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Villarrica

Biotecnologa y Gentica
La biotecnologa
La biotecnologa se define como el empleo de organismos y microorganismos, o parte de
ellos con el fin de obtener un beneficio para las personas, permitiendo la creacin y
diseo de una gran gama nuevos productos mediante el uso de tcnicas, conocimientos y
variados procesos. La biotecnologa se desarrolla desde un enfoque multidisciplinario
involucrando varias disciplinas y ciencias como biologa, bioqumica, gentica, virologa,
agronoma, ecologa, ingeniera, fsica, qumica, medicina y veterinaria entre otras.
Estos procesos han estado presentes desde tiempos milenarios. El trmino fue
biotecnologa fue asignado por el ingeniero agrnomo hngaro Karl Ereky. Se divide
fundamentalmente en dos: tradicional y moderna.
La biotecnologa tradicional es la que contiene todas aquellas tcnicas que se empleaban
sin tener el conocimiento cientfico, por ejemplo, la elaboracin de yogurt, quesos, vinos y
cervezas. En cambio, la biotecnologa moderna, surge durante el transcurso del siglo XX
gracias a los conocimientos en biologa molecular, como el descubrimiento del ADN y su
estructura. El ms trascendental hallazgo fue la universalidad del cdigo gentico y que
con la informacin gentica, se poda interpretar y expresar ciertos genes en otras clulas,
dando paso a la ingeniera gentica.
La biotecnologa tiene distintos propsitos, y se clasifica en:
Biotecnologa roja: se aplica a la utilizacin de biotecnologa en procesos mdicos.
Algunos ejemplos son la obtencin de organismos para producir antibiticos, el desarrollo
de vacunas ms seguras y nuevos frmacos tales como insulina, hormonas de
crecimiento, enzimas y produccin de protenas especiales., los diagnsticos moleculares,
las terapias regenerativas y el desarrollo de la ingeniera gentica para curar
enfermedades a travs de la manipulacin gnica. Tambin se incluyen: las tcnicas de
determinacion de las relaciones familiares en litigios de paternida; para confrontar
donantes de rganos con receptores en programas de trasplante, unir sospechosos con la
evidencia de ADN en la escena del crimen (biotecnologa forense), o servir como
indicativo de pedigr para mejoramiento en semillas y ganado.
Biotecnologa blanca: o biotecnologa industrial, es aquella aplicada a procesos
industriales. Un ejemplo es la obtencin de microorganismos para generar un producto
qumico o el uso de enzimas como catalizadores o Inhibidores enzimticos industriales, ya
sea para producir productos qumicos valiosos o destruir contaminantes qumicos
peligrosos. Tambin se aplica a los usos de la biotecnologa en la industria textil, en la
creacin de nuevos materiales, como plsticos biodegradables y en la produccin de
biocombustibles. Su principal objetivo es la creacin de productos fcilmente degradables,
que consuman menos energa y generen menos desechos durante su produccin. La
manipulacin gentica de vas metablicas de los microorganismos hace posible convertir
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eficientemente forrajes pobres en productos de gran valor como aminocidos, protenas y
qumicos especiales.
Biotecnologa verde: es la biotecnologa aplicada a procesos agrcolas. Un ejemplo de
ello es la obtencin de plantas transgnicas capaces de crecer en condiciones
ambientales desfavorables o plantas resistentes a plagas y enfermedades. Se espera que
la biotecnologa verde produzca soluciones ms amigables con el medio ambiente que los
mtodos tradicionales de la agricultura industrial. Un ejemplo de esto es la ingeniera
gentica en plantas para expresar plaguicidas, con lo que se elimina la necesidad de la
aplicacin externa de los mismos, como es el caso del maz Bt.10 La biotecnologa se ha
convertido en una herramienta en diversas estrategias ecolgicas para mantener o
aumentar sustancialmente recursos naturales como los bosques.
Biotecnologa azul: tambin llamada biotecnologa marina, es un trmino utilizado para
describir las aplicaciones de la biotecnologa en ambientes marinos y acuticos. An en
una fase temprana de desarrollo, sus aplicaciones son prometedoras para la acuicultura,
cuidados sanitarios, cosmtica y productos alimentarios.
Ingeniera Gentica:
La ingeniera gentica -como rama que contribuye con la biotecnologa- es aquella que
disea y coopera con la modificacin en las clulas del ADN usando distintas
herramientas moleculares. Una de las herramientas empleadas son las enzimas de
restriccion, que cortan el ADN en sitios especificos; las ligasas enzimas que unen
fragmentos de ADN y los vectores, agentes como plasmidos y virus que transfieren un
segmento de su cadena de nucleotidos de un organismo a otro.
Existen distinta tcnicas para lograr la modificacin de la estructura del ADN: la
secuenciacin del ADN, la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), plasmotosis,
clonacin molecular, mutacin excepcional, transgnesis, bloqueo gnico y la tecnologa
del ADN recombinante.
Esta ultima modifica o crea molculas de ADN que son sintetizadas artificialmente
mediante la unin de distintos trozos de material gentico provenientes de distintas
especies e introducidas y mezclarlas con las de un nuevo organismo, haciendo que este
cambie su fenotipo, es decir, exprese una nueva caracterstica.
La terapia gnica consiste en la aportacin de un gen funcionante a las clulas que
carecen de esta funcin, con el fin de corregir una alteracin gentica o enfermedad
adquirida. La terapia gnica se divide en dos categoras.
Terapia Gnica germinal : es la alteracin de clulas germinales (espermatozoides
u vulos) en su dotacin cromosmica, lo que origina un cambio permanente de
todo el organismo y generaciones posteriores. Esta terapia no se utiliza en seres
humanos por cuestiones ticas. Permite generar individuos ms fuertes y
resistentes a factores climticos adversos, pesticidas y herbicidas -en el caso de
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los vegetales. Un ejemplo de este tratamiento sera las plantaciones de
leguminosas que son resistentes a los herbicidas, las semillas tendrn las mismas
caractersticas que sus progenitores, las platas transgnicas como las lechugas o
tomates.
Terapia somtica celular: se aplica a las clulas somticas, por lo tanto las
caractersticas no son traspasadas de un individuo a otro. Consiste en que uno o
ms tejidos son sometidos a la adicin de uno o ms genes teraputicos, mediante
tratamiento directo o previa extirpacin del tejido. Esta tcnica se ha utilizado para
el tratamiento de cnceres o enfermedades sanguneas por ejemplo, la anemia
falciforme, hepticas o pulmonares.
1) Terapia gnica in vivo (Figura 1): agrupa la tcnicas en las que el material gentico se
introduce directamente en las clulas del organismo, sin que se produzca su extraccin ni
manipulacin in vitro. La gran ventaja de las tcnicas in vivo sobre la terapia gnica in
vitro es su mayor sencillez.

Figura 1. Modelo de transferencia gnica in vivo mediado por liposomas catinicos: introduccin del gen
que codifica el regulador transmembrana de la fibrosis qustica (CFTR).

2) Terapia gnica ex vivo (Figura 2): comprende todos aquellos protocolos en los que las
clulas a tratar son extradas del paciente, aisladas, crecidas en cultivo y sometidas al
proceso de transferencia in vitro. Sus principales ventajas son el permitir la eleccin del
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tipo de clula a tratar.

Figura 2. Modelo de transferencia gnica ex vivo: introduccin del gen que codifica el receptor de LDL
en el tratamiento de la hipercolesterolemia familiar mono-gnica.

Mtodos para introducir el material gentico
Para que sea posible la modificacin del fenotipo es necesario cambiar ciertos cdigos
genticos para que se pueda expresar las caractersticas. Existen variadas tcnicas
dependiendo si los cromosomas se integran o no, y el medio por el cual se logra su
insercin.
Genes integrados en Cromosomas: La ventaja de que el gen se integre en el cromosoma
es que puede perpetuarse por replicacin cromosmica tras la divisin celular. Como las
clulas de la progenie tambin contienen los genes introducidos, se puede obtener una
expresin estable a largo plazo. No obstante, la integracin cromosmica tiene sus
inconvenientes debido a que la insercin suele ocurrir casi al azar: la localizacin de los
genes insertados puede variar enormemente entre clulas y en algunos casos los
fenotipos no son expresados.
Genes no integrados: Algunos sistemas de transferencia gnica estn diseados para
insertar genes en clulas donde pueden quedar como elementos extra-cromosmicos y
tener una expresin elevada. Si las clulas estn dividindose activamente, el gen
introducido puede no segregar igualmente a las clulas hijas, por lo que la expresin a
largo plazo puede ser un problema. El resultado es que la posibilidad de curar un
trastorno gentico puede ser remota: harn falta tratamientos repetidos de terapia gnica.
Sin embrago, en algunos casos puede ser que no haga falta una expresin estable a largo
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plazo. Por ejemplo, las terapias gnicas contra el cncer suelen implicar la transferencia y
expresin de genes a clulas cancerosas con la intencin de eliminarlas. Una vez
eliminado el tumor, el gen teraputico puede no ser necesario nunca ms.
1.1 Mtodos de trasferencia fsico-qumicos de transferencia gnica
Microinyeccin: es un proceso que consiste en utilizar microagujas para insertar
sustancias a un nivel microscpico o en el lmite de lo macroscpico dentro de una clula
viva. Es un simple proceso mecnico en el cual una aguja extremadamente fina penetra la
membrana celular y a veces la membrana nuclear para lanzar su contenido, en este caso,
trozos de ADN sintetizado.
Precipitacin con fosfato clcico: Se basa en la precipitacin del DNA exgeno y los iones
de calcio, provocando que la clula, mediante endocitosis, introduzca el DNA en su
interior. Es una terapia de carcter transitorio.
Electroporacin: Se introduce la construccin gnica mediante un choque elctrico a las
clulas que provoca la formacin de poros en sus membranas , por donde entra el
transgn. Est especialmente indicado para clulas con una alta tasa de proliferacin. Sin
embargo, muchas clulas mueren al no soportar el choque elctrico

Inyeccin directa de ADN desnudo: Consiste en la introduccin del DNA en una solucin
salina o srica, normalmente mediante inyeccin intramuscular, para conseguir la
expresin del transgn. Se ha observado actualmente expresin en timo, piel, msculo
cardaco y msculo esqueltico. No se conoce el mecanismo por el que llega a entrar a la
clula aunque se postula que es a travs del complejo del poro nuclear.
Conjugados ADN-protenas: Son segmentos de ADN que tiene adosados otras protena,
que se introducen en la clula logrado una modificacin.
Liposomas: los lisosomas son bolsas rodeadas de una membrana lipdica a semejanza
de una clula eucariota animal, son capaces de hacer entrar DNA en la clula, se
encuentran cargados positivamente por lo que interaccionan con la carga negativa del
DNA. Son recomendables en transfecciones "in vitro".
Biolstica o Gene-gun: Consiste en el bombardeo de los tejidos con partculas de oro o
tungsteno que llevan adheridas a ellas el DNA. El bombardeo se realiza mediante una
descarga con helio como si fuera una pistola (de all el nombre de la tcnica). La
capacidad de penetracin es limitada usndose en lneas celulares, epidermis, msculo e
hgado. Su expresin es transitoria. Esta tcnica puede realizarse "ex vivo" (en el caso de
clulas animales) e "in vivo" (en el caso de clulas vegetales).
1.2 Metodos con Vectores virales:
Retrovirus: Son virus ARN que tienen capacidad para integrar genes teraputicos
relativamente grandes (un mximo de 8 Kb). Necesitan de clulas empaquetadoras para
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su obtencin. Se transfiere el DNA del virus mediante la tcnica del fosfato de calcio a las
clulas empaquetadoras. Los virus inyectados en el husped integran su DNA en el
genoma del husped expresando as el gen que le hemos aadido. Sin embargo,
nicamente sirven para infectar clulas del husped que se encuentran en divisin.
Adems los ttulos de virus obtenidos hasta ahora son bajos y la integracin en el genoma
es al azar.
Adenovirus: Son una familia de virus ADN que causan infecciones en el tracto respiratorio
humano. En este caso no se necesita la integracin del material hereditario del virus, ni
tampoco el transgn ser introducido en el genoma de la clula, ni tampoco se necesitan
clulas infectadas estn dividindose para su replicacin. Poseen una alta eficacia de
transduccin
Virus adenoasociados (VAA): Son parvovirus, contienen DNA como material gentico, y
requieren la coinfeccin con un adenovirus para multiplicarse. Son vectores que combinan
las ventajas de los retrovirales y los adenovirales.
Herpesvirus: Son virus DNA cuyas clulas diana son las neuronas. Su complejidad y lo
poco que todava conocemos de esta familia de virus dificulta su utilizacin. La gran
ventaja es el gran tamao de su DNA , que les permite aceptar varios genes teraputicos,
incluso podran ir con sus propias regiones reguladoras.
1.3Marcaje celular
Consiste en introducir, junto con el gen teraputico, uno o ms genes que permitirn
identificar y seleccionar aquellas clulas diana que hayan incorporado el transgn. As,
por ejemplo, el marcaje con un gen que confiere resistencia a neomicina permite la
deteccin selectiva de las clulas cuando se hacen crecer en un medio que contiene
dicho antibitico
Proyecto Genoma Humano:
El proyecto genoma es un programa internacional de colaboracin cientfica, cuyo objetivo
es obtener un conocimiento bsico de la dotacin gentica humana completar e identificar
todos los genes del ncleo de la clula humana.
Fue fundado en 1990 en el Departamento de Energa y los Institutos Nacionales de la
Salud de los Estados Unidos, bajo la direccin del doctor Francis Collins, conformado por
cientficos de diferentes pases, con un plazo de realizacin de 15 aos. Debido a la
amplia colaboracin internacional, a los avances en el campo de la genmica y en la
tecnologa computacional, un borrador inicial del genoma fue terminado en el ao 2000
La finalidad de este proyecto es establecer el lugar que ocupan en los cromosomas del
ncleo y determinar mediante secuenciacin, la informacin gentica codificada por el
orden de las subunidades qumicas de ADN. Es un esfuerzo cientfico que pretende
localizar y secuenciar todos los genes que constituyen el genoma de los humanos y
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algunos otros organismos. Con esto, se adquirir un conocimiento completo de la
organizacin, estructura y funcin de los genes en los cromosomas humanos.

Aplicaciones el PGH
a)mbito de la evolucin biolgica: El conocimiento de la secuencia de las bases del
genoma humano potenciar la ciencia que estudia la diversidad gentica de los seres
humanos y las relaciones que se pueden establecer entre el genoma humano y las otras
especies. Esta nueva rama de investigacin, Antropologa molecular, se preocupa de
polimorfismos (variabilidad gentica) entre individuos y entre poblaciones, el anlisis del
ADN de restos humanos antiguos, las similitudes genticas dentro del orden de los
primates, etc. Gracias a esto, es posible armar un rbol genealgico acerca de la
evolucin del ser humano y llegar a la conclusin de un origen comn.
b) mbito mdico : Las enfermedades genticas se deben a la alteracin en la
estructura de los genes o en la regulacin de su expresin funcional. En la actualidad se
estima que de los 70 mil genes que constituyen el genoma humano, unos 2 mil a 5 mil
tienen probablemente alguna relacin con la produccin de enfermedades.
Todas las enfermedades pueden ser consideradas como el resultado de la interaccin
entre la constitucin gentica de un individuo y el medio ambiente. Slo un pequeo grupo
de enfermedades pueden ser atribuidas exclusivamente a uno de estos factores. En
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general, los genes confieren cierta predisposicin ( o en algunos casos proteccin) a
manifestar una enfermedad en presencia de determinadas condiciones ambientales. A su
vez, las enfermedades genticas se deben a alteraciones en un gen (enfermedades
monognicas) , en varios genes (enfermedades polignicas) o en muchos genes
(enfermedades cromosmicas). A la luz de la influencia que tienen los genes en la
produccin de enfermedades, la informacin que surja del Proyecto en cuestin tendr
gran relevancia para la medicina, especialmente en el diagnstico, el tratamiento y la
prevencin de enfermedades.
*Diagnstico de enfermedades: Uno de los usos ms comunes de la tecnologa gentica
es la confirmacin de un diagnstico en una persona que ya ha presentado sntomas de
una determinada enfermedad gentica. La importancia de estos tests genticos es que
permiten hacer un diagnstico preciso, y a de alguna manera predecir la evolucin de la
enfermedad y disear el tratamiento disponible ms adecuado. En la actualidad el
diagnstico de una afeccin gentica puede realizarse no slo en las personas ya
nacidas, sino que tambin antes del nacimiento.
*Terapia gnica: En la actualidad existe una enorme brecha entre la capacidad
diagnstica de enfermedades debidas a razones genticas y las posibilidades
teraputicas, por lo que el conocimiento del Genoma Humano en este campo genera
muchas esperanzas, como consecuencia del conocimiento biolgico alcanzado, ya se
estn ensayando terapias gnicas, con el propsito de intentar curar definitivamente
algunas afecciones genticas. La terapia gnica consiste en la insercin de genes
normales, para suplir o reemplazar genes mutados con el fin de un tratamiento definitivo
del defecto gentico.
FISH:
La tcnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, llamadas
sondas, que son complementarias de las secuencias de DNA que se quieren marcar y
examinar. Es muy utilizada en la deteccin de anomalas cromosmicas. alta sensibilidad
y especificidad
Cul es el objetivo de esta tcnica?
Tecnologa de citogentica molecular que permite el estudio y visualizacin de los 23
pares de cromosomas en forma simultnea. Sondas marcadas fluorescentemente son
hechas para cada cromosoma al marcar DNA especfico de cada cromosoma con
diferentes fluorforos. Debido a que hay un limitado nmero de fluorforosespectralmente
distintos, un mtodo de etiquetado combinatorio es usado para generar muchos
coloresdiferentes. La diferencias espectrales generadas por eletiquetado combinatorio son
capturadas y analizadas usando un interfermetro agregado a un microscopio de
fluorescencia. El programa de procesamiento de imgenes entonces asigna un
pseudocolor a cadacombinacin espectralmente diferente, permitiendo la visualizacin de
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cromosomas coloreados .Se usa cuando el bandeo con Giemsa u otras tcnicas noson lo
suficientemente precisas. no son suficientemente seguras
Que son las sondas y que permiten?
Una sonda de hibridacin en Biologa Molecular es un fragmento de ADN o ARN de
longitud variable, que se utiliza en el ADN o ARN de muestras para detectar la presencia
de nucletidos secuencias (la meta de ADN) que son complementarios a la secuencia de
la sonda. En el caso de la tecnoca FISH las sondas que se utilizan dependen de lo que se
est buscando.
TIPOS DE SONDAS DE FISH SECUENCIAS EN EL GENOMA : I-SONDAS DE
SECUENCIA UNICA:para la deteccion deregiones especificas Pj regiones subtelomericas
microdelecciones II-SONDAS CENTROMERICAS:son sondas alfa satelite quepermiten la
deteccion de secuencias altamente repetitivas de lasregiones pericentromericas III-
SONDAS PARA REGIONES ESPECIFICAS:detectasecuencias altamente repetitivas
localizadas en determinadasregiones de los cromosomas P j. Yq12 IV SONDAS PARA
EL PINTADO DE CROMOSOMASCOMPLETOS (WCP):detectan secuencias de
eucromatina endeterminados brazos o cromosomas completos
Cual es la importancia de las tecnicas de fluorecencia
Detecta anomalas: Aneuploida, la prdida de una regin cromosmica, un cromosoma
entero o para monitorizar la progresin de una aberracin. En el diagnstico de una
enfermedad gentica. FISH se puede aplicar a la investigacin como: el mapeo de genes,
identificacin de nuevos oncogenes que contribuyen a diversos tipos de cncer
Proporciona una resolucin considerablemente superior a la de las tcnicas de bandas de
alta resolucin; ya que puede detectar deleciones de tamao tan pequeo como 1 milln
de pares de bases. Pueden detectar aneuploidias empleando cromosomas en interfase,
no es necesario estimular a las clulas para que se dividan con el fin de obtener
cromosomas en metafase.