Biotecnologa Actualmente los estudios se enfocan en la bsqueda de valores ptimos para los diferentes parmetros que afectan el proceso

fotocataltico: pH, temperatura, intensidad de radiacin, diseo del reactor, naturaleza y concentracin del contaminante, y agentes oxidantes que puedan mejorar la reaccin; adems se estudia con detalle la cintica de reaccin, pues esta juega un papel muy importante en la real aplicacin del proceso. La tendencia de la fotocatlisis est enfocada al desarrollo de prototipos tiles en la industria, ya sea en tratamientos de descontaminacin de aire, agua o suelo, para procesos de autolimpieza e incluso para aplicaciones mdicas. La fotocatlisis heterognea aplicada al tratamiento de aguas, se encuentra en un nivel preindustrial, pues slo se han construido algunas plantas pilotos en el mundo. Es importante resaltar que para el uso industrial de esta tecnologa se hace necesario el estudio de aplicaciones de la energa solar, dada su amplia disponibilidad. Por lo tanto, gran parte de los esfuerzos se dirigen al desarrollo de la tecnologa fotocataltica con luz solar a cambio de la luz proporcionada artificialmente, mediante el uso de lmparas como se hace generalmente a nivel de laboratorio. El comportamiento de los xidos metlicos de transicin frente a la absorcin de luz es eminentemente cataltico, razn por la cual se les denomina fotocatalizadores. El campo de aplicacin de la catlisis abarca tanto la prevencin de la contaminacin mediante la elaboracin de nuevas rutas catalticas, cada vez ms limpias mediante diversos mtodos de oxidacin. La fotocatlisis heterognea es un buen ejemplo de la aplicacin de la catlisis como tratamiento para la depuracin de contaminantes acuosos. La fotocatlisis heterognea permite la degradacin e incluso la mineralizacin de contaminantes inorgnicos como orgnicos presentes en el agua, bsicamente haciendo uso de un semiconductor (que en este caso es el xido metlico de transicin), una fuente de irradiacin, que en este caso, es la luz solar y la presencia de oxgeno atmosfrico como agente oxidante en el medio de reaccin. En resumen, la fotocatlisis se basa en la excitacin electrnica de un slido fotocatalizador (normalmente de banda ancha), que se encuentra sumergido en una solucin, mediante la absorcin de energa radiante (visible o UV) lo que produce reacciones simultneas de oxidacin y reduccin en diferentes zonas de la regin interfacial que existe entre el catalizador y la solucin (ambas fases).

a constante de equilibrio aparente (ver el captulo 8) de una reaccin bioqumica, en general, es funcin del pH. Las reacciones qumicas de inters biolgico se estudian generalmente en presencia de una disolucin reguladora que mantenga el pH constante, y casi siempre en un valor prximo a la neutralidad. Si medimos la constante de equilibrio de una reaccin bioqumica, manteniendo el pH constante (por ejemplo en 6.5), obtendremos un valor para dicha constante; si cambiamos el pH (incluso dentro del entorno de la neutralidad, por ejemplo 7.7), el valor de la constante puede ser distinto. Vamos a ver por qu: Podemos clasificar las reacciones de inters biolgico en tres grupos: a) Aquellas en las que se consuman se produzcan protones de forma estequiomtrica, por ejemplo la aparicin de lactato como producto final de la gluclisis anaerbica, a partir de piruvato, que sufre una reduccin por NADH, en una reaccin catalizada por la Lactato Deshidrogenasa,

CH3 - CO - COO- + NADH + H+ = NAD+ + CH3 - CHOH - COO-

[1]

En esta reaccin se consume un mol de H+ por cada mol de piruvato y de NADH. La constante de equilibrio tendr la forma: [NAD+] [lactato] -------------------------------------[piruvato] [NADH][H+]

K =

[2]

Puesto que se trabaja a pH constante, [H+] ser una constante, por tanto si multiplicamos los dos miembros de la igualdad por esa constante que es la concentracin de H+, [H+], y llamamos K' al producto K[H+], tendremos: [NAD+] [lactato] K' = K[H ] = --------------------------[3] [piruvato][NADH] La expresin que define K' ya no incluye la concentracin de [H+], y como + K' = K[H ], la constante K', definida segn [3] es funcin de la concentracin de H+, y por tanto del pH. En este ejemplo el valor de K' (a pH 7) es 1.6 x 104 (E.L. Smith y otros. en PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY. McGrawHill 7th edition. p396-397). A este pH la reaccin se encuentra muy desplazada, en el equilibrio, hacia la formacin de lactato. Si quisiramos que, en el equilibrio hubiese una concentracin menor de lactato, y cosecuentemente mayor de piruvato, debemos disminuir la concentracin de H+ (subir el pH). De hecho la Lactato Deshidrogenasa se puede ensayar en ambas direcciones (J.B.Neilands en METHODS IN ENZYMOLOGY (Ed. S.P. Kolowick) Vol1 (1955) p 449), y cuando se ensaya midiendo el aumento de absorbancia a 340 nm, debido a la aparicin de NADH, el pH se ajusta a 10, de forma que aumente la cantidad de NADH que puede aparecer en la reaccin.
+

El correspondiente valor de incremento de energa libre standard ser: DG' = -RT Ln K' [4]

Obviamente este valor de DG' tambin es funcin del pH. En las tablas se incluye normalmente el valor a pH 7. Si en lugar del ejemplo que hemos visto, en el que se consumen H+, hubisemos utilizado una reaccin en la que los H+ aparecen como productos, la relacin entre K' y [H+] sera, como es fcil de comprobar, K' = K / [H+]. b) Reacciones en las que participen especies con grupos disociables que posean valores de pK prximos a la neutralidad. Esta es con mucho la situacin ms frecuente, y tambin la ms difcil de manejar. No obstante, desde el punto de vista experimental se ha resuelto de forma simple y eficaz: Los cidos lctico y pirvico poseen valores de pK de 3.86, y 2.5, respectivamente, de forma que a valores de pH prximos a la neutralidad ambas especies estn totalmente disociadas, siendo el lactato, y el piruvato, las bases conjugadas predominantes. Por esta razn la constante de equilibrio definida en [3] incluye las concentraciones de ambas formas disociadas. Sin embargo, en el caso de reacciones en

las que participen epecies que posean grupos disociables con valores de pK prximos a la neutralidad, ambas formas, disociada y sin disociar, poseern una concentracin apreciable en el entorno de pH neutro. En estos casos existe el convenio (de amplia utilizacin en Bioqumica) de usar la suma de las concentraciones de ambas formas, disociada y sin disociar, en todas las expresiones que definen la constante de equilibrio. Este convenio, que simplifica mucho las cosas, implica ciertas complicaciones tericas. Veamos un ejemplo: La fosforilasa del glucgeno cataliza la siguiente reaccin, mediante la cual los residuos de glucosa que componen el glucgeno se incorporan a la ruta anaerbica de la gluclisis: (Glucgen)n + Fosfato = (Glucgeno)n-1 + Glucosa-1Fosfato [5] El Glucgeno es un polmero de glucosa muy ramificado, heterogneo y de muy elevado grado de polimerizacin, de forma que la diferencia entre (Glucgeno)n y (Glucgeno)n-1, desde el punto de vista de concentracin es irrelevante, y la constante de equilibrio de la reaccin anterior se puede escribir como: [G-1-P] K' = -----------------------------[6] [P] Donde G-1P, y P estn por Glucosa-1Fosfato, y Fosfato respectivamente. El segundo pK de la G-1-P vale 6.5, y el del Fosfato 7.19, de forma que a valores de pH prximos a la neutralidad se darn los equilibrios: G-1-PH- = G-1-P2- + H+ [7] PO4H2- = PO4H2- + H+ [8] A cualquier valor de pH prximo a siete tendremos una concentracin significativa de ambas formas, disociada y sin disociar, de fosfato, y tambin de G-1-P. Las concentraciones que figuran en [6] sern entonces; ([ G-1-PH- ] + [ G-1-P2- ]) K' = -------------------------------------------[9] 2([PO4H2 ] + [PO4H ]) El convenio de utilizar la suma de las concentraciones de todas las especies presentes al pH al que se trabaje resulta muy conveniente, ya que cuando se mide la concentracin de Fosfato, de G-1-P, se mida esa concentracin total. El resultado, no obstante es que la constante de equilibrio que se mide resulta funcin del pH, ya que al cambiar ste, cambiarn las cantidades relativas de G-1-PH- y G-1-P2-, de PO4H2y PO4H2- , presentes en el equilibrio. La relacin entre la constante de equilibrio y el pH se puede obtener de forma sencilla para este ejemplo, introduciendo las constantes de disociacin correspondientes a los equilibrios [7] y [8] en [9]. El resultado final es: K = ([ G-1-P2- ]/[ PO4H2-]) (( 1 + [H+] / KG ) / (1 + [H+] / KP)) [10] donde KG y KP son las constantes de disociacin correspondientes a [7] y[8]. La ecuacin [10] nos da la constante K en funcin de las concentraciones de equilibrio de las formas disociadas de ambos reactivos, y de la concentracin de protones. Como el valor de KG es mayor que el de KP, K aumenta con el pH. En el lmite de alto pH, la ecuacin [10] se convierte en: K = [ G-1-P2- ]/[ PO4H2-] [11] Y en el lmite opuesto de bajo vlor de pH, la ecuacin [10] se convierte en: K = ( [ G-1-P2- ]/[ PO4H2-]) (KP / KG) [12] De nuevo se puede comprobar que, al ser KP menor que KG, la constante K aumenta de valor al aumentar el pH.

Ecuaciones similares a [10] se pueden obtener para distintas reacciones bioqumicas con diferentes estequiometras en cuanto a especies disociables, pero siempre se obtendr una constante de equilibrio funcin del pH. Finalmente queda el tercer grupo de reacciones que sera aquel en el los H+ ni aparecen de forma estequimtrica, ni como consecuencia de grupos disociables. En estos casos el pH no influye en la constante de equilibrio, aunque por razones de carcter cintico, o por la presencia de macromolculas biolgicas en general, resulte siempre conveniente trabajar a un pH constante a constante de equilibrio aparente (ver el captulo 8) de una reaccin bioqumica, en general, es funcin del pH. Las reacciones qumicas de inters biolgico se estudian generalmente en presencia de una disolucin reguladora que mantenga el pH constante, y casi siempre en un valor prximo a la neutralidad. Si medimos la constante de equilibrio de una reaccin bioqumica, manteniendo el pH constante (por ejemplo en 6.5), obtendremos un valor para dicha constante; si cambiamos el pH (incluso dentro del entorno de la neutralidad, por ejemplo 7.7), el valor de la constante puede ser distinto. Vamos a ver por qu: Podemos clasificar las reacciones de inters biolgico en tres grupos: a) Aquellas en las que se consuman se produzcan protones de forma estequiomtrica, por ejemplo la aparicin de lactato como producto final de la gluclisis anaerbica, a partir de piruvato, que sufre una reduccin por NADH, en una reaccin catalizada por la Lactato Deshidrogenasa,

CH3 - CO - COO- + NADH + H+ = NAD+ + CH3 - CHOH - COO-

[1]

En esta reaccin se consume un mol de H+ por cada mol de piruvato y de NADH. La constante de equilibrio tendr la forma:

[NAD+] [lactato] K = -------------------------------------[piruvato] [NADH][H+] [2]

Puesto que se trabaja a pH constante, [H+] ser una constante, por tanto si multiplicamos los dos miembros de la igualdad por esa constante que es la concentracin de H+, [H+], y llamamos K' al producto K[H+], tendremos:

[NAD+] [lactato] K' = K[H+] = --------------------------[piruvato][NADH] La expresin que define K' ya no incluye la concentracin de [H+], y como K' = K[H+], la constante K', definida segn [3] es funcin de la concentracin de H+, y por tanto del pH. [3]

En este ejemplo el valor de K' (a pH 7) es 1.6 x 104 (E.L. Smith y otros. en PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY. McGrawHill 7th edition. p396-397). A este pH la reaccin se encuentra muy desplazada, en el equilibrio, hacia la formacin de lactato. Si quisiramos que, en el equilibrio hubiese una concentracin menor de lactato, y cosecuentemente mayor de piruvato, debemos disminuir la concentracin de H+ (subir el pH). De hecho la Lactato Deshidrogenasa se puede ensayar en ambas direcciones (J.B.Neilands en METHODS IN ENZYMOLOGY (Ed. S.P. Kolowick) Vol1 (1955) p 449), y cuando se ensaya midiendo el aumento de absorbancia a 340 nm, debido a la aparicin de NADH, el pH se ajusta a 10, de forma que aumente la cantidad de NADH que puede aparecer en la reaccin.

El correspondiente valor de incremento de energa libre standard ser:

DG' = -RT Ln K'

[4]

Obviamente este valor de DG' tambin es funcin del pH. En las tablas se incluye normalmente el valor a pH 7.

Si en lugar del ejemplo que hemos visto, en el que se consumen H+, hubisemos utilizado una reaccin en la que los H+ aparecen como productos, la relacin entre K' y [H+] sera, como es fcil de comprobar, K' = K / [H+].

b) Reacciones en las que participen especies con grupos disociables que posean valores de pK prximos a la neutralidad. Esta es con mucho la situacin ms frecuente, y tambin la ms difcil de manejar. No obstante, desde el punto de vista experimental se ha resuelto de forma simple y eficaz:

Los cidos lctico y pirvico poseen valores de pK de 3.86, y 2.5, respectivamente, de forma que a valores de pH prximos a la neutralidad ambas especies estn totalmente disociadas, siendo el lactato, y el piruvato, las bases conjugadas predominantes. Por esta razn la constante de equilibrio definida en [3] incluye las concentraciones de ambas formas disociadas. Sin embargo, en el caso de reacciones en las que participen epecies que posean grupos disociables con valores de pK prximos a la neutralidad, ambas formas, disociada y sin disociar, poseern una concentracin apreciable en el entorno de pH neutro. En estos casos existe el convenio (de amplia utilizacin en Bioqumica) de usar la suma de las concentraciones de ambas formas, disociada y sin disociar, en todas las expresiones que definen la constante de equilibrio. Este convenio, que simplifica mucho las cosas, implica ciertas complicaciones tericas. Veamos un ejemplo:

La fosforilasa del glucgeno cataliza la siguiente reaccin, mediante la cual los residuos de glucosa que componen el glucgeno se incorporan a la ruta anaerbica de la gluclisis:

(Glucgen)n + Fosfato

(Glucgeno)n-1 + Glucosa-1-Fosfato

[5]

El Glucgeno es un polmero de glucosa muy ramificado, heterogneo y de muy elevado grado de polimerizacin, de forma que la diferencia entre (Glucgeno)n y (Glucgeno)n-1, desde el punto de vista de concentracin es irrelevante, y la constante de equilibrio de la reaccin anterior se puede escribir como: [G-1-P] K' = -----------------------------[P] Donde G-1P, y P estn por Glucosa-1Fosfato, y Fosfato respectivamente. El segundo pK de la G-1-P vale 6.5, y el del Fosfato 7.19, de forma que a valores de pH prximos a la neutralidad se darn los equilibrios: G-1-PHPO4H2- = = G-1-P2PO4H2+ + H+ H+ [7] [8] [6]

A cualquier valor de pH prximo a siete tendremos una concentracin significativa de ambas formas, disociada y sin disociar, de fosfato, y tambin de G-1-P. Las concentraciones que figuran en [6] sern entonces; ([ G-1-PH- ] + [ G-1-P2- ]) K' = -------------------------------------------([PO4H2- ] + [PO4H2- ]) El convenio de utilizar la suma de las concentraciones de todas las especies presentes al pH al que se trabaje resulta muy conveniente, ya que cuando se mide la concentracin de Fosfato, de G-1-P, se mida esa concentracin total. El resultado, no obstante es que la constante de equilibrio que se mide resulta funcin del pH, ya que al cambiar ste, cambiarn las cantidades relativas de G-1-PH- y G-1-P2-, de PO4H2- y PO4H2- , presentes en el equilibrio. La relacin entre la constante de equilibrio y el pH se puede obtener de forma sencilla para este ejemplo, introduciendo las constantes de disociacin correspondientes a los equilibrios [7] y [8] en [9]. El resultado final es: K = ([ G-1-P2- ]/[ PO4H2-]) (( 1 + [H+] / KG ) / (1 + [H+] / KP)) [10] [9]

donde KG y KP son las constantes de disociacin correspondientes a [7] y[8]. La ecuacin [10] nos da la constante K en funcin de las concentraciones de equilibrio de las formas disociadas de ambos reactivos, y de la concentracin de protones. Como el valor de KG es mayor que el de KP, K aumenta con el pH. En el lmite de alto pH, la ecuacin [10] se convierte en: K = [ G-1-P2- ]/[ PO4H2-] [11]

Y en el lmite opuesto de bajo vlor de pH, la ecuacin [10] se convierte en: K = ( [ G-1-P2- ]/[ PO4H2-]) (KP / KG) [12]

De nuevo se puede comprobar que, al ser KP menor que KG, la constante K aumenta de valor al aumentar el pH.

Ecuaciones similares a [10] se pueden obtener para distintas reacciones bioqumicas con diferentes estequiometras en cuanto a especies disociables, pero siempre se obtendr una constante de equilibrio funcin del pH. Finalmente queda el tercer grupo de reacciones que sera aquel en el los H+ ni aparecen de forma estequimtrica, ni como consecuencia de grupos disociables. En estos casos el pH no influye en la constante de equilibrio, aunque por razones de carcter cintico, o por la presencia de macromolculas biolgicas en general, resulte siempre conveniente trabajar a un pH constante

Bioquimica Los microorganismos desarrollan actividades qumicas en forma organizada a travs de las clulas que comprenden la produccin y utilizacin de energa, proceso que se conoce con el nombre de metabolismo. La bioenergtica estudia las formas de producir y consumir energa por parte de las clulas. Gran cantidad de clulas obtienen energa atravs de una serie de reacciones qumicas que liberan energa. Otras utilizan la luz como fuente energtica pero, deben convertirla a energa qumica para poder utilizarla. Para estudiar los distintos procesos metablicos se debe partir del concepto de energa libre G o sea la cantidad de energa liberada o consumida durante el desarrollo de una reaccin qumica; teniendo en cuenta que la energa til es el cambio en energa libre. Una reaccin es endergnica cuando requiere energa y G es positiva, y una reaccin es exergnica cuando libera energa siendo G negativa. G se relaciona con la constante de equilibrio de la reaccin, as: G a 25C y 1 atm. = - R T Ln Keq. Donde R= constante de los gases y T= temperatura absoluta La energa puede obtenerse de una reaccin qumica en la forma de potencial elctrico. La energa elctrica es generada cuando la oxidacin ocurre por remocin de electrones; se produce energa cuando los electrones caen atravs de una diferencia de potencial. G = - n F E Siendo n = nmero de electrones transferidos, F= constante de Faraday y E= diferencia de potencial de xido-reduccin estndar. Para la vida es esencial que la energa liberada de una reaccin exergnica sea usada para efectuar las reacciones endergnicas. Este acoplamiento de reacciones se basa en el principio de un reactante comn. Los reactantes comunes son muy tiles a las clulas y se denominan compuestos de transferencia de alta energa. Entre los principales estn: el ATP adenosin trifosfato; el GTP guanosintrifosfato; el UTP uridintrifosfato; el CTP o citidintrifosfato; el cido fosfoenol pirvico y el acetil fosfato. Por ejemplo para el ATP Los procesos metablicos comprenden la oxidacin: o sea la remocin de electrones o de tomos de hidrogeno, con ayuda de la coenzima A, la cual es reducida y convertida en

NADH; y la Fosforilacin oxidativa o sea cuando los electrones son transferidos del NADH atravs de una serie de reacciones utilizando coenzimas, hasta el aceptor final de electrones. Durante estas transferencias una parte de la energa disponible es transferida al ADP (adenosin difosfato), y otra parte se pierde como calor, debido a una transferencia ineficiente. Parte del ATP puede formarse directamente en las transformaciones orgnicas, como en la transformacin de glucosa en piruvato. El nitrato puede utilizarse como aceptor final de electrones por organismos facultativos que viven en condiciones intermedias entre aerobias y anaerobias, llamadas anoxicas, las cuales se caracterizan por producir finalmente CO2, H2O y Nitrgeno gaseoso y no producen metano, dixido de carbono y cido sulfhdrico como en condiciones anaerobias. La oxidacin es la prdida de electrones y la reduccin la ganancia de los mismos, muchas reacciones de oxidacin son deshidrogenaciones. La oxidacin incluye la transferencia de electrones por una sustancia reducida denominada donador de electrones a una sustancia oxidada llamada aceptor de electrones. Pueden ser donadores de electrones: los alimentos, el amoniaco NH3, el cido sulfhdrico H2S, el Hidrogeno H2 y el Hierro ionico Fe. La materia orgnica es utilizada como alimento por las bacterias y los hongos como lo hacen los animales mayores. Sinembargo algunas bacterias utilizan materia inorgnica reducida, como fuente de energa. Se llaman heterotrofas las que necesitan oxidar materia orgnica como fuente de energa y autotrofas (capaces de mantenerse a s mismas) las que oxidan materia inorgnica que toman del medio como Nitrgeno, Azufre, Fsforo, dixido de carbono e Hidrgeno. La energa es transferida del donador de electrones al organismo por una serie de reacciones enzimticas, para sntesis y mantenimiento. ADP + fosfato + energa ATP + H2O El ADP utiliza la energa liberada en la oxidacin para formar un enlace con fosfato y formar otro nucletido: ATP que viaja atravs de la clula y entrega esa energa. En la respiracin aerobia el aceptor final de electrones es el oxgeno, en la anaerobia, el aceptor final puede ser uno de los siguientes compuestos: fumarato, NO3-, SO4-2 el CO3-2. En la fermentacin, el aceptor final de electrones es un compuesto orgnico. En la transferencia de energa el ATP desempea el papel de unidad de cambio, similar al de una moneda, y por lo tanto el nmero de molculas de ATP que se forman constituye el factor crucial de la reaccin productora de energa. Por medio de los procesos de fermentacin, una molcula de glucosa da lugar a dos de ATP, y en cambio en el proceso de respiracin se forman 38 molculas de ATP.

GLUCOLISIS Condiciones aerobias: GLUCOSA Ferm METABOLITOS INTERMEDIOS resp. O2 CO2 + H2O Piruvato Condiciones anaerobias Glucosa a. pirvico productos de fermentacin C6H12O6 + 2NAD + 2ATP + 2Pi 2CH3COCOOH + 2NADH + 2ATP Glucosa fsforos cido pirvico inorgnicos Parte del ATP puede formarse directamente en las transformaciones orgnicas, como en la transformacin de glucosa en piruvato. El nitrato puede utilizarse como aceptor final de electrones por organismos facultativos que viven en condiciones intermedias entre aerobias y anaerobias, llamadas anoxicas, las cuales se caracterizan por producir finalmente CO2, H2O y Nitrgeno gaseoso y no producen metano, dixido de carbono y cido sulfhdrico como en condiciones anaerobias. Las reacciones balanceadas para estas oxidaciones y reducciones pueden ser obtenidas por combinacin de las reacciones medias de la siguiente: como en condiciones anaerobias. :