OBJETIVOS

Objetivo General Reconocer el proceso de la Actividad Uresica en muestras de origen biolgico.

Objetivos Especficos Reconocer los trminos y la fundamentacin terica que comprenden la Actividad Uresica (AU) Producir la hidrlisis de la urea por medio de la enzima amidohidrolasa denominada ureasa. Cuantificar la Actividad Uresica (AU) en muestras de origen biolgico, mediante la tcnica volumtrica de Berthelot.

MARCO TERICO

La urea, tambin conocida como carbamida, carbonildiamida o cido arbamdico, es el nombre del cido carbnico de la diamida. Su frmula qumica es CH4N2O, la urea, es un compuesto qumico cristalino, incoloro, con un punto de fusin de 132.7C.

Propiedades de la urea Peso molecular 60.06 g/mol Densidad 768 Kg/m3 Punto de fusin 132.7C Calor de fusin 5.78 a 6 cal/gr Calor de combustin 2531 cal/gr Humedad crtica relativa (a 30C): 73% ndice de salinidad 75.4 Corrosividad: corrosivo al acero al carbn, poco al aluminio, zinc y cobre. No lo es al vidrio y aceros especiales

Principales reacciones de la urea Por termo descomposicin, a temperaturas cercanas a los 150 160C, produce gases inflamables y txicos y otros compuestos. Por ejemplo amonaco, dixido de carbono, cianato de amonio (NH4OCN) y biurea HN (CONH2)2. Si se contina calentando, se obtienen compuestos cclicos del cido cinabrio. Soluciones de urea neutra, se hidrolizan muy lentamente en ausencia de microorganismos, dando amonaco y dixido de carbono. La cintica aumenta a mayores temperaturas, con el agregado de cidos o bases y con un incremento de la concentracin de urea.

El nitrgeno de la urea, que constituye la mayor parte del nitrgeno de la orina, procede de la descomposicin de las clulas del cuerpo pero, sobre todo, de las protenas de los alimentos. La urea se forma principalmente en el hgado como un producto final del metabolismo, en el caso del hombre y los mamferos resulta como producto de la eliminacin del amonaco, el cual es altamente txico para los mismos y es excretado en grandes cantidades por la orina; en cantidades menores, est presente en la sangre, en el hgado, en la linfa y en los fluidos serosos. La urea est presente tambin en mohos de los hongos as como en las hojas y semillas de numerosas legumbres y cereales. Es soluble en agua y en alcohol, y ligeramente soluble en ter.

Por otra parte, se encuentran en el suelo numerosas bacterias que liberan una enzima llamada ureasa. La ureasa es una enzima hidroltica que cataliza la reaccin de descomposicin de urea por el agua, con formacin de una molcula de anhdrido carbnico y dos molculas de amonaco.

El ciclo de la urea, es el proceso que consiste en la formacin de urea a partir de amonaco. En los humanos al igual que en el resto de los mamferos, la urea es un producto de desecho, producido cuando el cuerpo ha digerido las protenas. Esta es llevada a travs de la sangre a los riones, los cuales filtran la urea de la sangre y la depositan en la orina. Un hombre adulto elimina aproximadamente unos 28 g de urea por da.

El sustrato de urea, una diamida del cido carbnico, a menudo se designa como una carbamida.

Todas las amidas

son hidrolizadas con facilidad. La urea es hidrolizada

por una enzima especfica, la ureasa tambin llamada urea amidohidrolasa, para dar dos molculas de amoniaco. En solucin, la urea se hidroliza a carbonato de amonio como producto final.

La

ureasa

es

una

importante

enzima

microbiana

relacionada

con

la

descomposicin de los compuestos orgnicos. Las enzimas bacterianas se clasifican como constitutivas o adaptativas. Una enzima adaptativa o inducida se produce slo cuando su sustrato especfico est presente. La ureasa es considerada constitutiva debido a que es sintetizada por ciertas bacterias sin tomar en consideracin la presencia o la ausencia de su sustrato, la urea.

Existen dos amplias divisiones de enzimas: a) Hidrolasas, que estn relacionadas con la hidrlisis (agregado de agua) de steres, hidratos de carbono, protenas y amidas. b) Aquellas relacionadas con diversas reacciones de oxidacin-reduccin.

La ureasa se clasifica como una amidasa, ya que cataliza la hidrlisis de las amidas. Oppenheimer incluy entre las amidas a todas las enzimas que pueden romper los puentes entre el nitrgeno y el carbono por hidrlisis.

En el caso de la ureasa, el nitrgeno es disociado como amoniaco (NH 3). La ureasa acta en los compuestos a nivel de los puentes C-N, excepto en aquellos que contienen puentes pptidos. El pH ptimo para la actividad Uresica es de 7.

Hidrolisis de la Urea La urea o carbamida es una diamida que se degrada por medio de una amidasa llamada ureasa. Se rompe en enlace del nitrgeno con el carbono, con liberacin de amoniaco y CO2. El medio con urea es adicionado de un indicador de pH (rojo de fenol). El amoniaco libre alcaliniza el pH y el indicador vira a color violeta, es as como se presenta la Hidrolisis de la Urea.

El mtodo de Berthelot es una reaccin enzimtica de la Urea presente en la muestra en la que se forma un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.

REACCIONES QUMICAS PRESENTES EN LA PRCTICA

Nombre

Descripcin Elementos o compuestos sencillos que se unen para

Reaccin de sntesis

formar un compuesto ms complejo. A+B AB Un compuesto se fragmenta en elementos o

Reaccin de descomposicin

compuestos ms sencillos. En este tipo de reaccin un solo reactivo se convierte en zonas o productos. AB A+B

Reaccin de desplazamiento o simple sustitucin

Un elemento reemplaza a otro en un compuesto. A + BC AC + B

Tabla 1. Reacciones Qumicas presentes en la prctica

LISTA DE MATERIALES Y REACTIVOS

Lista de Materiales Bao termostatado. Beaker de 400mL Bureta de 25mL. Centrifuga Erlenmeyer de 125mL Matraz aforado de 100mL Pinzas para bureta Pipeta de 10mL Pipeta de 5mL Probeta Soporte universal. Tubo de centrifuga Tubo de ensayo con gradilla Vaso de precipitado Tabla 2. Lista de Materiales, Reactivos y Muestras

Lista de Reactivos HgCl2 al 1% Indicador de Tashiro 10 mL NaCl 1% Buffer fosfato de pH = 7.0 Urea 0,25M Urea 0,25M HCl 0,1N Ureasa al 0,5 %

DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCEDIMIENTO

Proceso de Titulacin

Figura 1. Diagrama de Flujo del Procedimiento TABLA DE DATOS, RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Tubos Tipo de Muestra B St 1 2 3 Blanco Standard EHAU ESAU EFAU

mL gastados de HCl 0,1N 1 mL 1,4 mL 1,3 mL 1,1 mL 1,2 mL

Tabla 3. Volmenes de HCl 0,1N, empleados en la titulacin del NH4OH

Tubos Tipo de Muestra B St 1 2 3 Blanco Standard EHAU ESAU EFAU

Tiempo empleado (t) 5Seg 5Seg 6Seg 5Seg 4Seg

Tabla 4. Tiempo empleado (t)