METODOLOGAS DE ANLISIS DE LABORATORIO EN EL INGENIO MARIA LUISA

Realizado por: Karen L. Martnez Mendoza

I- Anlisis a realizar
1. Para azcar, jarabes y meladuras
1.1. DEXTRANAS
1.1.1. Curva de calibracin
EQUIPOS
9 Erlenmeyer de 50 mL
Pipetas graduadas de 5 y 1 mL
2 Beaker de 250 mL
Espectrofotmetro a 720 nm
Bureta de 50 mL
Baln aforado de 1L
REACTIVOS
Solucin de cido tricloroactico al
10% (p/v)
Etanol absoluto
Dextrana
Agua destilada
Solucin de sacarosa 50% (p/v)
PROCEDIMIENTO
a- Se prepara la solucin patrn de Dextrana pesando 1 g y completando un volumen de 1 L
en un baln aforado

b- Preparar las siguientes soluciones:
Solucin
estndar [mL]
1 2 3 4 5 6 7 8
9
(Blanco)
cido
tricloroactico
(10%)
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solucin de
sacarosa
(50%)
4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
Solucin
patrn de
Dextrana
(1000 ppm)
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 4.0 5.0 0.0
Agua
destilada
5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 2.5 1.5 0.5 15.5
Volumen final
de la solucin
[mL)
10 10 10 10 10 10 10 10 20
Ppm de
dextrana en la
solucin
0 50 100 150 200 300 400 500 0

Recuerde marcar cada Erlenmeyer con el nmero para facilitar su identificacin
c- A cada una de las soluciones anteriores (exceptuando la solucin nmero 9(blanco)) se
agregan lentamente 10 mL de etanol absoluto a travs de una bureta. Justo despus de
agregar la ltima gota a la solucin 1 inicie el cronmetro. Para agregar el alcohol de la
segunda a la octava solucin tenga intervalos de tiempo de 3 minutos, esto quiere decir
que usted debe tardar mximo este tiempo para agregar el alcohol.
d- Utilice la solucin 9 para el blanco del espectrofotmetro.
e- Pasados 20 minutos en el cronmetro (es decir, el tiempo para la solucin 1) tome la
absorbancia en el espectrofotmetro a 720 nm de onda. A los 23 minutos tome la
absorbancia para la solucin 2, a los 26 minutos la de la solucin 3 y as sucesivamente.
f- Para ingresar la nueva curva de calibracin en el espectrofotmetro:
a. en la pantalla presione Programas de usuario
b. Seleccione opciones de programa
c. seleccione nuevo y Aceptar para el nmero dado de programa que aparece.
d. Escriba un nombre para el programa (Ejemplo: Dextrana_agosto_2014), presione
siguiente.
e. Seleccione longitud de onda nica y siguiente.
f. Borre el valor que aparece y escriba 720 para la longitud de onda y siguiente.
g. Seleccione 0,01 en la resolucin de la concentracin y siguiente.
h. Escriba la palabra Dextrana y siguiente.
i. Seleccione introducir valores y siguiente.
j. Presione en el smbolo + y escriba uno de los resultados que obtuvo y seleccione
aceptar. Repita este paso para los 8 patrones a los que les midi la absorbancia.
NOTA: Cada vez que los reactivos del laboratorio se cambien, se debe construir nuevamente la
curva de calibracin.

1.1.2. Anlisis
VLIDO PARA: JUGOS Y AZCAR CRUDO
EQUIPOS
Probeta de 100 mL
Espectrofotmetro
Refractmetro
2 Pipetas volumtricas de 10 mL
Cronmetro
Papel filtro Wathman No.5
Vasos de precipitado de 250 mL y
100 mL
2 Erlenmeyer de 50 mL
1 Bureta de 25 mL
REACTIVOS
Etanol absoluto
Solucin de cido tricloroactico al
10%
Tierra diatomcea (ayuda filtrante)




PROCEDIMIENTO
a- Para jugos tomar 100 mL de jugo previamente filtrado y para azcar, preparar 100 mL de
solucin con 20 Brix en un vaso de 250 mL.
b- Adicionar 20 mL de la solucin de cido tricloroactico al 10% y 10 mL de la solucin de
cloruro de bario al 10%.
c- Adicionar 2 gramos de tierra diatomcea (ayuda filtrante), mezclar bien y filtrar a travs
del papel filtro whatman No. 5. Recoger y desechar los primeros 5-10 mL de filtrado.
d- Del filtrado tomar 2 muestras de 10 mL y agregarlas en los Erlenmeyer.
e- A una de ellas se le agregan 10 mL de agua destilada y se usa como blanco en el
espectrofotmetro
f- A la otra solucin, se me agregan lentamente, gota a gota, 10 mL de etanol absoluto con la
bureta. Se toma el tiempo desde que se agrega la ltima gota de etanol absoluto y se
cuentan 20 minutos.
g- Transcurridos los 20 minutos, se lee la absorbancia de la muestra en el espectrofotmetro
con longitud de onda de 720 nm usando el blanco.
h- A travs del programa 954-Dextranas_2014 se encuentran las ppm dadas por el
espectrofotmetro. Se utiliza la siguiente frmula para calcular las dextranas:






1.2. COLOR Y TURBIEDAD (ICUMSA, 2005)
VLIDO PARA: AZCAR, JARABES Y MELADURAS
OBJETIVO
Determinar el color y la turbiedad en jarabes y meladuras
EQUIPOS
Balanza Mettler J300
2 Beaker de 250 mL
Espectrofotmetro
Refractmetro
Filtro de tamao de poro igual a 0.45
mm, dimetro 25 mm o 47 mm
Cuentagotas fino
PH metro
Equipo de filtro al vaco.
Bao ultrasnico
REACTIVOS
cido clorhdrico (HCl) 0.1 M
Hidrxido de sodio (NaOH) 0.1 M





PROCEDIMIENTO
a- Se pesan las cantidades de azcar o de jarabe y agua que se muestran a continuacin:
Ejemplo
de
muestra
Rango de
color
Azcar/jarabe
(g)
Agua
(g)
Longitud
de la
cubeta [b]
(cm)
Azcar
blanco
250-500 50 50 2
Azcar sin
refinar
250-500 30 70 5
Jugo claro 500-2000 30 70 1
Jugo claro 2000-7000 10 90 1
Meladuras 7000-13000 5 95 1

b- Medir el pH de la solucin anterior. Se debe ajustar el pH a 7 (7.1, 7 o 6.9), si mayor a 7,
agregar gotas de la solucin de cido clorhdrico y si es menor a 7, agregar gotas de la
solucin de hidrxido de sodio. Las gotas se agregan con el cuentagotas fino.
c- Se divide la solucin anterior en dos (S
1
y S
2
). Se filtra S
1
y se desecha la primera parte del
filtrado si est turbio. Para ambas soluciones se realizan los siguientes pasos:

a. Se toma la temperatura de la solucin
b. Se miden los Brix de la solucin con el refractmetro.
c. Se desairea la solucin en el bao ultrasnico por 30 s.
d. Se ajusta la longitud de onda del espectrofotmetro a 420 nm, se enjuaga la
cubeta con la solucin y luego se llena con ella. Se utiliza agua destilada filtrada y
desaireada como cero en la absorbancia. La absorbancia se ingresa en la hoja de
clculo.
e. El resultado de color se calcula automticamente.

d- Para calcular la turbiedad se usan los resultados de color de S
1
y S
2

1.3. SULFITOS
VLIDO PARA: MELADURA CRUDA Y SULFITADA.
EQUIPO
PH metro
Vaso de 250 mL
Bureta de 50 mL
REACTIVOS
Solucin de yoduro-yodo 0,033 N
cido clorhdrico concentrado
Indicador de almidn
Procedimiento
a- Tomar pH de la muestra
b- Tomar 5 mL de la meladura y agregar 50 mL de agua destilada
c- Agregar 3 mL de cido clorhdrico concentrado y 0,5 mL de indicador de almidn
d- Se agrega con la bureta la solucin de yoduro hasta que el color cambie a un tono azul-
violeta.
e- Se calcula la cantidad de sulfitos as:



1.4. DUREZA (Tecnicaa, 1989)
VALIDO PARA: JUGOS
EQUIPO
Bureta de 50 mL
Cpsula de porcelana de 150 mm
Beaker de 250 mL
Probeta de 50 mL
Pipeta de 10 mL
Filtro

REACTIVOS
cido ascrbico
Solucin buffer pH 10
Solucin EDTA
Solucin de cloruro de calcio
Indicador negro de eriocromo
Procedimiento
a- Filtrar el jugo con servilletas
b- Pesar 5 g del jugo, aadirle 95 mL de agua destilada, mezclar y filtrar.
c- Del filtrado se toman 50 mL y en la cpsula de porcelana se agregan entre 0.3 y 0.5 g de
cido ascrbico y se agita
d- Se dejan pasar 10 min y se agrega 10 mL de solucin buffer pH 10, cinco gotas de indicador
negro de eriocromo y se agrega con la bureta, la solucin de EDTA lentamente hasta que
cambie el color.

El resultado se expresa en ppm. La dureza debe ser menor de 2000 ppm.
1.5. FOSFATOS (Tecnicaa, 1989)
VLIDO PARA: JUGO DILUIDO Y JUGO CLARIFICADO
1.5.1. Curva de calibracin
EQUIPO
8 Vasos de 100 o 250 mL
8 balones aforados de 50 mL
Espectrofotmetro


REACTIVOS
Solucin estndar de fosfato
Solucin de molibdato cido de
amonio
Solucin de 1-Amino-2-naftol-4-
sulfnico

PROCEDIMIENTO
a- Preparar las siguientes soluciones estndar:
Nmero de
solucin
1 2 3 4 5 6 7 8 BLANCO
Solucin
estndar [mL]
2 5 10 20 40 60 80 100 0
Agua
destilada
94 88 83 73 53 33 13 0 100

b- De cada una de las soluciones anteriores tomar 10 mL en balones aforados:
Nmero de la
solucin
1 2 3 4 5 6 7 8
BLANCO
(9)
Solucin de
molibdato
cido de
amonio (mL)
5 5 5 5 5 5 5 5 5
Solucin de 1-
Amino-2-
Naftol-4-
sulfnico (mL)
2 2 2 2 2 2 2 2 2
Volumen final
[mL)
50 50 50 50 50 50 50 50 50
Ppm de
fosfato en la
solucin
2 5 10 20 40 60 80 100 0

c- Agitar bien los balones y esperar 15 min. Despus leer la absorbancia en el
espectrofotmetro con una longitud de onda de 650 nm usando como BLANCO la solucin
9.
d- Para hacer vlida esta curva, debe ser realizada por al menos dos analistas diferentes.
e- Ingrese los valores de esta curva en la hoja de clculo

1.5.2. Anlisis
EQUIPO
5 Balones aforados de 50 mL
2 Balones aforados de 100 mL
3 Pipetas volumtricas de 10 mL (2) y
de 2 mL (1)
1 pipeta graduada de 5 mL
Espectrofotmetro
2 Vasos de 250 mL
Servilletas y 2 embudos
REACTIVOS
Solucin de molibdato cido de
amonio
Solucin de 1- Amino-2- Naftol-
4- Sulfnico


Procedimiento
a- Filtrar ambos jugos.
b- Tomar 5 mL del jugo diluido y aadirlo a un baln aforado de 100 mL y llenar con agua
destilada. (A)
c- Tomar 50 mL del jugo clarificado en un baln aforado de 50 mL y pasarlo a un baln de
100 mL, se llena con agua destilada hasta el aforo. (A1)
d- De la muestra A se toman 10 mL en dos balones de 50 mL (B1 y B2) y de igual manera para
la muestra A1 en dos balones de 50 mL (B3 y B4)
e- A los 4 balones (B1,B2, B3, Y B4) se agregan 5 mL de la solucin de molibdato cido de
amonio.
f- A los balones B1 y B3 se agregan 2 mL de solucin de cido 1-Amino-2-Naftol-4-Sulfnico.
g- Todos los balones se llenan hasta el aforo con agua destilada, se tapan y se agitan.
h- Despus de 10 min se lee la absorbancia con una longitud de onda de 650 nm usando de
blanco B2 para leer B1 y de blanco B4 para leer B3.
i- Para obtener los resultados se ponen los valores obtenidos de la absorbancia en la hoja de
clculo FOSFATOS.
2. Para agua de caldera
2.1. ALCALINIDAD (South African Sugar Factories, 1977)
EQUIPO
Bureta de 50 mL
Probetas de 50 mL
Cpsulas de porcelana
Goteros

REACTIVOS
Indicador de fenolftalena
cido sulfrico 0,01 M
Cloruro de Bario en polvo

Procedimiento
a- Para alcalinidad a la fenolftalena (P)
a. A 50 mL de muestra de agua de caldera, se le agregan 5 gotas de fenolftalena. Si
se produce un color rosado se agrega poco a poco el cido sulfrico 0.01 M hasta
que desaparezca el color. Se registran los mL usados. (Si no se usaron se registra
0).
b. Se calcula la alcalinidad P as:



El resultado est en ppm de CaCO
3

b- Para alcalinidad de hidrxido (OH)
a. A 50 mL de muestra de agua de caldera, se le agrega entre 0,5-1,0 g de Cloruro de
bario (hasta formar un slido en el fondo de la cpsula) y dos gotas de
fenolftalena. La solucin se torna rosado.
b. Se agrega la solucin de cido sulfrico con la bureta hasta desaparecer el color
rosado.
c. Se calcula la alcalinidad OH as:



El resultado est en ppm de CaCO
3
Se calcula la alcalinidad total as:

El resultado est en ppm de CaCO
3
2.2. DUREZA (Tecnicaa, 1989)
Equipos
Erlenmeyer de 100 mL
Pipeta de 10 mL
Gotero
Bureta de 50 mL
Equipo de agitacin.

Reactivos
Solucin EDTA
Solucin buffer pH 10
Indicador negro de eriocromo



Procedimiento
a- Se toma una muestra de 50 mL de agua de caldera filtrada y se le agregan 10 mL de
solucin buffer pH 10 y 5 gotas de indicador negro de eriocromo. La solucin se torna roja.
b- Se agrega con la bureta, agitando constantemente, la solucin de EDTA hasta que el color
cambie de rojo a azul.
c- Se calcula la dureza as:

2.3. SULFITOS (Tecnicaa, 1989)
EQUIPOS
Erlenmeyer de 100 mL
Probeta de 100 mL
Pipeta de 1 mL
Bureta de 25 mL
REACTIVOS
Solucin al 0,0125 N de yoduro-
yodato de potasio
Indicador de almidn
cido clorhdrico concentrado
Procedimiento
a- Se toman 50 mL de muestra de agua de caldera y se le agregan lentamente 0.5 mL de
cido clorhdrico concentrado.
b- Se le aade 1 mL de indicador de almidn
c- Se agrega gota a gota la solucin de yoduro hasta que aparezca un color azul permanente.
d- Se calcula el contenido de sulfitos as:

II- PREPARACIN DE SOLUCIONES (Tecnicaa, 1989)
Tenga en cuenta que al agregar un nuevo reactivo, debe mezclarse hasta que se integre
completamente.
Indicador negro de eriocromo: a 30 mL de agua se agregan 1 mL de Na
2
CO
3
de concentracin 1N y
1 g de negro de eriocromo. Se agregan 100 mL de alcohol isoproplico y se guarda en un frasco
mbar.
Solucin buffer pH 10: Pesar 21,4 g de NH
4
Cl y se disuelven en 400 mL de agua destilada (esta es la
solucin 1). Aparte, se miden en una probeta 138,48 mL de NH
4
Cl y se mezclan con 2L de agua
destilada (solucin 2).
Solucin cloruro de calcio: Pesar 1 g de CaCO
3
y se transfiere a un baln aforado de 1L. Se agregan
15 mL de agua y 9 mL de HCl, se mezcla y disuelve.
Se adicionan 3 gotas de naranja de metilo y se diluye con hidrxido de amonio (NaH
4
OH 1:4) hasta
que al color cambie de rosado a amarillo. Se completa el volumen con agua destilada.
Se mezclan las dos soluciones, se mide el pH y este debe ser 10; de lo contrario debe repetirse el
procedimiento.
Solucin EDTA: Se disuelven 4 g de etilendiamino tetracetato de sodio (Na
2
C
10
H
14
C
8
N
2
2H
2
0) en
800 mL de agua destilada, se agregan 0,86 g de NaOH y se completa el volumen hasta 1000 mL con
agua destilada en un frasco volumtrico.
Se guarda esta solucin en un frasco mbar. (Para la estandarizacin ver (Tecnicaa, 1989))
Solucin yoduro-yodo 0,033 N
Solucin de yoduro-yodo 0,0125 N: Se pesan 0.45 g de yodato de potasio (KIO
3
), se pasa a un
baln volumtrico de 1 L y se agregan 100 mL de agua destilada. Se agregan 4.35 g de yoduro de
potasio (KI) y 0.31 de carbonato cido de sodio (NaHCO
3
), se disuelve y se completa el volumen
con agua destilada.
Indicador de almidn: Se prepara una solucin saturada de NaCl agregando 50 g de NaCl a 140 mL
de agua, se calienta hasta hervir, se deja enfriar y decantar. Luego, se- disuelve 1 g de almidn en
50 mL de una solucin saturada de NaCl, si es necesario se hace un calentamiento suave (no ms
de 40 C). Se transfiere a un baln aforado de 100 mL y se llena con solucin de sal.
Solucin de cido tricloroactico al 10%
Solucin de molibdato de Amonio-cido: Se disuelven 30g de molibdato de amonio en 350 mL de
agua destilada, se agregan 160 mL de cido sulfrico concentrado lentamente mientras se agita.
Se enfria y se completa el volumen a 1 L con agua destilada. Se guarda en un frasco plstico
(polietileno)
Solucin de 1-Amino-2-naftol-4-sulfnico: Se disuelve 1 g de cido 1-amino-2-naftol-4-sulfnico y
7,5 g de sulfito de sodio (o 3.8 g de sulfito de sodio anhidro) en 100 mL de agua destilada hasta
disolver, luego se agregan 79.9 g de bisulfito de sodio NaHSO3 disueltos en 700 mL de agua
destilada y se completa hasta 1L con agua destilada. Se guarda en un frasco color mbar.

III- Bibliografa
ICUMSA. (2005). Libro de mtodos. Bartens.
South African Sugar Factories. (1977). Laboratory Manual . Durban: South african technologist
association.
Tecnicaa. (1989). Manual de laboratorio para la industria azucarera. Cali: Tecnicaa.