En 1920 Thumberg, Batelli y Stern descubrieron que cidos orgnicos como Succinato,

Fumarato, Malato y Citrato, son rpidamente oxidados, estimulando en forma cataltica

el consumo de Oxgeno y la produccin de Dixido de Carbono. Posteriormente,
descubrieron otros cidos tricarboxlicos como el Isocitrato y el cis-Aconitato, que tienen
el mismo efecto
En 1935 Albert Szent-Grgyi propone una secuencia para la oxidacin enzimtica del
succinato:
Succinato Fumarato Malato Oxalacetato
Adems, descubre que la adicin de Oxalacetato produce un consumo de Oxgeno
mucho mayor que el tericamente necesario.
Ese mismo ao, Martius y Knoop determinan la secuencia enzimtica de oxidacin de
Citrato:
Citrato alfa-Cetoglutarato Succinato
En 1937 Hans Adolph Krebs descubre que en condiciones
anaerbicas, la adicin de Oxalacetato al medio provoca la
acumulacin de Citrato. Tambin encuentra que la inhibicin
especfica de la enzima Succinato Deshidrogenasa con
Malonato, anula el efecto cataltico de todos los cidos, con
acumulacin de Succinato en forma proporcional a la cantidad
aadida de cido. Tambin prob que en estas condiciones, la
adicin de Oxalacetato restablece el consumo de Piruvato, pero
en proporcin 1 a 1 y no en forma cataltica, como descubri Szent-Grgyi.

Sintesis y degradacion de los aminoacidos en el
Ciclo de krebs


2

Con base en sus resultados, Krebs propuso el esquema general del ciclo y demostr la
existencia de todas las enzimas involucradas. Por la importancia de su contribucin, el
Ciclo del cido Ctrico tambin se conoce como Ciclo de Krebs.








En 1945, Albert L. Lehninger y Eugene P. Kennedy, determinaron que el Ciclo de Krebs
se lleva a cabo en la Matriz Mitocondrial.
Reacciones del Ciclo del cido Ctrico
En la Figura, se presenta el esquema completo del ciclo en su forma actual, que es
esencialmente igual a la propuesta por Krebs, y a continuacin se discuten las
reacciones individuales.


3


Figura 2. Esquema del Ciclo del cido Ctrico
Citrato Sintasa
La Citrato sintasa es una enzima del grupo de las Liasas, que cataliza la condensacin
del Oxalacetato y la Acetil-CoA, para formar Citrato. Esta reaccin se considera la
principal va de entrada de Carbono al ciclo, pues la Acetil-CoA se produce en grandes
cantidades durante el catabolismo de Glucidos, Lpidos y Aminocidos, y su oxidacin
en el ciclo, produce la mayor parte de la energa metablica. Citrato Sintetasa, Citrato
Oxalacetato Liasa, Citrogenasa y Enzima Condensante, son nombres que a recibido
esta enzima a travs de los aos, todos hacen referencia a la formacin del citrato, pero
en la nomenclatura enzimtica moderna, ya no se aconseja su empleo. La enzima es
grande y estable.
La reaccin es una condensacin aldlica entre el metilo de la Acetil-CoA y el doble
enlace Carbono Oxgeno del Oxalacetato.


4


La condensacin se lleva a cabo mediante la catlisis cido-base del carboxilo de un
resto de Aspartato y dos de Histidina, para formar Citril-CoA, intermediario que
permanece unido a la enzima. En el segundo paso, la enzima hidroliza el Citril-CoA
liberando Citrato y CoA-SH.
Cuando se une el Oxalacetato, la enzima sufre un cambio de conformacin que coloca
el Oxalacetato en una cavidad inaccesible al agua y al mismo tiempo, se forma el sitio
de unin de la Acetil-CoA. La reaccin es espontnea debido a la hidrlisis de enlace
Tioster y colabora para determinar la direccin del ciclo de Krebs.
La enzima tiene especificidad absoluta para Oxalacetato y Acetil-CoA. Slo el veneno
de origen vegetal Fluoroacetil-CoA, puede sustituir a la Acetil-CoA.




Fluoroacetil-CoA
Fuera de la mitocondria, se encuentra una isoenzima denominada Citrato Liasa, que
participa en la sntesis de cidos grasos.


5

El ATP es inhibidor alostrico de la Citrato Sintasa. La actividad de la enzima tambin
responde a los niveles de Oxalacetato y Acetil-CoA. Con frecuencia el Oxalacetato es el
reactivo limitante, porque participa en la Gluconeognesis. Cuando falta Oxalacetato, se
acumula la Acetil-CoA que es activador de la enzima Piruvato Carboxilasa, la cual
convierte el Piruvato en Oxalacetato. El exceso de Acetil-CoA tambin inhibe a la
enzima Piruvato Deshidrogenasa que convierte el Piruvato en Acetil-CoA.
Aconitasa
Esta enzima, tambin conocida como Aconitato Hidratasa, cataliza la transposicin de
un grupo OH del citrato, para convertirlo en Isocitrato. Pertenece al grupo de las Liasas,
porque se considera que la isomerizacin reversible, se lleva a cabo a travs de
reacciones de deshidratacin (eliminacin) e hidratacin (adicin) sucesivas, a travs
del cis-Aconitato, que sera un intermediario unido a la enzima. Sin embargo, evidencias
espectroscpicas sugieren que el intermediario de la reaccin es un in carbonio, capaz
convertirse en Isocitrato, Citrato o cis-Aconitato. A pesar de ello, en muchos textos se
incluye el cis-Aconitato como intermediario.










6







En equilibrio, la enzima forma una mezcla de 58% Isocitrato, 39% Citrato y 3% cis-
Aconitato. Contiene Hierro no hemo y Azufre cido lbil en una agrupacin denominada
centro hierroazufre.
Es inhibida competitivamente por Fluoroacetato, cuando se convierte en Fluorocitrato.
Tambin es inhibida por el trans-Aconitato.
Es una enzima notable por la especificidad de la reaccin que cataliza, convirtiendo el
Citrato no quiral, nicamente en uno de los cuatro ismeros posibles quirales del
Isocitrato, el 2R,3S-Isocitrato o treo-D-Isocitrato, al transponer el Grupo OH del Carbono
3 del Citrato hacia el Carbono 2, proveniente del Oxalacetato, y jams al que proviene
de la Acetil-CoA. Los grupos encargados de eliminar y aadir el H
2
O en forma de H
+
y
OH
-
se encuentran colocados en el sitio activo en las posiciones adecuadas para
asegurar la estereoespecificidad.
El complejo de Hierro y Azufre de la Aconitasa tiene una funcin diferente al de otras
protenas con Hierro y Azufre. En la mayora de las protenas, el complejo de Hierro y
Azufre participa en reacciones de oxido reduccin. En la Aconitasa, el complejo tiene la
forma de un cubo, con tomos de Hierro y Azufre alternados en los vrtices. El Hierro
en uno de los vrtices se coordina con los tomos de Oxgeno del carboxilo y el
hidroxilo del carbono 3 del Citrato.


7

La reaccin tiene un G
o
' positivo, pero en las condiciones intracelulares, el consumo
rpido del Isocitrato, mantiene el G casi en cero.
Hay una isoenzima que se encuentra fuera de la mitocondria.
Isocitrato Deshidrogenasa
Es una Oxido-reductasa de especificidad absoluta, que cataliza la reaccin de
descarboxilacin oxidativa del 2R, 3S-Isocitrato producido por la Aconitasa.

El anillo de Nicotinamida del NAD
+
(o NADP
+
en algunos organismos) oxida al grupo -
OH del Isocitrato convirtindolo en Oxalosuccinato, intermediario unido a la enzima. En
el Oxalosuccinato, el grupo ceto en 2 se encuentra en posicin respecto del carboxilo
en 3, situacin que hace al carboxilo inestable y fcil de eliminar. La eliminacin, forma
-Cetoglutarato y es favorecida por la interaccin entre Mg
2+
(o Mn
2+
) y el grupo cetona.
El carbono eliminado como CO
2
, proviene del carboxilo 1 del Oxalacetato.
Esta enzima se considera el punto principal de regulacin del ciclo. La forma de
regulacin ms importante de la Isocitrato Deshidrogenasa es la activacin alostrica
por ADP (antagonizada por ATP) mediante la cual se acelera la actividad del ciclo
cuando la relacin ATP/ADP es baja. Tambin es activada por NAD
+
(antagonizado por
NADH) y Ca
2+
.
La reaccin de la Isocitrato Deshidrogenasa tiene un G
o
' negativo grande debido a que
involucra una oxidacin y una descarboxilacin, ambos procesos exergnicos. Adems,
el CO
2
producido en la descarboxilacin, se elimina fcilmente haciendo que la reaccin


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sea irreversible, lo que la convierte en una de las reacciones que da direccin al ciclo de
Krebs.
Se han descrito 3 isoenzimas. Una que es especfica de NAD
+
y se encuentra slo en
mitocondria. Las otras dos enzimas son especficas de NADP
+
, una se encuentran en
mitocondria y otra en citoplasma.
-Cetoglutarato Deshidrogenasa
El complejo de la -Cetoglutarato Deshidrogenasa, cataliza una reaccin de
descarboxilacin oxidativa, mediante la cual el -Cetoglutarato se convierte en Succinil-
CoA. Tiene un mecanismo idntico al del complejo de la Piruvato Deshidrogenasa.

El complejo est formado por varias copias de:
-Cetoglutarato Deshidrogenasa con TPP como grupo prosttico, que cataliza la
reaccin de descarboxilacin oxidativa del -Cetoglutarato para transformarlo en
Succinilsemialdehdo-TPP.
Lipoamida Succiniltransferasa que tiene como grupo prosttico el cido Lipoico, unido
a un resto de lisina en forma de lipoamida, y completa la oxidacin mediante la
transferencia de Semialdehdo Succnico del TPP al Lipoato para formar la
Succinillipoamida, y despus la transferencia del Succinato a la Coenzima A, para
formar la Succinil-CoA.


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Dihidrolipoamida Deshidrogenasa (E.C.1.6.4.3) idntica a la del complejo de Piruvato
Deshidrogenasa, con FAD como grupo prosttico, que cataliza la oxidacin de la
Dihidrolipoamida a Lipoamida, con NAD
+
como aceptor final de electrones, a travs
del FAD y una protena con hierro y azufre.
El CO
2
que se elimina en esta reaccin, es del carboxilo 4 del Oxalacetato original, de
manera que se eliminan dos Carbonos, equivalentes a los de la Acetil-CoA que entr al
ciclo, pero provenientes del Oxalacetato.
-Cetoglutarato
Deshidrogenasa implica un paso de oxidacin y otro de descarboxilacin lo que hace
que la reaccin total sea espontnea e irreversible, por lo que contribuye a dar direccin
al ciclo de Krebs. Parte de la energa liberada en la oxidacin, se conserva en el enlace
tioster de la Succinil-CoA.
La principal regulacin del complejo es la inhibicin por producto, cuando se acumulan
SuccinilCoA y NADH, disminuye la actividad de la enzima y la velocidad del ciclo. El
complejo tambin es inhibido por Arsenito y para-Hidroxifenilpiruvato (inhibidor
competitivo).
Succinil-CoA Sintetasa
Cataliza la hidrlisis del enlace tioster de la Succinil-CoA, conservando parte de la
energa de hidrlisis en forma de GTP (ATP en procariotes) mediante una fosforilacin a
nivel de sustrato. La enzima tambin se conoce como Succinato Tiocinasa Succinil-
CoA Tiocinasa, nombres que no son compatibles con las reglas de nomenclatura
moderna y no deben emplearse.
El mecanismo de la reaccin se ha descrito como de "la papa caliente" porque el fosfato
va pasando de un compuesto a otro.
La energa liberada en la hidrlisis del enlace tioster de Succinilc-CoA, se usa para
formar un enlace anhidro entre el grupo carboxilo del Succinato y el fosfato inorgnico
(Pi). Este enlace tiene alta energa de hidrlisis.


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A continuacin, el fosfato del grupo anhidro, se transfiere a un resto de Histidina de la
enzima, formando fosfohistidina que tambin es un compuesto de alta energa de
hidrlisis.
En el ltimo paso, el fosfato se transfiere de la Histidina al GDP para formar GTP.

El G
o
' de la reaccin es casi cero porque se hidroliza un enlace de alta energa, pero a
cambio se sintetiza otro, por lo tanto la reaccin es reversible., pero en las condiciones
intracelulares slo procede hacia Succinato, porque las reacciones anteriores son
irreversibles El fosfato que ha sido activado a GTP, se mantiene en equilibrio con todos
los nucletidos a travs de la enzima Nucletido Difosfato Cinasa.
La enzima no tiene ningn otro mecanismo de regulacin importante, pero es inhibida
por NH
2
OH (acta formando el cido hidroxiamnico derivado del sustrato Succinil-
CoA).
Esta es la ltima reaccin en la que hay diferencias entre el metabolismo de los
carbonos de Acetil-CoA y Oxalacetato.
Succinato Deshidrogenasa
Esta xido-reductasa cataliza la oxidacin del Succinato mediante la eliminacin
estereoespecfica de dos tomos de Hidrgeno, en forma de hidruro H
-
y protn H
+
,
para formar el enlace trans del fumarato. La enzima es un complejo formado por cuatro
subunidades, con FAD y un Hemo tipo b como grupos prostticos, adems de tres
ncleos con Hierro y Azufre.


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La oxidacin de Succinato reduce el FAD a FADH
2
.
El FADH
2
se oxida transfiriendo los electrones, a travs de los complejos de hierro
y azufre, hasta la Coenzima Q componente de la cadena respiratoria.

La Succinato Deshidrogenasa es inhibida por el Malonato, con estructura semejante al
Succinato, pero que nicamente tiene un metenilo (-CH
2
-) y no se puede oxidar por
deshidrogenacin. Tambin la inhibe el Oxalacetato, que tampoco se puede
deshidrogenar. La Succinato Deshidrogenasa est incluida en la membrana interna de
la mitocondria, formando parte del Complejo II de la Cadena Respiratoria. El resto de
las enzimas del ciclo de Krebs, estn libres en la matriz mitocondrial.


Fumarasa
Esta enzima
pertenece al grupo
de las Liasas y
cataliza la


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hidratacin esteroespecfica del Fumarato para formar el l-Malato. No requiere
cofactores y tiene una isoenzima que se encuentra en el citoplasma.


Malato Deshidrogenasa
Es la ltima enzima del ciclo y cataliza la oxidacin del grupo -OH del Malato al ceto (u
oxo) del Oxalacetato, mediante la transferencia de un hidruro (2e
-
+ H
+
) al NAD
+
. La
enzima es especfica del l-Malato. La interaccin entre el sustrato negativo, y restos de
Arginina del sitio activo, promueve el cambio a la conformacin activa de la enzima.

La reaccin tiene G
o
' positivo, sin embargo, el cambio no estndar es casi cero porque
la concentracin del Oxalacetato se mantiene baja, debido a que se consume en la
reaccin de la Citrato Sintasa que tiene un G muy negativo. El Oxalacetato tambin se


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consume para la sntesis de Glucosa en la Gluconeognesis, y por ello con frecuencia
es el reactivo limitante del ciclo de Krebs.
Esta enzima no es un punto de regulacin importante y es inhibida competitivamente
por -Fluoroxalacetato y el Fluoromalato.
Hay una isoenzima Malato Deshidrogenasa citoplsmica, que participa en el
intercambio de equivalentes reductores entre citoplasma y mitocondria y en la salida de
la Acetil-CoA de mitocondria.
Mediante la secuencia de reacciones descrita, se oxidan dos tomos de carbono, que
se consideran equivalentes a los de la Acetil-CoA. Sin embargo, como se muestra en
las reacciones individuales, los tomos del grupo Acetilo que entran al ciclo no se
oxidan y permanecen en l, al menos despus de la primera vuelta. Los tomos que se
oxidan y se eliminan como CO
2
, son los dos grupos carboxilo del Oxalacetato. La
estequiometra global del ciclo es la siguiente:

Considerando la cantidad estndar de ATP, producida por cada coenzima reducida, que
se oxida en la Cadena Respiratoria, la oxidacin de un Acetil-CoA en Ciclo del cido
Ctrico, y la oxidacin de las coenzimas reducidas en la Cadena Respiratoria equivale a
12 molculas de ATP, 11 por fosforilacin oxidativa (9 de 3 NADH y 2 de 1 FADH
2
) ms
una por fosforilacin a nivel de sustrato (GTP).
Otras Funciones Catablicas del Ciclo del cido Ctrico
Adems de la oxidacin de Acetil-CoA del catabolismo de Glcidos y Lpidos, el ciclo
tambin oxida esqueletos de carbono provenientes del catabolismo de Aminocidos y
de la degradacin de las bases Pirimdicas de los cidos nucleicos.
Los esqueletos de carbono de los aminocidos se incorporan al ciclo del cido ctrico en
forma de varios intermediarios.


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-Cetoglutarato. As se incorporan Glutamato, Glutamina, Arginina, Prolina e
Histidina.
Succinil-CoA. Es la entrada del carbono de Valina, Metionina, Treonina y parte de
Isoleucina, Fenilalanina y Tirosina. Tambin es el punto de entrada de los
carbonos del esqueleto de Timina.
Fumarato. Una parte del esqueleto de Fenilalanina y Tirosina entran al ciclo en
este punto.
Oxalacetato. Esta es la forma de incorporacin del Aspartato y la Aspargina.
Piruvato. Los aminocidos Alanina, Glicina, Serina, Cisteina y Triptofano
producen Piruvato puede entrar al ciclo.
Acetoacetil-CoA o Acetil-CoA. Lisina y Leucina, junto con algunos carbonos
provenientes de la degradacin de Isoleucina, Fenilalanina, Tirosina y Triptofano
entran as al ciclo, lo mismo que los carbonos de Uracilo yosina.
Funciones Anablicas del Ciclo del cido Ctrico.
Adems de participacin en el catabolismo, el Ciclo de Krebs tambin participa en el
anabolismo ya que varios de sus intermediarios sirven como precursores para la
sntesis de todo tipo de molculas.
El Citrato, cuando se acumula en la mitocondria, sale al citoplasma donde se rompe
liberando Acetil-CoA para la sntesis de cido Grasos. Tambin en el citoplasma acta
como modulador de la Gliclisis.
El -Cetoglutarato es precursor para la sntesis de Glutamato y Glutamina.
La Succinil-CoA es la materia prima para la sntesis del grupo Hemo de las
hemoprotenas.
El Oxalacetato es precursor para la sntesis de Glucosa en el citoplasma y tambin para
la sntesis de Aspartato y Asparagina, Por esta razn con frecuencia es el reactivo
limitante del Ciclo del cido Ctrico.