Comparacin del contenido de lpidos obtenido en la microalga Chlorella

Protothecoides utilizando glucosa y polvo de maz hidrolizado como fuente de

carbono en un medio de cultivo heterotrfico.

Daniela Corts Cifuentes

Sara Piedrahita Rodrguez

Biologa Celular y Microbiologa

Universidad Nacional de Colombia

Sede Manizales
Facultad de Ingeniera y Arquitectura
Ingeniera Qumica

2015

Objetivos

Objetivo general:
Analizar el contenido de lpidos de la microalga Chlorella Protothecoides sintetizado en
medios de cultivo heterotrficos utilizando como sustrato polvo de maz hidrolizado.

Objetivos especficos:

Indagar las condiciones que debe tener el medio de cultivo utilizando como
sustrato polvo de maz hidrolizado para el crecimiento benfico y eficaz de las
microalgas y realizar una comparacin con las condiciones del medio utilizando
como sustrato glucosa.
Comparar el contenido de lpidos de la microalga Chlorella Protothecoides
utilizando la fuente de carbono convencional (glucosa) y la fuente de carbono a
analizar (polvo de maz hidrolizado), y evaluar si esta nueva implementacin
beneficiar la produccin de biodiesel a escala industrial.
Pregunta de investigacin

Utilizando el sustrato polvo de maz hidrolizado como fuente de carbono sobre la

microalga Chlorella Protothecoides, se producir una mayor cantidad de lpidos que la
producida utilizando glucosa?

Hiptesis
En medios heterotrficos, la implementacin del sustrato polvo de maz hidrolizado
como fuente de carbono permite obtener un medio de cultivo con una mayor
productividad de biomasa que el obtenido utilizando glucosa en la cual est presente
una proporcin significativa de lpidos.

Justificacin
En la actualidad existen gran variedad de formas para realizar medios de cultivo de la
microalga Chlorella Protothecoides, sin embargo es difcil obtener aquellos con los que
se pueda tener una ptima produccin de biodiesel en condiciones heterotrficas a nivel
industrial, pues se revelan limitantes considerables en este mbito como obtencin de
cultivos con una alta proporcin de constituyentes diferentes a los deseados, dificultad
en la bsqueda de sustratos econmicamente viables y crecimiento limitado de biomasa.
Los estudios realizados para la microalga Chlorella Protothecoides han sido
encaminados hacia el uso de fuentes de carbono como la glucosa, pero este tipo de
sustratos difcilmente pueden ser implementados a gran escala, debido a que son
necesarias grandes cantidades de sta con cierto porcentaje de pureza que resultan poco
favorables econmicamente.

Se evaluar si el sustrato polvo de maz hidrolizado como fuente de carbono, llevar a la

microalga Chlorella Protothecoides a tener una ruta metablica con la que se produzca
una cantidad significativa de lpidos y, por ende, se favorezca la produccin de
biodiesel.
Este anlisis se realizar en un medio de cultivo heterotrfico debido a que en ste
puede crecer la microalga a utilizar. El uso de medios cerrados, evitar que agentes
contaminantes acten como inhibidores, interviniendo en funciones metablicas
especficas del microorganismo a analizar, por lo que se puede indagar sobre este medio
y buscar alternativas que se puedan acoplar a nivel industrial.

Marco Terico

Biodiesel:
El biodiesel es un biocombustible lquido que se obtiene a partir de lpidos naturales
como aceites vegetales o grasas animales, mediante procesos industriales de
esterificacin y transesterificacin.

Produccin de biodiesel:
El biodiesel a partir de aceite de microalgas se produce por procesos como la
transesterificacin usando una base como catalizador debido a que es el mtodo ms
econmico, requiriendo bajas temperaturas y presiones y obteniendo una conversin del
98%. sin embargo, hay otros mtodos que usan cidos como catalizadores que son ms
lentos.

Microalgas:
Las microalgas son microorganismos celulares eucariontes fotosintticos de tamao
entre 2-200 m que pueden ser auttrofos o hetertrofos.

Microalgas oleaginosas:
Son microalgas que contienen cidos grasos como componentes de su membrana,
producto de almacenamiento, metabolitos y fuente de energa. Estos microorganismos
representan una opcin viable como materia prima para producir biodiesel, debido a una
alta productividad de biomasa; stas no requieren terrenos cultivables para el
crecimiento celular y no compiten por alimento humano por lo que pueden ser utilizadas
para este proceso. Algunas especies pueden acumular entre 20-80% (peso seco) de
triglicridos.

Lpidos:
Los lpidos son un grupo amplio y heterogneo de compuestos insolubles en agua, pero
solubles en solventes orgnicos no polares. En su molcula ellos contienen c, h y o. son
reservas energticas, se utilizan como combustibles biolgicos importantes y sirven
como componentes estructurales de las membranas biolgicas.

Sustrato:
Es un material orgnico o inorgnico que le aporta nutrientes a un microorganismo para
que produzca una funcin especfica.

Microalgas como fuente de lpidos para la produccin de biodiesel:

El uso de microalgas para la produccin de biodiesel ha surgido como una opcin
viable, debido a acumulan entre 20 y 80% de triglicridos, no requieren tierras
cultivables, demandan menor consumo de agua renovable y pueden cultivarse en agua
salobre. La composicin del medio de cultivo y las condiciones de crecimiento de
microalgas tienen un efecto importante en el rendimiento de biomasa y en el contenido
de lpidos. Se ha demostrado que la limitacin de nitrgeno y fsforo, incrementa el
contenido lipdico en microalgas.

Medio de cultivo hetertrofo

Medio en el que las especies crecen con fuentes orgnicas de carbono y en ausencia de
una fuente lumnica. Este medio es utilizado para especies de microorganismos que no
pueden crecer bajo condiciones autotrficas. Un tipo de microalga que crece en este tipo
de cultivo heterotrfico es la chlorella protothecoides.

Sistemas de cultivos

Sistemas Abiertos. Son sistemas con menor necesidad de inversin y

mantenimiento, de fcil escalado pero que presentan un difcil sistema de
control, la produccin es menor y con baja eficiencia, adems de ser susceptibles
a contaminacin.
sistemas cerrados: son sistemas ms seguros, con mejor control de operacin,
siendo el coste su principal inconveniente. permiten mantener condiciones
idneas para el crecimiento de las microalgas, a la vez que evitan la
contaminacin por organismos ajenos, posibilitando as el mantenimiento de
dichos cultivos.

caractersticas de un medio de cultivo:

fuentes de carbono: proveen energa.

fuentes de nitrgeno: reserva de nitrgeno para la sntesis de protenas.

metabolitos primario y secundario: se obtienen despus de una ruta metablica

para una funcin especfica.
inhibidores: limitan el desarrollo de una funcin del microorganismo.
cofactores: promueven el desarrollo de una funcin.
sales: promueven cualquier otra funcin no relacionada con las rutas
metablicas.

fuentes de carbono:
dependiendo del tipo de metabolismo utilizado por las microalgas para su crecimiento,
la fuente de carbono puede ser orgnica (glucosa, acetato, glicerol, fructosa, entre otras),
o inorgnica (co2). fotoautotrficamente, las microalgas utilizan la luz como fuente de
energa y el co2 como fuente de carbono para obtener energa qumica a travs de la
fotosntesis. heterotrficamente, las microalgas en ausencia de luz utilizan slo
compuestos orgnicos como fuente de carbono y energa.

mejoramiento de la produccin de lpidos en microalgas:

para obtener un mejoramiento en la produccin de lpidos de la especie de microalgas se
debe tener en cuenta aspectos como: la intensidad y el tipo de luz, la composicin del
medio de cultivo, temperatura, ph y la asociacin con otros microorganismos.

metodologa:
1. cultivo de la microalga chlorella protothecoides.
el procedimiento que se presenta en la literatura es el siguiente:
esterilizacin del material a utilizar, por medio de un autoclave.
preparacin del medio de cultivo. para esto son necesarios los siguientes
compuestos:
(nh4)2so4
cacl2
mgso4
kh2po4
nacl
proteasa peptona
fuente de carbono
cultivar las microalgas empezando con un volumen de 100 ml para su
adaptacin en una incubadora a una temperatura de 33c con agitacin
permanente en completa oscuridad. escalar a un volumen de 600 ml y
controlar las condiciones de ph y temperatura.
realizar monitoreo de biomasa cada 24 horas durante 8 das utilizando azul
de metileno para la identificacin de microalgas vivas y muertas.
dejar sedimentar por gravedad la biomasa de microalgas durante 2 das y
recolectar el caldo de cultivo.

bombear el lquido claro de cultivo y filtrar la biomasa al vaco.

secar en una placa calefactora a 50c durante 30 a 60 segundos para no daar
el material y las propiedades de la biomasa, y cuantificar el rendimiento de
biomasa total por caldo de cultivo.
someter la biomasa de microalga seca, a un proceso de extraccin durante 2
das en una solucin de acetona-etanol en una relacin de 0.11 v/v.
cuantificar la pasta de biomasa residual y por un balance de materia simple
determinar la posible cantidad de aceite extrado.

este procedimiento se realiza utilizando la fuente de carbono convencional (glucosa) y

la fuente de carbono de inters (polvo de maz hidrolizado)
2. produccin de biodiesel:
se inicia con el cultivo de la cepa para la obtencin de biomasa con una alta
productividad de lpidos, seguido de la separacin de la biomasa del medio de
cultivo y posterior extraccin de los lpidos para finalmente obtener el biodiesel
por una reaccin de transesterificacin. en la siguiente imagen se puede ver lo
anteriormente mencionado: