Laboratorio de

Microbiologia
Tincin de Gram
INTRODUCCIN
De gran importancia en Microbiologa porque permite
diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y
Gram-), segn se comporten ante esta tincin. El
fundamento radica en la diferente estructura de la pared
celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una
gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que
las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano ms
fina y una capa lipopolisacardica externa. Tras la tincin
con el primer colorante (Cristal violeta) se efecta un
lavado conetanol que arrastrar al colorante slo en las
Gram (-), mientras que en las Gram (+) elcolorante
queda retenido y las clulas permanecern azules. Las
clulas Gram (-) se teirn despus con un colorante de
contraste (safranina) para que puedan observarse.
Objetivos
Utilizacin de tcnicas sencillas para la observacin de
microorganismos
Conocer o manejo del microscopio ptico para la
observacin de bacterias (importancia del objetivo de
inmersin)
Conocer y manejar las unidades de medida de las clulas
y establecer comparaciones entre tamaos de procariotas
y de eucariotas
Reconocer los distintos modelos de pared bacteriana.

Materiales

MecheroBunsenodeAlcohol

AsadeSiembraoagujaenmangada

Pinzas

Portaobjetos

Muestrasbacterianasdeorigennatural:Yogur,Sarro
Dental,Suelo,etc.

Palillos

Microscopios

Aceitedeinmersin

SoportedeTinciones

Goteros

Pinzas

Aguadestilada

Colorantes paraTincin:Solucinde cristal Violeta

LugolSafraninaEtanol95%

Procedimiento
I.preparalasmuestrassiguiendoestospasos:
1.Enunasgotasdeaguacolocadassobreunportaobjetos,
disuelveunapequeacantidaddeyogurconayudadeun
palillohiginico.Hazlomismoconlamuestradesarro
dentalextradodelabocadealguien.2.Preparaunafina
extensin(frotis),enotrosportas,dejndolossecar.3.Fija
estefrotisdndolevariospasesalosportassobrelallama
delmechero,conlamuestrahaciaarriba.
IITieahoralosfrotisfijadosmediantelossiguientes
pasos:
1.Cubreambosfrotisconcristalvioletadurante3min.Se
retirarelcolorantemedianteunsuavelavadoconagua,
deslizandoelaguasobreelporta,paranondesprenderla
muestra.Se2.cubrirahoraconLugoldurante1min.,y
despusserealizarotrolavadosuave.Todaslasclulas
seteirndevioleta.2.Seretirarelcoloranteconetanol,
gotendolo por el portaobjetos, hasta que las gotas que
salennotengancasicolor.LasclulasGrampierdenel

colorante violeta y quedarn incoloras. Las Gram +

seguiran violeta.3. Aade una gota de agua a la
preparacinycubrelaspreparaciones2min.consafranina
(colorantedecontraste).Finalmente,lavaelcolorantecon
agua.EstecolorantesloentrarenlasbacteriasGram,
quequedarnrojas.LasGram+seguirnvioletas.
Seca las preparaciones sobre papel de filtro y
obsrvalas con microscopio utilizando el objetivo de
inmersin. En esta tincin diferencial las bacterias
Gram aparecen rojas y las Gram + violeta.
Observar(100).Lugol
Tincinnegativa
1.colocarunapequeagotadetintachinaenelextremo
deunportaobjeto,colocarunagotademuestra2.realizar
frtis,3.dejarsecar.

Resultados

Preguntasdeanlisis
1)Culessonlasfuentesdeerroresmscomunesde
errorenlaTincindegram.
Los peores obstculos de laTincin, que impiden
conseguir el resultado perseguido, son los errores del

tcnico.Paraevitarloshayqueelegirbienlosreactivosy
sermuycuidadososalejecutarlatcnica.Acontinuacin
describimosalgunasdelasfuentesdeerror:Impurezasen
losreactivosdeTincin.

Concentracininadecuadadelosreactivosdetincin.

pHinadecuado.

Elcolorantesefijaalaclulapormecanismosfsico
qumicos,quesealteransielPhnoeselapropiado.

Loscolorantespuedensercidos,bsicosoneutros.

TiempodeTincinincorrecto.

Temperaturasuficiente.
2) Explique qu reaccin de Gram darn las
levaduras. Estos tendrn la misma importancia que
paralasbacterias.
Elcolordependedelacomposicindelaparedcelularde
lalevaduraynotienetantaimportanciacomolasbacterias
yaqueenellasexistetodaunaclasificacinpormediodel
gramloquenosucedeconlaslevaduras.
3) Explique el fundamento de laTincinnegativa
realizadaenlaprctica.Qutipode informacinse
obtiene.
LaTincinnegativa es el reverso del procedimiento de
tincinusual:lasclulassedejansinteir,perosecolorea
encambioelmedioquelasrodea.Loqueseve,portanto,
eselperfildelasclulas.LaTincinnegativaesunmodo
satisfactoriodeaumentarelcontrastedelasclulasenla
microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en
revelarlapresenciadecpsulasalrededordelasclulas
bacterianas.

4) Investigue otra tcnica deTincinselectiva que

permitaobservarotrasestructurasbacterianas.
Las Tinciones Selectivas nos permiten observar
estructurasdelasclulasgraciasasumayorafinidadpor
loscolorantesutilizados.
5)Aqusedebeeldistintocomportamientodelas
bacteriassegnseanGram+oGram?
EldistintocomportamientoenlaTincinsepiensaquees
debidoalasdiferentescapassuperficialesoparedesdelas
dosbacterias(TiposdeClulas).
6)Paraquesenecesitaelaceitedeinmersin?
Elaceitedeinmersintieneunindicederefraccinsimilar
aldelvidrio(1,5aprox.)yseutilizaparaelobjetivode
100X.

Conclusin
Aunquelasbacteriasnoaparecenendiferentesmedioque
las rodea, difieren muchoqumicamenteesta
diferenciaqumicaes los que permitedistinguir las
bacterias porTincin, pues generalmente, el colorante
reaccionaconlaclulabacteriana,peronoreaccionacon
sumedioexterior.
Debido a eso laTincines importante para
lamicrobiologadebidoaque:

Proporcionacontrasteentreelmicroorganismoyel
medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios
tiposmorfolgicos.

Permite el estudio de las estructuras internas de

laclulabacteriana, tales como paredes celulares,
vacuolasocuerposcelulares.
Permiteelempleodemayoresamplificaciones.