BIOQUMICA-1 de Medicina

Dpto. Biologa Molecular

Jos C Rodrguez Rey
TEMA 20. Cadena de transporte electrnico y fosforilacin oxidativa..
Transportadores universales de electrones. Estructura y biognesis de la
cadena respiratoria. Flujo de electrones en la cadena respiratoria. Modelo
quimiosmtico de conservacin de la energa: flujo de protones a travs
de los complejos de la cadena respiratoria de la membrana interna
mitocondrial. Acoplamiento de la fuerza protn-motriz a la fosforilacin
del ADP y a otras funciones mitocondriales: energa del transporte
intramitocondrial; energa termognica. Transporte de nucletidos a
travs de las membranas mitocondriales. Translocasas de fosfato.
Lanzaderas de equivalentes de reduccin. Regulacin de la respiracin
mitocondrial y fosforilacin oxidativa. Los citocromos como sistemas de
detoxificacin. El Citocromo P450.
TEMA 20
2
Origen del ATP
Fosforilacin de nivel de sustrato
Fosforilacin oxidativa
TEMA 20
3
La fosforilacin a nivel de sustrato es un mecanismo poco habitual de formacin
de ATP
FOSFOGLICERATO QUINASA
1,3 Bis-fosfoglicerato ADP 3- Fosfoglicerato
ATP
SUCCINIL CoA DH (Ciclo de Krebs)
TEMA 20
4
CONCEPTOS BASICOS
1. Las reacciones productoras de energa son procesos de xido-reduccin
2. Un compuesto se oxida cuando pierde electrones
3. El aceptor final de los electrones liberados durante los procesos de
oxidacin biolgicos es el oxgeno
4. La transferencia de electrones desde los compuestos oxidados al
oxgeno produce energa
5. Esta energa se utiliza para la sntesis de ATP
TEMA 20
5
La energa producida por el transporte electrnico se puede convertir en
enlaces fosfato de alta energa en forma de ATP.
AH
2 A
CoE1 oxidado
CoE1 reducido
AD
P
CoE2 oxidado CoE2 reducido
O
2
H
2
O
ATP
E
TEMA 20
6
OBJETIVOS
1. Calcular la energa que se produce en los procesos de oxido-reduccin.
2. Estudiar los componentes del proceso y su localizacin
3. Revisar el mecanismo de transferencia de los electrones al oxgeno
(cadena de transporte electrnico)
4. Entender cmo se puede utilizar la energa del transporte electrnico en
sntesis de ATP
5. Revisar los problemas que plantea la compartimentalizacin y cmo se
resuelven
6. Estudiar la regulacin del sistema
7. Ver otros ejemplos de enzimas que utilizan citocromos y su papel en el
metabolismo
3
TEMA 20
7
G = G + RT ln
[C]
c
[D]
d
[A]
a
[B]
b
G = nF E
G = RT ln Keq
G = nF E
R(constante de los gases)= 8,315 julios/mol. K
F(constante de Faraday)= 96.480 julios/voltio.mol
E= E +
RT
nF
ln
[Aceptor de electrones]
[Dador de electrones]
(Ec de Nernst)
TEMA 20
8
Flujo de electrones en las oxidorreducciones biolgicas
Metabolitos
NAD/ NADP
FMN/FAD
Transportadores de
electrones de la cadena
respiratoria
Oxgeno
TEMA 20
9
NAD y FAD son los receptores de los electrones en las
reacciones de las rutas metablicas
L- Malato
Oxalacetato
Succinato Fumarato
Succinato DH
Malato DH
De Nelson et al. Principles of
Biochemistry. 4th Ed. Freeman
TEMA 20
10
Fosforilado en el NADP
+
Coenzimas de oxidorreducin 1: NAD(P)
+
De Nelson et al. Principles of
Biochemistry. 4th Ed. Freeman
Longitud de onda (nm)
Absorbancia
TEMA 20
11
C
HC
C
CH HC
N
R
CONH
2
H
+
+ H
+
+ H
-
C
HC
C
CH HC
N
R
CONH
2
H H
+ H
+
Transferencia de electrones al NAD(P)
+
TEMA 20
12
Enzimas ligadas a NAD
+
Alfa- cetoglutarato DH
Malato DH
Piruvato DH
Gliceraldehido- 3 -fosfato DH
Lactato DH
Beta- hidroxiacil- CoA DH
Ligadas a NADP
+
Glucosa- 6- fosfato DH
Ligadas a NAD
+
o NADP
+
Glutamato DH
Algunos enzimas que utilizan NAD(P)
+
como
cofactores
TEMA 20
13
(semiquinona) Completamente reducido
Nucletidos de flavina
De Nelson et al. Principles of
Biochemistry. 4th Ed. Freeman
TEMA 20
14
Ligadas a FAD
Acil CoA DH
Dihidrolipoil DH
Succinato DH
Glicerol3 P DH
Ligadas a FMN
NADH DH
Algunos enzimas (Flavoprotenas) que utilizan
nucletidos de Flavina como coenzimas
TEMA 20
15
Membrana externa: 60% protenas (alto contenido en PORINA)
Membrana interna (80% de protenas)
ATP sintasa
Translocasa de ADP-ATP
Cadena de transporte electrnico (complejos I-IV)
MATRIZ
Enzimas del ciclo de los cidos tricarboxlicos
(excepto Succinato DH)
Enzimas de la degradacin de cidos grasos
Piruvato deshidrogenasa
DNA mitocondrial
Complejos de transcripcin y traduccin.
Ribosomas
Iones magnesio, calcio y potasio
Estructura bioqumica de la mitocondria
TEMA 20
16
Tratamiento con Digitonina
Ruptura osmtica
Fragmentos de membrana
Externa (desechados)
ATP
sintasa
Fragmentos
MIM
Solubilizacin /cromatografa de intercambio inico
Reacciones catalizadas por las fracciones
Separacin de los
complejos de la
cadena respiratoria
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TEMA 20
17
I NADH DH (I) 850 42 FMN, Fe-S
II Succinato DH 140 5 FAD, Hemo, Fe-S
CoQ (Ubiquinona)
III Ubiquinona: Citc 250 11 Hemo, Fe- S
Oxidorreductasa (cit b y c1)
Citocromo C 13 1 Hemo
IV Citocromo oxidasa 160 13 Hemos, CuA, CuB
(Cit a a3)
Complejo Masa Subunidades Grupos
COMPONENTES DE LA CADENA DE TRANSPORTE ELECTRONICO
TEMA 20
18
Ubiquinona (Q)
Totalmente oxidada
Radical Semiquinona
Parcialmente oxidado
QH
Ubiquinol
Totalmente reducido
QH2
Coenzima Q
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TEMA 20
19
Protoporfirina IX
Citocromos tipo B
Hemo C
Citocromos C
Hemo A
Citocromos A
Abs
relativa
Longitud de onda
Grupos prostticos de los citocromos
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TEMA 20
20
Protena
De Nelson et al. Principles of
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Estructura de los centros Fe-S
Fe
S inorgnico
S Cys
TEMA 20
21
Centro de cobre binuclear (Complejo IV)
En amarillo Cys
En naranja Met
En azul His
En rojo Asp
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TEMA 20
22
Potenciales de reduccin estndar de los componentes de la cadena
respiratoria
Semirreaccin E (V)
I
III
IV
NADH Q Cit b Cit c1 Cit c Cit a Cit a3 O
2
FADH
2
Q Cit b Cit c1 Cit c Cit a Cit a3 O
2
TEMA 20
23
Rotenona, Amital
CN
-
o CO
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Biochemistry. 4th Ed. Freeman
Antimicina C
Determinacin del orden de los transportadores de la cadena de
transporte electrnico
TEMA 20
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COMPLEJO I
ESPACIO
INTERMEMBRANOSO ( P)
MATRIZ (N)
Brazo de la
matriz
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EL COMPLEJO I ES UNA BOMBA DE PROTONES
TEMA 20
25
Estructura del complejo II (Succinato DH)
De Nelson et al. Principles of
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MATRIZ (N)
Espacio
Interm (P)
Unin al
Substrato
HemoB
TEMA 20
26
Matriz
Espacio
intermembranoso
Succinato
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El coenzima Q es paso obligatorio de los electrones procedentes de varias
vas
Acil Graso CoA
Flavoprotena de
transferencia de
electrones
TEMA 20
27
Matriz (N)
Espacio intermembranoso
(P)
Citocromo C1
Protena hierro-sulfurada Riesken
Citocromo b
COMPLEJO III: Estructura del monmero
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TEMA 20
28
Citocromo c1
Citocromo c
Protena Fe-S
Rieske
Centro
2Fe-2S
Citocromo b
Matriz (N)
Espacio
intermembranoso (p)
Ubiquinona- Citocromo c oxidorreductasa ( Complejo III)
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TEMA 20
29
CICLO Q (Complejo III)
Oxidacin de la
primera QH2
Oxidacin de la
segunda QH2
MATRIZ
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TEMA 20
30
CITOCROMO OXIDASA: MECANISMO
Matriz (N)
(del sustrato) (bombeados)
Espacio intermembranoso (p)
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TEMA 20
31
Matriz
Succinato Fumarato
El transporte de electrones origina un gradiente de protones
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Valores para 2 electrones transferidos
TEMA 20
32
G = nF E
F(constante de Faraday)= 96.480 julios/voltio.mol
E= 0,816 + 0,320 = 1,136 Volts
G = - 2 x 96.480 x 1,136 = 219. 202 julios/mol = 219,2 KJ/mol
Energa producida en la cadena de transporte electrnico
Potencial reduccin
TEMA 20
33
Espacio intermembranoso
Matriz
FUERZA PROTON-MOTRIZ
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TEMA 20
34
El transporte electrnico genera la energa suficiente para
la sntesis de ATP
La Energa generada por la transferencia de electrones entre los CoE de
xidorreduccin se transforma en enlaces fosfato de alta energa mediante
la fosforilacin oxidativa.
El transporte de electrones lo llevan a cabo cuatro complejos situados en la
membrana interna mitocondrial
El transporte de electrones genera un gradiente electroqumico a ambos
lados de la membrana interna.
La Energa almacenada en forma de gradiente (Fuerza protn- motriz) es
suficiente para la sntesis de varias molculas de ATP.
TEMA 20
35
Oxgeno
consumido
Tiempo
ATP
sintetizado
El Transporte electrnico y la sntesis de ATP son procesos
acoplados. 1. Efecto del bloqueo del transporte electrnico
ADP+ Pi
CN-
Succinato
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Freeman
TEMA 20
36
Oxgeno
consumido
Tiempo
ATP
sintetizado
El Transporte electrnico y la sntesis de ATP son procesos
acoplados. 1. Rotura del gradiente y agentes desacoplantes
Bloqueo por
oligomicina
Succinato
ADP+ Pi
DNP
Desacoplados
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TEMA 20
37
Enzima tpico ATP sintasa
ATP en
solucin
La energa del gradiente de protones se utiliza sobre todo para liberar
al ATP del enzima
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TEMA 20
38
De Nelson et al. Principles of
Biochemistry
Dominio F1

Dominio Fo
Ab
2
c
10-12
MATRIZ
La Sintasa de ATP es una ATPasa de tipo F
TEMA 20
39
LAS SUBUNIDADES PUEDEN ADOPTAR TRES TIPOS DE CONFORMACION
La subunidad se une a una subunidad vaca
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TEMA 20
40
El Mecanismo de sntesis de ATP es una catlisis rotacional mediada
por el giro de la subunidad
ATP
Contacto con
giro de
AD
P
*
* En la actualidad se considera 4 H
+
/ ATP

- vaca
1
1
- ADP
2 2
3
- ATP
3
4
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TEMA 20
41
El giro de Fo y ha sido demostrado de
forma experimental
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TEMA 20
42
Matriz Espacio
intermembranoso
Traslocasa de
nucletidos
Sintasa de ATP
Translocasa de
fosfato
La energa del gradiente de protones se utiliza tambin para el transporte
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TEMA 20
43
De Nelson et al. Principles of
Biochemistry
En el hgado, rin y msculo cardaco la Lanzadera del Malato- Aspartato
transporta equivalentes de reduccin al interior de la mitocondria
TEMA 20
44
En tejidos como el cerebro y el msculo esqueltico los equivalentes se transportan por la
lanzadera del Glicerol fosfato
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TEMA 20
45
MATRIZ
Termogenina
Espacio
intermembranoso
CALOR
UCP-1 Grasa marrn
UCP-2 Ubicua
Inducida por T3
UCP-3 Msculo esqueltico
Inducida por T3
UCP-4 Cerebro
UCP-5 Cerebro
Las protenas desacoplantes aprovechan la energa del gradiente para la produccin de
calor
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TEMA 20
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DNA MITOCONDRIAL Y PATOLOGIAS ASOCIADAS
Encefalomiopata de Fibras Rojas Rasgadas
(MERRF) ( NADH DH)
Neuropata Optica Hereditaria de Leber
(LHON) (tRNA
leu
/subunidades F
0
)
MELAS (Myopathy, Encephalomyopathy
Encefalomiopata,Lactic Acidosis lctica,
Stroke-like episodies) (tRNA
lys
)
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TEMA 20
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Fe- Hemo
FAD
FMN
2e-
2e-
NADPH + H
+
NADP
+
RH + O
2
ROH + H
2
O
NADPH-citocromo P450
Oxidorreductasa
Citocromo
P450
Estructura general de las enzimas asociadas al Citocromo P450
CYP2E1
Cy: Citocromo
P: P450
2 y E: familia y subfamilia
1: nmero del enzima
TEMA 20
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Caractersticas generales de los isoenzimas P450
1. Todas contienen citocromo P450 y una subunidad que contiene nucletidos de
flavina y que utiliza NADPH como sustrato
2. Estn localizadas en el retculo endoplsmico liso (fraccin microsmica)
3. Unidas a la porcin lipdica de la membrana
4. Son inducibles por su sustrato y a veces por sustratos de otras isoenzimas P450
5. Todas generan radicales libres como intermedios de la reaccin
TEMA 20
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Xenobitico
Metabolito
primario
Metabolito secundario
adecuado para la
eliminacin
Esquema general de los procesos de eliminacin de Xenobiticos
Reacciones fase I
Reacciones fase II
Reduccin
Oxidacin
Hidroxilacin
Hidrlisis
Conjugacin
Sulfatacin
Metilacin
Glucuronidacin
TEMA 20
50
Algunos sustratos de isoenzimas P450
Xenobitico Enzima Interaccin
Cloruro de vinilo CYP2E1
Aflatoxina B1 CYP2A1
Paracetamol CYP2E1 Etanol
Barbitricos CYP2B2 Etanol (inhibicin)
TEMA 20
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CH3CH
2
OH (etanol)
CH3COH (acetaldehido)
CH3COOH (acetato)
NAD+
NADH + H+
NAD+
NADH + H+
ADH
ALDH
METABOLISMO DEL ETANOL
MEOS
(Principalmente
CYP2E1)
Acetil CoA
EFECTOS TOXICOS
EFECTOS METABOLICOS
TEMA 20
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Glucosa
Pyr
Lactato
Acetil CoA
NAD
+
NADH + H
+
NADH + H
+
NAD+
NAD+
NADH + H
+
C cetnicos
Glicerol 3 P
DHAP
NAD
+
NADH + H
+
EFECTOS METABOLICOS DEL ETANOL
CK