UNIVERSIDAD MANUELA BELTRN MACROPROCESO DE RECURSOS E INFRAESTRUCTURA ACADMICA FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO Fecha: Diciembre 2010 Cdigo:

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INFORMACIN BSICA NOMBRE DE LA PRCTICA: EXTRACCIN DE ADN ASIGNATURA: Biologa TEMA DE LA PRCTICA: PRACTICA No. 11

Extraccin sencilla de ADN (cido desoxirribonucleico) de material vegetal LABORATORIO A UTILIZAR: Biologa

CONTENIDO DE LA GUA OBJETIVOS DE LA PRCTICA DE LABORATORIO.

Extraer ADN de materia vegetal Discutir la diferencia entre la molcula de ADN y ARN

INTRODUCCIN.

Los cidos nucledos, ADN (cido desoxirribonucleico) y ARN (cido desoxirribonucleico) son polmeros especializados en almacenar, transmitir y expresar la informacin gentica en secuencias de aminocidos, las cuales luego de algunos procesos (Traduccin) conforman las protenas de una clula. Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o bandas formadas por un numeroso grupo de compuestos qumicos llamados nucletidos. Estas cadenas forman una estructura (de escalera retorcida) que se llama doble hlice. Cada nucletido est formado por tres unidades: una molcula de azcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos nitrogenados llamados bases: Adenina (abreviada como A), Guanina (G), estas son Purinas, Timina (T) y Citosina (C), estas son pirimidnicas; La molcula de desoxirribosa ocupa el centro del nucletido y est rodeada por un grupo fosfato a un lado y una base al otro. El grupo fosfato est a su vez unido a la desoxirribosa del nucletido contiguo de la cadena. Estas subunidades enlazadas desoxirribosa-fosfato forman los lados de la escalera; las bases estn enfrentadas por parejas (Figura 1).

Figura 1. Estructura molecular del ADN, tomado de:

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/imagenes/adn2.jpg

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La estructura del ADN es de doble cadena, lo que probablemente da una mayor proteccin a la informacin contenida en la molcula. La estructura del ARN es monocatenaria aunque, puede presentarse en forma lineal como el ARNm o en forma plegada cruciforme como ARNt y ARNr (Figura 2).

Figura 2. Representacin de las cadena de ARN y ADN, tomado de: http://www.biotecnologica.com/wp-content/imagenes/2007/06/rna.png Otra diferencia entre ADN y ARN es su componente de pentosa (azcar), el ADN cuenta con desoxirribosa y el ARN con ribosa, el ADN est compuesto por Adenina, Timina Guanina y Citosina, el ARN sustituye la Timina por Uracilo (Figura 3).

Figura 3. Comparacin entre estructuras de ADN y ARN, tomado de: http://1.bp.blogspot.com/_nYuxqpFpBsI/R09fyr0JqUI/AAAEQ/L3iD6D96Xew/s320/ADN_ARN.jp g

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Reactivos y Reaccin

Agua destilada: Agua a la que se le han eliminado iones e impurezas mediante destilacin. Isopropanol o Alcohol isoamlico: H3C-HCOH-CH3. Es un alcohol incoloro, inflamable, de olor intenso, compuesto no polar, en la prctica permite la precipitacin del ADN. Azul de metileno (Cloruro de Metilionina): C16H18ClN3S, es un compuesto de variadas aplicaciones, entre estas la capacidad de teir tejidos viables, en la prctica tie las fibras de ADN. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR (INDICAR LAS CANATIDADES). MATERIALES Mortero y pistilo (5) Beaker 200 ml. (1) Centrfuga. (1) Probeta 25 ml. (5) Cubeta con hielo (1) Pipeta 10 ml. (5) Tubos de Ensayo con tapn (20) Agitador de vidrio (5) Nevera (1) Balanza digital (1) PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO ESPECIALIZADO. Con precaucin y cuidado manipular la balanza digital normal y la balanza de precisin. REACTIVOS Agua destilada (300 ml.) Isopropanol (o Alcohol isoamlico) a 0C. (50 ml.) Azul de metileno. (2 ml.) MATERIALES ESTUDIANTE Cloruro de Sodio (Sal) (5 gr.) Bicarbonato de Sdio (5 gr.) Champ (Jabn lquido) (5 ml.) Cebolla cabezona (material vegetal) 1 cebolla mediana por grupo Bistur (1 por grupo)

PROCEDIMIENTO: 1. Preparacin de la solucin tampn. En un beaker de 200 ml mezclar: 120 ml de agua destilada, 4.5 gr de Sal, 5 gr de Bicarbonato de Sodio, 5 ml de Champ.

2. Preparacin del material biolgico Se corta en cuadritos el material vegetal (cebolla), se le aade un poco de agua destilada y a continuacin se tritura utilizando el mortero, hasta dejar sin partculas el macerado.

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3. Mezcla del pur con el tampn fro En una probeta de 25 ml se depositan 5 ml del macerado obtenido en el paso anterior y se aaden 10 ml de la Solucin tampn fro. Se agita fuertemente durante 2 min.

10 l

5 ml

15 ml

4. Centrifugacin por 10 minutos a baja velocidad El contenido de la probeta se separa en los dos tubos de ensayo pequeos, de manera que los dos tengan la misma cantidad. A continuacin estos tubos se ponen en la centrfuga durante 5 min.

5. Recoger el sobrenadante Tras la centrifugacin se recoge el sobrenadante (con cuidado de no agitar el precipitado) de cada uno de los tubos De ensayo hasta completar 5 ml; para ello nos ayudamos de una pipeta. Este sobrenadante se pone en otro Tubo de ensayo limpio. Pipeta

6. Aadir el alcohol isoamilico o isopropanol Se aade 10 ml de alcohol isoamlico o isopropanol fro lentamente al tubo que contiene el sobrenadante, se deja caer el isopropanol o alcohol isoamlico sobre las paredes de la probeta. Se debe dejar escurrir lentamente el el alcohol por la pared interna del tubo, teniendo este inclinado. El alcohol quedara flotando sobre el tampn.

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7. Recoger el ADN con una varilla de vidrio Tras aadir el alcohol (isopropanol o isoamlico) en nuestra muestra han quedado dos fases, una superior (contiene el alcohol) y otra inferior. Se introduce la pipeta en la interface entre el alcohol y el resto de la muestra y se va extrayendo con cuidado, en este material se encuentra el ADN

Alcohol ADN Sedimento 8. Aadir una gota de azul de metileno El mtodo que hemos utilizado para extraer al ADN no es del todo eficiente, ya que en la muestra todava queda ADN sin extraer. Al aadir el azul de metileno, en la interface, se teirn las fibras de ADN que no hemos conseguido extraer.

RESULTADOS: Describa lo observado en los procedimientos realizados, desde el paso 3 al 8.

Cuestionario: 1. Explica la composicin del ADN y del ARN. 2. Realiza una descripcin de la funcin de cada base nitrogenada en el ADN y el ARN

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Conclusiones (Escriba como mnimo 3 conclusiones) ____________________________________________________________

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Causas de Error: ____________________________________________________________

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Para la prxima gua No olvidar revisar materiales (copitos de algodn, palillos) procedimientos y puntos a resolver. BIBLIOGRAFIA MADER, S. 2008. Biologa. 9na Edicin. McGraw Hill. Mxico, D.F. MATTA, N; GARCIA, M. 1997. Curso libre juvenil en Biologa. Facultad de Ciencias. Departamento de

Biologa. Universidad Nacional de Colombia. PERSON, 2010.Biologia. Mxico, D.F.

ELABOR

REVIS

APROB

Firma : Nombre: Equipo Docente de Laboratorios de Biologa.

Firma : Nombre: Equipo docente Laboratorios de Biologa.

Firma : Nombre : Equipo docente laboratorios de Biologa. Gerencia de Laboratorios Fecha: Diciembre 2010

Fecha:

Diciembre 2010

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