Guaa de Laboratorio Fisiologaa 2013

Semestre otoo
La esencia de la fisiologa es el estudio de los mecanismos de regulacin de todas las funciones del organismo, lo que significa la interrelacin morfolgica y funcional de todos los constituyentes del cuerpo. Se trata, por lo tanto, de un enfoque integrativo u holstico, que solo es posible si previamente se ha estudiado el funcionamiento de cada una de las partes ( Bruno Gnter 2007)
Profesores participantes: Prof. Rodrigo Varas Prof. Carlos Cisterna Prof. Jos I. Loyola Carreras: Obstetricia Enfermera Kinesiologa Fonoaudiologa Medicina
Manos dibujndose as mismo, dibujo ocupado para explicar la autopoyesis
Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Autnoma de Chile- Talca
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GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ]
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GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA

Autores profesores: Ma. Eliana Albornoz Mauricio Quiroz Jos Ignacio Loyola Primera edicin 2009 Segunda edicin 2010 Tercera edicin 2011 Cuarta edicin 2012 Quinta edicin 2013 Profesores participantes: Prof. Rodrigo Varas Prof. Carlos Cisterna Prof. Jos Loyola Carreras: Enfermera Obstetricia Kinesiologa Fonoaudiologa Medicina
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Calendario de Actividades Prcticas

Semana 18 - 22 de Marzo 25 - 29 de Marzo 1- 5 de Abril 8 -12 de Abril 15- 19 de Abril 22 26 de Abril Actividad de Laboratorio LABORATORIO N 1: ACTIVIDAD MULTIMEDIAL, SEMINARIO DE EXCITABILIDAD CELULAR LABORATORIO N 2: ESTIMULACIN NERVIOSA Y MUSCULO ESQUELTICO LABORATORIO N 3: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA SOMESTESIA LABORATORIO N 4: ELECTROMIOGRAFIA (EMGS) Y ACTIVIDAD REFLEJA LABORATORIO N 5: : PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA ELECTROCARDIOGRAMA Y PRESIN ARTERIAL LABORATORIO N 6: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA FROTIS SANGUNEO, ANALISIS DEL HEMATOCRITO Y GRUPOS SANGUNEOS
29 - 3 de LABORATORIO N 7: VOLUMENES PULMONARES ESPIROMETRA, CONTROL DE LA RESPIRACION Mayo (VIRTUAL) PhysioEx 6.0 6 -10 de LABORATORIO N 8: FISIOLOGA DEL SISTEMA RENAL (VIRTUAL) PhysioEx 6.0 Mayo 13 -17 de LABORATORIO N 9: FISIOLOGA DEL SISTEMA ENDOCRINO I (VIRTUAL) PhysioEx 6.0 Mayo 20-24 de LABORATORIO N 10: FISIOLOGA DEL SISTEMA ENDOCRINO II (VIRTUAL) PhysioEx 6.0 Mayo 27 31 PROCESOS FSICOS Y QUMICOS DE LA DIGESTIN (VIRTUAL) PhysioEx 6.0 Junio
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LABORATORIO N1: ACTIVIDAD MULTIMEDIAL, SEMINARIO DE EXCITABILIDAD CELULAR Este es un programa interactivo en el cual se simula un potencial de accin, sus diferentes caractersticas, las corrientes inicas que lo generan y el efecto de diversas sustancias qumicas sobre su generacin y configuracin. Ud. deber trabajar utilizando el programa instalado en un PC a su disposicin. En relacin al video de simulacin que se proyecte, responda y desarrolle cada una de las preguntas formuladas en el siguiente seminario y entregar al trmino del seminario (NOTA: en cada respuesta no se debe exceder ms de 30 palabras): Integrantes activos del grupo: Nombre
Carrera
1. Defina los siguientes conceptos: a.- Potencial de equilibrio electroqumico b.- Potencial de reposo c.- Potencial de accin 2. Reconozca en la figura y explique las siguientes etapas del potencial de accin: a) Despolarizacin b) Hiperpolarizacin c) Perodo refractario absoluto d) Perodo refractario relativo
[ESCRIBIR
LA DIRECCIN DE LA COMPAA]
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3. Cul es el mecanismo de accin e importancia que tiene la bomba Na+ - K+ ATPasa en la recuperacin del Potencial de Membrana? 4. Si un axn se sumerge en una solucin sin sodio Qu corriente inica desaparecer si se aplica un estmulo supraumbral? 5. Que suceder si se disminuye a una cuarta parte la concentracin de sodio extracelular y a la vez que sucede si aumenta en un 50%. 6. Que esperara que ocurriera con el Potencial de Accin (PA) de una persona que padece una deshidratacin severa. 7. Existe una gran diversidad de toxinas que afectan los canales inicos. Una de ellas es la Tetrodotoxina (TTX), producida por una especie de pez globo. TTX bloquea los canales de sodio voltaje dependiente y por lo tanto tiene potentes efectos sobre el sistema nervioso. La Saxitoxina, homologo qumico de la TTX tiene una accin similar a sta y es producida por algunos dinoflagelados. Por qu no se deben consumir mariscos que han ingerido dinoflagelados de la marea roja? Cules son los efectos de la ingestin de saxitoxina sobre las neuronas?. Grafique cules son los efectos sobre el potencial de accin si se agrega una solucin de TTX (Tetradotoxina) y TEA (Tetraetilamonio). 8. Por qu cuando un paciente requiere hacerse una extraccin dental se aplica anestesia local? Qu relacin existe entre los anestsicos locales y los canales de sodio voltaje dependientes?. 9. Explique qu ocurre con la velocidad de conduccin nerviosa en los pacientes con Esclerosis Mltiple. 10.- Qu importancia le atribuye a los canales inicos de Na+ y K+ en la generacin de un PA. 11.- Qu diferencia existen entre un canal inico dependiente de voltaje y uno dependiente de ligando? 12.- En qu estados funcionales puede encontrar los canales dependiente de voltaje de Na+ y K+? 13.- Explique las bases inicas del PA.
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] LABORATORIO N2: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA ESTIMULACIN NERVIOSA Y MUSCULO ESQUELTICO
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INTRODUCCIN Un potencial de accin en un axn motor, produce un potencial de accin en las fibras musculares que inerva. El efecto del potencial de accin es aumentar el nivel de calcio intracelular por un periodo breve, aportando la seal a la maquinaria contrctil molecular dentro de la fibra y generndose una breve contraccin denominada sacudida muscular. Un msculo completo puede estar inervado por cientos de axones motores. Una forma a travs de la cual, el sistema nervioso puede controlar la fuerza de contraccin es controlando el nmero de axones motores que generan potenciales de accin y en consecuencia, el nmero de fibras musculares que se contraen. Este proceso se denomina reclutamiento. Una segunda forma a travs de la cual el sistema nervioso controla la fuerza de contraccin es variando la frecuencia de los potenciales de accin en los axones motores. A frecuencias menores de 5 Hz, hay tiempo suficiente para que el calcio intracelular vuelva a sus valores normales entre potenciales de accin; se producen entonces, sacudidas musculares separadas. A frecuencias entre 5 15 Hz, la concentracin de calcio intracelular en una sacudida muscular, se ha recuperado solo parcialmente cuando llega el siguiente potencial de accin. La fibra muscular produce tensin pulstil (suma de contracciones) y la tensin que se genera es mayor que en una sacudida muscular nica: entre pulsos, la tensin nunca cae a cero. A frecuencias mayores, no se observa el componente pulstil y la fibra genera una contraccin permanente y de mayor magnitud ttanos.
OBJETIVO GENERAL Explorar como trabaja el sistema neuromuscular y examinar algunas de las propiedades de la fatiga muscular.
OBJETIVOS ESPECIFICOS Estimular elctricamente nervios (en la zona del antebrazo) que inervan msculos de la mano, modificando los parmetros de estimulacin. Demostrar los fenmenos de reclutamiento, sumacin y ttanos. MEDIDAS DE SEGURIDAD El equipo de estimulacin del Power/Lab est aislado elctricamente para poder ser usado sin peligro, sin embargo deben tomarse siempre las precauciones aqu mencionadas y personas con marcapasos o equipos similares, epilpticos o con problemas cardacos NO deben ser utilizados como voluntarios para estos ejercicios.
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Medidas que deben considerarse siempre: 1. Slo los estimuladores elctricos suplementados con el equipo deben ser utilizados para los experimentos de estimulacin (jams si estn daados). Nunca deben ser usados separadamente (separar el positivo del negativo), jams deben ser puestos en la cabeza o el trax o utilizar dos estimuladores en cada mano. 2. Siempre usar crema o gel de conduccin sobre la piel. 3. Siempre comenzar con la estimulacin ms baja y lentamente subir la corriente. 4. Si la persona voluntaria comienza a sentir malestar durante la experimentacin detngala y consulte de inmediatamente al profesor. 5. Siempre al usar el estimulador se debe ver una luz verde intermitente, si es amarilla indica que los electrodos no estn bien conectados (problema de conduccin), en ese caso chequear la piel y las conexiones (en especial en experimentos ms extensos). 6. Estar siempre alerta de cualquier situacin de problema en el voluntario, en ese caso detener la estimulacin bajando el interruptor en el panel frontal del Power/Lab.
MATERIALES PowerLab conectado a un computador Transductor de fuerza conectado a un conector Electrodo de estimulacin de barra Crema conductora para electrodos Dinammetro de mano Cinta adhesiva METODODOLOGA 1. Asegrese que el Power/Lab est conectado y encendido 2. Conecte el transductor de fuerza al Imput 1 de la unidad Power/Lab y asegrelo con cinta adhesiva sobre el mesn del laboratorio, como se indica en la figura N1.
Figura 1. Instalacin del sistema para iniciar la actividad 6
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3. Conecte el electrodo de estimulacin de barra a la salida de la unidad aisladora de estmulo: el cable rojo (positivo) a la salida roja y el cable negro (negativo) a la salida negra. 4. Coloque una pequea cantidad de crema conductora a ambas placas metlicas de la barra estimuladora. ACTIVIDAD N1: EFECTOS DE ESTIMULACIN NERVIOSA Objetivos Explorar los efectos sensoriales y motores de la estimulacin elctrica, utilizando los nervios del Antebrazo y una barra de electrodos estimuladora. Procedimiento En este primer ejercicio, la unidad Power/Lab se utiliza slo como un estimulador, sin registrar. Ud. slo deber observar las respuestas musculares mirando la mano del voluntario. 1. Entre a set-up y abra la ventada del estimulador aislado; asegrese que la programacin sea la siguiente: Modo: continuo Rango: Hz Frecuencia: 1 Hz Duracin del pulso: 200 s Corriente de pulso: Variacin en la intensidad del estimulo, cada vez con mayor intensidad en mA (de 1mA..). 2. Coloque la barra de estimulacin sobre el nervio ulnar a la altura de la mueca, como lo indica la figura N 2
Figura 2. Ubicacin de la barra de estimulacin sobre el nervio ulnar.
3. Ponga el estimulador en posicin ON. 4. Note que las sacudidas musculares afectan el dedo pulgar y los otros dedos. Ajuste la posicin del electrodo hasta que observe sacudidas de mayor magnitud. 5. Detenga el estimulador.
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] Preguntas de la Actividad N1: 1. Defina y determine cul es su umbral sensitivo 2. Defina y determine cul es su umbral Motor 3. Anote los efectos motores que usted pudo observar
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ACTIVIDAD N2: SACUDIDA MUSCULAR Y RECLUTAMIENTO Objetivos Medir una respuesta de sacudida muscular gatillada por estimulacin nerviosa y mostrar reclutamiento en la respuesta de sacudida cuando aumenta la intensidad del estmulo. Procedimiento 1. Asegrese que el transductor de fuerza est firmemente unido al mesn, no debe moverse cuando se le aplique fuerza a las hojas. 2. Coloque su mano como lo muestra la figura N3; con los dedos bajo el mesn y la punta del pulgar descansando suavemente sobre las hojas metlicas del transductor.
Figura 3. Pulgar ubicado sobre el transductor de presin 3. Coloque la barra de estimulacin sobre el nervio ulnar a la altura de la mueca y fjelo firmemente en este lugar. 4. Coloque la corriente del pulso de estimulacin en 0 mA. 5. Presione el botn de inicio de la ventana de Windows. Chart realizar un registro de duracin fija de 0.5 seg. y luego se detendr automticamente. 6. Desde el valor de su umbral motor aumente la corriente de estimulacin 1 mA cada vez hasta que la respuesta no aumente ms. Para la mayora de los sujetos, este estmulo mximo est entre 6-15 mA. 7. Anote todos los datos de su registro.
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] Anlisis de la Actividad N2: 1. Use el cursor para medir la amplitud de cada pick del registro.
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2. Grafique la relacin entre corriente de estimulacin y tamao de la respuesta obtenida. (Relacin intensidad del estimulo v/s fuerza generada). Preguntas de la Actividad N2: 1. Pudo usted evocar una sacudida muscular visible con un estmulo de 0 mA? Cul ser el nmero de fibras musculares que se contraen con esta corriente de estimulacin?. 2. Cul fue la corriente mnima necesaria para provocar una contraccin mxima? Qu proporcin de las fibras musculares se estarn contrayendo con esta intensidad de estimulo?. 3. Qu concluye usted con respecto al nmero de fibras que se contraen cuando la corriente del estmulo pasa desde una intensidad umbral hasta la intensidad requerida para gatillar una contraccin mxima?. 4. Por qu al variar la intensidad del estmulo se modifica la fuerza de contraccin? ACTIVIDAD N 3: SUMACIN Y TETANOS Objetivos Demostrar los efectos que se generan entre estmulos pareados y observar una corta contraccin tetnica. Procedimiento 1. En la ventana de dilogos del estimulador aislado, coloque la intensidad de la corriente 19 mA (valor fijo). Pulso de 5. 2. Presione el botn de inicio de Chart y estimule. 5. Comience con una frecuencia de 10 Hz y registre. 6. Repita la estimulacin a frecuencias de 10, 20, 30 Hz Preguntas de la Actividad N3: 1. Cul es la relacin entre la frecuencia del estmulo y el tiempo entre estmulos?. 2.- Observe al modelo Porqu, la respuesta tetnica visiblemente (amplitud) es mayor que la de una sacudida muscular?. 3. Cuales son las 2 formas a travs de las cuales el sistema nervioso puede controlar la fuerza generada por un msculo esqueltico?. 4.- Qu sucedera en el msculo esqueltico, si Usted contina con la estimulacin elctrica indefinidamente?. 5.- Qu es la fatiga muscular?. Mencione tres factores que pueden desencadenar fatiga muscular. 6.- Segn la respuesta observada, discuta cules son las condiciones necesarias para que la fibra muscular se relaje?.
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] LABORATORIO N3: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA SOMESTESIA
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INTRODUCCIN Los seres vivientes desarrollan sus actividades en un medio ambiente que es, generalmente, cambiante. A estos cambios del medio los denominaremos estmulos. Un estmulo puede implicar, para una especie en particular la necesidad de dar una respuesta adecuada a l, con el objetivo de poder sobrevivir, es decir es una forma de adaptacin del organismo a su medio ambiente. As, existen al menos dos aspectos que se deben considerar dentro del proceso de adaptacin: i) el conocimiento del cambio energtico ii) la capacidad de dar respuesta adecuada a l Para conocer el cambio energtico existen estructuras denominadas receptores sensoriales cuya finalidad es translucir el cambio energtico medio-ambiental a energa elctrica (potenciales generadores) la que debidamente codificada, integrada y procesada puede dar origen a una respuesta adecuada.
OBJETIVO GENERAL Estudiar las sensaciones que se originan a nivel de la piel: tacto, calor y fro. OBJETIVO ESPECFICOS Analizar las relaciones que existen entre la magnitud del estmulo y la intensidad de la sensacin evocada (tacto y presin).
MATERIALES Algodn Agua a 40C (recipiente I) Agua a 20C (recipiente II) Agua a 4C (recipiente III) Comps de Weber modificado Reglas graduadas en milmetros
ACTIVIDAD N 1: CAPACIDAD DE LOCALIZACIN DE UN ESTMULO TCTIL Toque suavemente con la punta de un lpiz la piel del sujeto y pdale que con otro lpiz trate de localizar el punto tocado. Determine el margen de error midiendo la distancia que hay entre el lugar estimulado y el sealado. Estimule en la frente, en el dorso (espalda), en el dorso y palma de la mano, antebrazo. Mientras aplica el estmulo el alumno permanecer con los ojos cerrados y slo al contestar utilizara el control visual.
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ACTIVIDAD N 2: SENSACIN TCTIL Con un trozo de algodn roce suavemente (intensidad ligeramente supra umbral) la piel de la mano (palma y dorso), antebrazo, cara, trax y observe que regiones cutneas son ms sensibles a este tipo de estimulacin. ACTIVIDAD N 3: DISCRIMINACIN DE DISTANCIA DE 2 PUNTAS Mediante las puntas del comps de Weber modificado toque al sujeto y pdale que diga si siente dos puntas o una. Si seala sentir una, debe continuar separando las puntas del comps modificado hasta que el alumno discrimine dos, de esta manera deber medir la distancia entre las puntas y anotarla. Explore: pulpejo de los dedos, mano (dorso y palma), antebrazo, brazo, cara, labios, espalda. ACTIVIDAD N 4: ADAPTACIN AL TACTO LIGERO Con la punta de un lpiz flecte un pelo, mantenga la posicin alcanzada y pregunte al sujeto cuando deje de sentir que lo tocan. Mida el tiempo (cronmetro) desde que se flecto el pelo hasta que el alumno informe que no lo siente. Realice esta actividad en el dorso de la mano, en el antebrazo y la cara. ACTIVIDAD N 5: SENSIBILIDAD TRMICA - Efecto de la Superficie: introduzca un dedo e inmediatamente despus, toda la mano en agua a 40 C y compare la intensidad de ambas sensaciones. Repita el mismo experimento, utilizando agua con hielo (4 C). - Sensaciones trmicas: en tres recipientes con agua a diversas temperaturas (4, 20 y 40C), dispuestos en ese orden se sumerge la mano derecha en el agua a 40 C, la mano izquierda en el agua con hielo y a continuacin ambas manos en el recipiente con agua a 20C (temperatura ambiente). Anote las sensaciones percibidas. Cuestionario de preguntas a desarrollar durante la actividad de laboratorio 1.- Los receptores de los folculos pilosos son tnicos o fsicos? Por qu el tiempo de adaptacin de los pelos vara en las distintas zonas del cuerpo? 2.- Discriminacin con el comps de Weber modificado: Haga un grfico con los resultados obtenidos Qu influencia puede tener el tamao de los campos receptivos con los resultados obtenidos? 3.- Seale las caractersticas de los receptores de calor y de fro; cul es la importancia de los mecanismos adaptativos a diferentes temperaturas ambientales. 4.- Localizacin de un estmulo tctil y sensacin tctil: a qu se debe la diferencia en el error de localizacin al explorar las diferentes zonas del cuerpo? 5.- Por qu al practicar una puncin venosa en el dorso de la mano, un paciente siente ms intensamente que si lo puncionan en el brazo?
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LABORATORIO N4: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA ELECTROMIOGRAFIA (EMGS) Y ACTIVIDAD REFLEJA INTRODUCCIN Una fibra muscular esqueltica esta inervada por ramas de un axn motor. Bajo circunstancias normales, el potencial de accin neuronal activa todos los msculos inervados por la neurona motora. Este proceso de activacin involucra un potencial de accin y una contraccin de las fibras musculares. Por lo tanto, durante una contraccin, hay actividad sincronizada en varias fibras del mismo msculo. La seal elctrica registrada de un msculo contrado se llama electromiograma o EMG. Como en el electrocardiograma (ECG), esta actividad se puede detectar a travs de electrodos puestos sobre la piel. Una contraccin muscular voluntaria se produce por uno o ms potenciales de accin en muchas fibras. La actividad del EMG no es una serie regular de ondas como el ECG, sino un estallido catico de seales solapadas en forma de espiga. En este experimento, usted registrara la actividad del EMG durante contracciones voluntarias de los msculos bceps y trceps. La seal cruda del EMG obtenida durante las contracciones voluntarias, puede procesarse de varias maneras para indicar la intensidad de actividad del EMG. En el mtodo usado aqu, la porcin negativa del EMG es invertida y entonces la seal se integra de tal manera que suaviza las puntas, y hace mucho ms claro el cambio de actividad a lo largo del tiempo. Usted tambin registrar seales de EMG producidas por estmulos elctricos de un nervio motor que inerva un msculo. El msculo abductor corto es uno del grupo de msculos de la eminencia tenar en la superficie palmar de la mano. El nervio motor de este msculo (el nervio mediano) es fcil de estimular en la mueca y codo. OBJETIVO GENERAL El objetivo de esta sesin es explorar la actividad elctrica de musculatura esqueltica. OBJETIVOS ESPECIFICOS Lograr registrar y analizar la electromiografa de un voluntario. ADVERTENCIA Algunos ejercicios involucran aplicacin de estmulos elctricos a travs de electrodos puestos en la piel. Las personas que tienen marcapasos cardaco o quin padece desrdenes neurolgicos o cardacos no se deben ofrecer para esos ejercicios. MATERIALES: El PowerLab conectado a un computador Cable Bio Amp Cuatro electrodos EEG/EMG Electrodo Barra de estmulo Crema conductora para el electrodo Alcohol 80% Almohadilla Abrasiva Correa de tierra Cinta Adhesiva 12
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] Cuatro libros de peso similar, aproximadamente 1 Kg METODODOLOGA
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1. El estudiante que se ofrece para el experimento se debe quitar el reloj y cualquier joya de su cuerpo. 2. Conecte el cable Bio Amp a la unidad Power/Lab como se seala en la figura 1. 3. Conecte el terminal de la correa de tierra en la conexin tierra del cable Bio Amp (figura 2), colocando la correa (un electrodo de tierra) alrededor de la mueca. Debe asegurase que el lado suave de la correa de tierra est por completo en contacto con la piel. 4. Preprese para unir los electrodos al voluntario. Limpie suavemente el rea dnde usted pondr cada electrodo con una almohadilla abrasiva y luego con un algodn que contiene una solucin de Etanol al 80%. Con un lpiz, marque ligeramente dos cruces pequeas en el msculo bceps, como se muestra en la figura 1. Las cruces deben tener una separacin de 2-5 centmetros y se deben alinear con el eje largo del brazo. Desgaste ligeramente la piel marcada con una almohadilla abrasiva; esto disminuye la resistencia de la capa exterior de la piel y asegura un buen contacto elctrico.
6. Prepare la piel del msculo Trceps para unir los electrodos tal como se indica en el paso anterior para Bceps. La posicin de los electrodos para el trceps se muestra en la Figura 1. 7. Ponga los electrodos hacia abajo sobre la piel encima de las cruces, y fjelos con el pegamento. Use la cinta extra para atar el cable del electrodo que est inmediatamente adyacente a los electrodos en la piel. 8. Una los terminales de los cuatro electrodos EEG/EMG en los cuatro terminales del cable Bio Amp Fig. 1 y 2. La polaridad en este caso no interesa pero s que los electrodos del bceps o trceps correspondan al canal correcto. En el canal 1 corresponde a los cables del bceps y en el canal 2 a los del trceps. 9. Verifique que todos los electrodos se conectaron apropiadamente al voluntario y al terminal de cable Bio Amp.
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Usted est ahora listo para empezar los ejercicios. ACTIVIDAD N 1: CAMBIO VOLUNTARIO EN LA FUERZA CONTRCTIL Objetivo Examinar la contraccin muscular voluntaria y cmo la fuerza contrctil cambia con la demanda creciente. Procedimiento 1. El voluntario debe sentarse en una posicin relajada, con su codo doblado en 90 con la palma de la mano hacia arriba. Debe usar la otra mano para sostener la mueca del brazo que tiene los electrodos. 2. Pida al voluntario que haga una contraccin fuerte del msculo del bceps, intentando flectar el brazo y resistiendo este movimiento con su otro brazo o bien un compaero puede realizar esta funcin. Observe la seal (Figura 3).
Figura 3. El cuadro de dialogo del Bio-Amplifier muestra una fuerte contraccin del Bceps. 3. Repita los pasos 2 para la seal del trceps. El voluntario puede hacer una contraccin fuerte del msculo del trceps intentando forzar hacia abajo el brazo y resistiendo este movimiento con su otro brazo o un compaero puede realizar esta funcin. 4. Para empezar la grabacin presione el botn INICIO (Start). Capte la seal en reposo inicialmente y luego el voluntario debe realizar una contraccin mxima del bceps y luego del msculo trceps. Pulse el botn de Termino (Stop) y verifique que la seal integrada sea claramente visible en pantalla. Si no se ve claramente, use los botones de auto- escalar en el Eje de Amplitud o el Cursor para ajustar la escala vertical. 5. El voluntario debe sentarse ahora en una posicin relajada, con su codo sin apoyo y en 90 con la palma hacia arriba. 6. Pulse el botn Inicio de nuevo, para reasumir sus grabaciones. Despus de unos segundos, ponga un libro (o un peso similar) en la mano del sujeto de prueba, djelo durante dos a tres segundos, grabe el cambio en el EMG, entonces qutelo. Repita este proceso para dos, tres y cuatro libros.
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7. Pulse el botn Stop para detener la grabacin. La forma de las ondas debe parecerse a aq ullas de la Figura 4.
Figura 4. Estallidos de actividad del bceps mientras sostiene un peso: canal 1 corresponde a la seal integrada. La ventana de zoom muestra parte de la actividad de EMG crudo del bceps.
Anlisis 1. Revise los datos grabados y note los cambios en la actividad elctrica en el Bceps. Note que tambin poniendo los pesos en la mano da una pequea o ninguna actividad en el msculo del trceps. Seleccione una parte pequea de la actividad del Bceps y examnelo en la ventana del Zoom. La seal del EMG crudo est compuesta por muchas espigas dirigidas hacia arriba y hacia abajo. 2. Note los cambios en el grfico integrado cuando se agregaron pesos y luego se quitaron. La altura del trazado se correlaciona con la fuerza producida por el msculo. ACTIVIDAD N 2: LA ACTIVIDAD ALTERNA Y COACTIVATION Objetivo Examinar la actividad de msculos antagonistas y el fenmeno de coactivacin. Procedimiento 1. El voluntario debe sentarse en una posicin relajada, con su codo en 90 con la palma hacia arriba. Debe usar la otra mano para resistir el movimiento sosteniendo la mueca del brazo que tiene los electrodos. 2. Pida al voluntario que active bceps y trceps alternadamente. Debe practicar este modelo alterno hasta sentir que ambos msculos est activndose por igual. 3. Inicie el registro. Pdale al voluntario que use el modelo alterno de activacin durante 20 a 30 segundos. 4. Detenga el registro. La forma de las ondas debe parecerse a las mostradas en la Fig. 5. 15
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Figura 5. Actividad alternada del bceps y trceps, mostrando la coactivation. Anlisis 1. Observe los trazos de la EMG para los bceps y trceps. Note la alternancia de actividad en el bceps y trceps. 2. Tambin note que cuando el msculo bceps se activa enrgicamente, hay un aumento menor de actividad en el trceps. Correspondientemente, hay un aumento menor de actividad, en el trazo del bceps cuando el trceps se activa. Este fenmeno se llama coactivacin. Su significado fisiolgico no se entiende bien, aunque podra servir para estabilizar la articulacin del codo. Para Investigar: 1. Cmo cambia el trazado del EMG cuando aade peso a su brazo? Que indican estos resultados? 2. Describa la coactivacin. Por qu cree que ocurre este fenmeno? 3. Explique los mecanismos fisiolgicos de la contraccin tetnica? 4. Explique la diferencia mecnica y fisiolgica de la sacudida muscular y la contraccin tetnica?
ACTIVIDAD REFLEJA
INTRODUCCIN La respuesta refleja del sistema nervioso es una manifestacin directamente observable de la actividad de un grupo reducido de neuronas. Este pequeo grupo de neuronas esta interconectado en forma relativamente sencilla, de modo que responde de la misma manera frente a un mismo estmulo (simple), en el mismo lugar del estmulo (local), relacin uno a uno (un estmulo, una respuesta individuales-) y estereotipados. Otro hecho relevante es que dichos grupos de neuronas se encuentran empaquetados dentro de regiones (segmentos en el caso de la mdula espinal) claramente identificadas y definidas en el neuroeje. 16
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Esta particular forma de organizacin de la arquitectura neuronal, nos proporciona una herramienta de incalculable valor para el anlisis de la integridad segmento a segmento del sistema nervioso. Efectivamente, una vez estandarizada una cierta forma de estimulacin, obtendremos siempre una respuesta invariable y estereotipada. Esta respuesta refleja es un elemento de juicio objetivo clnico y neurofisiolgico para el evaluador, donde surge la inevitable pregunta: Est funcionando intacto aquel sector del neuroeje que estoy estimulando? Del mismo modo, podemos sealar que para interpretar las respuestas obtenidas, existen dos enfoques que acompaan al evaluador: - La comparacin con exmenes previos realizados en sujetos normales. - La comparacin con la misma respuesta obtenida en el lado opuesto del mismo sujeto que se est examinado. Esto ltimo es particularmente importante, ya que la simetra bilateral del ser humano se manifiesta tambin a nivel de los reflejos, de modo que cualquier asimetra en una respuesta dada tiene gran valor en el diagnstico de un proceso patolgico.
OBJETIVO GENERAL Estudiar algunos reflejos profundos y superficiales en el hombre.
OBJETIVOS ESPECFICOS Familiarizar al alumno con algunos reflejos de uso clnico. Conocer los estmulos, vas aferentes, centros integradores, vas eferentes y efectores en la respuesta refleja. Adquirir un lenguaje neurofisiolgico orientado a aspectos clnicos.
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] ACTIVIDAD N1: REFLEJO MIOTTICO O DE ESTIRAMIENTO Objetivo Estimular y observar el reflejo miottico en un voluntario relajado Material Martillo de percusin
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Procedimiento a) Reflejo tricipital El alumno acostado sobre una camilla, el brazo se mantiene en posicin flectada y libre; percuta con la mano o con el martillo el tendn del trceps en su insercin distal b) Reflejo rotuliano o patelar El alumno sentado sobre camilla u otro, con las piernas flectadas (sin tocar el suelo). Con el martillo de percusin o la mano del evaluador, percuta el tendn del cuadriceps en la insercin distal. Es necesario que la pierna del alumno este en total relajacin. c) Reflejo aquiliano El alumno acostado sobre una camilla con los pies pendiendo libremente, percuta el tendn del triceps. d) Maniobra de Jendrassik El alumno sentado con los pies elevados del suelo, se le pide que entrelace sus manos y trate de separarlas con el mximo de fuerza. e) Babinski (explicacin y apoyo video) f) Clonus (explicacin y apoyo video)
Cuestionario de preguntas a desarrollar durante la actividad de laboratorio 1.- Por qu al estimular el tendn del cuadriceps la pierna se extiende?. 2.- Qu estructura est involucrada en este tipo de reflejos? Explique y realice un diagrama. 3.- Discuta el rol del huso muscular en la contraccin. 4.- Describa el rgano tendinoso de Golgi y sus conexiones. Dibuje las conexiones de inervacin recproca en una articulacin. 5.- Justifique la respuesta observada en la maniobra de Jendrasick. 6.- Qu pasa con la respuesta refleja en condiciones de shock medular? Justifique. 7.- Qu estructuras estn involucradas en el reflejo miottico inverso o antimiottico? 8.- En qu condicin clnica se presenta el signo de Babinski y Clonus?. Justifique
ACTIVIDAD N2: REFLEJO PUPILAR Introduccin La retina es capaz de responder a un amplio rango de intensidades de luz. Con luz brillante, la sensibilidad del ojo es baja, pero cuando la luz es tenue, la sensibilidad aumenta. La mayor parte de esta adaptacin ocurre en los fotorreceptores, pero parte de esta resulta de la regulacin de la cantidad de luz que entra al ojo a travs de la pupila.
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Objetivo Observar los reflejos pupilares y los efectos relacionados en un voluntario Materiales Linterna Lpiz Procedimiento a) Reflejo fotomotor El alumno debe cerrar los ojos durante 15 segundos. Posteriormente aplique un haz de luz sobre el ojo y observe las variaciones del dimetro pupilar. b) Reflejo consensual Repetir la actividad anterior y observe la pupila del ojo contrario. c) Reflejo pupilar de acomodacin Con iluminacin normal, observe la pupila del alumno cuando este mira un lpiz que se ubica a 10 cm de la cara, y luego observe el dimetro cuando el lpiz es colocado a gran distancia. Compare los dimetros pupilares en ambas situaciones. Cuestionario de preguntas a desarrollar durante la actividad de laboratorio 1.- Cul es el efecto de la luz sobre el dimetro pupilar? Cul es el efecto beneficioso de poseer intacto este reflejo? 2.- El reflejo fotomotor es un reflejo consensual? Justifique. 3.- Qu estructuras estn involucradas en las respuestas reflejas oculares? Describa.
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LABORATORIO N6: : PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA ELECTROCARDIOGRAMA Y PRESIN ARTERIAL
INTRODUCCIN Un par de electrodos de superficie colocados directamente sobre el corazn registrarn un patrn repetido de cambios de potencial. Como los potenciales de accin se propagan desde las aurculas a los ventrculos, el voltaje medido entre estos dos electrodos variar en una forma tal, que, entregar una imagen de la actividad elctrica del corazn. Esta imagen puede variar cambiando la posicin de los electrodos de registro; diferentes posiciones entregan diferentes perspectivas, permitiendo as, una imagen ms completa de los eventos elctricos. El cuerpo es un buen conductor de la electricidad debido a que los lquidos tisulares contienen una alta concentracin de iones que se mueven (creando corrientes) en respuesta a diferencias de potencial. Las diferencias de potencial generadas en el corazn, se conducen entonces a la superficie corporal, donde pueden registrarse mediante electrodos de superficie colocados sobre la piel. El registro obtenido de esta forma se denomina electrocardiograma (ECG). Los componentes del ECG se pueden correlacionar con la actividad elctrica del msculo auricular y ventricular. La onda P corresponde a la despolarizacin de las aurculas. El complejo QRS es producido por despolarizacin ventricular; la repolarizacin auricular tambin ocurre durante este tiempo. La onda T es producida por repolarizacin ventricular. El primer ruido cardiaco lub ocurre durante la primera fase de contraccin ventricular y se produce por cierre de las vlvulas aurculo-ventriculares (mitral y tricspide). Cuando los ventrculos se relajan, la presin sangunea desciende bajo la presin que hay en la arteria y las vlvulas semilunares (artica y pulmonar) se cierran, produciendo el segundo ruido cardiaco dup.
OBJETIVO GENERAL Registrar y analizar un ECG obtenido de un estudiante voluntario estando en reposo y luego del ejercicio. OBJETIVOS ESPECFICOS Examinar la relacin entre el ECG y los ruidos caractersticos del corazn. MATERIALES - Power/Lab conectado a un computador - Cable Bio Amp - 3 electrodos desechables - Pasta conductora, algodn, alcohol y esponja abrasiva - Fonendoscopio - Botn marcador de tiempo
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ACTIVIDAD N 1: ELECTROCARDIOGRAMA Y RUIDOS CARDIACOS REGISTRO DE UN ECG EN REPOSO 1. El estudiante voluntario deber sacarse el reloj y joyas de sus manos. 2.- La conexin de los electrodos debe realizarse de acuerdo al diagrama adjunto.
3.- Conecte los electrodos ya colocados en el estudiante, al cable del Bio Amplificador (tierra, negativo y positivo). 4.- Asegrese que el estudiante est sentado y relajado para minimizar cualquier seal proveniente del movimiento. 5.- Comience el registro pulsando el botn START. Si la seal tiene mucho ruido de fondo, asegrese que el estudiante voluntario est relajado. 6.- A partir del trazado ECG, utilizando el marcador (M) y el cursor mida la amplitud de 4 ondas P, complejos QRS y ondas T. Para esto, mueva el cursor hasta el punto ms alto de la onda y obtenga el valor de la amplitud en el display Rango/Amplitud, directamente sobre el canal ECG. Saque el promedio de los valores obtenidos. 7.- Utilizando el marcador y el cursor, mida la duracin de una onda P, un complejo QRS y una onda T, colocando el marcador sobre el trazado ECG al inicio de la onda y el cursor al final de la onda. 8.-Anote sus resultados en la siguiente tabla: COMPONENTE Onda P Complejo QRS Onda T 21 AMPLITUD ( mV) DURACIN (seg)
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9.- Realice el mismo procedimiento y confeccione la misma tabla con las variaciones sufridas en el registro luego de haber realizado ejercicio.
CUESTIONARIO 1. Cules son las bases bioelctricas de un Electrocardiograma? 2.-Qu puede decir acerca de la amplitud de las distintas ondas del ciclo cardaco?. 3.- La onda P y el complejo QRS representan la despolarizacin del msculo auricular y ventricular respectivamente. Por qu el complejo QRS tiene una amplitud mayor?. 4.- Compare los resultados obtenidos en reposo y luego de realizar ejercicio. 5.- Cmo se correlaciona el intervalo P-R con la velocidad de conduccin en el nodo aurculoventricular?. 6.- El siguiente diagrama muestra el sistema de conduccin y los distintos tipos de potenciales de accin que se generan en el corazn y su correlacin temporal con la actividad elctrica registrada mediante el ECG.
Cules son las corrientes inicas que se generan en las distintas fases de los potenciales de accin de accin de una clula marcapaso y de una fibra ventricular?. 7. Cul es la duracin de un potencial de accin de una fibra ventricular?. 8. Cunto dura el perodo refractario en la fibra ventricular? Cul es su importancia fisiolgica?. 9. Analice al menos 3 electrocardiogramas patolgicos con sus respectivas figuras.
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ACTIVIDAD N2: MEDICION DE LA PRESION ARTERIAL SISTEMICA La presin en la aorta y en las arterial braquiales y otras arterias grandes en un adulto normal joven, aumenta hasta alcanzar su valor mximo (presin sistlica) de casi 120 mm Hg durante cada ciclo cardaco y disminuye a un valor mnimo (presin diastlica) cercano a 70 mm Hg. La presin de pulso es aproximadamente de 50 mm Hg y corresponde a la diferencia entre la presin sistlica y diastlica. La presin arterial media, es la presin promedio durante todo el transcurso del ciclo cardaco; como la sstole es ms corta que la distole, la presin media es algo menor que el valor del punto medio entre las presiones sistlica y diastlica y puede determinarse de manera eficaz slo mediante la integracin del rea de la curva de presin; no obstante como una aproximacin, la presin media equivale a la presin diastlica ms la tercera parte de la presin de pulso. La presin arterial se puede medir en forma directa, insertando una cnula en una arteria y el uso de transductores de presin. Sin embargo, la presin arterial en el ser humano se mide habitualmente por el mtodo auscultatorio. El mtodo auscultatorio para medir la presin arterial sistmica es un procedimiento indirecto y no invasivo, que se aplica de rutina en todos los servicios mdicos. Objetivo: Determinar las presiones arteriales mediante el mtodo auscultatorio y observar los cambios en el flujo sanguneo mientras se mide la presin arterial. Materiales: - PowerLab 4/20T conectado a un computador - Transductor de pulso - Manmetro - Brazalete - Fonendoscopio Metodologa: a) Se coloca el brazalete en el brazo correspondiente b) Se palpa el pulso de la arteria cubital a nivel del pliegue del codo c) Se coloca la cpsula del fonendoscopio en ese lugar, debiendo existir un espacio libre de alrededor de 5 cm entre el borde inferior del brazalete y el lugar en que se coloca la cpsula del fonendoscopio. d) Se eleva rpidamente la presin a 150 mm Hg, insuflando aire al manguito, con lo que desaparecen los peridicos ruidos arteriales. e) A continuacin se deja escapar lentamente el aire, moviendo el tornillo anexo a la pera de insuflacin y se auscultan los ruidos arteriales; al mismo tiempo se observa el descenso de la columna de mercurio en el manmetro. La presin sistlica corresponde 23
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a la aparicin de los primeros ruidos que se perciben durante el descenso de la presin, y la presin diastlica corresponde al momento en que se reducen notoriamente dichos ruidos, o en su defecto, cuando dichos ruidos arteriales desaparecen del todo. f) Se repiten estas mediciones 2 o 3 veces con intervalos de a lo menos 2 minutos, hasta obtener valores consistentes, experimentando con distintas velocidades de escape de aire, es decir, con una mayor o menor velocidad en el descenso de la columna de mercurio. g) Calcule la presin de pulso y la presin arterial media h) Pdale a un estudiante del grupo que se coloque en posicin horizontal, mdale la presin arterial y la frecuencia cardiaca. Sin sacar el brazalete, indquele que se ponga de pi rpidamente y vuelva a medir los mismos parmetros. Compare con los valores anteriores i) Mida la presin arterial antes y despus de realizar una maniobra de Valsalva. j) Mida presin arterial y frecuencia cardiaca antes e inmediatamente despus de pedalear durante 5 minutos en una bicicleta ergomtrica a una intensidad correspondiente al 70% de su frecuencia cardiaca mxima terica. Discuta los resultados obtenidos con su profesor. Sonidos de Korotkoff: mediante estudios angiogrficos y tcnicas ultrasnicas, se ha demostrado que la primera aparicin de los ruidos caractersticos (presin sistlica) coincide con el pasaje de sangre por la arteria en la zona de compresin braquial. Luego los sonidos sistlicos aumentan de intensidad y de duracin, para disminuir despus a medida que disminuye la presin en el manguito. Estos ruidos se hacen ms sordos y apagados, llegando a desaparecer del todo a presiones inferiores a la diastlica. Cuando fluye sangre por un vaso sanguneo de paredes colapsables y la presin transmural es negativa (presin interior menor que la presin exterior), entonces pueden originarse autoscilaciones en la pared vascular a causa del flujo intermitente de la sangre en su interior. Cambios en el lumen arterial debido al cono de presin del brazalete ACTIVIDAD N3: PRESION ARTERIAL Y PULSO 1. Entre a CHART y deje en la pantalla slo el canal 1. 2. Trabaje bajo las siguientes condiciones experimentales: Sampling rate. 100 muestras por segundo View compresin. 5:1 para comenzar Canal 1. Input Amplifier: rango 200 mV, Low Pass 50 Hz, Positive Checkbox On. 1. Conecte el transductor de pulso como lo indica el diagrama (debe quedar firme pero no apretado).
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4. Asegrese que el voluntario este sentado y relajado para minimizar cualquier seal proveniente del movimiento. 5. En el canal 1 entre al Input Amplifier, ajuste el valor hasta que la seal sea claramente visible. 6. Vuelva a Chart y registre aproximadamente 10 segundos 7. Infle el brazalete con aire y eleve rpidamente la presin a 150 mm Hg, Note que la seal de pulso desaparece. 8. Bote el aire a una velocidad de 1 a 2 mm Hg por segundo. Cuando escuche la presin sistlica a travs de fonendoscopio, presione ENTER (sirve para marcar el tiempo). 9. Cuando se alcance la presin diastlica, vuelva a presionar ENTER y luego bote todo el aire del brazalete. 10. Detenga el registro y comprima la seal a 5:1 CUESTIONARIO a. El tiempo en que aparece el primer sonido Korotkoff se corresponde con la primera aparicin de flujo? b. Podra Ud. usar la medicin de pulso para reemplazar el fonendoscopio? c. Cmo se regula la presin arterial media? d. Por qu es necesaria la regulacin de la presin arterial media? e. Por qu los pacientes hipertensos no deben realizar ejercicios isomtricos? f. Qu diferencia existe entre los conceptos de presin sangunea y presin arterial? g. A que corresponde la preeclamsia? h. Qu factores afectan la presin arterial?
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] LABORATORIO N7: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA FROTIS SANGUNEO, ANALISIS DEL HEMATOCRITO Y GRUPOS SANGUNEOS
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INTRODUCCIN El trmino de tejido sanguneo es un tejido conectivo altamente especializado, cuya matriz extracelular es liquida y se denomina plasma, adems cuenta con elementos formes que corresponden a las clulas sanguneas: leucocitos, eritrocitos y plaquetas.
En cuanto a los Grupos sanguneos, Berstein puso de manifiesto que este sistema llamado ABO consista en tres alelos de un nico gen: A, B y O; que determinan 4 grupos fenotpicos diferentes:: A B - AB O. Los alelos A y B exhiben codominancia y a su vez son dominantes con respecto a O.
El alelo A produce en la sangre un antgeno A, el alelo B produce el antgeno B y el O no produce ningn antgeno. Estos antgenos son mucopolisacridos y se denominan aglutingenos, encontrndose en la cara externa de la membrana plasmtica de los eritrocitos. Adems de los antgenos, los grupos A, B y O presentan anticuerpos para cualquiera de los antgenos A y B que no poseen. Estos anticuerpos o aglutininas producidas por las clulas plasmticas y linfocitos circulantes de la sangre, se denominan isoaglutininas, pues se presentan naturalmente en el suero, sin que sea necesaria la presencia del antgeno correspondiente para su produccin.
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Las transfusiones de sangre entre individuos de distintos tipos ABO puede dar lugar a una reaccin de aglutinacin, especialmente si se introducen grandes cantidades de un tipo sanguneo distinto. Ottenberg estableci reglas prcticas para evitar accidentes, con el siguiente esquema clsico, en el cual el sentido de cada flecha indica que la transfusin slo es posible en esa direccin.
Se puede deducir tambin que las personas del tipo O son dadoras universales (ausencia de antgenos A y B). Landsteiner y Wiener descubrieron un grupo de genes el sistema Rhesus (Rh), de los cuales el ms importante es el D por ser el ms antignico y las personas son, para fines prcticos Rh positivas (si poseen el antgeno D) o Rh negativas (si carecen de l). El alelo D (+) es dominante con respecto al alelo (-). Es el responsable de la incompatibilidad sangunea materno-fetal.
OBJETIVOS 1. Identificar en microscopio ptico los elementos del tejido sanguneo. 2. Comprender los mecanismos de identificacin de los grupos sanguneos. 3. Analizar los resultados de Hematocrito obtenidos del procesamiento de una muestra sangunea.
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MATERIALES 1. Sangre fresca 2. Kit para determinacin de grupos sanguneos (Antisueros comerciales) 3. Agua destilada 4. Tincin May-Grgualds-Giemsa 5. PBS 6. Portaobjetos y cubreobjetos 7. Algodn 8. Alcohol 9. Microscopio ptico 10. Capilar para micro-hematocrito 11. Centrifuga
ACTIVIDAD N1: REALIZACIN DE UN FROTIS SANGUNEO Obtencin de sangre: limpiar con un algodn embebido en alcohol el pulpejo del dedo, presionar y pinchar con una aguja. Dejar caer una gota en el extremo de un portaobjeto limpio y con un extensor (cubre-objeto) realizar el extendido. Una vez seco el extendido, se cubre el frotis con May-Grgualds, se deja 5 minutos. Luego se agrega de 3 a 5 gotas de PBS (tampn fosfato-salino), soplar suavemente para homogenizar la solucin, se deja as 3 minutos. Posteriormente se debe lavar el frotis (sumergirlo 5 veces a un vaso que contenga PBS). Luego se cubre el frotis con una dilucin de Giemsa (por cada 1 ml de PBS, 3 gotas de Giemsa), se deja 15 minutos. Posteriormente se debe lavar el frotis 5 veces en PBS, luego se deja secar. Se observa en 100X (usando aceite de inmersin) NOTA: En el frotis se presentan 3 zonas (cabeza, cuerpo y cola), pero para poder observar se debe fijar entre el cuerpo y la cola, esta zona se reconoce porque los glbulos rojos estn unos al lado del otro y se observa la depresin central o halo blanco. En la cola los glbulos rojos estn deformados, totalmente separados y no se les nota la depresin central. En la cabeza los glbulos rojos estn aplanados (por los puntos antes expuestos los extremos cabeza y cola no son aptos para la observacin del frotis sanguneo). Una vez ubicada la zona optima, nos vamos al borde del frotis y empezamos a realizar un zic-zac por el frotis hasta llegar al otro extremo, de esta forma se visualizarn todos los elementos formes presentes, por ejemplo usted debe ser capaz de identificar las diferencias entre glbulos rojos y glbulos blancos, tratar de localizar a las plaquetas, identificar los distintos tipos de leucocitos que se observan.
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] ACTIVIDAD N2: DETERMINACIN DE GRUPOS SANGUINEOS
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Obtener sangre del pulpejo del dedo como se indica en la actividad anterior y dejar caer una gota de sangre sobre cada uno de los casilleros de un portaobjeto previamente rotulados con los grupos sanguneos. Figura 1.
AB A
Rh
Figura 1. Portaobjetos rotulados en casilleros con los grupos sanguneos.
A continuacin, colocar donde corresponda una gota de suero Anti A, una de suero Anti B, una de suero Anti AB y una gota de antisuero Rh. Revolver suavemente con unos palillos, esperar unos minutos y determinar segn el proceso de aglutinacin a qu grupo sanguneo y factor Rh corresponde. Figura 2.
Figura 2. Determinacin de grupos sanguneos.
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ACTIVIDAD N3: DETERMINACIN DEL MICRO-HEMATOCRITO
Anlisis. Frotis de sangre 1. Cul es la clula ms abundante del preparado? 2. De los leucocitos, cules fueron los que pudo observar? Cul es la funcin de cada uno? 3. Cul es la funcin de las plaquetas? Cmo se originan? Grupo sanguneo 1. Que ocurre en cada una de las gotas? 2. De qu forma determina los grupos sanguneos?
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LABORATORIO N8: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA VOLUMENES PULMONARES ESPIROMETRA, CONTROL DE LA RESPIRACION
INTRODUCCIN El intercambio de gases entre el aire y la sangre ocurre en los sacos alveolares. La eficacia del intercambio de gases es dependiente de la ventilacin: movimientos respiratorios cclicos que alternadamente inflan y desinflan los sacos alveolares. La inspiracin recambia el aire de los alvolos por aire atmosfrico fresco y la espiracin quita el aire consumido el que tiene una menor presin de oxgeno y mayor de CO2. Muchos aspectos importantes de la funcin pulmonar se pueden determinar, midiendo flujo areo y los cambios correspondientes en el volumen pulmonar. En el pasado esto se hizo respirando normalmente en una campana espiromtrica en la cual el nivel de una de la campanilla flotante en un tanque daba una medida de cambios de volumen pulmonares. En la actualidad, se puede medir el flujo areo directamente con un neumotacmetro (la palabra se deriva de races griegas que significan (dispositivo que mide velocidad de la respiracin). El neumotacmetro PowerLab se muestra en la Fig 2. El cabezal de flujo contiene una malla fina; el aire respirado a travs de la malla da lugar a una diferencia de presin pequea que es (dentro de ciertos lmites) proporcional al flujo. Dos tubos plsticos pequeos transmiten la diferencia de presin al espirmetro dnde un transductor convierte el signo de presin en un voltaje cambiante que se graba por el PowerLab y es desplegado con el software Chart. Una complicacin que surge en la medida de volmenes pulmonares, es causada por la diferencia en la temperatura del aire que entra al espirmetro (temperatura ambiente) y el aire exhalado de los pulmones (temperatura corporal). El volumen de gas se expande con el calor, por consiguiente el volumen areo espirado de los pulmones ser ligeramente mayor que el inspirado. Para reducir estas diferencias, el flujo tiene que ser integrado separadamente durante la inspiracin y espiracin, siendo el volumen inspiratorio corregido por un factor BTPS (temperatura del cuerpo, presin atmosfrica saturada con vapor de agua). La extensin del Chart 'Spirometry' puede hacer esta correccin. La espirometra permite visualizar, medir y calcular muchos componentes de la funcin pulmonar (como se muestra en la Fig 1).
Figura 1. Volmenes y Capacidades Pulmonares 31
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La respiracin consiste en ciclos repetidos de inspiracin seguidos por espiracin. Durante el ciclo respiratorio, un volumen especfico de aire es arrastrado al interior y luego espirado fuera de los pulmones; este volumen es el volumen corriente o tidal (VT). En la ventilacin normal, la frecuencia respiratoria (R) es aproximadamente 15 ciclos respiratorios por minuto. Este valor vara con el nivel de actividad. El producto de R y VT corresponde a la ventilacin pulmonar (VE). Este parmetro tambin cambia segn el nivel de actividad. La capacidad total de los pulmones comprende cuatro volmenes pulmonares funcionales: el volumen corriente (VT), volumen de reserva inspiratorio (IRV), volumen de reserva espiratorio (ERV) y el volumen residual (RV). Hay cinco capacidades pulmonares que son la suma de dos o ms volmenes pulmonares: capacidad inspiratoria (IC), capacidad espiratoria (EC), capacidad residual funcional (FRC), la capacidad pulmonar total (TLC) y la capacidad vital (VC). Observe que RV, FRC, y TLC no pueden ser medidos por el espirmetro. Los parmetros forzados, los cuales evalan la habilidad de ventilar los pulmones con el esfuerzo voluntario mximo, son a menudo de mayor valor clnico que las capacidades y los volmenes pulmonares simples. El volumen espiratorio en un segundo (FEV1), el flujo inspiratorio mximo (PIF) y el flujo espiratorio mximo (PEF) son fuertemente afectados por la resistencia de la va area y son importantes en la deteccin y monitoreo de desrdenes obstructivos (bronquitis, enfisema y asma). La capacidad vital forzada (FVC) o sea el mximo volumen de aire que se puede espirar en el menor tiempo posible despus de una inspiracin mxima, se encuentra reducida en los desrdenes restrictivos como la fibrosis pulmonar. En condiciones normales, el FEV1 representa alrededor del 80% de la FVC. En los experimentos siguientes simulars una espirometra y medirs cada uno de estos volmenes respiratorios utilizando un par de pulmones mecnicos. Sigue las instrucciones de la seccin Primeros Pasos al comienzo de este anual de laboratorio para iniciar PhysioEx. Del Men principal selecciona Mecanismo del Sistema Respiratorio (espiratory System Mechanics). Vers la pantalla de inicio experimento Volmenes Respiratorios (Respiratory Volumes. A la izquierda hay un recipiente grande que simula la cavidad torcica) que contiene un tubo de aire, Este tubo parece una Y invertida. En los extremos de la Y hay dos envases esfricos, simulando los pulmones, los cuales fluir el aire. Encima del recipiente estn los troles para ajustar el radio del tubo de suministro de los pulmones. Este tubo simula la trquea y otras vas areas de los pulmones. Debajo de los pulmones hay una plataforma negra que simula el diafragma. El diafragma se mover hacia abajo, simulando su contraccin y aumentando el volumen de la cavidad torcica para hacer entrar aire en los pulmones; despus se mover hacia arriba, simulando su relajacin y disminuyendo el volumen de la cavidad torcica para expulsar el aire hacia fuera. En la parte inferior del recipiente hay tres botones: un botn de Iniciar (Start), un botn de ERV (volumen espiratorio de reserva) y un botn de FVC (capacidad vital mxima). Pulsando sobre Iniciar (Start) los pulmones simulados comenzarn a respirar a un volumen corriente normal; pulsando ERV (volumen espiratorio de reserva) hars que los pulmones espiren tanto aire como les sea posible ms all del volumen corriente; y pulsando FVC (capacidad vital mxima) los pulmones expulsarn todo el aire posible despus de haber realizado la inspiracin ms profunda posible. En la parte superior derecha est la pantalla del osciloscopio que mostrar grficamente los volmenes respiratorios. Observa que el eje Y indica litros en lugar de mililitros. El eje X muestra el tiempo transcurrido, correspondiendo la longitud total de la pantalla a 60 segundos. Debajo de la pantalla del osciloscopio hay una serie de indicadores de datos. A lo largo de toda la parte inferior de tu 32
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pantalla hay un mdulo de registro de datos. Pulsando Guardar Datos (Record Data) despus de un experimento aparecern los datos de ese experimento en tu pantalla.
1. Asegrate de que el radio del tubo de aire est en 5.00 mm. Para ajustar el radio, pulsa los botones (+) o (-) junto al indicador del radio. 2. Pulsa el botn Iniciar (Start). Observa la pantalla del osciloscopio. Cuando el trazado alcance la marca de 10 segundos en la pantalla, pulsa el botn ERV (volumen espiratorio de reserva) para obtener el volumen espiratorio de reserva. 3. Cuando el trazado alcance la marca de 30 segundos en la pantalla del osciloscopio, pulsa FVC (capacidad vital mxima) para obtener la capacidad vital mxima. 4. Una vez que el trazado llegue al extremo de la pantalla, pulsa el botn Detener (Stop) y despus Guardar Datos (Record Data). 5. Recuerda que puedes imprimir tu trazado o tus datos guardados pulsando Herramientas (Tools) en la parte superior de la pantalla y seleccionando Imprimir Grfica (Print Graph) o Imprimir Datos (Print Data). A partir de los datos que has guardado puedes calcular el volumen respiratorio por minuto: la cantidad de aire que entra y sale de los pulmones en 1 minuto. La frmula para calcular el volumen 33
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respiratorio por minuto es: Volumen respiratorio por minuto = volumen corriente x bpm (respiraciones por minuto) Pulsa Herramientas (Tools) y luego Calculadora. Calcula y anota el volumen respiratorio por minuto: A juzgar por el trazado que generaste, durante cuntos segundos tuvo lugar la inspiracin?________________ Durante cuntos segundos tuvo lugar la espiracin? ________________ La duracin de la inspiracin o de la espiracin vara durante ERV (volumen espiratorio de reserva) o durante FVC (capacidad vital mxima)?________________ 6. Pulsa Borrar Trazados (Clear Tracings) antes de proceder a realizar la siguiente actividad. No borres tus datos guardados los necesitars para la actividad siguiente.
Actividad 2: Efecto de la restriccin del flujo de aire sobre los volmenes respiratorios 1. Ajusta el radio del tubo de aire a 4.00 mm pulsando el botn ( - ) junto al indicador del radio. Repite los pasos 2 a 5 de la actividad anterior, asegurndote de pulsar Guardar Datos (Record Data). Compara este conjunto de datos con los datos que guardaste de la Actividad 2. ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ El funcionamiento del sistema respiratorio es mejor o peor que en la actividad anterior? Explica por qu. ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 2. Pulsa Borrar Trazados (Clear Tracings). 3. Reduce el radio del tubo de aire otros 0.50 mm, hasta 3.50 mm. 4. Repite los pasos 2 a 6 de la Actividad 2. 5. Reduce el radio del tubo de aire otros 0.50 rnm, hasta 3.00 mm. 6. Repite los pasos 2 a 6 de la Actividad 2. Cul fue el efecto de la reduccin del radio del tubo de aire sobre los volmenes respiratorios? ____________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Qu simula el tubo de flujo en el cuerpo humano? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________
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Cules podran ser algunas causas de la reduccin del flujo de aire a los pulmones? ____________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ Cmo afecta el aumento en la concentracin de CO2 a la frecuencia respiratoria? Y por qu? ____________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Pulsa Herramientas (Tools). Imprimir Datos (Print Data) para imprimir tus datos. Expresa tus datos de FEV1(volumen espiratorio mximo) como porcentaje de la capacidad vital, rellenando la tabla siguiente (es decir, toma el valor de FEV1y divdelo por el valor de la capacidad vital para cada lnea de datos).
Radio 5.00 4.00 3.50 3.00 FEV, Capacidad vital FEV, (%)
Factores que influyen en la respiracin Muchos factores influyen sobre la respiracin. La distensibilidad, o capacidad de la pared del trax o del pulmn para dilatarse, es uno de ellos. Si la pared torcica o los pulmones no pueden dilatarse, la capacidad respiratoria se ver comprometida. El tensioactivo, un material lipdico secretado al fluido alveolar, es otro factor. El agente tensioa ctivo, acta para disminuir la tensin superficial del agua en el fluido que reviste las paredes de los alvolos. Sin el agente tensio activo, la tensin superficial del agua hara que los alvolo s se colapsaran despus de cada respiracin. Un tercer factor que influye en la respiracin es cualquier lesin de la pared torcica que tenga como resultado su perforacin. Tal perforacin elevara la presin intratorcica hasta el valor de la presin atmosfrica, impidiendo que la contraccin del diafragma disminuyera la presin intratorcica y, por lo tanto, que el aire fuera conducido al interior de los pulmones. (Recuerda que la circulacin del aire se consigue por la generacin de una diferencia de presin entre la presin atmosfrica del exterior de la cavidad torcica y la presin intratorcica). En la siguiente actividad investigaremos el efecto del agente tensioactivo. Pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla y despus selecciona Factores que Influyen en la Respiracin (Factors Affecting Respiration). La pantalla de inicio se parecer a la Figura 7.2. Observa los cambios en el equipo de encima del tubo de aire. Pulsando el botn de Agente Tensioactivo (Surfactant) aadirs una cantidad predeterminada de tensioactivo a los pulmones. Pulsando Limpiar (Flush) limpiars lo pulmones de tensio activo. Observa tambin que se han aadido vlvulas a los lados 35
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de cada pulmn simulado. Al abrir las vlvulas permitirs que la presin en el interior del recipiente (la cavidad torcica) se iguale a la atmosfrica. Finalmente, fjate en los cambios en los indicadores debajo de la pantalla del osciloscopio. Flujo Izquierdo (FlowLeft) y Presin Izquierda (PressureLeft) se refieren al flujo de aire y a la presin en el pulmn izquierdo; Flujo Derecho (FlowRight) y Presin Derecha (PressureRight) se refieren al flujo de aire y a la presin en el pulmn derecho. Flujo Total (TotalFlow) es la suma del flujo izquierdo y del flujo derecho. El efecto del agente tensioactivo sobre los volmenes respiratorios 1. El mdulo de registro de datos de la parte inferior de la pantalla debe estar sin datos. Si no lo est, pulsa Borrar Tabla (ClearTable). 2. El radio del tubo de aire se debe fijar en 5.0 mm y la frecuencia de bombeo en 15 strokes/minuto. 3. Pulsa Iniciar (Start) y deja que el trazado recorra toda la longitud de la pantalla del osciloscopio. Pulsa entonce Guardar Datos (Record Data). Esto servir como referencia, o control, para tus experimentos. Si lo deseas, puede pulsar Herramientas (Tools) y despus Imprimir Grfica (PrintGraph) para imprimir tu trazado. 4. Pulsa Agente Tensioactivo (Surfactant) dos veces para agregar el tensioactivo al sistema. Repite el paso 3. Qu le sucede al volumen corriente cundo se aade el tensioactivo? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Como resultado del cambio en el volumen corriente, qu le sucede al flujo de cada pulmn y al flujo total de aire? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Por qu sucede esto? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Recuerda, puedes pulsar Herramientas (Tools) y despus Imprimir Datos (PrintData) o Imprimir Grfica (PrintGraphs) para imprimir tus resultados.
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Efecto de la perforacin de la cavidad torcica Recuerda que, si la pared de la cavidad torcica es perforada, a presin intratorcica se igualar a la atmosfrica de forma que el pulmn no podr hincharse. Este trastorno se conoce como neumotrax, y lo investigaremos en esta actividad. No borres tus datos de la actividad anterior. Si hay algunos trazados en la pantalla del osciloscopio, pulsa Borrar Trazados (Clear Tracings). Pulsa Limpiar (Flush) para eliminar el agente tensioacivo de la actividad anterior. Asegrate de que el radio del tubo de aire est fijado a 5.0 mm y que la Frecuencia de Bombeo (PumpRate) est fijada a 15 bombeas/minuto. Pulsa Iniciar (Start) y deja que el trazado recorra toda la longitud de la pantalla del osciloscopio. Observa los indicares de presin y cmo se van alternando los valores positivos y negativos. Pulsa Guardar Datos (Record Data). Ahora pulsa la vlvula del pulmn izquierdo en la que se lee vlvula cerrada. Pulsa Iniciar (Start) y deja que el trazado recorra toda la longitud de la pantalla del osciloscopio. Pulsa Guardar Datos (Record Data). Qu le sucedi al pulmn izquierdo cuando pulsaste el botn de la vlvula? Por qu? 37
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______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Qu le ha sucedido al Flujo Total (Total flow rate)? Cul es la presin en el pulmn izquierdo? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Se ha visto afectada la presin en el pulmn derecho? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Si no hubiera nada que separara el pulmn izquierdo del derecho, qu habra sucedido cuando abriste la vlvula del pulmn izquierdo? Por qu? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Ahora pulsa de nuevo la vlvula del pulmn izquierdo, cerrndola. Qu ocurre? Por qu? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Pulsa Reiniciar (Reset) (junto al botn Limpiar (Flush) en la parte superior del tubo de aire). Qu ha sucedido? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Describe la relacin que debe existir entre la presin intratorcica y la presin atmosfrica para que el aire entre en los pulmones. ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________
Disea tu propio experimento para probar el efecto de la apertura de la vlvula del pulmn derecho. Habra alguna diferencia con respecto al efecto de abrir la vlvula del pulmn izquierdo? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Recuerda, puedes pulsar Herramientas (Tools) y despus Imprimir Datos (Print Data) o Imprimir Grfica (PrintGraphs) para imprimir tus resultados.
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] Variaciones en la respiracin:
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Normalmente la ventilacin alveolar va en consonancia con las necesidades tisulares. La adecuacin de la ventilacin alveolar se mide en trminos de presin parcial de dixido de carbono (Pco2), El dixido de carbono es el componente principal para regular la frecuencia respiratoria. La ventilacin (la frecuencia de la respiracin multiplicada por el volumen corriente) mantiene las presiones parciales normales de oxgeno y de dixido de carbono en los pulmones y en la sangre. El riego sanguneo pulmonar est acoplado a la ventilacin. Los patrones de respiracin de un individuo estn estrechamente regulados por los centros respiratorios del cerebro de modo que los sistemas respiratorios y circulatorio puedan trabajar juntos con eficacia. En la siguiente actividad examinars los efectos de la respiracin rpida, de volver a respirar el mismo aire espirado, y de contener la respiracin sobre los niveles de dixido de carbono en sangre. La respiracin rpida aumenta la frecuencia respiratoria y la ventilacin alveolar llega a ser excesiva para las necesidades tisulares. Ello da lugar a una disminucin del cociente entre la produccin de dixido de carbono y la ventilacin alveolar. Bsicamente, la ventilacin alveolar llega a ser demasiado elevada para la cantidad de dixido de carbono que se produce. En volver a respirar el mismo aire espirado, el aire se toma del que acaba de ser espirado, con lo que la PC02 (la presin parcial de di xido de carbono) en el alvolo (y posteriormente en la sangre) se eleva. En contener la respiracin, no hay ventilacin ni ningn intercambio de gas entre el alvolo y la sangre. Pulsa Experimento en la parte superior de la pantalla y selecciona Variaciones en la Respiracin (Variationsin Breathing). Vers la siguiente pantalla, mostrada en la Figura 7.3. Esta pantalla es muy similar a las otras con las que has estado trabajando. Observa los botones para la Respiracin Rpida (Rapid Breathing), el Volver a Respirar el mismo Aire Espirado (Rebreathing), el Contener la Respiracin (Breath Holding) y la Respiracin Normal (Normal Breathing) pulsando cada uno de estos botones inducirs ese patrn de respiracin. Observa tambin los indicadores para PC02 (presin parcial de dixido de carbono), Pco2Mxima (presin parcial mxima de dixido de carbono), Pco2 Mnima (presin parcial mnima de dixido de carbono) y Frecuencia de Bombeo (PumpRate). Actividad 6: Respiracin Rpida 1. La pantalla del osciloscopio y el mdulo de registro de datos deben estar vacos y limpios. Si no es as, pulsa Borrar Trazados (Clear Tracings) o Borrar Tabla (Clear Table). El radio del tubo de aire se debe fijar a 6.0. Si no lo est, pulsa los botones (+) o (-) junto al indicador del radio para ajustarlo. Pulsa Iniciar (Start) y lleva a cabo un experimento de referencia. Recuerda pulsar Guardar Datos (Record Data) al final del experimento. Deja el trazado de referencia en la pantalla del osciloscopio. Pulsa de nuevo Iniciar (Start), pero esta vez pulsa el botn de Respiracin Rpida (Rapid Breathing) cuando el trazado llegue a la marca de 10 segundos en la pantalla del osciloscopio. Observa los niveles de Pco2 en los indicadores. Deja que finalice el trazado, despus pulsa Guardar Datos (Record Data).
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Qu sucede con la Pco2 durante la respiracin rpida? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Por qu? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Recuerda, puedes pulsar Herramientas (Tools) y despus Imprimir Datos (PrintData) o Imprimir Grfica (PrintGraphs) para imprimir tus resultados. Pulsa Borrar Trazados (Clear Tracings) antes de continuar con la siguiente actividad. Actividad 7: Volver a respirar el mismo aire espirado Repite la actividad 6, excepto que esta vez pulsa el botn de volver a Respirar el Aire Espirado (Rebreathing) en lugar botn de Respiracin Rpida (Rapid Breathing). Qu sucede con la Pco2 durante la respiracin del aire espirado? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Por qu? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Cambia el flujo total de aire? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Por qu? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Cmo es el trazado de volver a respirar el aire espirado en comparacin con tu registro de referencia? (Observa cuidadosamente las diferencias pueden ser sutiles). ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________
Por qu? ______________________________________________________________________________ _________________________________________________________________ Pulsa Borrar Trazados (Clear Tracings) para limpiar la pantalla del osciloscopio. Actividad 8: Contener la respiracin 1. Pulsa Iniciar (Start) y lleva a cabo un experimento de referencia. Recuerda pulsar Guardar Datos (Record Data) al final del experimento. Deja el trazado de referencia en la pantalla del osciloscopio. 40
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2. Pulsa de nuevo Iniciar (Start), pero esta vez pulsa el botn de Contener la Respiracin (Breath Holding) cuando el trazado llegue a la marca de 10 segundos en la pantalla del osciloscopio. Observa la Pco2en los indicadores. 3. Cuando alcance la marca de 20 segundos pulsa Respiracin Normal (Normal Breathing) y deja que finalice el trazado. 4. Pulsa Guardar Datos (Record Data). Qu sucede con la Pco2 durante el momento de contener la respiracin? Por qu? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ Qu cambio se observ cuando volviste a la Respiracin Normal ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________
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LABORATORIO N9: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA FISIOLOGA DEL SISTEMA RENAL Objetivos 1. Definir nefrn, corpsculo renal, tbulo renal, arteriola aferente, filtracin glomerular, arteriola eferente, aldosterona, ADH y reabsorcin. 2. Describir los componentes y las funciones de una nefrn. 3. Entender cmo afecta el dimetro arterial a la funcin de la nefrn. 4. Entender cmo influye la presin arterial en la funcin de la nefrn. 5. Explicar el proceso de la reabsorcin. 6. Explicar el papel de los transportadores en la reabsorcin de glucosa. 7. Entender las acciones de la ADH y de la aldosterona en la reabsorcin de solutos y en la absorcin de agua.
Los riones son rganos excretores y reguladores. Al excretar agua y solutos, los riones son responsables de eliminar del organismo los productos de desecho y el exceso de agua. Los riones regulan 1) la osmolaridad del plasma, o concentracin de una solucin expresada como osmoles de soluto por litro de solvente; 2) el volumen plasmtico; 3) el equilibrio cido-base; 4) el equilibrio de electrlitos; 5) la excrecin de desechos metablicos y de materiales extraos, y 6) la produccin y la secrecin de hormonas que regulan la osmolaridad y el equilibrio de electrlitos. Todas estas actividades son extremadamente importantes para mantener la homeostasis en el organismo. Los riones estn situados entre la pared abdominal posterior y el peritoneo abdominal. Aunque muchos libros de texto representan los riones directamente enfrente uno del otro, realmente el rin derecho est un poco ms bajo que el izquierdo. Cada rin humano contiene aproximadamente 1,2 millones de nefrns, las unidades funcionales del rin. Cada nefrn se compone de un corpsculo renal y de un tbulo renal. El corpsculo renal consiste en un penacho de capilares, denominado glomrulo, que est encerrado por una cpsula llena de lquido denominada cpsula de Bowman. Una arteriola aferente proporciona sangre al glomrulo. A medida que la sangre atraviesa los capilares glomerulares, el plasma sin protenas se filtra hacia la cpsula de Bowman, un proceso denominado filtracin glomerular. Depus, una arteriola eferente drena el glomrulo de la sangre restante. El lquido filtrado fluye desde la cpsula de Bowman hasta el comienzo del tbulo renal, denominado tbulo contorneado proximal, sigue despus hasta el tbulo recto proximal, seguido por el asa de Henle, una curva en forma de horquilla en U. El lquido filtrado fluye luego al tbulo contorneado distal antes de alcanzar el tbulo conector (connecting tubule) y el conducto colector, donde se recoge la orina. El tbulo distal y el conducto colector estn formados por dos tipos de clulas: las clulas principales y las clulas intercaladas. Las clulas principales reabsorben Na + yagua y secretan K+. Las clulas intercaladas secretan H+ o HC03 - y son, por lo tanto, muy importantes en la regulacin del equilibrio cido/base.
Filtracin Glomerular La sangre entra en el glomrulo desde la arteriola aferente. Las fuerzas de Starling (los gradientes de presin hidrosttica y osmtica) conducen al plasma sin protenas desde la sangre, a travs de las 42
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paredes de los capilares glomerulares hasta la cpsula de Bowman. Lafiltracin glomerunr es un ndice de la funcin del rin. En los seres humanos, la filtracin oscila entre 80 y 140 ml/min, de modo que en 24 horas los glomrulos filtran alrededor de 180 litros de plasma. El filtrado que se forma est desprovisto de partculas celulares y esencialmente no contiene protenas. La concentracin de sales y de molculas orgnicas es similar a la de la sangre. La produccin normal de orina es 1-1,5 litros/24 horas. La diferencia es reabsorbida por el organismo. Normalmente, solo se filtra cerca del 20% de la sangre que entra en la nefrn, debido a la presin osmtica de la sangre (presin onctica) y a la presin hidrosttica de los fluidos de la cpsula de Bowman. La filtracin glomerular se puede alterar cambiando la resistencia de la arteriola aferente, la presin de la arteriola eferente, o el tamao de la superficie de filtracin, o por un proceso denominado autorregulacin renal. Una vez formado el filtrado, el nefrn debe reabsorber los materiales que necesita el organismo y excretar los materiales innecesarios. Mientras que cada da se filtran hasta 180 litros, en la orina se excretan menos del 1 % del agua filtrada, de cloruro sdico y de otros solutos. Ms del 67% de esta reabsorcin tiene lugar en el tbulo contorneado proximal. El tbulo contorneado distal y el conducto colector reabsorben aproximadamente el 7% del NaCl filtrado, secretan una cantidad variable de K+ y de H+ y reabsorben una cantidad variable de agua. Es en esta parte distal de la nefrn donde actan las hormonas para reabsorber agua y electrlitos. La aldosterona regula la reabsorcin de NaCl (y as tambin su excrecin). La ADH (hormona antidiurtica) produce un incremento de la permeabilidad del tbulo distal y del conducto colector, promoviendo la absorcin de agua desde el lquido filtrado. La ADH se considera la hormona ms importante del organismo para regular el equilibrio hdrico.
En las tres primeras actividades te concentrars en cmo el dimetro y la presin arteriales afectan a la filtracin glomerular y al volumen de orina. Del Men Principal, selecciona Fisiologa del Sistema Renal (Renal System Physiology).
Pulsa Ayuda (Help) en la parte superior de la pantalla y selecciona despus Globos Activos (Balloons On). Mueve ahora tu ratn alrededor de la nefrn simulada en la parte amarilla de la pantalla. Aparecern etiquetas en las distintas partes de la nefrn a medida que pasas sobre ellas. Observa en particular el glomrulo y la cpsula del glomrulo. Observa tambin el tubo aferente y el tubo eferente a la izquierda del glomrulo --stos representan las arteriolas aferente y eferente que llevan y que drenan la sangre desde el glomrulo. Puedes ajustar el radio de cualquiera de estos tubos pulsando sobre los botones (+) y (-) Junto a los tubos respectivos. Tambin puedes ajustar la presin arterial del recipiente de origen pulsando los botones (+) y (-) junto indicador de Presin (mmHg) (Pressure). Una vez que hayas identificado todo el equipo de la pantalla, pulsa de nuevo Ayuda (Help) y selecciona Glob Inactivos (Balloons Off) (no puedes seguir con el experimento a menos que las etiquetas estn des activadas). En parte inferior izquierda de la pantalla hay dos recipientes. El recipiente de la izquierda, al que llamaremos el recipiente de origen, representa el suministo de sangre que llega al nefrn. Cuando se pulsa el botn Iniciar (Start), la sangre fluir desde el recipiente de origen a la arteriola aferente y luego al grupo de pequeos tubos que representan el glomrulo. A medida que la sangre atraviesa el glomrulo, vers cmo se produce la ultra filtracin (ultrafiltracin significa la filtracin desde el plasma de cualquier cosa, excepto las protenas y las clulas). La sangre entonces ser drenada desde el glomrulo hasta el recipiente de drenaje junto al recipiente de origen. En el extremo del tubo de la nefrn vers la formacin de orina en un depsito pequeo en la parte 43
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inferior derecha de la pantalla. Para ver en accin un experimento de prueba de este proceso pulsa el botn Iniciar (Start). Al final del experimento, pulsa Rellenar (Refill) debajo del recipiente de drenaje antes de comenzar las actividades que siguen.
Pantalla de inicio del experimento de Simulacin de la filtracin glomerular.
Actividad 1 Efecto del dimetro de la arteriola sobre la filtracin glomerular En esta actividad investigars cmo los dimetros de las arteriolas aferente y eferente que conducen hacia y desde el glomrulo pueden afectar a la filtracin glomerular. 1. El indicador del radio aferente (Afferent Radius) debe fijarse a 0.50 mm y el del radio eferente (Efferent Radius) a 0.45 mm. Si no lo estn, utiliza los botones (+) o (-) junto a los indicadores de los radios para ajustarlos. 2. Asegrate de que el recipiente de la izquierda est lleno. Si no lo est, pulsa el botn Rellenar (Refill). 3. El indicador de presin (Pressure (mmHg)) que se encuentra sobre el recipiente de la izquierda debera marcar 90 mm Hg. Si no es as, pulsa los botones (+) o (-) junto al indicador para ajustarlo. 4. Pulsa el botn Iniciar (Start). Observa los indicadores de la presin glomerular (Glomerular Pressure) y de la filtracin glomerular (Glomerular Filt. Rate) en la parte superior derecha de la pantalla a medida que la sangre atraviesa la nefrn, as como el indicador del volumen de orina (Urine Volume) 44
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] en la parte inferior derecha de la pantalla.
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5. Despus de que el recipiente de drenaje se haya llenado de sangre, pulsa Guardar Datos (Record Data). Estos sern tus datos de referencia para esta actividad. 6. Pulsa el botn Rellenar (Refill). 7. Aumenta el radio aferente (Afferent Radius) en 0.05 mm y repite los pasos 3 a 6, asegurndote de pulsar Guardar Datos (Record Data) al final de cada experimento. Mantn el resto de variables en sus valores originales. Contina repitiendo la actividad hasta que hayas alcanzado el radio aferente (Afferent Radius) mximo de 0.60 rnm. Compara estos datos con tus datos de referencia. Cmo afect el aumento del radio de la arteriola aferente a la filtracin glomerular? 8. Reduce el radio de la arteriola aferente (Afferent Radius) hasta 0.30 rnm y pulsa Iniciar (Start). En estas condiciones, fluye el lquido a travs del nefrn? Cul es la filtracin glomerular? Cmo es esta filtracin comparada con tus datos de referencia, y por qu? 9. Utilizando la simulacin, disea y realiza un experimento para probar los efectos del aumento o de la disminucin del radio eferente (Efferent Radius). Cmo afect el aumento del radio eferente a la filtracin glomerular? Cmo afect la disminucin del radio eferente a la filtracin glomerular? Cul podra ser la causa fisiolgica de un cambio en el radio de la arteriola aferente o eferente?
Actividad 2: Efecto de la Presin sobre la filtracin glomerular A continuacin, investigars el efecto de la presin arterial sobre la filtracin glomerular. 1. Bajo el indicador de Conjunto de Datos (Data Sets), resalta Presin (Pressure). Esto te permitir guardar tus datos en una nueva ventana de conjunto de datos. Siempre puedes recuperar tus datos de la actividad anterior resaltando el conjunto de datos Aferente (Afferent). 2. Asegrate de que el recipiente de origen est lleno de sangre y el recipiente de drenaje est vaco. Si no es as, pulsa Rellenar (Refill). 3. Ajusta el indicador de presin (Pressure (mm Hg)) (encima del recipiente de origen) a 70 mm Hg. Fija el radio aferente (Afferent Radius) a 0.50 mm y el radio eferente (Efferent Radius) a 0.45 mm. 4. Pulsa el botn Iniciar (Start). Observa los indicadores de Presin Glomerular tGlomerular Pressure) y de Filtracin Glomerular (Glomerular Filtration Rate) en la parte superior derecha de la pantalla. 5. Cuando hayas finalizado el experimento, pulsa el botn de Guardar Datos (Record Data). Estos son 45
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] tus datos de referencia.
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6. Aumenta la presin (Pressure (mm Hg)) en 5 mmHg y repite el experimento. Contina aumentndola de 5 en 5 rnm y repitiendo el experimento hasta que hayas alcanzado la presin mxima de 100 mmHg. Asegrate de pulsar Guardar Datos (Record Data) y Rellenar (Refill) despus de cada experimento. Qu le sucedi a la presin en el glomrulo a medida que aumentabas la presin? Qu ocurri con la filtracin glomerular? Compara el volumen de orina de tus datos de referencia con el volumen de orina cuando aumentaste la presin. Cmo cambi el volumen de orina? Por qu podra considerarse beneficioso para el organismo un incremento del volumen de orina? Actividad 3. Efectos Combinados En la primera actividad te fijaste en el dimetro de la arteriola y su papel en la filtracin glomerular. Despus examinaste el efecto de la presin sobre la filtracin glomerular. En el cuerpo humano, ambos efectos se producen simultneamente. En esta actividad investigars los efectos combinados de los cambios en el dimetro de la arteriola y en la presin sobre la filtracin glomerular. 1. Bajo la ventana de Conjunto de Datos (Data Sets), resalta Combinado (Combined). Esto te permitir guardar tus datos en una nueva ventana de conjunto de datos. Siempre puedes recuperar tus datos de las actividades anteriores resaltando el conjunto de datos Aferente (Afferent) o el conjunto de datos Presin (Pressure). 2. Fija la presin (Pressure (mmHg)) a 90 mmHg, el radio de la arteriola aferente (Afferent Radius) a 0.50 mm, y el radio de la arteriola eferente (Efferent Radius) a 0.45 mm. 3. Pulsa el botn Iniciar (Start) y deja que se complete el experimento. Pulsa entonces Guardar Datos (Record Data). Estos son tus datos de referencia. 4. Pulsa Rellenar (Refill). 5.Disminuye la presin (Pressure (mmHg)) hasta 80 mmHg. Mantn el radio de la arteriola aferente (Afferent Radius) en 0.50 y el radio de la arteriola eferente (Efferent Radius) en 0.45 mm. 6. Pulsa el botn Iniciar (Start) y deja que se complete el experimento. Pulsa entonces Guardar Datos (Record Data). 7. Pulsa Rellenar (Refill). Qu sucedi con la filtracin glomerulai y con el volumen de orina despus de reducir la presin? Cmo podras ajustar el radio aferente o eferente para compensar el efecto de la reduccin de presin sobre la filtracin glomerular y sobre el volumen de orina? Utiliza la simulacin para decidir tu respuesta. 8. A continuacin, pulsa el botn cuadrado de la vlvula que se encuentra sobre el conducto colector (que actualmente indica vlvula abierta (valve open)). Ahora la vlvula debe indicar vlvula cerrada (valve closed). 9. Pulsa Iniciar (Start). Al final del experimento pulsa Guardar Datos (Record Data). 46
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Qu cambios se observan en el funcionamiento de la nefrn cuando la vlvula est cerrada? Por qu se observaron estos cambios? Es funcional el rin cuando la filtracin glomerular es cero? Explica tu respuesta. Cul es el principal ingrediente que se necesita eliminar de la sangre? Los estudios sobre el envejecimiento han demostrado que algunas nefrns pueden fallar a medida que envejecemos. Ser esto un problema en lo que se refiere a la formacin de la orina? Si la presin arterial disminuyera -por ejemplo, como resultado de la prdida de sangre qu cambios necesitara hacer el rin para mantener su filtracin normal?
SIMULANDO LA FORMACIN DE ORINA La reabsorcin es el movimiento de los solutos y del agua filtrada desde la luz de los tbulos renales nuevamente hacia el plasma. Sin la reabsorcin excretaramos los solutos y el agua que necesita nuestro organismo. En la siguiente actividad examinars el proceso de reabsorcin pasiva que se produce mientras el lquido filtrado viaja a travs de un nefrn y se va formando orina. Pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla y selecciona Simulando la Formacin de Orina tSimulating Urine Formation. El espacio amarillo claro que rodea a la nefrn de color amarillo oscuro representa el espacio intersticial entre la nefrn y los capilares peritubulares que se ramifican desde la arteriola eferente. El movimiento de solutos yagua desde los tbulos renales al espacio intersticial depende del gradiente de concentracin --es decir, la diferencia entre la concentracin de solutos en los tbulos y la concentracin de solutos en el espacio intersticial. Observa el indicador de Cone. Grad. (mosm) (Gradiente de Concentracin) cerca de la parte inferior de la pantalla. Pulsando los botones (+) y (-) que hay junto a este indicador y despus pulsando Aplicar (Dispense), puedes ajustar la concentracin de solutos del espacio intersticial. Cuando pulsas Iniciar (Starti, el lquido filtrado comenzar a fluir a travs de la nefrn, y los solutos y el agua se movern desde los tbulos al espacio intersticial y de ah a los capilares peritubulares, .completando el proceso de la reabsorcin. Observa que los capilares no se muestran en la pantalla.
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Pantalla de inicio del experimento de Simulacin de la formacin de orina
Observa tambin las dos botellas cuentagotas en la parte derecha de la pantalla, que contienen las hormonas aldosterona (Aldosterone) y ADH (hormona antidiurtica). Para la primera actividad te ocupars solamente de la ADH, que aumenta la permeabilidad al agua del t bulo contoneado distal y del conducto colector de la nefrn. Cerca de la parte inferior izquierda de la pantalla observars un Detector (Probe). Cuando el detector se ponga rojo, puedes pulsar sobre l y arrastrarlo sobre las diferentes partes de la nefrn y sobre el recipiente, para medir la concentracin de solutos en ese momento. Finalmente, observa el equipo para aadir transportadores de glucosa en la misma parte superior de la pantalla. Explicaremos este equipo en la Actividad 5, cuando estudies la reabsorcin de glucosa. Actividad 4. Efecto del gradiente de soluto sobre la concentracin de la orina 1. Asegrate de que est resaltado Gradiente (Gradient) dentro de la ventana de Conjunto de Datos (Data Sets). 2. Pulsa y arrastra el tapn del cuentagotas de la botella de ADH y sultalo en la parte superior del tapn gris, directamente encima del lado derecho de la nefrn. El tapn se abrir y la ADH gotear sobre el conducto colector. Despus se cerrar el tapn. 3. La ventana de Conc. Grad. (mosm) (Gradiente de Concentracin) debe indicar 300. Si no es as, utiliza los botones (+) o (-) para ajustarlo.
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4. Pulsa Aplicar (Dispense) para aadir la concentracin de 300 mosm al fluido intersticial. Es importante observar que ste es tambin el valor tpico de la concentracin sangunea de solutos. 5. Pul a Iniciar (Start) y deja que la sangre atraviese el sistema. Observa el Detector (Probe) en la parte inferior izquierda de la pantalla. Cuando se ponga rojo, pulsa sobre l y arrstralo hasta encima del depsito que recoge la orina para medir la concentracin de solutos en ella. El valor aparecer en la ventana de Concentracin (Concentration) al lado de la localizacin original del detector. 6. Al final del experimento, pulsa Guardar Datos (Record Data). 7. Aumenta el gradiente de concentracin en 300 mosm (es decir, fjalo a 600 mosm) y repite el experimento. Recuerda aadir ADH al conducto colector antes de pulsar Iniciar (Start). Contina aumentando el gradiente de 300 en 300 mosm y repitiendo el experimento hasta que alcances 1200 mosm, el valor normal de la concentracin intersticial de solutos en el rin. Asegrate de pulsar Guardar Datos (Record Data) despus de cada experimento. Cmo vari la concentracin de solutos de la orina a medida que aumentaba el gradiente de concentracin del fluido intersticial? Qu le sucedi al volumen de orina a medida que aumentaba el gradiente de concentracin? Por qu? Al aumentar el gradiente de concentracin, qu le ests haciendo a la orina que se est formando? Haz una prediccin sobre qu le sucedera al volumen de orina si no aadieras ADH al conducto colector. Actividad 5. Reabsorcin de Glucosa La glucosa no es una molcula muy grande, y como tal se filtra fcilmente desde del plasma hacia la cpsula de Bowman como parte del lquido filtrado. Para asegurarse de que la glucosa sea reabsorbida hacia el organismo, de modo que pueda constituir el material inicial del metabolismo, existen en el nefrn transportadores de glucosa. Hay un nmero finito de transportadores en cada clula, de forma que si se ingiere demasiada glucosa, no toda ella ser reabsorbida hacia el organismo. La glucosa es absorbida mediante un transporte activo secundario, cuya energa procede del gradiente creado por el transporte de sodio. Los transportadores que trasladan estas molculas a travs de la membrana on protenas incrustadas en la membrana celular. En esta actividad examinars el efecto de los tran portadores de glucosa sobre su reabsorcin. 1. Resalta Glucosa (Glucos.e) en la ventana de Conjunto de Datos (Data Sets). 2. Fija el Conc. Grad. (mosm) (Gradiente de Concentracin) en 1200 y pulsa Aplicar (Dispense). Recuerda que 1200 es el valor normal de la concentracin de solutos en el rin. 3. Pulsa Iniciar (Start). 4.Pulsa Guardar Datos (Record Data) al final del experimento. ste servir como control, sin transportadores de glucosa. Observa que tampoco se ha aadido ADH -te centrars en la ausencia o la 49
[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] presencia de transportadores de glucosa.
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5. En la parte superior de la pantalla pulsa el botn (+) hasta que la ventana de Transportadores de Glucosa (Glucose Carriers) indique 100. Pulsa entonces Aadir Transportadores (Add Carrier) 6. Pulsa Iniciar (Start). 7. Al final del experimento, pulsa Guardar Datos (Record Data). 8. Contina aumentando el nmero de transportadores de glucosa de 100 en 100 y repitiendo el experimento hasta que hayas alcanzado el mximo nmero de transportadores, 500. Asegrate de aplicar el gradiente de concentracin antes de comenzar cada experimento, y de pulsar Guardar Datos (Record Data) despus de cada uno de ellos. Qu le sucede a la concentracin de glucosa a medida que aades transportadores de glucosa al sistema? En qu punto la concentracin de glucosa en la orina es cero? Una persona con diabetes tipo 1 no puede sintetizar insulina, y una persona con diabetes tipo II no responde a la insulina que sintetiza. En cualquier caso, la persona diabtica es incapaz de absorber glucosa hacia su organismo. Qu esperaras encontrar en la orina de una persona diabtica? Por qu?
Actividad 6. Efecto de las hormonas sobre la reabsorcin Ahora debes entender cmo se produce la filtracin y cmo est controlada. Debes comprender el movimiento pasivo de solutos y el papel de los transportadores de glucosa en su reabsorcin. A continuacin, examinars las acciones de las hormonas sobre la nefrn, la mayora de las cuales tienen lugar en el conducto colector. La hormona antidiurtica (ADH) est influida por la osmolalidad (la concentracin de una solucin expresada en osmoles de partculas de soluto por kilogramo de solvente) de los fluidos corporales as como por el volumen y la presin del sistema cardiovascular. Un cambio de un 1 % en la osmolalidad corporal har que se segregue esta hormona. Su ccin principal es aumentar la permeabilidad al agua del tbulo distal y del conducto colector de modo que se absorba ms agua hacia el organismo. La ADH se une a los receptores de las clulas principales para producir esta reaccin abriendo acuaporinas, o canales de agua en la membrana apical, Sin absorcin de agua, el organismo se deshidratara rpidamente. En condiciones normales el rin regula estrechamente la cantidad de agua excretada para mantener el equilibrio hdrico del organismo. La entrada de agua al organismo debe ser exactamente igual a su prdida. Si la toma de agua es baja, o si ha habido una prdida de fluidos del organismo, los riones funcionan para conservar el agua haciendo la orina muy hiperosmtica (con una concentracin de solutos relativamente elevada) con respecto a la sangre. Si ha habido una gran entrada de lquido, la orina es ms hipoosmtica. En el individuo normal, la osmolalidad de la orina vara desde 50 hasta 1200 miliosmoles/kg de agua. La osmolalidad del organismo se debe mantener dentro de lmites muy estrechos. La aldosterona es una hormona de la corteza suprarrenal que est bajo el control del sistema renina-angiotensina. Una disminucin de la presin arterial es detectada por las clulas de la arteriola aferente y desencadena la liberacin de renina. La renina acta como una enzima proteoltica, haciendo 50
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que el angiotensingeno se convierta en angiotensina I. Las clulas endoteliales tienen una enzima, denominada enzima convertidora, que convierte la angiotensina I en angiotensina II. La angiotensina II acta sobre la corteza suprarrenal para inducirla a que segregue la aldosterona. La aldosterona acta sobre el conducto colector del rin para estimular la captacin de sodio desde el lquido filtrado hacia el organismo y la liberacin de potasio desde el organismo. Unido a la adicin de ADH, este cambio de electrlito tambin hace que se reabsorba ms agua hacia la sangre, dando como resultado un incremento de la presin arterial. 1. Resalta Hormona (Hormone) dentro de la ventana de Conjunto de Datos (Data Sets). 2. Fija el nmero de Transportadores de Glucosa (Glucose Carriers) en cero y pulsa Aplicar (Dispense) para asegurarte de que ningn transportador de la actividad anterior contina activo. 3. Fija el Conc. Grad. (mosm) (Gradiente de Concentracin) en 1200 y pulsa Aplicar (Dispense). 4. Pulsa Iniciar (Start). Al final del experimento pulsa Guardar Datos (Record Data). ste es tu experimento control y tus datos de referencia. 5. Pulsa y arrastra el tapn del cuentagotas de la botella de aldosterona y sultalosobre el tapn gris, directamente encima del lado derecho de la nefrn. El tapn se abrir y la aldosterona gotear sobre el conducto colector. 6. Pulsa Iniciar (Start). Al final del experimento, pulsa Guardar Datos (Record Data). 7. Pulsa y arrastra el tapn del cuentagotas de la botella de ADH y sultalo sobre el tapn gris, directamente encima del lado derecho de la nefrn. El tapn se abrir y la ADH gotear sobre el conducto colector. 8. Pulsa Iniciar (Start). Al final del experimento pulsa Guardar Datos (Record Data). 9. Para tu cuarto experimento, aplica sobre el conducto colector tanto la ADH como la aldosterona. Debes ver aparecer una lnea amarilla contorneando el conducto colector. 10. Pulsa Iniciar (Start). Al final del experimento, pulsa Guardar Datos (Record Data). Qu hormona tiene el mayor efecto sobre el volumen de orina? Por qu? Cmo influye la adicin de aldosterona a la concentracin de potasio en la orina? Cmo afecta la adicin de ADH a la concentracin de potasio en la orina? Este efecto es comparable al efecto de aadir aldosterona? Cmo afecta aadir ambas hormonas a 1) la concentracin de la orina, 2) el volumen de orina y 3) la concentracin de potasio? Si no se utilizara ADH, cmo variara la concentracin de la orina? Razona tu respuesta
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] SEMINARIO DE FISIOLOGA ENDOCRINA
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1.- Si en un animal de experimentacin, se hace una seccin a nivel de los vasos portales: Qu pasar con la secrecin de hormonas hipofisiarias? Por qu?. 2.- Cmo es el modelo general de control de la secrecin de hormonas adenohipofisiarias?. 3.- Actualmente el Ministerio de Salud tiene implementado un programa de bsqueda masiva de hipotiroidismo congnito y fenilcetonuria, que se aplica a todos los recin nacidos que nacen en los hospitales pblicos del pas. En Chile, para detectar el hipotiroidismo congnito se extrae una gota de sangre del taln y mediante tcnicas de radioinmunoanlisis (RIA), se cuantifica TSH, siendo sus valores normales hasta 20 mUI/ml. a) Qu es el Hipotiroidismo Congnito? b) Por qu se puede utilizar la cuantificacin de TSH para pesquisar esta patologa? c) Por qu los nios afectados con esta patologa tienen niveles de TSH altos? d) Cmo se encontrarn los niveles plasmticos de T3 y T4 en estos nios? e) Por qu es importante prevenir esta enfermedad? f) Qu manifestaciones se observan a nivel del sistema nervioso central en los nios afectados por esta patologa? Cul cree Ud. que sera el tratamiento? 4.- Un individuo normal fue sometido a las siguientes condiciones experimentales: - Se le administr en ayunas 75 g de glucosa por va oral y se le determin la glicemia en funcin del tiempo. Los valores encontrados fueron: Basal: 80 mg/dl 60 min.: 170 mg/dl 120 min.: 110 mg/dl 180 min.: 95 mg/dl -Al da siguiente se le administr igual cantidad de glucosa por va endovenosa. En este caso los valores encontrados fueron: Basal: 85 mg/dl 60 min.: 175 mg/dl 120 min.: 150 mg/dl 180 min.: 120 mg/dl Grafique los resultados en cada caso. a) A qu se deben las diferencias observadas entre las dos condiciones experimentales? b) Cmo es la respuesta de un diabtico frente a una carga oral de glucosa? c) Cul es la importancia de la mantencin de la glicemia? e) Qu hormonas participan en este proceso? Indique los efectos sobre el metabolismo intermediario que poseen tales hormonas y los tejidos sobre los cuales actan.
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5. El grfico muestra un test de tolerancia a la glucosa realizado en una persona que presenta hipoglicemia reactiva.
a) Todas las personas presentan este tipo de hipoglicemia reactiva? b) Cul es la causa de esta respuesta a la ingesta de glucosa? c) Cmo cree Ud. que debera ser normalmente, la ingesta de carbohidratos en esta persona? d) Por qu se debe evitar caer en un estado de hipoglicemia como la que presenta este paciente? 6. Algunos frmacos hipoglicemiantes utilizados en el tratamiento de pacientes diabticos son bloqueadores de canales de potasio sensibles a ATP. En el contexto del mecanismo de acoplamiento estmulo- secrecin de insulina cmo es que estos frmacos podran estimular la secrecin de insulina? 7. Cules son las hormonas que influyen en el crecimiento normal y cul es su funcin? 8. La hormona del crecimiento aumenta directamente la velocidad de desarrollo en los nios? 9. Clasifique las acciones biolgicas directas de la hormona del crecimiento sobre el tejido adiposo, msculos e hgado.
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] LABORATORIO N10: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA TEST DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
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INTRODUCCION La prueba de la glucosa en sangre sirve para conocer la cantidad de glucosa en sangre justo en el momento de la obtencin de la muestra. Se utiliza tanto para detectar hiperglicemias como hipoglicemias y para diagnosticar la diabetes. La glucosa sangunea puede medirse en estado de ayuno (obtencin despus de 8 a 10 horas de ayuno), aleatoriamente (en cualquier momento), postprandial (despus de una comida), y/o formando parte de un test de tolerancia oral a la glucosa (TOG). Un test de TOG no es ms que una serie de determinaciones de glucosa. Debe determinarse ante todo una glucosa en ayunas; entonces el paciente bebe una cantidad estndar de una solucin de glucosa para poner a prueba su sistema. A continuacin se solicitan una o ms determinaciones de glucosa a intervalos especficos para controlar los niveles de glucosa a lo largo del tiempo. El test de TOG puede solicitarse como ayuda en el diagnstico de una diabetes y como una prueba de seguimiento ante una glucosa en sangre aumentada. La American Diabetes Association recomienda estudiar la glucosa en ayunas o bien el test de TOG para diagnosticar una diabetes pero dice que la prueba debe repetirse al cabo de un tiempo, para poder confirmar el diagnstico de diabetes. Niveles elevados de glucosa suelen indicar diabetes, pero existen muchas otras situaciones y enfermedades que pueden tambin causar aumentos de glucosa en sangre. En la tabla siguiente se resume el significado de los resultados obtenidos, basndose en las recomendaciones de prctica clnica de la American Diabetes Association. Tabla 1.
Tabla 1. Interpretacin de los resultados obtenidos en el Test de Tolerancia a la glucosa.
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OBJETIVO GENERAL Diagnosticar diabetes y se realiza en toda persona con glicemia basal entre 110 y 126 mg/dl, valoracin del postparto de gestantes con diabetes gestacional o en estudios epidemiolgicos.
MATERIALES Sobrecarga de Glucosa (75gr) Glucotex Lancetas
IMPORTANTE Para el desarrollo de esta actividad practica es necesario que un integrante de cada grupo de trabajo este en ayunas de al menos 10-12 hrs.
RIESGO FRECUENTE El riesgo ms frecuente consiste en tener nauseas e incluso llegar a vomitar con lo que la prueba quedara anulada.
PROCEDIMIENTO El test consiste en la administracin de glucosa por va oral y medicin del aumento de la glicemia durante dos horas. Se administrar 75 g (1,75 g/kg de peso en nios) de glucosa oral. Se extraer sangre en situacin basal y cada media hora posterior a la administracin de la sobrecarga de glucosa. El paciente deber permanecer en reposo. ANALISIS DE LA ACTIVIDAD 2. Anotar en la siguiente tabla los valores obtenidos de glicemia en cada uno de los tiempos establecidos, segn la tabla: Tiempo 0 Basal 30 1h 1.5 h 2.0 h 2.5 mg/dL
3. Graficar glicemia (mg/dl) v/s tiempo (hrs.). Analizar y discutir el grafico obtenido. Si el nivel de glucosa a las dos horas es inferior a 140mg/dl el paciente es normal, si a las dos horas, el valor es mayor o igual a 200 mg/dl la situacin del paciente es patolgica. Para valores entre 140 y 200 mg/dl se considera intolerancia oral a la glucosa. 55
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PARA INVESTIGAR: 1. Por qu dentro de la tcnica del test de tolerancia a la glucosa se utiliza una sobre carga de 75 gr. de glucosa? 2. Explique los mecanismos fisiolgicos por los cuales al cabo de 1 hora se logra normalizar la glicemia? 3. Cmo sera esta grafica en los siguientes casos: diabetes tipo 1, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa y diabetes gestacional? 4. Averiguar la diferencia de realizar el test en sangre total y en plasma.
NOTA: Consultar valoresnormales.com
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] LABORATORIO N11: PRACTICO DE FISIOLOGIA HUMANA PROCESOS FSICOS Y QUMICOS DE LA DIGESTIN
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Objetivos: 1. Definir tracto digestivo, glndulas accesorias, digestin, hidrolasas, amilasa salival, carbohidratos, protenas, lpidos, sales biliares, pepsina y lipasa. 2. Comprender las principales funciones y procesos del sistema digestivo. 3. Comprender la especificidad de la accin enzimtica. 4. Explicar el efecto de la temperatura y del pH sobre la actividad enzimtica. 5. Identificar las tres categoras principales de molculas alimenticias. 6. Explicar cmo puede determinarse la actividad enzimtica con ensayos enzimticos. 7. Identificar las principales enzimas, sustratos y productos de la digestin de carbohidratos, protenas y grasas. El sistema digestivo, tambin denominado sistema gastrointestinal, consta de un tracto digestivo y las glndulas accesorias que segregan enzimas y los fluidos necesarios para la digestin. El tracto digestivo incluye la boca, la faringe, el esfago, el estmago, el intestino delgado, el colon, el recto y el ano. Las funciones principales del sistema digestivo son inferir el alimento, romperlo en sus componentes ms simples, extraer los nutrientes de estos componentes para su absorcin corporal y eliminar los deshechos. La mayora de los alimentos que consumimos no se pueden absorber hacia nuestra circulacin sangunea sin que primero se rompan en partculas ms pequeas. La digestin es el proceso de rotura en tracto digestivo de las molculas de alimento en otras ms pequeas con la ayuda de enzimas. Las enzimas digestivas son hidrolasas: catalizan (aceleran) la adicin de agua a las molculas de alimento para romperlas en subunidades ms pequeas. Por ejemplo, cuando dos aminocidos se unen para formar una protena, un grupo OH- es eliminado del extremo carboxilo de un aminocido y un H+ es eliminado del grupo amino del segundo aminocido para formar un enlace dipptido entre los dos aminocidos y adems agua. Para romper esta protena, una enzima digestiva cataliza la adicin de agua al enlace dipptido, rompiendo el enlace para restaurar el grupo carboxilo del primer aminocido y el grupo amino del segundo aminocido, escindiendo eficazmente la protena en dos subunidades de aminocido. Una vez que una molcula de alimento se rompe en sus componentes mas simples, estos se absorben a travs de las clulas epiteliales que revisten el tracto intestinal y entran en la circulacin sangunea. Adems de ser hidrolasas, las enzimas digestivas son especficas de sustrato -funcionan sobre algunas sustancias pero no sobre otras. Por ejemplo, la amilasa salival e una enzima de la saliva que rompe el almidn (que se encuentra en alimentos como el maz, las patatas, el pan y la pasta) y el glucgeno (almidn animal), pero no la celulosa (que se encuentra en las paredes celulares de las plantas), aunque la celulosa se compone de glucosa, al igual que el almidn y el glucgeno. La temperatura y el pH son dos factores que desempean un papel clave en la eficacia de las enzimas digestivas. Un aumento en la temperatura puede hacer que una reaccin se acelere, ya que las molculas se muevan ms rpidamente y entonces se incrementa el contacto con la enzima; sin embargo, una temperatura demasiado alta alterar las uniones moleculares que estabilizan la configuracin de la enzima, causando su desnaturalizacion (es decir, experimenta un cambio estructural que impide su funcin). Adems, cada enzima tiene un pH ptimo en el cual es ms activa. Dentro del rango de pH ptimo, la enzima funcionar segn lo esperado; ms all de este pH, la enzima no tendr efecto. La mayora de las molculas alimenticias se pueden incluir en una de las siguientes categoras: carbohidratos, protenas o lpidos. Los carbohidratos son la fuente principal de caloras para la mayora de las personas e incluyen la glucosa, las azcares y el almidn. Antes de ser absorbidos hacia la sangre, 57
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los carbohidratos ms grandes se rompen en monosacridos (azcares simples, tales como glucosa). Las protenas son muy importantes para el crecimiento, especialmente entre la gente joven. Las protenas se rompen en aminocidos antes de ser absorbidas por el organismo para construir nuevas protenas. Los lpidos, la mayora de los cuales son triglicridos (1os componentes principales de grasas y de aceites) no son solubles en agua y por ello plantean problemas especiales para la digestin. La lipasa, la enzima que acta sobre los lpidos, es hidroltica (como todas las enzimas digestivas) y solo puede actuar en la superficie de las gotas de lpidos porque estos son insolubles en agua. Para aumentar la velocidad de digestin por la lipasa, los lpidos primero son emulsionados (se rompen en gotas ms pequeas) con la ayuda de las sales biliares, derivadas del colesterol. La emulsin da lugar a gotas ms pequeas con reas superficiales ms grandes, haciendo ms fcil que la lipasa se una a los sustratos y digiera los lpidos. Las sales biliares tambin forman micelas, que ayudan a la absorcin de los productos de la digestin de los lpidos: cidos grasos y monoglicridos. Amilasa Observa las 11 botellas cuentagotas en el cuadrante superior derecho de la pantalla. Preparars tubos de ensayo conteniendo varias combinaciones del contenido de las botellas. Debajo de las botellas cuentagotas hay una unidad de incubacin que te permitir hervir, congelar e incubar los tubos de ensayo. El armario cenado en el cuadrante superior izquierdo de la pantalla es un armario de anlisis, que contiene los productos qumicos que aadirs a tus tubos de ensayo experimentales para interpretar los resultados de la prueba. Debajo del armario de anlisis hay un lavador de tubos de ensayo (Test Tube Washer) donde depositars los tubos de ensayo usados. Junto a l hay un aparato distribuidor de tubos de ensayo, donde pulsars sobre los tubos de ensayo y los arrastrars a los soportes en la unidad de incubacin, donde los preparars para la experimentacin. A lo largo de la parte inferior de la pantalla est el mdulo de registro de datos, donde guardars tus datos experimentales.
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Actividad 1. Amilasa salival y almidn La digestin del almidn comienza en la boca con la accin de la amilasa salival, que es segregada por las glndulas salivales. La amilasa salival rompe el almidn en maltosa, un disacrido formado por dos molculas de glucosa. As, la presencia de maltosa en una muestra experimental indicara que se ha producido la digestin del almidn. Tus objetivos en este experimento son probar lo efectos de la amilasa sobre el almidn, determinar el pH ptimo al que acta la amilasa y observar los efectos de la temperatura sobre la actividad enzimtica. 1. Pulsa sobre el tubo de ensayo que cuelga ms cerca de la incubadora, arrstralo a la ranura nmero 1 en la parte superior de la incubadora y suelta el botn del ratn. El tubo de ensayo se colocar en su lugar. Repite esta accin, llenando la ranura nmero 2, la ranura nmero 3, etctera, hasta que las siete ranuras en la parte superior de la incubadora contengan tubos ensayo. 2. Llena tus siete tubos de ensayo con tres sustancias cada uno, tal como sigue: - Tubo de ensayo 1: almidn (Starch), agua desionizada (Deionized Water), tampn pH 7.0 (PH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 2: amilasa (Amylase), agua desionizada (Deionized Water), tampn pH 7.0 (PH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 3: almidn (Starch), amila a (Amylase), tampn pH 7.0 (PH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 4: almidn (Starch), amilasa (Amylase), tampn pH 7.0 (PH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 5: maltosa (Maltose), agua desionizada (Deionized Water), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 6: almidn (Starch), amilasa (Amylase), tampn pH 2.0 (pH 2.0 Buffer) - Tubo de ensayo 7: almidn (Starch), amilasa (Amylase), tampn pH 9.0 (pH 9.0 Buffer) Para hacer esto, pulsa sobre el cuentagotas de la sustancia deseada, arrstralo encima del tubo de ensayo correspondiente y suelta el botn del ratn. 3. Pulsa el nmero 3 debajo del tubo n.? 3. El tubo bajar en la unidad de incubacin. Entonces pulsa Hervir (Boil). El tubo hervir y despus volver a subir. Observa que la nica diferencia entre el tubo 3 y el tubo 4 es que el tubo 3 ha hervido. 4. Asegrate de que la temperatura de incubacin est fijada a 37C y el temporizador (Timer) est fijado en 60 minutos. Si no es as, pulsa los botones (+) o (-) para ajustarlo. 5. Pulsa Incubar (lncubate). Los siete tubos de ensayo bajarn al interior de la unidad de incubacin y sern agitados suavemente mientras se incuban. Al final del periodo de incubacin, los tubos volvern a subir y la puerta del armario de anlisis se abrir. Observars que en el armario de anlisis hay siete tubos de ensayo vacos y dos botellas cuentagotas. Las dos botellas cuentagotas contienen los reactivos de IKI y de Benedict. La prueba de IKI detecta la presencia de almidn, mientras que la prueba de Benedict detecta la presencia de azcares tales como 59
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glucosa o maltosa (que, como recordars, son productos de la digestin del almidn). Aadirs estos reactivos a tus siete tubos de ensayo experimentales para determinar si ha habido o no digestin. 6. Pulsa sobre el tubo de ensayo 1 de la ranura 1 de la incubadora. Vers cambiar el cursor a un tubo de ensayo en miniatura. Arrstralo al borde del primer tubo del armario de anlisis, despus suelta el botn del ratn. El contenido del tubo de ensayo en miniatura se vaciar en el tubo de anlisis. 7. Repite el paso 6 para los tubos de ensayo restantes. Asegrate de hacer esto secuencialmente; es decir, haz el tubo de ensayo 2, despus el tubo de ensayo 3, etctera. 8. Una vez que las soluciones de cada uno de los tubos de la incubadora se han transferido a los tubos del armario de anlisis, pulsa sobre el tapn de la botella cuentagotas del reactivo de IKI, arrstralo a la boca del primer tubo del armario de anlisis y suelta el botn del ratn. Se vertern las gotas del reactivo de IKI. Repite esto para todos los tubos de ensayo del armario de anlisis y observa cualquier cambio de color. Un color azul oscuro o gris indica una prueba positiva para el almidn; un color amarillo indica una prueba negativa. Anota tus resultados de la prueba de IKI en la tabla que hay ms adelante. 9. Despus, pulsa sobre el tapn de la botella cuentagota de Benedict, arrstralo a la boca del tubo de ensayo 1, (en la ranura 1 de la incubadora) y suelta el botn del ratn. Las gotas del reactivo de Benedict se aadirn al tubo de ensayo. Reptelo para los restantes tubos de ensayo de la incubadora. 10. Despus de que el reactivo de Benedict se haya aadido a cada tubo de ensayo, pulsa Hervir (Boil). Todos los tubos de ensayo descendern a la unidad de incubacin, hervirn y volvern a subir. Examina los cambios de color de los tubos. Un color verde, naranja o rojizo indican la presencia de maltosa, considerando positivo el resultado de la prueba de Benedict. Un color azul indica que no hay maltosa y el resultado de la prueba de Benedict se considera negativo. Anota tus datos en la Tabla l. 11. Pulsa Guardar Datos (Record Data) para guardar tus resultados de la pantalla. Tambin puedes pulsar Herramientas (Tools) y seleccionar Imprimir Datos (Print Data) para obtener una copia impresa de tus resultados. 12. Pulsa y arrastra cada tubo de ensayo al lavador de tubos de ensayo (Test Tube Washer) y suelta el botn del ratn. Lo tubos desaparecern. Cul era el propsito de tubos1 y 2? Qu puedes concluir de los tubos 3 y 4? Qu indican los tubos 4, 6 y 7 sobre la actividad de amilasa y el pH?
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[GUA PRCTICA DE LABORATORIOS DE FISIOLOGA ] Tabla 1. Resultados de la Actividad 1

Tubo N Sustancias 1
Almidon Agua desionizada Tampn pH 7.0 37C
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amilasa Agua desionizada Tampn pH 7.0 37C
3
Almidon amilasa Tampn pH 7.0 Hervido y luego incubado a 37C
4
Almidon Agua desionizada Tampn pH 7.0 37C
5
maltosa Agua desionizada Tampn pH 7.0 37C
6
Almidon amilasa Tampn pH 2.0 37C
7
Almidon amilasa Tampn pH 9.0 37C
Condiciones de incubacin Prueba del reactivo de IKI Prueba del reactivo de Benedict
Cul es el pH ptimo para la actividad de la amilasa? La amilasa acta a pH diferentes al pH ptimo? Cul es el producto final de la digestin del almidn? En qu tubos detectaste la presencia de maltosa al final del experimento? Por qu la maltosa no estuvo presente en los otros tubos? La amilasa salival sera desactivada casi por completo en el estmago. Sugiere una razn del porqu, basada en lo que has aprendido en esta actividad. Actividad 2. Amilasa Salival y Celulosa Si queda algn tubo de ensayo en la incubadora, pulsa sobre l y arrstralo al lavador de tubos de ensayo (Test Tube Washer) antes de comenzar esta actividad. En la actividad anterior aprendimos que la amilasa salival puede digerir el almidn. En esta actividad investigaremos si la amilasa salival digiere o no la celulosa, una sustancia que se encuentra en la pared celular de los vegetales. Tambin investigaremos si las bacterias (tales como las que se encuentran en el estmago de la vaca y de otros rumiantes) digerirn la celulosa y si la peptidasa (una enzima pancretica que rompe los pptidos) digerir el almidn. l. Pulsa sobre el tubo de ensayo que cuelga ms cerca de la incubadora, arrstralo a la ranura nmero 1 en la parte superior de la incubadora y suelta el botn del ratn. El tubo de ensayo se colocar en su lugar. Repite esta accin, llenando la ranura nmero 2, la ranura nmero 3, etctera, hasta que las siete ranuras contengan tubos de ensayo. 2. Llena tus siete tubos de ensayo con tres sustancias cada uno, tal como sigue: - Tubo de ensayo 1: amilasa (Amylase), almidn (Starch), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 2: amilasa (Amylase), almidn (Starch), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 3: amilasa (Amylase), glucosa (Glucose), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 4: amilasa (Amylase), celulosa (Cellulose), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 5: amilasa (Amylase), celulosa (Cellulose), agua desionizada (Deionized Water) - Tubo de ensayo 6: peptidasa (Peptidase), almidn (Starch), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 7: bacterias (Bacteria), celulosa (Cellulose), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) Para hacer esto, pulsa sobre el cuentagotas de la sustancia deseada, arrstralo encima del tubo de ensayo correspondiente y suelta el botn del ratn. 61
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3. Pulsa el nmero 1 debajo del tubo n.? 1. El tubo bajar a la unidad de incubacin. Entonces pulsa Congelar (Freeze). El tubo se congelar y despus volver a subir. 4. Asegrate de que la temperatura de incubacin est fijada a 37C y el temporizador (Timer) est fijado en 60 minutos. Si no es as, pulsa los botones (+) o (-) para ajustarlo. 5. Pulsa Incubar (lncubate). Los siete tubos de ensayo bajarn a la unidad de incubacin y sern agitados suavemente mientras se incuban. Al final del periodo de incubacin, los tubos volvern a subir y se abrir la puerta del armario de anlisis. Observars, de nuevo, que en el armario de anlisis hay siete tubos de ensayo vacos y las botellas cuentagotas de los reactivos de IKI y de Benedict. Recuerda que la prueba de IKI detecta la presencia del almidn, mientras que la prueba de Benedict detecta la presencia de glucosa o maltosa. Aadirs estos reactivos a tus siete tubos de ensayo experimentales para determinar si ha habido o no digestin. 6. Pulsa sobre el tubo de ensayo n.? 1 de la ranura 1 de la incubadora. Vers cambiar el cursar a un tubo de ensayo en miniatura. Arrstralo al borde del primer tubo en el armario de anlisis, despus suelta el botn del ratn. El contenido del tubo de ensayo en miniatura se vaciar en el tubo de anlisis. 7. Repite el paso 6 para los restantes tubos de ensayo. Asegrate de hacer esto secuencialmente: es decir, haz el tubo de ensayo n 2, despus el tubo de ensayo n 3, etctera. 8. Una vez que las soluciones de cada uno de los tubos de la incubadora se han transferido a los tubos del armario de anlisis, pulsa sobre el tapn de la botella cuentagotas del reactivo de IKI, arrstralo a la boca del primer tubo del armario de anlisis y suelta el botn del ratn. Se vertern las gotas del reactivo de IKI. Repite esto para todos los tubos de ensayo del armario de anlisis y observa cualquier cambio de color. Un color azul oscuro o gris indica una prueba positiva para el almidn; un color amarillo indica una prueba negativa. Anota tus resultados de la prueba de IKI en la tabla que hay ms adelante. 9. Despus, pulsa sobre el tapn de la botella cuentagotas del reactivo de Benedict, arrstralo a la boca del tubo de ensayo n." 1, (en la ranura 1 de la incubadora) y suelta el botn del ratn. Se aadirn al tubo de ensayo las gotas del reactivo de Benedict. Reptelo para los restantes tubos de ensayo. 10. Despus de que el reactivo de Benedict se haya aadido a cada tubo de ensayo de la incubadora, pulsa Hervir (Boil). Todos los tubos descendern a la unidad de incubacin, hervirn y volvern a subir. Examina los cambios de color de los tubos. Un color verde, naranja o rojizo indica la presencia de glucosa o de maltosa, considerando positivo el resultado de la prueba de Benedict. Un color azul indica que no hay glucosa o maltosa y el resultado de la prueba de Benedict se considera negativo. Anota tus datos en la Tabla 2.
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Tabla 2. Resultados de la Actividad 2

Tubo N Sustancias 1
amilasa almidn Tampn pH 7.0 Congelado y luego incubado a 37C
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amilasa almidn Tampn pH 7.0 37C
3
amilasa glucosa Tampn pH 7.0 37C
4
amilasa celulosa Tampn pH 7.0 37C
5
amilasa celulosa agua desionizada 37C
6
peptidasa almidn Tampn pH 7.0 37C
7
bacterias celulosa Tampn pH 7.0 37C
Condiciones de incubacin Prueba del reactivo de IKI Prueba del reactivo de Benedict
11.
Pulsa
Guardar
Datos
(Record
Data)
para
guardar
tus
datos
de
la
pantalla
12. Pulsa y arrastra cada tubo de ensayo al lavador de tubos ensayo (Test Tube Washer) y suelta el botn del ratn. Los tubos desaparecern. Qu tubos mostraron un resultado positivo para el reactivo IKl? Qu tubos mostraron un resultado positivo para el reactivo Benedict? Cul fue el efecto de congelar el tubo 1? Cul es la diferencia entre congelar o hervir el tubo? Cul es la subunidad ms pequea en la cual puede romper el almidn? Cul fue el efecto de la amilasa sobre la glucosa en el tubo 3? Sugiere una explicacin para este efecto. Cul fue el efecto de la amilasa sobre la celulosa en el tubo 4? Las palomitas de maz y el apio estn constituidas casi exclusivamente por celulosa. Qu puedes concluir sobre la digestin de la celulosa a juzgar por los resultados de los tubos de ensayo 4, 5 y 7? Cul fue el efecto de la enzima peptidasa utilizada en el tubo 6? Explica tu respuesta, basndote en lo que sabes sobre la peptidasa y la especificidad de substrato. Pepsina Las protenas estn compuestas de subunidades conocidas como aminocidos. Cuando estn sometidas a actividad enzimtica se rompen en sus componentes aminocidos. La pepsina es un ejemplo de enzima que rompe protenas. Es segregada por glndulas del estmago en forma de proenzima inactiva, pepsingeno, que es convertido a pepsina por la escisin de uniones dbiles en el ambiente cido (pH bajo) del estmago. El grado en el que se hidrolizan o digieren protenas en el estmago es significativo aunque variable. Se estima que el 15% de las protenas de la dieta son reducidas a aminocidos por la pepsina. La mayora de la digestin de las protenas ocurre en el duodeno del intestino delgado.
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Actividad 3. Digestin de protenas por la pepsina En la siguiente actividad investigars los efectos de la pepsina sobre BAPNA, una protena sinttica. Pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla y despus selecciona Pepsina (Pepsin). Vers la pantalla mostrada en la Figura 8.2. La pantalla es ligeramente diferente a la empleada con las actividades de la Amilasa. Observa que las botellas cuentagotas incluyen ahora botellas de pepsina y de BAPNA. BAPNA es una solucin incolora y transparente pero que tomar un color amarillo si es digerida por una enzima como la pepsina -no necesitars aadir reactivos adicionales para determinar si ha habido o no actividad enzimtica. 1. Pulsa sobre el tubo de ensayo que cuelga ms cerca de la incubadora, arrstralo a la ranura nmero l en la parte superior de la incubadora y suelta el botn del ratn. El tubo de ensayo se colocar en su lugar. Repite esta accin, llenando la ranura nmero 2, la ranura nmero 3, etctera, hasta que seis de las siete ranuras contengan tubos de ensayo (a diferencia de las actividades anteriores, aqu trabajars solamente con seis tubos de ensayo). 2. Llena tus seis tubos de ensayo con tres sustancias cada uno, tal como sigue: - Tubo de ensayo n." 1: pepsina (Pepsin), BAPNA, tampn pH 2.0 (PH 2.0 Buffer) - Tubo de ensayo n." 2: pepsina (Pepsin), BAPNA, tampn pH 2.0 (pH 2.0 Buffer) - Tubo de ensayo n." 3: pepsina (Pepsin), agua desionizada (Deionized Water), tampn pH 2.0 (PH 2.0 Buffer) - Tubo de ensayo n." 4: agua desionizada tDeionized Water), BAPNA, tampn pH 2.0 (PH 2.0 Buffer) - Tubo de ensayo n." 5: pepsina (Pepsin), BAPNA, tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo n." 6: pepsina (Pepsin), BAPNA, tampn pH 9.0 (pH 9.0 Buffer)
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Para hacer esto, pulsa sobre el cuentagotas de la ustancia deseada, arrstralo encima del tubo de ensayo correspondiente y suelta el botn del ratn. 3. Pulsa el nmero 1 debajo del tubo 1. El tubo bajar a la unidad de incubacin. Entonces pulsa Hervir (Boil). El tubo hervir y despus volver a subir. 4. Asegrate de que la temperatura de incubacin est fijada a 37C y el temporizador (Timer) est fijado en 60 minutos. Si no es as, pulsa los botones (+) o (-) para ajustarlo. 5. Pulsa Incubar (Incubate). Los seis tubos de ensayo bajarn a la unidad de incubacin y sern agitados suavemente mientras se incuban. Al [mal del periodo de incubacin, los tubos volvern a subir y se abrir la puerta del armario de anlisis. Al abrirse el armario de anlisis, vers un espectrofotmetro, un instrumento que mide la cantidad de luz absorbida (llamado densidad ptica) por una solucin. Utilizars el espectrofotmetro para medir la intensidad del color amarillo que se produce cuando es digerido el BAPNA. Para hacer esto, arrastrars individualmente cada tubo de ensayo al espectrofotmetro y pulsar Analizar (Analyze). El espectrofotmetro emitir una luz que pasar a travs de la solucin para medir su densidad ptica. Cuanto mayor es la densidad ptica, ms BAP A habr sido digerida por la pepsina. 6. Pulsa el tubo n." 1, arrstralo al espectrofotmetro y suelta el botn del ratn. 7. Pulsa Analizar (Analyze). Observa la lectura de densidad ptica para este tubo. Apntala en la Tabla 3. 9. Quita el tubo de ensayo y devulvelo a su ranura encima de la incubadora. 10. Repite los pasos 6 a 9 para los restantes tubos de ensayo. 11. Despus de que se hayan ledo todos los tubos, pulsa Guardar Datos (Record Data) para guardar tus datos de la pantalla. Tabla 3. Resultados de la Actividad 3
Tubo N Sustancias 1 pepsina BAPNA Tampn pH 2.0 hervido y luego incubado a 37C 2 pepsina BAPNA Tampn pH 2.0 37C 3 pepsina agua desionizada Tampn pH 2.0 37C 4 Agua desionizada BAPNA Tampn pH 2.0 37C 5 pepsina BAPNA Tampn pH 7.0 37C 6 pepsina BAPNA Tampn pH 9.0 37C
Condiciones de incubacin Densidad ptica
12. Arrastra cada tubo de ensayo al lavador de tubos de ensayo (Test Tube Washer) para deshacerte de de ellos. Qu valor de pH permiti la mxima hidrlisis del BAPNA? Qu efecto sobre la actividad enzimtica produjo el hervir el tubo de ensayo? Qu tubos de ensayo te llevaron a esta conclusin? La congelacin tendra el mismo efecto? 65
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Cules tubos de ensayo fueron tus controles? De qu eran controles? Cul fue el efecto de la pepsina sobre BAPNA? Usando la simulacin, disea un experimento que te permita ensayar cmo vara la cantidad de BAPNA digerida en funcin del tiempo. Cul es tu conclusin? Usando la simulacin, disea un experimento que te permita ensayar si la temperatura tieno o no algn efecto sobre la digestin de BAPNA. Cul es tu conclusin? Lipasa En una dieta normal, los principales lpidos son los triglicridos, los componentes mayoritarios de grasas y aceites. Los lpidos son insolubles en agua y primero deben ser emulsionados (se rompen en gotas ms pequeas, aumentando su rea superficial) antes de que una enzima digestiva como la lipasa pueda actuar con eficacia sobre ellos. En el intestino delgado, los lpidos son emulsionados por la bilis, un lquido amarillo verdoso producido por el hgado. Las gotas resultantes cubiertas de bilis tienen reas superficiales relativamente grandes, permitiendo a la enzima lipasa, soluble en agua, un acceso ms fcil a los sus tratos. La lipasa entonces hidroliza las gotas de lpidos a cidos grasas y monoglicridos, los productos finales de la digestin de los lpidos. La hidrlisis de los lpidos tambin forma micelas, pequeos agregados moleculares que aumentan la absorcin de los productos de la digestin de los lpidos. Las lipasas que se encuentran en el jugo pancretico son las responsables de la digestin de la mayora de los lpidos presentes en la dieta normal.
Actividad 4. Lipasa, bilis y digestin de lpidos Pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla y despus selecciona Lipasa (Lipase). Observa que entre las botellas cuentagotas ahora se incluyen las de lipasa, aceite vegetal y sales biliares. Observa tambin que las botellas cuentagotas que contienen tampones de pH est ahora codificadas por 66
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colores, esto te ayudar ms adelante a analizar tus resultados. Ensayars los efectos de la lipasa y de la bilis en la digestin de un lpido: el aceite vegetal. 1. Pulsa sobre el tubo de ensayo que cuelga ms cerca de la incubadora, arrstralo a la ranura nmero 1 en la parte superior de la incubadora y suelta el botn del ratn. El tubo de ensayo se colocar en su lugar. Repite esta accin, llenando la ranura nmero 2, la ranura nmero 3, etctera, hasta que las siete ranuras contengan tubos de ensayo. 2. Llena tus siete tubos de ensayo con cuatro sustancias cada uno, tal como sigue: - Tubo de ensayo 1: lipasa (Lipase), aceite vegetal (Vegetable Oil), sales biliares (Bife salts), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 2: Iipasa (Lipase), aceite vegetal (Vegetabfe Oil), sales biliares (Bife salts), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 3: lipasa (Lipase), aceite vegetal (Vegetable Oil), agua desionizada (Deionized Water), tampn pH 7.0 (PH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 4: lipasa (Lipase), agua desionizada tDeionized Water), sales biliares (Bife salts), tampn pH 9.0 (pH 9.0 Buffer) - Tubo de ensayo 5: agua desionizada (Deionized Water), aceite vegetal (Vegetable Gil), sales biliares (Bife safts), tampn pH 7.0 (pH 7.0 Buffer) - Tubo de ensayo 6: lipasa (Lipase), aceite vegetal (Vegetable Oil), sales biliares (Bile salts), tampn pH 2.0 (pH 2.0 Buffer) - Tubo de ensayo 7: lipasa (Lipase), aceite vegetal (Vegetable Oil), sales biliares (Bile salts), tampn pH 9.0 (pH 9.0 Buffer) Para hacer esto, pulsa sobre el cuentagotas de la sustancia deseada, arrstralo encima del tubo de ensayo corresponiente y suelta el botn del ratn. 3. Pulsa el nmero 1 debajo del tubo n. l. El tubo bajar a la unidad de incubacin. Entonces pulsa Hervir (Boil). El tubo hervir y despus volver a subir. 4. Asegrate de que la temperatura de incubacin est fija a 37C y el temporizador (Timer) est fijado en 60 minutos. Si no es as, pulsa los botones (+) o (-) para ajustarlo. 5. Pulsa Incubar (Incubate). Los siete tubos de ensayo jarn a la unidad de incubacin y sern agitado suavemente mientras se incuban. Al final del periodo de incubacin los tubos volvern a subir y se abrir la puerta del armario de anlisis. Vers un medidor de pH (acidmetro) en el armario de anlisis. La digestin del aceite vegetal por la lipasa liberar acidos grasos, que disminuirn el pH. As, utilizars el acidmetro para ayudarte a detectar la presencia de cidos grasos (y por lo tanto, evidencia de la digestin) comparando el pH tus muestras con su pH original. Pulsars y arrastrars individualmente los tubos de ensayo al acidmetro. Una vez tubos estn colocados en su lugar, pulsars Medir pH (measure pH). Un electrodo descender sobre el contenido de los tubos y tomar una lectura de pH. 6. Pulsa y arrastra el tubo de ensayo 1 al acidmetro. 7. Pulsa Medir pH (Measure pH). 8. Anota el valor del pH en la table 4, despus devuelve el tubo de ensayo a su ranura en la incubadora. 9. Repite los pasos 6 a 8 con los restantes tubos de ensayo. 10. Cuando todos los tubos hayan sido analizados, pulsa Guardar Datos (Record Data). 67
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12. Deshazte de los tubos de ensayo arrastrndolos individualmente al lavador de tubos de ensayo (Test Tube Washer). Qu mostr el tubo 1? Por qu el tubo 1 deba tener un pH de 7? Cul es la principal diferencia entre los tubos 2 y 3? Cul es el efecto de la sustancia del tubo 2 que no fue incluida en el tubo 3? Cul fue el pH ptimo para la digestin por la lipasa? Cmo lo sabes? Qu efecto tuvieron los otros tampones sobre el proceso digestivo? Cules son los productos de digestin por lipasa en el tubo 2? En qu tubos detectaste la presencia de cidos grasas? Tabla 4. Resultados de la actividad 4
Tubo Sustancias 1 lipasa aceite vegetal sales biliares Tampn pH 7.0 hervido y luego incubado a 37C 2 lipasa aceite vegetal sales biliares Tampn pH 7.0 37C 3 lipasa aceite vegetal agua desionizada Tampn pH 7.0 37 C 4 lipasa agua desionizada sales biliares Tampn pH 9.0 37C 5 agua desionizada aceite vegetal sales biliares Tampn pH 7.0 37 C 6 lipasa aceite vegetal sales biliares Tampn pH 2.0 37C 7 lipasa aceite vegetal sales biliares Tampn pH 9.0 37 C
Condicion es de incubacin pH
Procesos Fsicos de la Digestin Ten presente que los procesos qumicos de la actividad enzimtica son solamente una parte del proceso digestivo. Tambin estn implicados procesos fsicos. La masticacin, por ejemplo, mezcla el alimento con la mucosidad salival y la amilasa, lo reduce a partculas pequeas y manejables y lo transforma en una masa que se puede tragar denominada bolo. La lengua separa el bolo de la masa del alimento en la boca, presionndolo contra el paladar duro. El bolo entra entonces en la faringe, estimulando los receptores tctiles que inician el reflejo de deglucin y lo impulsan a travs del esfago. Una onda de contraccin denominada peristaltismo mueve entonces el bolo hasta el estmago, donde se convierte en quimo. Los msculos del estmago mezclan el quimo con los jugos gstricos para fragmentar el alimento en partculas an ms pequeas; tambin regulan la entrada del quimo en el intestino delgado. Los movimientos peristlticos continan en el intestino delgado, entremezclndose peridicamente con la segmentacin, en la cual el quimo va hacia delante y hacia atrs por la contraccin y la relajacin de los segmentos intestinales. La segmentacin mezcla a fondo el quimo con las enzimas digestivas, la bilis y los iones bicarbonato segregados por el conducto pancretico, aumentando la eficacia de la absorcin de nutrientes a la sangre.
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