Replicacin,Reparacin y Recombinacin de DNA

CAPITULO 24

INTRODUCCION

El proceso de replicacin es preciso, exacto y monitoreado cuidadosamente porque un cambio en el DNA va a producir una informacin incorrecta. Replicacin es un proceso semiconservador: la nueva banda est formada de una banda original y de una acabada de producir.

Experimento de Meselson-Stahl: utilizaron un proceso de centrifugacin por gradiente de densidad.

INTRODUCCION

Meselson and Stahl Experiment

La replicacin comienza en puntos especficos del DNA.

Replication fork
Dos regiones producen la burbuja. Ocurre en direcciones opuestas. Finaliza en el lado opuesto del DNA circular (theta model). En DNA eucaritico hay varios lugares de iniciacin, hay varias burbujas que finalmente producen dos molculas de DNA de doble cadena.

Several origins of replication

A pair of replication forks begins at each origin

As the forks advance in opposite directions, the bubbles coalesce to form doublestranded DNA molecules.

Polimerasa de DNA

Cataliza la replicacin de DNA: reaccin de polimerizacin. *Necesita: - template - Mg2+ - nucletidos - terminal 3` libre ( primer)

DNA Pol I en procariticos

DNA polimerasa I

Enzima Kornberg 5` 3` actividad enzimtica Actividad de exonucleasa : 3` 5` y 5` 3` DNA Pol II y DNA Pol III

DNA Polimerasa en eucariticos

Caractersticas del sistema de replicacin

DNA doble cadena debe abrirse. Ocurre desenrollamiento Copia simultneamente ambas bandas Replicacin en direccin 5` 3`

Puntos de iniciacin de replicacin

Movimiento del Tenedor

Lugares especficos donde ocurre inicio de replicacin: orgenes de replicacin(ori C). ori C : regin rica en A/T Desenrollamiento y sintess de bandas nuevas produce estructura Y : replication fork.

Nmero de tenedores vara. Direccin del movimiento: * unidireccional: mitocondria y virus * bidireccional: procariticos y eucariticos.

Unidad funcional de replicacin: replicon

Mecanismo de Replicacin

Desenrollamiento * dna A protein * helicase ( dna B protein) * single-strand binding proteins (SSB) * topoisomerase = DNA gyrase

Sntesis banda contnua

Leading

strand: DNA Pol III

Sntesis de banda no-contnua

Lagging strand * Okazaki fragments * DNA Pol I * DNA ligase

Enzimas para sntesis RNA primer

Pre-priming proteins Primase Primosome: conjunto de enzimas y protenas.

Terminacin de Replicacin y Procesamiento

Terminacin - punto especfico y usa protena. Procesamiento - metilaciones y mecanismos de reparacin.

MUTACIONES
Son cambios en la secuencia de bases del DNA. Las mutaciones pueden ser espontneas o inducidas. Las mutaciones inducidas se deben a la presencia de mutgenos:

Mutaciones espontneas
Errores en la incorporacin de deoxiribonucletidos durante la replicacin de DNA (mismatching).
Sustitucin de una base por otra (point mutation). Adicin de bases. Remocin de bases.

Radiacin ionizante Compuestos qumicos Luz ultravioleta

Modificaciones de bases por reacciones hidrolticas.

Mismatched repair
Rompimiento de enlace fosfoester por una endonucleasa. Remocin de la base incorrecta por una exonucleasa. Incorporacin de la base correcta por la polimerasa de DNA I o III. Unin de las cadenas por la ligasa de DNA.

Otros mecanismos de reparacin

Directo: fotoliasa Corte (excision) Recombinacin

Reparacin directa

Dmeros de pirimidinas

Fotoreactivacin Fotoliasas de DNA

Nucleotide excision repair

Glicosilasas remueven bases alteradas

Reparacin por recombinacin