medicamentos[23].Por lo tanto, sera ideal para confiar estos derivados polimricos, designado aqu como macromolculas de membrana activa
(MAM)(Fig.1A),el papel de re-sensibilizacin de los superbugs a los antibiticos utilizando un enfoque de combinacin. En este informe,
tomamos un enfoque de desarrollo de estrategias moleculares para la rehabilitacin de los "viejos antibiticos 'hacia superbacterias Gramnegativos y trat de apoyar a nuestras observaciones utilizando estudios organicistas y razonamientos molecular, Bridgman ing tanto la qumica y
la biologa. Las investigaciones mecanicistas de re-sensibilizacin, propiedades a membrana activas de MAM y ms importante an, los estudios
de resistencia a frmacos de tibiotics tetraciclina an- en presencia de MAM se reportan aqu.

Resultados y Discusin

aislados clnicos de bacterias resistentes a carbapenem (concentracin mnima inhibitoria, MIC de meropenem> 16 mg
ml-1)se caracteriza por blaNDM-1 gen (475 bp) usando PCR y electroforesis en gel(Fig.1B)[2,25,26].El blaNDM-1 gen se confirm en K .
pneumoniae y E. coli R3934 R3336 incluyendo el control positivo K. pneumoniae (ATCC-BAA-2146), mientras que la MDR K. pneumoniae
R3421 mostraron negativa(fig.1B).La prevalencia de blaNDM-1 en entornos clnicos hace que el desarrollo de estrategias alternativas imperativas.
Todos los tres blaNDM-1 cepas y la cepa MDR estn representados aqu en como R3336, R3934, R3421 y ATCC2146
respectivamente. Todos los cuatro aislamientos fueron sensibles a la tigeciclina y slo colistina (MIC = 0,5 a 1 mg ml -1)y eran altamente
resistentes a los antibiticos intracelulares (ciprofloxacina, kanamicina, eritromicina, tetraciclina, doxiciclina y minociclina) y antibiticos pared
dirigidos por clulas (ampicilina y meropenem) (vase el cuadro A en S1texto)[25].En mayora de
lalos casos, los pases de renta media de los antibiticos contra las cuatro bacterias fueron> 250 mg ml -1,lade alto
concentracinest probado (vase el cuadro A en S1texto).Esto proporciona otra evidencia por el alto nivel de resistencia a mltiples
frmacos en entornos clnicos. La actividad antibacteriana de MAM solo tambin se evalu y se encontr que marginal contra todos los cuatro
aislamientos. MAM1 muestra
MIC de 250 mg ml-1 contra R3336 y 62,5 mg ml -1 contra ATCC2146 mientras que mostraba
MIC de 125 mg ml-1 contra tanto R3934 y R3421 (ver Tabla B en S1texto).Por otro
lado, MAM2 mostr MIC de 125 mg ml -1 contra todos los cuatro bacterias (vase la Tabla B en S1texto).
Hemos probado la eficacia combinacin de ocho antibiticos y MAM contra los aislados (vase
la Tabla A en S1texto)usando ensayos de tablero de damas[27].Uso de los inhibidores defraccionada

la figura 1. (A) Estructurasde las molculas de la membrana activos (MAM) y (B) Representacin esquemtica de gel de agarosa (2%) que muestra el 475 pb
producto amplificado por reaccin en cadena de la polimerasa convencional. Carril 1, escalera de ADN de 100 pb; Carril 2, positivo control- NDM-1
produciendo K. pneumoniae (ATCC-BAA-2146); Carril 3, negativa E. coli control- (ATCC-25922); Carril 4, E. coli R3336 y Lane 5, K. pneumoniae R3934
confirmar elbla NDM-1; gen Carril 6, resistente a mltiples frmacos (MDR) K. pneumoniae R3421, que fue negativo para bla NDM-1 gen

concentracin (FIC), una combinacin sinrgica fue llamado cuando el FIC de

combinada ambos agentes, (el ndice FIC; FICI) fue 0,5[27].En presencia de MAM (a
una concentracin de
12,5 y 25 mg ml-1 para MAM1 y 25 y 50 mg ml -1 para MAM2), las CIMs de los
antibiticos
como la ampicilina, meropenem, ciprofloxacino, eritromicina y
kanamicina no redujeron cuando probado contra los dos clnica R3336 y R3934
isolates- (vase el cuadro A en S1texto).Sin embargo, el efecto sinrgico (FICI de 0.5)
de MAM se observ con antibiticos de tetraciclina (tetraciclina, doxiciclina y
minociclina) contra todos los cuatro aislamientos (vase la Tabla C en S1texto).
Cabe destacar que MAM1 a 12,5 mg ml -1,que es1/20,1/10 y1/5 de su MIC contra
R3336,
R3934 y R3421 mostraron respectivamente alta sinergia (FICI precio tan bajo
como 0,15) en combinacin con tanto doxiciclina y minociclina (vase la Tabla C en
S1texto). A los 25 g ml-1,MAM1 en combinacin con doxiciclina y minociclina muestra
sinergia en contra de todos los cuatro aislamientos. Por otro lado, MAM2 en 25 g ml -1
(1/5th de MIC) result en combinaciones sinrgicas con doxiciclina y la minociclina
contra el blaNDM-1 cepas(ATCC2146, R3336 y R3934). Considerando que, a los 50 mg
ml-1,mostr sinergia con doxiciclina y la minociclina contra todos los
cuatro aislados clnicos. La tetraciclina mostr sinergia en presencia de MAM1 contra
R3336, R3934 y ATCC 2146, mientras que en presencia de MAM2, la sinergia se
observ slo contra
ATCC2146. A continuacin, probamos la eficacia combinacin de ocho
antibiticos colistina y contra todos los cuatro aislados clnicos como un control. La
colistina en 0.25 mg mL-1 (~1/3 de MIC) est representada gy siner- (FICI de 0,3 a 0,5)
con tetraciclina contra R3934 y mostr sinergia tanto con tetraciclina y doxiciclina
contra ATCC2146 (vase la Tabla C en S1 texto).