PRCTICA

ESTUDIO DE PROTOZOOS. GEERALIDADES

I.- Teora

Definicin: Los protozoos son seres vivos unicelulares, desprovistos de clorofila y

hetertrofos. Se multiplican por mitosis y algunos tienen tambin reproduccin sexual. Al
menos en un estadio de su ciclo biolgico son mviles, utilizando distintos sistemas de
locomocin.

Caracteres morfolgicos y estructurales

Tamao: Los protozoos son generalmente microscpicos (desde unas micras a
varios cientos).

Estructura:
En los protozoos se distingue una forma activa que se conoce en la mayora de
ellos con el nombre de forma vegetativa o trofozoito. En muchos casos, el trofozoito
tiene la capacidad de transformarse en una forma de resistencia, conocida como quiste.
El componente fundamental del cuerpo del protozoo es el protoplasma, el cual
est diferenciado en ncleo y citoplasma.
a)
cleo: los ncleos de los protozoos tienen formas, tamaos y estructuras
variadas. La mayora de los protozoos contienen un solo ncleo, pero hay
muchos que tienen dos o ms ncleos. El ncleo aparece como una vescula
constituida por una membrana perfectamente definida que envuelve el
nucleoplasma en el que se encuentran el o los nucleolos (=cariosomas,
=endosomas) y la cromatina nuclear. Estructuralmente, los ncleos pueden
clasificarse en dos tipos principales: vesicular (en el que casi siempre se
pueden observar uno o varios cariosomas que destacan sobre el resto del
material cromatnico) y compacto (en el que el material cromtico aparece de

un tamao uniforme, llenando casi todo el ncleo, por lo que ste toma un
aspecto denso y compacto).

b) Citoplasma: La parte extranuclear del cuerpo del protozoo es el citoplasma.

Est compuesto de un sistema coloidal que a menudo est formado por una
parte perifrica, densa, denominada ectoplasma, y otra parte medular fluida
llamada endoplasma. En el citoplasma se encuentran

distintos orgnulos

como mitocondrias, aparato de Golgi, vacuolas (pulstiles o digestivas),

retculo endoplasmtico, etc. que participan en las distintas funciones
inherentes a la vida del protozoo. La superficie del cuerpo esta cubierta por
una membrana cuya estructura se corresponde, en principio, con la membrana
unidad de cualquier clula. Este sera el caso de la plasma-membrana o
plasmalema de muchos protozoos (amebas y algunos flagelados). En otros
protozoos, como en los ciliados, la membrana limitante del cuerpo presenta
una estructura mas complicada y recibe el nombre de pelcula.

Fisiologa
En los seres unicelulares existen ciertas partes de la clula especializadas en
llevar a cabo funciones

vitales como alimentacin, respiracin, reproduccin y

locomocin.

La alimentacin se realiza mediante diferentes mecanismos. El mas simple se

denomina osmotrofia y consiste en la incorporacin de sustancias orgnicas disueltas en
el medio donde viven, a travs de su membrana. Otro procedimiento es la fagocitosis, que
consiste en la incorporacin de partculas slidas de tamao considerable. Por ltimo,
algunos protozoos se alimentan por pinocitosis, que es un proceso similar a la fagocitosis,
del que se diferencia porque el tamao de las partculas ingeridas en este caso es mucho
menor.
La respiracin en algunos protozoos es aerobia y en otros anaerobia. En la primera
toman el oxgeno de su medio ambiente y expulsan el dixido de carbono a travs de la
membrana celular. En la segunda necesitan metabolizar ciertas sustancias de las cuales
obtienen el oxgeno.
Los protozoos presentan diversos mecanismos de locomocin, que se tienen en
cuenta como uno de los caracteres para su clasificacin. As, muchos se mueven gracias a
que poseen rganos locomotores permanentes: cilios o flagelos. En otros el movimiento
se produce como consecuencia de la formacin de pseudpodos, que son proyecciones
citoplasmticas temporales y retrctiles que, fijndose al sustrato, ejercen traccin sobre
el resto del cuerpo del protozoo. Por ltimo, hay bastantes protozoos que carecen de
rganos especficos de locomocin en casi todas las etapas de su ciclo biolgico.
Los protozoos se multiplican por reproduccin asexual (binaria o mltiple) y solo
algunos tienen reproduccin sexual.

El enquistamiento en los protozoos

Los ciclos biolgicos de los protozoos son mas o menos complejos dependiendo
de las especies o grupos que se consideren. Entre los protozoos parsitos, cuando
abandonan el hospedador en el que se encuentran para pasar a colonizar otro, es frecuente
que adopten una forma de resistencia llamada quiste, a fin de superar las condiciones
adversas del medio externo. Estos quistes estn formados por una masa citoplasmtica en
la que se observan un nmero de ncleos igual o superior al que tena el trofozoito del
que derivan. Todo ello est rodeado por una cubierta resistente llamada pared qustica
que lo protege de los agentes externos, lo que permite que estos quistes acten como
medios de transmisin del parsito de un hospedador a otro. Para algunas especies estos

quistes sirven adems como reorganizadores de la divisin nuclear e incluso en otras

actan como fijadores al hospedador.

Clasificacin
Tradicionalmente los protozoos se han clasificado teniendo en cuenta,
fundamentalmente, los distintos tipos de orgnulos de locomocin que presentan. A
continuacin se citan cuatro de los grupos en los que se incluyen las especies parsitas
con ms trascendencia en sanidad humana y animal.
Phylum SARCOMASTIGOPHORA
Poseen pseudpodos, flagelos o ambos tipos de organelos locomotores. Protozoos
con ncleo de un solo tipo. La reproduccin es asexual por fisin binaria. Incluye los
subphylum sarcodina (AMEBAS) y mastigophora (FLAGELADOS)

Phylum CILIOPHORA
Presentan cilios como organelos de locomocin (CILIADOS). Generalmente con dos tipos de ncleos. Fisin binaria transversal. Vacuola contractil tpicamente
presente.

Phylum APICOMPLEXA
Son protozoos que presentan en alguno de sus estadios, una estructura
denominada complejo apical (solo visible al microscopio electrnico) y que generalmente
est formado por anillos polares, roptrias, micronemas, conoide y microtbulos
subpeliculares. El movimiento tiene lugar por deslizamiento. Reproduccin sexual por
singamia. En este grupo se incluye el orden Eucoccidida (COCCIDIOS).

Phylum MICROSPORA
Son parsitos intracelulares diminutos con esporas de origen unicelular en
una cpsula membranosa indivisa, que contiene un solo germen ameboide, que sale a su
vez a travs de un filamento polar tubular. Un poroplasto llena la porcin apical de la
espora y un posterosoma, la basal.

II.- Trabajo prctico

Material:
- Con la muestra de que dispone, confeccione una preparacin donde debe localizar
trofozoitos de:
Amebas
a) Observe la forma indefinida y cambiante de este estadio.
b) Mantenga la atencin en un trofozoito y observe la emisin de pseudpodos,
intentando distinguir ecto y endoplasma en los mismos.
c) Observe la posible presencia de vacuolas, tanto digestivas como pulstiles.
d) Haga un dibujo esquemtico y seale y comente sobre el mismo, todo lo que haya
observado.
Flagelados
a) Observe la forma mas o menos constante de estos organismos.
b) Cuente el nmero de flagelos y observe la disposicin de los mismos en el cuerpo del
protozoo. Estudie la forma en que se mueven los flagelos y como se desplaza el
protozoo.
c) Intente observar alguna estructura intracitoplasmtica y refleje todo lo visto en un
esquema sencillo.
Ciliados
a) Estudie la forma de estos protozoos.
b) Observe la disposicin y longitud de los cilios en relacin a lo visto para los
flagelados.
c) Describa el movimiento de estos trofozoitos en relacin a los otros protozoos
estudiados y haga un esquema de uno de ellos sealando las estructuras que haya
podido observar.

PRCTICA

ESTUDIO DE TROFOZOITOS Y QUISTES DE

AMEBAS, FLAGELADOS Y CILIADOS PARSITOS
Como ya se ha mencionado en la prctica anterior, dentro del phylum
Sarcomastigophora se incluyen aquellos protozoos que se mueven por pseudpodos
(AMEBAS) y aquellos que se mueven con ayuda de unos organelos de locomocin
denominados flagelos (FLAGELADOS).
En esta prctica se estudiarn, en primer lugar, trofozoitos y quistes de algunas
especies de amebas parsitas del intestino del hombre

Subphylum Sarcodina
Las amebas se incluyen en el subphylum Sarcodina y de forma resumida este
grupo se caracteriza por:

Los trofozoitos presentan forma inconstante

El movimiento se realiza por pseudpodos

La multiplicacin tiene lugar por fisin binaria

Presentan un ciclo biolgico directo
QUISTES

Quiste maduros

Entamoeba coli

Aspecto de pequea esferita de 10-30 micras de dimetro.

En su interior se pueden observar 8 ncleos flotando en
una masa protoplasmtica ntida, donde las barras
cromatoidales

estn

muy

reducidas

incluso

desaparecidas.
Los ncleos presentan un cariosoma pequeo y excntrico.
El interior de la membrana plasmtica est revestido por
numerosos grnulos de cromatina
1

Endolimax nana

Quiste maduro
Esfricos

rectangulares

con

bordes

redondeados. Contiene 4 ncleos pequeos, con

cariosoma grande, irregular, central o excntrico
muy visible.

Iodamoeba butschlii

Quiste maduro
Forma muy variable. Contiene un ncleo tpico, con gran
cariosoma central o ligeramente excntrico, poco visible
en las muestras fecales frescas. Tamao variable (6-15
micras). Lo ms caracterstico de estos quistes es la
presencia de una gran vacuola de glucgeno que se tie de
color rojo ladrillo con el yodo.

Quistes de amebas:
a) Observe la forma del quiste en relacin a la del trofozoito que observ in vivo.
b) Cuente el nmero de ncleos del quiste y, en la medida de lo posible, estudie su
estructura. Haga un esquema de lo observado.
c) Trate de identificar los quistes de cada especie con ayuda de las lminas,
descripciones y bibliografa.

Subphylum Mastigophora

FLAGELADOS

Los flagelados se incluyen en el subphylum mastigophora cuyo carcter ms

relevante, como ya se ha mencionado, es la presencia de uno o varios flagelos como
organelos de locomocin. Por otra parte los ciliados constituyen un grupo independiente,
Phylum Ciliophora, que se caracteriza por la presencia de cilios como organelos
quinticos.
Ambos grupos, flagelados y ciliados, presentan especies parsitas del hombre
algunas de las cuales se identificarn en esta prctica.
De forma resumida otras caractersticas significativas de este grupo son:

Presencia de uno o varios flagelos

Los trofozoitos presentan forma constante

La multiplicacin tiene lugar por fisin binaria

Pueden presentar un ciclo biolgico directo o indirecto
Dentro de este grupo se proceder a la localizacin e
identificacin trofozoitos y quistes de Giardia intestinalis as
como a la localizacin de trofozoitos vivos de una especie del
gnero

Trichomonas

que

se

describen

continuacin.

Giardia intestinalis
TROFOZOITO

brevemente

Tpicamente piriforme, con simetra bilateral. Dorsalmente es convexo y ventralmente presenta

una concavidad casi circular denominada disco suctor que funciona a modo de ventosa. Tiene 4
pares de flagelos y 2 ncleos, cada uno de los cuales lleva un cariosoma bien patente. Cerca del
margen posterior del disco suctor presenta un par de estructuras en forma de barra denominadas
cuerpos medios. Miden 15 x 8 micras.

QUISTE
Ovoide,

rodeado

por

una

pared

qustica

homognea y delgada. Presenta hasta 4 ncleos y

un conjunto de estructuras correspondientes al
axonema de los flagelos, restos del disco suctor,
etc. Que destacan en el interior por su refrigencia.
Miden 7-10 micras de largo.

Trichomonas spp,

Membrana ondulante

Los representantes de este gnero se

incluyen en el orden Trichomonadida el
cual se caracteriza porque los trofozoitos

Cuerpo parabasal

tienen entre 4 y 6 flagelos, uno de ellos

formando el borde de una membrana

Costa

ondulante lateral. Adems presenta un

rgano

Axostilo

de

desarrollado.

sostn

(Axostilo)

bien

Trichomonas vaginalis

Los trofozoitos miden unas 15-20 m de largo. Poseen 4 flagelos

libres anteriores y uno recurrente que recorre el borde de una
membrana ondulante a lo largo de todo el organismo sin dejar
porcin libre. El fino axostilo aflora por el extremo posterior. La
identificacin cuando se observan trofozoitos vivos se facilita por su
rpida motilidad, as como la visualizacin de la membrana ondulante
mientras gira el cuerpo adems de trasladarse.

Trofozoitos y quistes de flagelados:

a) Observe la forma del quiste en relacin a la del trofozoto
b) Cuente el nmero de ncleos del quiste y, en la medida de lo posible, estudie su
estructura. Haga un esquema de lo observado.
c) Trate de identificar los trofozoitos y quistes de cada especie con ayuda de las
lminas, descripciones y bibliografa.
d) Confeccione una preparacin con la muestra que se ha proporcionado. Intente
localizar tricomondidos. Localice las estructuras quinticas y de sostn. Describa
el movimiento que observa.

Phylum Ciliophora

CILIADOS

De forma breve podemos caracterizar a los representantes de este grupo por las
siguientes caractersticas:

Presencia de cilios como orgnulos de locomocin

Localizacin de un citostoma o boca celular

Presencia de 2 ncleos heteromorfos: uno de mayor
tamao o macroncleo y otro menor o microncleo

Reproduccin asexual por fisin binaria y sexual por

conjugacin

A continuacin se describe de forma breve la morfologa de Balantidium coli, nico

ciliado parsito del intestino humano. De esta especie trataremos de localizar e identificar
tanto trofozoitos como quistes

Balantidium coli

TROFOZOITO

QUISTE

Ovalado, mide de 50 a 200 micras. Todo el cuerpo

Esfrico, mide 50-60 micras. Presenta

se encuentra cubierto de cilios, siendo estos ms

pared qustica y por debajo una membrana

fuertes alrededor de la boca celular o citostoma

ciliada.

situada en la parte anterior. En el interior se observa

microncleo y vacuolas alimenticias.

un macro y microncleo y vacuolas alimenticias.

6

Citoplasma

con

macro

Trofozoito y Quiste de ciliado

a) Compare la forma y el tamao de estos quistes con los de amebas y flagelados que ya
ha visto.
b) Enfocando con el objetivo fuerte seco (40), y moviendo levemente arriba y abajo el
tornillo micromtrico, intente observar bajo la cubierta qustica, las hileras de cilios
del protozoo. Haga un esquema sealando todo lo observado.
c) Trate de identificar el trofozoito y el quiste de este ciliado con ayuda de las lminas,
descripciones y bibliografa.