20. NUTRICIN NITROGENADA. Introduccin.

Fijacin simbintica. Nodu acin. !"canismo bio#u$mico d" a %ijacin. R"duccin asimi adora d" nitratos. Asimi acin d" amonio "n as & antas. Contro d" a asimi acin d" nitr'"no &or a & anta.

O()ETI*O+, Comprender los procesos relacionados con la asimilacin del nitrgeno y su utilidad posterior.

Introduccin
El nitrgeno es un elemento esencial para la planta. Es muy abundante en el medio pero an as, existen muchas posibilidades de mineralizacin o evaporacin gaseosa, que hacen que estas fuentes de nitrgeno no sean asimilables. uchos suelos adem!s no tienen nitrgeno disponible y por ello es necesario el uso de fertilizantes "que siempre suelen llevar #itrgeno y otros dos elementos m!s$. %u deficiencia es muy visible en la planta porque su existencia es muy importante como componente de mol&culas imprescindibles' clorofila, auxinas, fitoquininas, amino!cidos, proteinas(

Fig.1 Efectos de la deficiencia en N

)as fuentes de nitrgeno m!s importantes para las plantas son' # atmosf&rico' "#2$ es una gran fuente "*+, de la atmsfera$. %e asimila cuando la planta entra en
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simbiosis con una bacteria. Este proceso tiene un importante impacto ecolgico as como gran importancia agronmica. En otros casos la planta no puede fi-ar esta forma. #o biolgica' nitratos, amonio(son formas asimilables por la planta pero generalmente no est!n disponibles.

Fijacin simbintica
%e produce en simbiosis con bacterias que s son capaces de asimilar el nitrgeno atmosf&rico "bien sea slo en simbiosis o tambi&n de forma independiente$, como puede ser Rhizobium "llega a fi-ar *x.+7 / al a0o$. En este caso la simbiosis se produce entre la bacteria y una leguminosa. Esta fi-acin es muy efectiva y suele utilizarse para la recuperacin de suelos degradados "fitorremediacin$. )a asociacin es recproca entre ambos, es decir, los dos organismos se benefician de la asociacin. 1epende de procesos que hacen que los dos se reconozcan mutuamente. %e conoce muy bien el modelo de Rhizobium y por eso es el tipo que vamos a estudiar. En este caso, como en muchos otros, la asociacin se produce en la raz. %e da un proceso de expresin g&nica diferencial que dar! lugar a una estructura llamada simbiosoma que contendr! a las bacterias modificadas " bacteroides$. 1e esta forma se va a poder llevar a cabo la reduccin de # atmosf&rico a amonio, porque las condiciones del simbiosoma van a permitir la funcin del enzima nitrogenasa, que necesita ausencia de oxgeno. /odo el proceso est! regulado por la disponibilidad de nitrgeno que tenga la planta. )os pasos del establecimiento de la simbiosis son' 2econocimiento celular modulado por aproximacin y se0alizacin 3nfeccin' crecimiento desorganizado Establecimiento de la simbiosis 13456/2674.

Nodulacin
Es el resultado de la infeccin. %e forman en la zona de los pelos radicales en la raz. Esto slo se produce cuando existe un
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d&ficit de # en la planta. %uele darse en regiones radicales -venes y en sus primeras etapas van acompa0adas de una curvatura del pelo radical.

Fig.2 Curvatura del pelo radical y formacin del ndulo

%lo cuando se produce el cambio de bacteria a bacteroide con la simbiosis, la bacteria es capaz de fi-ar # atmosf&rico porque es capaz de activar el enzima #itrogenasa. Cuando la planta necesita # comienza a excretar elicitores, que son mol&culas que la planta excreta y generan una respuesta. %uelen ser flavonoides que producen la aproximacin de la bacteria por quimiotaxis y la expresin de los genes #61 "nodulacin$. )a bacteria, a su vez, libera lipopolisac!ridos y la planta expone en la zona de infeccin mol&culas tipo lectina. 4s se va a provocar la expresin en la bacteria de los genes #37 "fi-acin$. El bacteroide se forma porque la bacteria entra formando un canal de infeccin mediante te-idos de la planta, y en su entrada la bacteria queda envuelta en restos de membrana de la c&lula vegetal "membrana peribacteroide$. 8arios bacteroides se incorporan a zonas diferenciadas formando los simbiosomas.
Fig.3 Ejemplo de ndulo

1ependiendo del clima nos podemos encontrar con distintos tipo de ndulos' C. templados' ndulos con crecimiento determinado. %in c&lulas meristem!ticas. E-em. 9uda. C. tropicales' ndulos con crecimiento ilimitado. Con diferentes poblaciones celulares, entre ellas meristem!ticas. E-em. 4lfalfa.

4mbos van a estar formados por un ncleo con c&lulas con actividad nitrogenasa "central$ y c&lulas con vacuolas rode!ndolo, que sirven como c&lulas de tranferencia. )os indeterminados suelen tener espacios intercelulares y m!s vacuolas en las c&lulas perif&ricas. )os determinados tienen lent&celas externas para facilitar el intercambio de amonio yu nio suelen tener c&lulas de transferencia. En todo el proceso hay una potente interaccin entre la efectividad del ncleo y la actividad del simbiosoma. El # entra por las races hacia el simbiosoma donde se reduce a amonio. :ste es excretado al citroplasma de la c&lula vegetal y es en los cloroplastos o tambi&n en el propio citoplasma donde se forman los compuestos org!nicos necesarios. 1esde ellos se transportan a las zonas de consumo.

Mecanismo bioqumico de la fijacin

El # atmosf&rico es un compuesto muy estable y debe ser activado para transformarlo en otros compuestos. ;ara que se produzca de forma espont!nea se requieren presiones y temperaturas muy altas. Este proceso se conoce como proceso Haber- Bosch. ;ero el enzima nitrogenasa permite esta reduccin de forma m!s r!pida y sin necesidad de estas condiciones. #ecesita, eso s, un ambiente de anaerobiosis y gasto de 4/;. Este ambiente anaerobio lo proporciona la Leghemoglobina o, en otros casos, el que la reaccin se produzca en heterocistes "estructuras celulares diferenciadas donde no hay oxgeno$. El poder energ&tico y reductor proceden fundamentalmente del proceso fotosint&tico. )a nitrogenasa es un comple-o proteico. 7acilita una reaccin sencilla pero a la vez comple-a, porque tiene que modificar la estabilidad de la mol&cula de #2. ;artes de la actividad nitrogenasa cambian conformacionalmente frente a flu-os energ&ticos o procesos de oxido<reduccin. En plantas superiores se desconoce parte de su funcionamiento pero se sabe m!s en plantas m!s simples. )as caractersticas de la nitrogenasa fueron postuladas por ;ostgate en .=*> y son las siguientes' Es inhibida por 62 Consta de dos sistemas proteicos

 Contiene !tomos de metales de transicin para facilitar el trasiego de electrones y generalmente se acepta que son 7e y b. #ecesita g %u actividad requiere gasto de 4/; Es inhibida por 41; Como decimos la nitrogenasa esta formada por dos unidades proteicas "fig.?$' Unidad 1' es el centro donde se reduce el # 2 y el que tiene la actividad reductora. 7ormada por ? subunidades proteicas de unos @++ A1a. )leva 7e, b y %. Unidad2: formada por una 7e<protena son @ subunidades con ? !tomos de 7e y ? de %.

Fig.4 Actividad y estructura tridimensional de la Nitrogenasa

)a unidad . recibe electrones de la unidad @ de forma coordinada para producir la reduccin efectiva del # 2. )a 7erredoxina reduce a la unidad @ que, por activacin con 4/; y g reduce posteriormente a la unidad .. )a reaccin global sera' N2 + 6 + + 6e! !!!NI"#$%&N'('!!! 2 N ) 2 + + 2e! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 2 N2 + *e! + * + + n '"+ !!!!!!!!!!!! 2N ) +

+ n ',+ + n+i

)uego necesitamos * e! para reducir el nitrgeno atmosf&rico. Beneralmente por cada electrn se necesitan @ mol&culas de 4/; luego ser!n necesarias .C mol&culas de 4/; para reducir una mol&cula de #2 - El aporte de energa procede de la sacarosa que se forma por el proceso fotosint&tico, luego como es observable, la reduccin del nitrgeno es un proceso que conlleva un gasto importante de energa. 4l simbiosoma no llega sacarosa sino malato, que proporciona el poder asimilatorio necesario. :ste es incorporado por el simbiosoma mediante transportadores activados. El amonio va a ser fi-ado en el citoplasma o en los plastos de la c&lula infectada. 1ependiendo del tipo de ndulo se formar!n amidas "en ndulos indeterminados$ o ureidos "en ndulos determinados de zonas tropicales$.
Fig. #ojas Fijacin en ra!" con ndulo y transporte a las

#educcin asimiladora de nitratos .fijacin no biol/ica0

%e da en las plantas donde no ocurre la fi-acin biolgica por simbiosis con microorganismos. 7i-an entonces formas nitrogenadas del suelo asimilables por la raz, preferentemente #6 ). 4lgunas tambi&n pueden absorber amonio. En estos dos casos se produce una entrada selectiva a la c&lula receptora. En el caso del nitrato pueden darse dos situaciones' Dtilizacin inmediata en la c&lula 4cumulacin en vacuolas' ocurre cuando no es utilizado ya que, a determinadas concentraciones, puede resultar txico. ;uede ser utilizado en momentos de escasez. El proceso consiste en la reduccin de nitrato a nitrito. Este entra en los plastidios y se transforma en amonio que dar! lugar, en ltimo t&rmino, a amino!cidos. Estos amino!cidos son
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transportados a los lugares de consumo mediante el xilema. )a fi-acin de nitrato es selectiva y activa y se produce por cambios de membrana generados por una 4/;asa. )a reaccin general sera' #6)! <<<<<<<<<<<<<<<<<<<< #62! <<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<<#E1+
Fig.$ Fijacin de nitrato en la ra!" y transporte a los centros de consumo.

El paso de nitrato a nitrito est! catalizado por el enzima nitrato reductasa. Es un enzima citopl!smico que toma e ! del #41E preferentemente y produce reduccin del nitrato con participacin de 741, Citocromo b<FF> y olibdeno. El paso de nitrito a amonio est! catalizado por el enzima nitrito reductasa, que se encuentra en los plastos y toma e ! de la 7erredoxina. En su caso participa el %irohemo "tetrapirrol de 7e y %$.

'similacin 2lantas

de

amonio

en

El amonio de transforma en productos susceptibles de ser transportados y que son necesarios para en crecimiento de la planta. Eay un gasto de 4/; para que, mediante la /lutamina sintetasa se transfiera el amonio al glutamato para dar lugar a /lutamina. ;ara formar elementos m!s comple-os se realiza una transaminacin con participacin de 7erredoxina o n41;, generando 4spartato y 4sparragina que van a ser los vehculos de transporte. En algunos casos tambi&n se pueden formar ureidos.

Fig.% &roceso glo'al de la asimilacin no 'iolgica de nitrgeno.

3ontrol de la asimilacin de nitr/eno en 2lantas

El proceso de captacin est! sometido a regulacin. %abemos que la mayora de los elementos necesarios para el crecimiento y desarrollo de la planta pueden llegar a ser nocivos si su concentracin en la planta es demasiado alta y por ello es necesaria esta regulacin. En el caso de la asimilacin de nitrgeno existe una regulacin tanto de la actividad g&nica como de la enzim!tica. En esta regulacin intervienen varios factores como son' 1isponibilidad de #itrato en el entorno ;resencia o ausencia de luz 1isponibilidad de Blucosa Concentracin de productos "E-em. la presencia de Blutamina inhibe el proceso$ )a nitrato reductasa se inactiva por fosforilacin en el ltimo residuo de %erina por accin de una Ginasa. )a activacin se ve favorecida por el Calcio "porque favorece hidrlisis de 4/;$ y desfavorecida por la presencia de triosas fosfato. )a luz es un efector positivo porque elimina restos de fosfato de la serina.
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