EMBARAZO Por el doctor Gilberlo Angel .MejIa La reaccin de Galli Mainini efectuada en batracios machos para el diagnstico precoz del embarazo, se deriva del conjunto de trabajos realizados por Houssay y su escuela, quienes desde el ao de 1922 venan trabajando en forma intensa e ininterrumpida, sobre anatoma histologa y fisiologa gonadales, observando las .relaciones entre stas y las gonadotrofinas en diversos batracios. En el ao de 1929 ha- llaron laliberacin de los espermatozoides en el testculo del Bufo are- narum Hensel, por la estimulacin de las gonadotrofinas hipofisia, rias y aunque numerosos trabajos sepublicaron al respecto en los aos posteriores, slo en marzo de 1947 Carlos Galli Mainini public su primer trabajo, realizado sobre 19 casos, marcando el primer eslabn en esta reaccin que ha sustitudo a cuantas se han aplicado para el diagnstico precoz del embarazo, por su exactitud y rapidez. El fundamento de la reaccin reposa en la especificidad que tiene la gonadotrofina corinica, presente en la orina de mujer embarazada, sobre el testculo del sapo, haciendo liberar las clulas de Sertoli : stas sufren una serie de' transformaciones, cuyo resultado es el desprendi- miento delos espermatozoides quedando libres enlaluz delas ampollas seminferas, desde donde inician su migracin al exterior. El procedimiento para efectuar la reaccin consiste, ~n inyectar 10 cm3. de orina en el saco linftico lateral, dejar el animal en re- poso 2 a 3 horas y luego tomar de la cloaca unas gotas de orina que seexaminan al microscopio. En caso de positividad, seven los es- permatozoides del sapo en medio de su orina y en caso negativo no estn estos elementos presentes. 4# Revista de laFacultad de Medicina M uest r as de. or i na. La mujer con cuya orina se efectuar la reaccion, no necesita sometersea ningn rgimenespecial ni tampocoserequierequesus- pendaningn tipodemedicacinalacual estsometida, aunencasos de teraputica hormonal conestrgenos, progesterona o gonadotrofi- nas. Referentea stas ltimas si seconsideranlas dosis comunmente empleadasy aunsuponiendoquetodalacantidadinyectadaseelimine enlas24horas por vaurinaria, el contenidode10cm3. ser siempre insuficientepara provocar respuestapositivaenel animal. La recolec- cindelaorinapuedehacerseencualquier momento, aunquees pre- feridalaorinadelaprimeramiccinmatinal. No es necesariofiltrar- la, nonecesitaprecaucionesdeesterilidadel recipiente, supH notiene influenciasobrelareacciny sobreladuracindelaactividadgenado- trfica de la orina de mujer embarazada, se ha comprobado que guardan la actividad suficiente para provocar reacciones positivas an 10das despus deemitirlas conservadas atemperatura ambiente sin preservativos de ninguna especie. Este punto fue estudiado por Galli Mainini quienaplicel mtodocuantitativo paradeterminar dia- riamente lapotenciagonadotrficaen orinas estacionadas a tempera- tura ambienteentre 149y 18 9 comotambina4 9 . En ningunodelos casosseempleprecaucinalgunaparaimpedir laproliferacinmicro- biana o inhibelos procesos de fermentacin. Los resultados de- mostraron, quean 10das despus deemitidalaorina, conservauna actividad gonadotrfica igual, tanto en las que seconservana bajas temperaturas como en las que se conservan a temperatura media. Mayer, Govi y Flrez han trabajado con orinas conservadas a una temperatura entre 229 y 269 durante 7 das y tambin encuentran resultados positivos despus de estelapso; sacando la siguientecon- c!usin: "Debemos destacar que los procesos de fermentacin en la orina no afectaron lavida del batracio, quedando demostrado que la actividad biolgica de la gonadotrofina corinica en orinas enveje- cidas, mantenidas a la temperatura ambienteexpresada, persistepor unlargotiempo (7 das determinado) siendofactibleseprolonguepor varios das ms, pero quenosotros no hemos determinado". Por otra parte Gandolfo Herrera y Sauri comprobaron, que el calentamiento a359noafectasuactividad, peros cuandosesobrepasenlos709. Ti empos m ni mo y mxi mo en [ a,s r eacci ones. La observacinmicroscpicadelaorina del sapo, puedehacerse encualquier momentoapartir delos30minutos deinyectados, quees Volumen XVIII, NQ6, Diciembre, 1949 44S el tiempomnimoenel quesehan obtenido resultados positivos. Se acepta queenbuenas condicionesel 100por 100derespuestas posi- tivas ocurrendentro delas tres primeras horas delainyeccin, posi- tividadquepersisteenformacontinuadurante ms de24horas. Especi f t i ci dad de l a r eacci n. Deacuerdo a lanumerosaestadstica presentada por el autor, la respuestadel sapomachoes especficasolamentepara las gonadotrofi- nas deorigencorial, aunqueexperimentalmenteseha logradoobtener respuestas positivas congonadotrofinasrica, hipofisiaria, equina, hi- pofisiaria de vacuno, pero usando productos muy purificados y en dosis elevadas. Se ha experimentado con hormona folculo estirnu- "lantehipofisiariade mujer ovariectomizadao en menopausia, estr- genos, benzoato de estradiol, etilbestrol, progesterona, propionato de testosterona, desoxicorticosterona, pitressina, tiroxina, prolactina. adrenocorticotrofina, adrenalina, suspensionescrudas dehgado, rin, suprarrenales, bazo, corazn, msculo y estmago de sapo, cido ascrbico, acetil.colina, acetato de cobre, yohinbina, azul demetileno, sulfato de zinc, sin ninguna respuesta positiva. Hasta el presente, no se ha observado ninguna reaccin falsamentepositiva. Sobre un total de 2.064 reacciones verificadas en personas que con certeza sepodaafirmar la ausenciade embarazo, la exactitud fue del 100 por 100y laestadsticaacumuladaenlos casosdeembarazosdepoco tiempo suman 3.079 reacciones. El nmero de positivos confirmados es de2.027y el porcentajederesultados corectosvaraentreel 98,16 por 100al 100por 100. Pr ecoci dad de l a r eacci n. La reaccindiagnsticaen el sapopareceser sumamenteprecoz en relacinal tiempodeamenorrea. Sobre106casosestudiados todos con amenorreamenor a 20 das y entre los queen80 la amenorrea era inferior a 15das, seobtuvieron resultados positivos en los que posteriormente se comprob el embarazo por el "estudioclnico. El tiempomnimodeamenorreaerade4das y en21casoslaamenorrea era de9 das. Resul t ados compar at i vos con l a r eacci n de F r i edman; Sobre 1.674reacciones efectuadas simultneamenteen la coneja yel sapo, sehapodidocomprobar quelareaccinenel batraciomacho 446 Revista de la Facultad de Medicina ~==~; : ================~==================~============= es de una mayor exactitud; en la mayora de los casos reacciones correctas en el sapo, lo eran tambin en la coneja, pero las' discordan- cias observadas estn a favor de la reaccin de Galli, posiblemente debido a las condiciones previas de la coneja, como peso, edad, ais- lamiento individual, etc., requisitos que pueden falsearla inadvertida- mente. En la serie de Galli-Mainini figuran 368 reacciones practica- das simultneamente en el sapo y en la coneja con 14 defunciones. Del resto, es decir en 354 reacciones hay 27 no coincidentes, con 23 casos en que la respuesta del sapo fue correcta, en 2 lo fue la Fried- man y en 2 no pudo establecerse cual de las reacciones era exacta. Pinto y Suer Boero hallaron 9 resultados no concordantes. En 7 casos el resultado de la Friedman fue equivocadamente negativo y el sapo correctamente positiva. Sala, J achesky y Colotta encontraron 3 reacciones no coincidentes en las cuales 2 eran respuestas correctas positivas en el sapo. Merchante, encontr coincidencia de resultados en 42 sobre 45 reacciones simultneas, analizando as la discordancia. Un resultado negativo incorrecto en el sapo en el que la observacin no se prololg ms de tres horas. Un resultado positivo correcto en el sapo y un resultado negativo incorrecto en el sapo, que posterior- mente repetido di respuesta positiva, comprobndose ms tarde lapre- sencia de un embarazo ectpico. "En S O reacciones simultneas afee- tuadas por Hutz, hubo un caso discordante en que la Friedman era errneamente negativa. Repetida la reaccin de Friedman fue nue- vamente negativa y el sapo positivo. Slo 1S das ms tarde, la ter- cera reaccin de Friedman di resultado positivo cuando la de GaIli lo haba sido ms precozmente. En el embar aeo ect pi co. De gran utildad porque adems de la rapidez en la respuesta que puede acelerarse manteniendo al animal en condiciones ptimas y a una temperatura constante de 30 9 , con 'ia inyeccin de orina obtenidr . en cualquier momento del da y en concentraciones variables, se han obtenido resultados muy halagadores, pues de S S casos observados, S O dieron resultados correctos. En l a mol a hi dat i f or me. - Los resultados obtenidos hasta el presente son dispares, el nmero de reacciones es escaso por lo que merece ms estudio a fin de llegar a conclusiones definitivas. Galli encuentra dos casos correctos y Pou de Santiago 8, Pinto y Suer Boero estudian la precocidad de la nega, Volumen XVIII, NQ 6, Diciembre, 1949 447 tivizacin despus de la expulsin en dos casos, haciendo sospechar a los autores que en esta afeccin la reaccin de Galli se negativiza ms precozmente que ias de Friedman y Ascheim Zondek. Personal- mente comprobamos un caso en que se sospechaba clnicamente una molahidatiforme. La reaccincuantitativa presentaba unaconcentracin superior a 320.000 unidades internacionales por litro, llamndonos la atencin, la rpida respuesta de! sapo y su excesiva positividad. Ms tarde comprobamos tanto al examen macroscpico como histolgico el diagnstico sospechado de Mola Hidatiforme. En este caso parti- cular obtuvimos una recacin cualitativamente positiva, con la inyec- cin al sapo de 7 ce. de lquido cefalo.raqudeo extrados a la pa- ciente antes de la interevencin. En el car i o- epi t el i oma. , Hasta el presente pocas estadsticas encontramos. Blanchard y Bretto observaron en 1947 un caso concordante con la reaccin de Friedman y hasta el momento la estadstica de Galli est en estudio. Al presentar la reaccin cuantitiva paralelismo con la de Friedman en los pocos casos que hemos t 1 nidola oportunidad de apreciar, cree- mos que en e! futuro sea de gran utilidad, esperando mayor oportu- nidad de su estudio para lograr alguna conclusin. En l a amenaza de abor t o. Galli obtuvo casos positivos de los que en S secomprob el em- barazo por el estudio histolgico del material expulsado y en dos por la evolucin posterior del embarazo. En el abor t o i ncompl et o. Figueroa Casas, Pinto y Pou deSantiago, citan 7 casos con lato- talidad deresultados correctos. En el abor t o compl et o. Galli Mainini obtuvo 4 respuestas positivas en 4 observaciones una de ellas a las 24 horas de producirse y 3 a las 48 horas. Hutz en dos casos de oborto provocado obtuvo resultados negativos a las 5 y 6 horas despus de la expulsin y en un tercer caso la respuesta erapositiva alas 8 horas pero negativa alas 10horas deproducirse el aborto. Hasta e! momento apesar de lacorta estadstica publicada por 448 Revista de la Facultad de Medicina los diversos autores, parecequelareaccindeGalli es devalor como diagnsticoy pronsticoenlas diversas fases del aborto, como10 de- muestran los resultados obtenidos. En embar azo con f et o muer t o y r et eni do .. Enuncasorelatadopor Hutz lapacientecon7mesesdeembara- zodej depercibir movimientosfetales durante 10das y laausculta- cin era negativa. La reaccinde Galli di resultado negativo y 5 das ms tarde lagestantecomunicsu seguridaddesentir nuevamen- temovimientosfetales. La reaccinrepetida enestemomentodi re- sultado negativo, comprobndose posteriormente la exactitud de la reaccinpor laexpulsindeun fetomuerto consignos desu muerte tiempoatrs. En l a ecl ampsi a. En 6 casos los resultados han sido positivos. En esta entidad' a veces se observa la precocidad e intensidad de la reaccin. Pou de Santiago relata un casoen quelapositividadera degran intensidad sloalos30minutosycon1cm3. deorinainyectada. En e~ per odo de l act anci a. Los casos recopilados por Ga1li, Pou de Santiago y Figueroa. Casos en mujeres amenorreicas y en lactanciahan sido coincidente- mentenegativos conausenciadeembarazoe,igualmentehan sidoeon-. cordanternentepositivos, enamenorreas y lactanciaenlos queposte- riormente la evolucin del embarazo fue confirmada. RC J,cci n cuant i t at i va. Dada la importancia clnica de determinar cuantitativamente la cantidad degonadotrofinas corinicaseliminadas, enunidades interna- cionales, Galli Mainini hatratado deestablecerestemtodoensureac- cin el que tericamente podra hacerse apreciando el tiempo que transcurre entre la inyeccinde una determinada cantidad de orina y su respuesta en el sapo, apreciando numricamente, lacantidadde espermatozoidesqueseencuentranenel campomicroscpicountiempo fijo despus de inyectar determinada cantidad de orina o finalmente valorar lacantidadmnimadeorinanecesariapara producir respues- ta positivaenuna Seriedesapos, concantidades decrecientesdema- terial, mtodoquesinser perfecto, comoafirmaGaIli, ofrecemayores Volumen, XVIII, NQ6, Diciembre, 1949 449 garantas que los anteriores. Valorando la dosis mmima de gonado, trofina corinica en unidades internacionales capaz de producir res- puesta positiva, encontr que esta dosis en su serie es de 40 U. I. aproximadamente por cm3. En 72 determinaciones cuantitativas, los resultados demuestran que la mayor concentracin gonadotrfica se encuentra en orinas donde el embarazo est entre el 1 y 334 meses encontrando en 4 casos una concentracin hasta de 320.000 U.l. por litro con embarazos clnicamente normales. La determinacin cuantitativa contina en estudio ya que dada la gran sensibilidad del sapo a la gonadotrofina corinica, no se han podido sacar conclusiones definitivas. Personalmente y en los casos que hemos tenido la oportunidad de observar, creemos que es de gran valor, en el control de embarazos donde hay antecedentes de mola hida- tiforme y en la sospecha clnica del corioepitelioma donde el aumento progresivo en unidades gonadotrficas es de un valor indiscutible. Concl usi ones. Segn los datos recopilados por el autor de la reaccion, Carlos Galli Mainini y los que se han ocupado de su estudio, se demuestra que sus caractersticas la hacen superior por su especificidad y dems caractersticas, a H1S reacciones hasta hoy conocidas. El animal usado en el Valle del Cauca es el sapo macho cient- ficamente denominado BUFO MARINUS segn la clasificacin hecha por Emmett R. Dunn Haverford College-Pensilvania, U.S.A. La reaccin de Galli es de gran precocidad diagnstica, observn- dose resultados correctamente positivos que han tenido su confirma- cin ulterior, en amenorreas.de slo 4 das. La especificidad es completa, ya que orinas de mujeres no embara- zadas, normales, ovariotornizadas, en menopausia, prepbereso con las ms diferentes afecciones, nunca han dado respuestas positivas co- mo tampoco en orinas de nios y hombres adultos. La exactitud de los resultados est comprobada por numerosas estadsticas, que segn los autores muestra de un 98,16 por 100 a 100 por 100 de resultados correctamente negativos y 100 por 100 de positivos correctos. Esta reaccin es la ms rpida en su respuesta de las existentes hasta hoy da. Algunas respuestas positivas se obtienen dentro de la primera hora de la inyeccin, el 80 por 100 a la segunda hora y casi la totalidad dentro de las tres horas, aunque es factible ver, reaccio- nes positivas hasta las 24 horas caso sumamente raro, cuando se tienen 450 Revista de la Facultad de Medicina los animales a temperatura conveniente. A los 8 das de inyectado el animal se ha negativizado totalmente. Al ser elemento de juicio para su positividad la presencia de es- permatozoides del sapo, no hay posibilidad de error por falsa aprecia. cin subjetiva. La reaccin cuantitativa aplicada en la mola hidatiforme y corioe- pitelioma, contina en estudio pero los casos observados, hasta el pre- sente prometen ser tan halagadores como los estudiados hasta el pre- sente en el embarazo normal y donde se aplica la reaccin cualitativa, Cali, agosto 19 de 1949. BTBLIOGRAFIA: Galli Mainini Carlos: Comunicaciones personales dadas en Buenos Aires aos 1948-49. Galli Mainini Carlos: Reaccin diagnstica del embarazo en la que se usa el sapo macho como animal reactivo. Semana Mdica. Galli Mainini Carlos: Ovulacin del Bufo Arenarum. 1947. 54-337. con gonadotrofina corinica. Rev. Seco Argent. Biol. 194723. Galli Mainini Carlos: Reaccin diagnstica de embarazo y accin de las gonadotrofinas en el sap~ macho. Sem. Mdica. ,1947. 54-447. Galli Mainini Carlos: Estudio sobre accin de l a gonadotrofina en el sapo macho. Rev. Soco Argentina. Biolog. 1947. 23-1~S. Galli Mainini Carlos: Pregnacy test using the male toad. J . Clin. Endocri- nolo. 1947. 7653. 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