NOMBRE: MARTINEZ ZAMBRANO NATALY NICOLE

QU ES PCR (REACCIN DE LA CADENA POLIMERASA)?

La reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls
(polymerase chain reaction), es una tcnica debiologa molecular desarrollada
en 1986 por Kary Mullis,[1] cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un
fragmento de ADNparticular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una
nica copia de ese fragmento original, o molde.
Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la
amplificacin resulta mucho ms fcil identificar con una muy alta
probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas
(cadveres) o hacer investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos
derivados de la amplificacin han hecho que se convierta en una tcnica muy extendida,
con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
PCR son las siglas por las que se conoce a la reaccin en cadena de la polimerasa (en
ingls Polymerase Chain Reaction), una tcnica cientfica avanzada que fue inventada
por el bioqumico estadounidense Kary Mullis en 1985. Esta tcnica permite amplificar
pequeas regiones especficas del ADN en laboratorio. Es decir, consigue que un
pequeo segmento de ADN que pasara desapercibido en un anlisis cualquiera se
multiplique millones de veces y as sea fcil de detectar.
Gracias a esta tcnica se han podido realizar estudios genticos en cualquier campo de
la ciencia. Por ejemplo, se utiliza diariamente para la identificacin de cadveres o en el
estudio de escenas del crimen para buscar rastros del culpable. Tambin se emplea en la
biologa, para identificar cadenas genticas de plantas, animales o, sobre todo,
microorganismos. En la medicina se rene la experiencia de todos esos campos y se usa
principalmente para identificar grmenes agresores que se encuentran en nuestro
organismo.
Cuando se desarroll la prueba de la PCR por primera vez se trataba de una tcnica cara
y algo engorrosa de realizar, pero pronto se generaliz su uso y se empezaron a
desarrollar equipos sencillos y muy baratos que se utilizan todava hoy en muchos
centros diagnsticos.
Adems, se han diseado PCR ms especficas que se pueden elegir segn sea la
muestra a estudio. Los diferentes tipos de PCR, adems de la bsica, son:

PCR anidada: consigue amplificar muestras mnimas de ADN a miles de

millones de fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos minsculos.
PCR in situ: permite la deteccin de ADN en el mismo lugar de la muestra, sin
tener que procesarla primero con tcnicas de laboratorio. Se suele utilizar para
biopsias o raspados de clulas.
PCR mltiple: con este tipo de PCR se consiguen detectar varios trazos de
ADN a la vez y con una sola muestra.
PCR con transcriptasa inversa: en este caso se utilizan cadenas de ARN para
detectar moldes de ADN. Se utiliza la enzima transcriptasa inversa, la misma
que utiliza el VIH entre otros virus.

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PCR en tiempo real o PCR cuantitativa: se aade un componente fluorescente

que permite medir la luz. A ms luz, ms cantidad del ADN detectado.

QU ES RT-PCR (REACCIN DE LA CADENA POLIMERASA EN TIEMPO

REAL)?
La aparicin de nuevas tcnicas de marcaje de ADN fluorescentes en los ltimos aos
ha permitido el anlisis y la deteccin de productos de PCR en tiempo real, y por lo
tanto ha conducido a la adaptacin generalizada de tiempo real RT-PCR para el anlisis
de la expresin gnica. No slo es en tiempo real de RT-PCR ahora el mtodo de
eleccin para la cuantificacin de la expresin gnica, sino que tambin es el mtodo
preferido de obtencin de resultados de anlisis de una variedad y expresiones de genes
en una escala global. Actualmente, hay cuatro sondas de ADN fluorescentes diferentes
disponibles para la deteccin en tiempo real de RT-PCR de los productos de PCR:
SYBR Green, TaqMan, balizas moleculares, y Escorpiones. Todas estas sondas
permiten la deteccin de productos de PCR mediante la generacin de una seal
fluorescente.
Mientras que el colorante SYBR Green emite su seal fluorescente simplemente
mediante la unin al ADN de doble cadena en solucin, las sondas TaqMan, balizas
moleculares y la generacin de Escorpiones de la fluorescencia dependen de Frster de
transferencia de energa de resonancia de acoplamiento de la molcula de colorante y un
resto extintor a los sustratos de oligonucletidos.
En la PCR a tiempo real, los procesos de amplificacin y deteccin se producen de
manera simultnea en el mismo vial cerrado, sin necesidad de ninguna accin posterior.
Adems, mediante deteccin por fluorescencia sepuede medir durante la amplificacin
la cantidad de adnsintetizado en cada momento, ya que la emisin de fluorescencia
producida en la reaccin es proporcional a lacantidad de ADN formado. Esto permite
conocer y registrar en todo momento la cintica de la reaccin de amplificacin4.
Los termocicladores para llevar a cabo la PCR a tiempo Real incorporan un lector de
fluorescencia y estn diseados para poder medir, en cualquier momento, la
fluorescencia emitida en cada uno de los viales donde se realice la Amplificacin. Los
sistemas de deteccin por fluorescenciaempleados en la PCR a tiempo real pueden ser
de dos tipos: agentes intercalantes y sondas especficas marcadascon fluorocromos,
diseadas, como veremos ms adelante,De manera especial.
QU ES Q-PCR (CUANTIFICACIN DE LA CADENA POLIMERASA)?
La clave en la PCR cuantitativa es la posibilidad de detectar en tiempo real la
amplificacin de nuestro genoma de inters. Para llevar a cabo esta deteccin existen
varios mtodos pero casi todos basados en la utilizacin de otro fragmento de ADN
(sonda) complementario a una parte intermedia del ADN que queremos amplificar. Esta
sonda lleva adherida una molcula fluorescente y otra molcula que inhibe esta
fluorescencia ("quencher"), de tal forma que slo cuando la sonda es desplazada de su
sitio por accin de la ADN polimerasa la molcula fluorescente se libera de la accin
del "quencher" y emite fluorescencia al ser iluminada con un lser.
La cuantificacin de la fluorescencia emitida durante cada ciclo de la PCR ser
proporcional a la cantidad de ADN que se est amplificando. En general para que sea

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vlida esta tcnica requiere realizar en paralelo una curva patrn en las mismas
condiciones para conocer la cantidad total de ADN que se est amplificando.
QU ES RT-PCR (RETROTRANSCRITASA INVERSA-PCR)?
Reaccin en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR del
ingls Reverse transcription polymerase chain reaction) es una variante de PCR,
una tcnica de laboratorio comnmente usada en biologa molecular para generar una
gran cantidad de copias de ADN, proceso llamado "amplificacin". En la RT-PCR, sin
embargo, una hebra de ARN es retrotranscripta en ADN complementario (ADNc)
usando una enzima llamada transcriptasa inversa, y el resultado, se amplifica en
una PCR tradicional. PCR en Transcripcin Reversa no debe ser confundido con la PCR
en tiempo real, PCR cuantitativa o Q-PCR, la cual a veces de manera errnea se abrevia
como RT-PCR.
La amplificacin exponencial mediante PCR en Transcripcin Reversa supone una
tcnica altamente sensible, que puede detectar un nmero de copias de ARN muy bajo.
Los principales usos de la RT-PCR estn relacionados con el campo del Diagnstico
Molecular y con la investigacin cientfica. Puede utilizarse como mtodo de deteccin
molecular de genes, para estudiar el genoma de virus de ARN como los retrovirus (tales
como el VIH) o el virus de la gripe (virus de la influenza).
Otro de sus usos se relaciona con la cuantificacin de la expresin gnica, mediante la
combinacin de esta tcnica con el anlisis de Northern blot. Una de las caractersticas
ms importantes es que en el proceso de RT-PCR, el ADNc generado ya no lleva los
intrones que s tendra el ADN original. De este modo, al expresar el ADNc producto de
la RT-PCR, se generar un ARNm formado exclusivamente por exones. Esto ha
permitido darle a esta tcnica uno de sus usos ms importantes: insertar genes eucariotas
en organismos procariotas.
QU ES RETROVIRUS?
Algunos virus relacionados con el cncer o el virus causante del SIDA son retrovirus.
La caracterstica principal que particulariza a los retrovirus es que su genoma (es decir,
su material gentico) est constituido por ARN en lugar de ADN, al contrario que en el
resto de virus.
Para infectar a una clula, los retrovirus deben traducir su ARN en ADN e insertarlo
dentro del ADN propio de la clula a infectar. Para conseguirlo usan una enzima
especfica, la transcriptasa inversa.
Normalmente, en las clulas, la informacin gentica va del ADN de los cromosomas a
las protenas, va ARN mensajero. En los retrovirus se produce la transcripcin
retrgrada, del ARN al ADN, por accin de la transcriptasa inversa. De ah el origen de
su nombre.
Entre los retrovirus se conocen tres gneros: oncovirus, lentivirus y espumavirus.
Algunos oncovirus son reponsables directos de algunos procesos tumorales y leucemias.
Los retrovirus pueden ser modificados genticamente y usados en terapia gnica como
vectores.

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QU ES ADENOVIRUS?
Es un grupo de virus, que pueden producir diferentes enfermedades en los seres
humanos.
Este es un virus que afecta los tejidos glandulares y respiratorios, as como el aparato
gastrointestinal. El adenovirus vara segn el tipo, todos son transmitidos mediante el
contacto directo, la transmisin fecal-oral, y ocasionalmente mediante transmisin por
agua. Algunos tipos son capaces de establecer infecciones persistentes y asintomticas
en las amgdalas e intestinos de personas infectadas.
El adenovirus provoca un cuadro que puede durar entre dos y catorce das en promedio
y dependiendo de la gravedad del cuadro puede prolongarse ms an.
Todas las personas son susceptibles de presentar una enfermedad por adenovirus. Su
transmisin se efecta por contacto directo a travs de:

Las de gotitas respiratorias emitidas desde el ser humano al hablar o toser, o por
medio del contacto con las secreciones respiratorias de los enfermos infectados
con adenovirus.
Este virus posee la capacidad de sobrevivir por varias horas sobre las manos,
objetos (juguetes, perillas de puertas, superficie de la ropa) contaminados con
secreciones con virus.

Este virus infecta principalmente clulas epiteliales de mucosas del tracto respiratorio,
intestinal, conjuntiva o crnea. Las infecciones ms conocidas son:

INFECCIONES RESPIRATORIAS: Son las ms frecuentes. Puede afectar el

tracto respiratorio superior o inferior causando por ejemplo cuadros de
bronquitis y neumona.
INFECCIONES DIGESTIVAS: Existen algunos tipos de adenovirus que se
caracterizan por causar diarrea y fiebre.
INFECCIONES OCULARES: Puede producir conjuntivitis, la cual puede
tornarse en una situacin grave que se acompaa de mucho dolor ocular y de
ojos intensamente rojos.
INFECCIONES URINARIAS: Infecciones e inflamacin de la vejiga
pudiendo llegar a producir la eliminacin de orina con sangre.
INFECCIONES EN PACIENTES INMUNODEPRIMIDOS: El adenovirus
puede causar graves problemas personas con inmunidad deprimida como los
transplantados, generando que las infecciones antes descritas se presenten
conjuntamente y con mayor gravedad.

Es muy importante estar atento a otros signos y sntomas que indican mayor gravedad
de la infeccin como por ejemplo: obstruccin respiratoria, dificultad para respirar,
compromiso del estado general progresivo, fiebre prolongada que no cede a las
indicaciones farmacolgicas de su mdico tratante. Esto puede indicar una infeccin
grave que requiera probablemente de otro tipo de tratamiento e intervenciones mdicas
VIRUS ADN

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Un virus ADN es un virus cuyo material gentico est compuesto por ADN, no
usando ARN como intermediario durante la replicacin. Los virus que usan el ARN
bien como material gentico o como intermediario durante la replicacin son virus
ARN.2El ADN puede ser tanto de cadena simple (monocatenario) como de doble
cadena (bicatenario), siendo estos ltimos ms diversos y frecuentes. La replicacin
dentro de las clulas depende una ADN polimerasa dependiente del ADN (que lee el
ADN). Es comn que los ADN de cadena simple se expandan a ADN de cadena doble
en las clulas infectadas.
CLASIFICACIN.
En el sistema de Clasificacin de Baltimore se reparten entre los grupos I y II.3

Grupo I: Virus ADN bicatenario

Virus ADN bicatenario(o virus dsDNA): es un virus en el que su material gentico est
compuesto por ADN de doble cadena y se replica usando una ADN polimerasa
dependiente del ADN, no usando el ARN como intermediario durante la replicacin.
Son los virus ADN ms diversos y frecuentes (ej., adenovirus, herpesvirus, poxvirus)

Grupo II: Virus ADN monocatenario

Virus ADN monocatenario (o virus ssDNA): es un virus en el que el material gentico

est compuesto por ADN de cadena sencilla y se replica usando una ADN polimerasa
dependiente del ADN, no usando ARN como intermediario durante la replicacin (ej.,
parvovirus)
VIRUS ARN.
Un virus ARN es un virus que usa cido ribonucleico (ARN) como material gentico, o
bien que en su proceso de replicacinnecesita el ARN. Por ejemplo, el virus de
la Hepatitis B es un virus clasificado como virus ADN (hepadnavirus), con la
peculiaridad de tener su genoma ADN de doble cadena y el genoma es transcrito en
ARN durante la replicacin.2 Su cido nucleico es usualmente ARN monocatenario pero
tambin puede ser ARN bicatenario. Los virus ARN monocatenarios pueden
clasificarse, a su vez, segn el sentido o polaridad de su ARN en negativos o positivos.
Los virus ARN positivos son idnticos alARNm viral y por lo tanto pueden ser
inmediatamente traducidos por la clula husped. El ARN viral negativo es
complementario del ARNm y por lo tanto debe convertirse en ARN positivo por
una ARN polimerasa antes de la traduccin.3
Los retrovirus, al contrario que otros virus ARN monocatenarios, usan ADN intermedio
para replicarse. La transcriptasa inversa, una enzima viral procedente del propio virus,
convierte el ARN viral en una cadena complementaria de ADN, que se copia para
producir una molcula de ADN bicatenario viral. Este ADN dirige la formacin de
nuevos viriones.
Los virus ARN presentan generalmente tasas de mutacin muy altas pues carecen
de ADN polimerasas que puedan detectar y corregir los errores (reparacin del ADN).
Los virus ADN presentan tasas de mutacin mucho ms bajas debido a la habilidad de
correccin de las ADN polimerasas de la clula husped. Los retrovirus integran un

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ADN intermediario de su genoma ARN en el genoma del husped, y por lo tanto tienen
una oportunidad mayor de corregir errores en su genoma gracias a la accin de
correccin de las ADN polimerasas de la clula husped.
Aunque usualmente el ARN muta rpidamente, un reciente trabajo de investigacin
determin que el virus del SARS y otros virus relacionados contienen un gen que muta
muy lentamente.4 El gen en cuestin tiene una estructura tridimensional compleja que se
supone proporciona una funcin qumica necesaria para la propagacin del virus, quizs
como una ribozima. Si esto fuese as, la mayora de las mutaciones la haran intil para
este fin y no se propagaran.
CLASIFICACIN
Los virus ARN pertenecen a los grupos III-VII de la Clasificacin de Baltimore.1

Grupo III: Virus ARN bicatenario

Grupo IV: Virus ARN monocatenario positivo

Grupo V: Virus ARN monocatenario negativo

Grupo VI: Virus ARN monocatenario retrotranscrito

Grupo VII: Virus ADN bicatenario retrotranscrito