ELISA

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ELISA (acrnimo del ingls Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, Ensayo por
Inmunoabsorcin Ligado a Enzimas) es una tcnica de inmunoensayo en cual
un antgeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de
generar un producto detectable como cambio de color o algn otro tipo; en ocasiones, con el
fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario
que reconoce al antgeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva
enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparicin de colorantes permite medir
indirectamente mediante espectrofotometra el antgeno en la muestra.
Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular est presente en la
muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a
un gran nmero de variables, tales como seleccin de reactivo, temperatura, medicin de
volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente, puede afectar los pasos sucesivos y el
resultado de la prueba.
La interaccin antgeno-anticuerpo en el laboratorio puede ser utilizada para determinar si un
paciente tiene una infeccin o una enfermedad autoinmune. Pero como prueba diagnstica,
posee diversas limitaciones que conviene conocer:
En primer lugar, un resultado positivo que confirma la presencia de anticuerpos no
significa necesariamente que el paciente est enfermo. El cuerpo de una persona que ha
estado enferma y que ya se ha recuperado puede seguir produciendo anticuerpos. Esto
originara un falso positivo.
En segundo lugar, hay personas que producen una baja cantidad de anticuerpos, por lo
que estos pueden pasar desapercibidos y no ser medidos, dando lugar a un falso
negativo. Sera el caso, por ejemplo, de personas que padezcan una inmunodeficiencia, o
que se encuentren en el periodo ventana de la infeccin en el momento de realizar la
prueba, o que estn infectadas por una cepa extraa.
En tercer lugar, pueden aparecer falsos positivos cuando se da inespecificidad entre
antgeno-anticuerpo.
En estos casos de diagnstico de enfermedad, es recomendable la eliminacin (mediante
centrifugacin) de clulas de la sangre que puedan interferir con el ensayo y puedan ocasionar
un resultado falso positivo, careciendo aquel de especificidad. Tambin, debemos tener en
cuenta que cuando se trata de diagnosticar una enfermedad que posee un valor predictivo
positivo bajo en una determinada poblacin es decir, que esa enfermedad tiene muy baja
incidencia en dicha poblacin, es necesario volver a confirmar el resultado positivo mediante
otro mtodo de diagnstico independiente. Normalmente, se lleva a cabo un western
blot donde se detecta la presencia de varios anticuerpos, simultneamente, frente a la misma
infeccin en una muestra. El resultado del western se considera positivo cuando aparecen al
menos 5 bandas, que indica que 5 anticuerpos diferentes estn presentes en el sujeto frente a
esa infeccin. Es entonces cuando se diagnostica como positivo a dicho paciente.
Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es verstil, robusto
y simple en su realizacin, mediante el uso de la fase slida, una separacin fcil entre la
fraccin retenida y la fraccin libre.
Adems se han propuesto y desarrollado diferentes mtodos de amplificacin de la seal
(luminiscentes, cascadas enzimticas...) que han permitido elevar la sensibilidad de algunos
ELISA a la obtenida en el RIA (radioinmunoensayo) hormonal.
Este mtodo ha tenido una enorme aplicacin en todos aquellos campos en los que se
precisaba la cuantificacin de productos mediante anticuerpos: diagnstico clnico, deteccin
viral, clasificacin de anticuerpos en isotipos, bsqueda de anticuerpos monoclonales, etc.
ndice
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1 Dispositivos empleados en ELISA
2 Fases de un ensayo ELISA
3 Tipos de ensayos ELISA
4 Quimioluminiscencia
5 Marcadores enzimticos ms comnmente utilizados
6 Prueba ELISPOT
Dispositivos empleados en ELISA[editar]


Se han ensayado numerosas fases slidas, desde los tubos de cristal de los orgenes hasta
las actuales microplacas de 96 pocillos de plstico tratado, para aumentar su capacidad de
adsorcin (en su superficie) de molculas, y con fondos de pocillo pticamente claros que
permitan realizar las medidas de densidad ptica en instrumentos especficos,
espectrofotmetros de lectura de placas que han recibido el nombre de lectores ELISA.
Actualmente se estn desarrollando dispositivos de mayor capacidad por ejemplo, con 384 y
1536 pocillos, adecuados para los sistemas de screening masivo de los sistemas
robotizados (HTS, High-throughput system).


Los lectores ELISA son espectrofotmetros capaces de realizar lecturas seriadas de cada uno
de los pocillos de la placa ELISA. A diferencia de un espectrofotmetro convencional, con
capacidad de leer todas las longitudes de onda del ultravioleta y el visible de manera continua,
los lectores de ELISA disponen de sistemas de filtros que solo permiten la lectura de una o
pocas longitudes de onda; son la que se corresponden con las necesarias para determinar la
densidad ptica de los cromgenos ms comnmente utilizados.