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BIOLOGIA CELULAR

Un viaje en tren por el interior de la clula: el Aparato de Golgi como la estacin central del trfico intracelular de membranas
Gustavo Egea, 2001 egea@medicina.ub.es,

Acroread

RESUMEN [ABSTRACT]
El sistema de membranas constituye un componente esencial para las clulas. La clula eucariota tiene la membrana plasmtica que la asla del exterior y las membranas intracelulares que la subdividen formando los distintos orgnulos. Esta compartimentacin le permite adaptarse a los variables ambientes extracelulares y llevar a cabo funciones especficas dependiendo del tejido u rgano al que pertenezca. Las membranas estn compuestas por (glico)lpidos y (glico)protenas, que, una vez sintetizados se transportan a sus destinos intracelulares. Errores en su envo y/o ubicacin pueden resultar fatales para la clula y para el organismo. Por ello, es crucial el control y la regulacin del transporte intracelular. Un orgnulo clave es el aparato o complejo de Golgi. Este orgnulo representa la Estacin Central intracelular de un viaje en tren en el que viajeros, vagones, ruedas, cambios de aguja, semforos, motores y vas nos van a ayudar a entender cmo tiene lugar el trfico intracelular de membranas.

Introduccin La clula est protegida del mundo exterior gracias a que est envuelta por la membrana celular o membrana plasmtica. En determinados tipos celulares, esta membrana presenta unos dominios o regiones claramente diferenciados, tanto a nivel funcional como morfolgico (cilios, flagelos, microvellosidades). Son las clulas polarizadas, entre las que se encuentran, entre otras, las clulas de ciertos epitelios (como el renal y el intestinal) y las clulas neuronales. Sin embargo, otros tipos celulares no presentan estas especializaciones estructurales y, por tanto, son clulas no polarizadas, como por ejemplo, los fibroblastos. La clula eucariota ha evolucionado funcionalmente conforme han ido apareciendo los compartimientos intracelulares. Esta compartimentacin estructural y funcional viene determinada por la composicin diferencial de los componentes de las membranas: los lpidos y las protenas. Sobre estos componentes recaen las funciones comunes y especializadas de todas las

clulas. Su correcta localizacin es lo que determina que la clula lleve a cabo las funciones que le vienen determinadas genticamente. Por lo tanto, cualquier alteracin en su localizacin intracelular puede acarrear trastornos patolgicos serios. El conocimiento de las seales que guan y/o controlan la localizacin de los lpidos y protenas y cmo se transportan a los distintos compartimentos u orgnulos (retculo endoplasmtico, aparato de Golgi, lisosomas, cloroplastos, mitocondria, peroxisomas, entre otros) resulta esencial para comprender las funciones comunes y propias de la clula y, por extensin, del tejido u rgano en el que est ubicada. El campo de estudio que aborda estas cuestiones recibe el nombre de trfico intracelular de membranas. Las grandes rutas del trfico intracelular de membranas El trfico intracelular de membranas es el proceso por el que los lpidos y protenas son enviados a los compartimentos de destino. De este modo, se distinguen (Fig. 1): 1.- La ruta secretora, biosinttica o exoctica. Es la ruta por la que los componentes recin sintetizados son transportados desde el compartimiento de sntesis o retculo endoplasmtico (RE) hasta (a) otros orgnulos (aparato de Golgi, lisosomas, cloroplastos, etc), (b) la membrana plasmtica, y (c) al medio extracelular. Se distinguen dos tipos de secrecin:

1.1.- La secrecin constitutiva. A medida que los lpidos y las protenas son sintetizados, se transportan y secretan sin pausa alguna hasta el destino final. Esta secrecin tiene lugar en todas las clulas (1).

1.2.- La secrecin regulada. Slo tiene lugar cuando aparece una seal especfica, como la entrada de algunos iones (calcio) o como consecuencia de la interaccin entre una hormona y su receptor. Los productos susceptibles de secrecin regulada, una vez sintetizados, se almacenan en unas estructuras esfricas de membrana conocidas como vesculas o grnulos de secrecin (en funcin del tamao que tengan), a la espera de que aparezca la seal de disparo de la secrecin. La secrecin regulada acontece en las clulas de tejidos endocrinos (glndulas secretoras de hormonas) y exocrinos (pncreas exocrino), los macrfagos, algunos tipos de leucocitos y las neuronas. 2. La ruta endoctica. Es la ruta por la que componentes solubles y de membrana entran en la clula. Esta ruta abarca a su vez: 2.1. La ruta de internalizacin mediada por un receptor. En este caso, las molculas exgenas se unen a un receptor que generalmente se encuentra en la

membrana plasmtica, o bien en determinados casos se almacena en compartimientos intracelulares localizados inmediatamente por debajo de la superficie celular y a la que se incorporan rpida y sincrnicamente cuando llega una seal especfica, como sucede, por ejemplo, con los receptores GLUT4 de la glucosa. Estos receptores se encuentran en un compartimiento situado por debajo de la membrana plasmtica. Cuando suben los niveles de glucosa en sangre, se produce la secrecin de insulina, que se une a su vez a sus receptores presentes en la membrana plasmtica. Esta unin dispara la fusin de las vesculas que contienen el receptor GLUT4 con la membrana plasmtica, captando rpidamente la glucosa del medio extracelular. Acto seguido, los receptores con la glucosa son internalizados y la glucosa se desliga del receptor. Los receptores ya vacos, esperan el inicio de un nuevo ciclo funcional, cuando aparezca otra vez la insulina en el medio extracelular. El desacoplamiento en la secuencia de este proceso comporta la aparicin de la diabetes mellitus independiente de insulina. 2.2. La pinocitosis. Es la va por la que se internalizan macromolculas y fluidos. Adems, es el mecanismo empleado para el recambio constante de la membrana plasmtica. En funcin del tipo celular, la membrana plasmtica se renueva completamente cada 30-60 min. 2.3. La internalizacin mediada por caveolas. Es una ruta de internalizacin que emplea unas vesculas que contienen mayoritariamente una protena denominada caveolina. A travs de estas vesculas se captan las molculas de pequeo tamao y de naturaleza hidrofbica como el colesterol y el cido flico y parecen estar implicadas en la sealizacin intracelular. 2.4. La fagocitosis. La fagocitosis es un tipo especializado de endocitosis por el que se internalizan grandes partculas como virus, bacterias, parsitos intracelulares y complejos inertes. Se encuentra slo en determinados tipos celulares como los macrfagos y los neutrfilos. 3. La ruta de reciclaje. Algunos componentes de membrana se internalizan, pero una vez liberada la carga de unin son devueltos a la membrana plasmtica para volver a ejercer su funcin.

Fig.1. Esquema general de las distintas rutas intracelulares del trfico de membranas.

Esta ruta la emplean la mayora de los receptores de membrana (por ejemplo, los receptores de factores trficos y el receptor de la transferrina) y en realidad es una combinacin de la ruta endoctica (internalizacin) y de la secretora (vuelta a la superficie celular). El trfico secretor y endoctico estn muy equilibrados en cuanto a la cantidad de membrana intracelular. Cualquier alteracin en este equilibrio comporta anomalas que comprometen la supervivencia de la clula. Viajando en tren por el interior de la clula Detallar a continuacin los distintos orgnulos y componentes moleculares en el trfico de membranas, como si de un viaje en tren se tratase, en el que los pasajeros representaran los lpidos y protenas, los vagones corresponderan a los intermediarios de transporte o vesculas y las estaciones, a los distintos orgnulos (retculo endoplasmtico, los lisosomas, los endosomas, la membrana plasmtica). Sin embargo, me extender con cierto detalle en el compartimento que representara la Estacin Central intracelular: el complejo o aparato de Golgi El retculo endoplasmtico como el hangar, factora y cadena de montaje de los trenes intracelulares Lpidos y protenas son sintetizados en el retculo endoplasmtico (RE), que est formado por una red continua de cisternas aplanadas, recubiertas de ribosomas y que se extiende por todo el citoplasma. Los ribosomas son estructuras citoplasmticas encargadas del proceso de traduccin de protenas a partir de los ARN mensajeros (ARNms) presentes en el citoplasma, que a su vez provienen del ncleo una vez transcritos del ADN. Los ARNms codifican las protenas celulares, algunas de las cuales se situarn en el citoplasma y otras en el RE. De

stas ltimas, unas permanecern solubles en el interior (o lumen) de las cisternas del RE y otras se insertarn en la membrana del mismo. Las protenas del RE equivaldran a los pasajeros que tienen asiento (protenas de membrana) y los que permanecen de pie (protenas solubles o luminales). Del conjunto de protenas sintetizadas en el RE, unas residirn en orgnulos y otras sern secretadas al exterior de la clula. Por consiguiente, las protenas que pertenecen a otros orgnulos que no sean el RE y las de secrecin deben transportarse a otras estaciones intracelulares (aparato de Golgi, lisosomas, membrana plasmtica), mientras que las protenas residentes del RE deben retenerse. Hay que mencionar que la mayora de las protenas sintetizadas en el RE son tambin glicosiladas al mismo tiempo (proceso de N-glicosilacin; ver ms adelante). Todas las protenas presentan una estructura tridimensional. Para adquirirla deben plegarse paulatinamente sobre s mismas. Solamente las protenas que se han plegado correctamente sern susceptibles de ser transportadas. Este plegamiento puede tener lugar enforma espontnea, pero suelen producirse errores que las incapacitan funcionalmente. Para resolvereste problema, dentro del lumen del RE se encuentran unas protenas que ayudan a sus compaeras en este ejercicio de contorsionismo molecular y que son conocidas con el nombre de chaperonas. Las chaperonas facilitan el plegamiento lento y ordenado de otras protenas, as como un correcto ensamblaje cuando se componen de varias subunidades (Ellgaard et al., 1999). Estos procesos post-traduccionales equivaldran a que los viajeros (protenas) dejen las maletas, se quiten el abrigo, lean el peridico, etc. Sin embargo, necesitan lo ms esencial: el billete. Qu es el billete? Cules pasajeros pueden viajar y cules no? Intuitivamente, al igual que sucede en la vida cotidiana, uno supone que para viajar hay que adquirir un billete pero... sorprendentemente dentro de la clula, el viajar es para algunos gratis y para otros no. Hasta hace poco tiempo se pensaba que no haca falta ninguna seal que determinase la salida de las protenas solubles y de membrana (conocidas genricamente como "cargo") fuera del RE. Es la teora de la "flujo a granel" (bulk-flow) (Wieland et al., 1987). Sin embrago, datos experimentales recientes demuestran que algunas protenas s presentan una seal de salida en el extremo carboxilo y que consiste en dos aminocidos fenilalanina (difenilalanina) o, por lo menos, dos aminocidos de naturaleza cida (Nishimura & Balch, 1997). Ms claro es el caso de las seales que implican la retencin de las protenas propias o residentes del RE. As, tenemos los aminocidos en la posicin carboxilo-terminal (1) di-lisina o di-arginina para las protenas de membrana de tipo I y tipo II, respectivamente (Nilsson et al., 1989; Jackson et al., 1990; Schutze et al., 1994) y (2) lisina-asparragina-glutmico-leucina (KDEL cdigo de una letra-) para las protenas solubles (Munro & Pelham, 1987). En principio, todas las protenas que no contengan esta seal de retencin saldrn del RE. El destino inmediato: el aparato o complejo de Golgi. Sin embargo, antes de llegar al aparato de Golgi, hay que explicar cmo y en qu vehculo se realiza el transporte, ya que el RE y el aparato de Golgi no estn fsicamente interconectados. Por lo tanto, se ven obligados a utilizar unos intermediarios de membrana que son las vesculas de transporte y que vienen a representar los vagones del tren en que vamos a realizar nuestro viaje intracelular.

Las vesculas de transporte o cmo se forman y ensamblan los distintos vagones intracelulares Tanto las protenas solubles como las de membrana que van a seguir la ruta secretora, deben salir del RE camino al aparato de Golgi para ser completadas en su estructura molecular (como por ejemplo, la glicosilacin y la fosforilacin), empaquetadas y finalmente enviadas a sus respectivos destinos. La salida del RE es un proceso complejo, del que se conoce bastante bien su maquinaria molecular. Hay que tener en cuenta que el volumen y la extensin del RE es muchsimo mayor que el volumen del aparato de Golgi. Esto significa que las protenas dentro del RE estn diluidas y por consiguiente deben concentrarse a lo largo de su viaje hasta el aparato de Golgi. Esta concentracin se realiza de forma paralela al proceso de formacin de vesculas de transporte en determinados lugares del RE carentes de ribosomas y conocidos como zonas de salida (exiting sites). Esto significa que no todo el RE es susceptible de concentrar cargo y producir las vesculas de transporte. Siguiendo con nuestro smil, los vagones o trenes (las vesculas) slo se encuentran en los andenes (zonas de salida del RE). Asociado al transporte tienen lugar dos hechos importantes: (1) la carga del cargo en la vescula y (2) la deformacin de la membrana en los lugares de salida del RE para seguidamente desprenderse y formar la vescula de transporte. Siguiendo con nuestro smil, los pasajeros (protenas y lpidos) estn diseminados por toda la estacin hasta que se van agrupando (concentrando) en el andn (zonas de salida del RE) conforme se acerca la hora de salida del tren (conjunto de vesculas de transporte). Las vesculas de transporte que viajan desde el RE hasta el aparato de Golgi presentan una serie de cubiertas (coats) formadas por complejos multiproticos que al autoensamblarse deforman la membrana donadora para formar las vesculas de transporte. Son las vesculas con cubiertas de tipo COP (coat protein). As tenemos las de tipo COP I y las de tipo COP II (Kreis and Pepperkok, 1994). Estas vesculas actan en tandem (Nickel et al., 1998). Es decir, primero se forman vesculas tipo COPII en el retculo endoplasmtico y luego las COP I en un compartimiento lbil y pleomrfico formado por estructuras tbulo-vesiculares (VTCs, vesicular-tubular clusters) situado a medio camino entre el RE y el aparato de Golgi y denominado ERGIC (endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment) (Fig. 2) (Hauri et al., 2000). En este compartimiento se produce la concentracin de ciertas protenas solubles destinadas a la secrecin (MartnezMenrguez et al., 1999).

Fig. 2. Esquema del transporte intracelular entre el retculo endoplasmtico y el aparato de Golgi. El aparato de Golgi est englobado por el retculo endoplasmtico y se sita alrededor de los centriolos. Entre el retculo endoplasmtico y el aparato de Golgi se sitan estructuras tbulovesiculares que forman el compartimento denominado ERGIC o VTC (complejo de transporte vesculo-tubular).

Hay otro tipo de cubierta conocida como clatrina. La clatrina est constituida por la asociacin de tres cadenas pesadas y tres ligeras que forman unas unidades llamadas triskelion y que se ensamblan formando figuras polidricas a modo de red de canasta de baloncesto. Originariamente se descubrieron en relacin con la endocitosis mediada por receptor y posteriormente se han visto tambin en los procesos de salida de las protenas del aparato de Golgi destinadas a los lisosomas (Le Borgue & Hoflack, 1998). Hay que tener en cuenta que la formacin de vesculas es un proceso que est altamente regulado por otras molculas, muchas de las cuales estn directamente implicadas tambin en procesos de sealizacin intracelular (Stow, 1995; De Camilli et al., 1996). Esto es importante porque permite a la clula regular su trfico intracelular en funcin de lo que acontece en un momento determinado del exterior. Sera equivalente a que en funcin de terminados sucesos (espectculos

deportivos, polticos, musicales, etc.g) o pocas del ao (temporadas alta, media y baja) se produce una mayor o menor demanda para viajar. Para ajustarse a dicha demanda hay que regular o ajustar el nmero de vagones o su capacidad y/o la frecuencia de paso de los trenes. De este modo se evita que el trfico se colapse al no dar salida a las demandas de membrana y/o de alguno de sus componentes, o bien que se infrautilice, lo que comportara un despilfarro de membrana y energa. Hay que tener en cuenta que la formacin de vesculas requiere energa. El aparato de Golgi: la Estacin Central de distribucin del trfico intracelular de membranas en clulas eucariotas En la mayora de las clulas animales no polarizadas, el aparato de Golgi es un orgnulo muy dinmico y nico (una sola copia). Est compuesto por una serie de pilas (stacks) formadas por cisternas muy aplanadas con unas dilataciones laterales (rims). Estas pilas estn interconectadas entre s por tbulos y vesculas (Rambourg y Clermont, 1990). El aparato de Golgi es el orgnulo responsable de la mayor parte de las modificaciones que sufren los lpidos y las protenas una vez finalizada su sntesis en el RE (Driouch & Staehelin, 1997; Farquhar & Palade, 1998). El ms abundante es el proceso de glicosilacin que da lugar a los glicolpidos y a las glicoprotenas. En el aparato de Golgi tienen lugar extensas modificaciones del bloque de azcares estandarizado que se ha aadido a las protenas conforme se sintetizaban en el RE. Tambin en el aparato de Golgi se producen procesos de fosforilacin que son esenciales para el envo correcto de ciertas protenas solubles a los lisosomas, procesos de sulfatacin de proteoglicanos y de ciertos aminocidos y por ltimo reacciones de protelisis esenciales para la activacin de ciertas hormonas. En las clulas animales, el aparato de Golgi se localiza cerca del ncleo y alrededor del centrosoma (Fig. 3A). El centrosoma es un orgnulo citoplasmtico del que surgen los microtbulos. Englobando al aparato de Golgi se sita el RE (Fig. 2) (Nota: en los libros de texto de Biologa Celular y Molecular y en los de Bioqumica, sitan el aparato de Golgi entre el RE y la membrana plasmtica para de este modo hacer ms comprensible la secuencia del transporte en la va secretora. Este esquema funciona bien didcticamente pero no refleja la disposicin real intracelular en la clula no polarizada, lo que fcilmente induce a errores de interpretacin). Tanto en clulas animales como vegetales, un stack de Golgi est constituido por las cisternas aplanadas (zona media) con una zona o cara de entrada (cis) y otra de salida (trans) (Fig. 3B). Cada una de las caras est unida a su respectiva red de estructuras tbulo-vesiculares: una de entrada o red tubular cis del Golgi (cisGolgi network, CGN) y la otra de salida o red tubular trans del Golgi (trans-Golgi network, TGN) (Rambourg y Clermont, 1990) (Fig. 2). La morfologa del aparato de Golgi es un tanto variable en funcin del tipo celular. Su tamao suele estar en consonancia con la actividad biosinttica de la clula. De forma similar sucede

con el tamao de las estaciones centrales de ferrocarriles: mayores cuanto mayor es el trfico de trenes que deben soportar. Esta polaridad morfolgica del aparato de Golgi se traduce en una polaridad funcional y un trfico vectorial en sentido de la ruta secretora hacia la membrana plasmtica. A lo largo de este viaje, las protenas y lpidos en trnsito por el aparato de Golgi sufren una serie de modificaciones que se suceden tambin de forma secuencial. Estas modificaciones secuenciales vienen determinadas por la distinta composicin molecular, principalmente por lo que se refiere a las enzimas de glicosilacin o glicosiltransferasas, las cuales se localizan de forma ms o menos diferencial a lo largo de las cisternas del aparato de Golgi (Roth, 1997; Varki, 1998). A diferencia de lo que ocurre con las protenas residentes en el RE, no se conocen con exactitud las secuencias y/o los requisitos estructurales que contienen las glicosiltransferasas para su retencin en el aparato de Golgi. Ensamblaje y mantenimiento del aparato de Golgi en clulas eucariotas. Modelos de transporte vesicular y de maduracin de cisternas. El aparato de Golgi est compuesto tambin por una membrana. A pesar de sufrir un intenso trfico de membranas, el aparato de Golgi permanece constante en cuanto a tamao y forma. Este hecho implica la existencia de un delicado equilibrio dinmico de los flujos de membrana de entrada y de salida. Hay que evitar que el aparato de Golgi se hipertrofie convirtindose en un monstruo intracelular o se atrofie o incluso desaparezca. Cualquiera de estas situaciones comprometera la vida de la clula. La integridad estructural del aparato de Golgi es pues el resultado del equilibrio entre el trfico antergrado y retrgrado (Fig. 2). El trfico antergrado viene definido por el flujo de membrana que entra y sale del aparato de Golgi en direccin a la membrana plasmtica. El trfico retrgrado se define como el flujo de membrana que pasando u originado en el aparato de Golgi se dirige al RE. El trfico antergrado es el que clsicamente identificamos como el de la va secretora. El trfico retrgrado es el que emplean las protenas solubles y de membrana que se han escapado del RE hacia el aparato de Golgi y que despus son devueltos de nuevo al RE. Para ello, emplean una serie de receptores que reconocen las secuencias de retencin del retculo (receptores de K(H)DEL; Lewis & Pelham, 1990) y que ya se han mencionado anteriormente. El transporte retrgrado es tambin la ruta que emplean algunas toxinas (la toxina colrica) para llegar al RE y ejercer despus su efecto txico. En este caso, estas protenas una vez internalizadas deben cruzar forzosamente el aparato de Golgi para llegar hasta el RE (Sandvig et al., 1992).

Fig. 3. (A) El aparato de Golgi de las clulas de mamfero en cultivo visualizado con el microscopio ptico de fluorescencia empleando anticuerpos contra una de sus protenas residentes (la manosidasa II). Se observa que el aparato de Golgi presenta una morfologa reticular y extendida alrededor del ncleo de la clula. (B) El aparato de Golgi visualizado con el microscopio electrnico de transmisin (B). El aparato de Golgi (g) est formado por una pila de cisternas planas. Se observa tambin que el aparato de Golgi est rodeado de cisternas del retculo endoplasmtico (re). Las flechas indican algunas vesculas de transporte que contienen la cubierta COPI. n, ncleo; l, lisosoma.

Sin embargo, quin determina y/o regula la especificidad o fidelidad del trfico tanto antergrado como retrgrado? En otras palabras, quin o quines actan de semforo, de cambios de aguja o autorizan la entrada y salida de trenes de nuestra estacin central intracelular? Parece ser que la especificidad en el reconocimiento y en la fusin de membranas radica en la interaccin molecular de una serie de complejos multiproticos y que han originado la hiptesis SNARE del transporte vesicular (Rothman y Warren, 1994). Segn este modelo, se produce la interaccin especfica de un grupo constante de componentes proteicos como son las protenas NSF (protena de fusin sensible a NEM), SNAPs (protenas solubles de unin a la NSF) y SNAREs (protenas receptoras de SNAPs). Estas SNAREs estaran presentes tanto en la membrana donadora (vSNARE), por ejemplo en una vescula de transporte, como en la membrana aceptora (tSNARE), por ejemplo una cisterna del aparato de Golgi o la membrana plasmtica. La interaccin entre una vSNARE y una tSNARE sera nica y asegurara la especificidad de la fusin. Se han identificado hasta la fecha numerosas protenas SNAREs especficas para determinados compartimentos. Siguiendo con nuestro smil, las SNAREs actuaran como los cambios de aguja que desvan cada tren a su correspondiente andn. Sin embargo, experimentalmente se ha visto que las SNAREs no son totalmente especficas y se veran ayudadas en su especificidad por otras protenas llamadas Rab (Novick y Zerial, 1997). Las protenas Rab se anclan a las membranas cuando se activan por unin al nucletido GTP. Para cada compartimiento intracelular se ha identificado una protena Rab especfica. Estas vendran a representar los semforos intracelulares que evitaran tanto las colisiones de trenes que ocurriran durante los cambios de vas camino a los andenes as como los errores de ubicacin de los trenes en los andenes. Evidentemente, hay otros componentes reguladores menores pero que se escapan del mbito de este artculo.

Fig. 4. Esquema general de los dos modelos de transporte intracelular: el modelo vesicular (A) y el de maduracin de cisternas (B). Para ms detalles ver el texto. Modificado a partir de Glick y Malhotra (1998).

Tanto el transporte antergrado como el retrgrado tendran como intermediarios de membrana a las vesculas (Rothman, 1994) (Fig. 4A). Estas estructuras de membrana suelen tener un tamao de unos 60-80 nm y su especificidad y fidelidad en el transporte vendran determinadas principalmente por las protenas SNARE y Rab. El modelo vesicular funciona muy bien para explicar el transporte de la mayora de protenas y lpidos, ya que se ajustan bien al tamao de la vescula. Adems, la relacin volumen/superficie es alta, con lo que la capacidad de carga es muy elevada. Sin embargo, la clula tambin sintetiza y transporta al exterior molculas o complejos proticos de gran tamao. Por ejemplo, las escamas de ciertas algas, el procolgeno sintetizado por los fibroblastos, o los complejos multiproticos entre la apoprotena E y la albmina en el hepatocito todos son demasiado grandes para caber en el interior de las vesculas! En estos casos se piensa en un modelo alternativo conocido como el de maduracin de cisternas (Fig. 4B) (Mironov et al., 1997; Glick y Malhotra, 1998). Este modelo postula que se formara una cisterna en la parte cis del aparato de Golgi por la continua fusin de los VTCs procedentes del RE. De esta fusin resultara la cisterna ms cis del aparato de Golgi. El posterior transporte hasta la membrana plasmtica tendra lugar gracias al progresivo movimiento de las cisternas en direccin a la parte trans del aparato de Golgi. Segn este modelo, las protenas transportadas no saldran nunca del interior de las cisternas y las protenas residentes del aparato de Golgi (las glicosiltransferasas) saldran de las cisternas conforme stas van madurando, transportndose retrgradamente de forma vesicular a la cisterna inmediatamente anterior. Finalmente, ya en la parte ms trans del aparato de Golgi (el TGN), la cisterna "madura" se transportara como tal o bien se rompera formando tbulos, para finalmente fusionarse con la membrana plasmtica.

Un modelo muy utilizado para el estudio de la maquinara molecular responsable del ensamblaje y desensamblaje del aparato de Golgi es la mitosis (Warren & Malhotra, 1998). La mitosis es el proceso por el cual las clulas se dividen dando origen a las clulas hijas. Consecuentemente, stas reciben una copia de todo lo que contiene la clula madre: el material gentico (cromosomas) y los distintos orgnulos. Durante el proceso mittico, el aparato de Golgi se fragmenta, dispersndose por el citoplasma, distribuyndose equitativamente estos fragmentos de Golgi a cada clula hija. Al final de la mitosis, estos fragmentos se vuelven a ensamblar y forman un nico aparato de Golgi con la clsica morfologa reticular y situado alrededor del centrosoma (Fig. 3A; 6A) (Lowe et al., 1998). Sin embargo, hay que destacar que la fragmentacin del aparato de Golgi asociada a la mitosis slo acontece en las clulas de mamferos. En otros eucariotas como las levaduras (el otro gran modelo de estudio de la maquinaria molecular implicada en el trfico intracelular de membranas; Duden & Schekman, 1997), en insectos como Drosophila (Stanley et al., 1997), y en las clulas vegetales (Driouich & Staehelin, 1997), el aparato de Golgi no se fragmenta . Vas de alta y baja velocidad en el transporte intracelular: el citoesqueleto y su relacin con el aparato de Golgi Hemos visto hasta ahora que el trfico intracelular entre los distintos compartimentos subcelulares est mediado principalmente por vesculas. Estos sucesos de transporte implican ciclos de seleccin del cargo en dominios de membrana especficos de los distintos orgnulos, seguidos a continuacin por el envo y posterior fusin de la vescula con la membrana del compartimiento receptor. Hemos descrito la maquinaria molecular que regula estos procesos (protenas de cubierta COPI, COPII; SNAREs, rabs) pero existen tambin unas molculas ms de tipo estructural que establecen y mantienen la forma de los compartimentos, que retienen los orgnulos en un determinado lugar dentro de la clula y/o permiten que las vesculas se unan y muevan a lo largo de ciertas estructuras para alcanzar sus destinos intracelulares. Siguiendo con nuestro smil, vamos a continuacin a hablar sobre motores, ruedas y vas de tren. Todas las clulas contienen un citoesqueleto que organiza y determina en cierto modo la localizacin de los orgnulos y mantiene la forma celular. Este citoesqueleto est compuesto por los microtbulos (Fig. 5A), los filamentos intermedios y los microfilamentos de actina (Fig. 5B).

Fig. 5. El citoesqueleto en las clulas eucariotas. (A) La red de microtbulos visualizada empleando anticuerpos contra la ?-tubulina. (B) El citoesqueleto de actina (fibras de estrs) visualizado empleando la toxina faloidina.

Los microtbulos (Fig. 5A) son estructuras lineales compuestas por unidades de tubulina que irradian hacia la periferia de la clula desde los centrolos o centro organizador de los microtbulos (MTOC). Tal como he mencionado anteriormente, el aparato de Golgi se sita alrededor de los centrolos. Esta disposicin permite centralizar en el aparato de Golgi el flujo de membrana que se origina en el RE (Fig. 2) (Cole y Lippincott-Schwartz, 1995). El aparato de Golgi se encuentra asociado al citoesqueleto (Kreis et al., 1997). Los agentes que alteran la estructura de los microtbulos y microfilamentos tambin alteran la integridad y localizacin del aparato de Golgi (Fig. 6). En particular, la desintegracin de los microtbulos comporta la fragmentacin del aparato de Golgi en pequeos trozos o ministacks que se dispersan por todo el citoplasma (Fig. 6B). Tanto el aparato de Golgi como las vesculas de transporte, interaccionan indirectamente con los microtbulos a travs de unas protenas que tienen la capacidad de moverse y que se conocen como las dinenas y las quinesinas. Estas protenas transforman la energa del ATP en movimiento en una determinada direccin. Por eso se las conoce como protenas motoras (Allan, 1996). En clulas no polarizadas, la dinena (dynein) permite el movimiento hacia el centrosoma, mientras que la quinesina (kinesin) lo hace hacia la membrana plasmtica (Lane & Allan, 1998). Siguiendo con nuestro smil, estas protenas representaran las ruedas motrices de los vagones (vesculas) que se mueven sobre los rales (microtbulos). Las vesculas de transporte que emplean los microtbulos viajan de una forma directa y rpida a su lugar de destino, por lo que los microtbulos representaran las vas de alta velocidad intracelulares. No obstante, hay que tener en cuenta que el aparato de Golgi sigue unido a los microtbulos cuando la funcin motora no est activada, por lo que debe haber una tipo de molculas que permitan la unin permanente del aparato de Golgi al citoesqueleto de microtbulos (Infante et al., 1999). Es posible que estas molculas acten a modo de frenos del movimiento de los orgnulos en general y del aparato de Golgi en particular. Por otro lado, el aparato de Golgi tambin interacciona con los microfilamentos de actina (Valderrama et al., 1998, 2000). Al igual que con los microtbulos, los microfilamentos estn compuestos por unidades de actina globular (G-actina) que tienen la capacidad de ensamblarse formando filamentos (F-actina; Fig. 5B) pero

con un dimetro inferior al de los microtbulos. Los microfilamentos son tambin estructuras lineales, pero mucho ms cortas y ramificadas. De este modo forman una densa red citoplasmtica. El citoesqueleto de actina es tambin una estructura sobre la que recae la capacidad de movimiento de las clulas. La rotura de los microfilamentos de actina comporta la compactacin del aparato de Golgi (Fig. 6C).

Fig. 6. La localizacin subcelular y la morfologa del aparato de Golgi (A) dependen del citoesqueleto. La rotura de los microtbulos empleando nocodazole (noc) comporta la fragmentacin del aparato de Golgi y su dispersin por todo el citoplasma (B). La rotura del citoesqueleto de actina por la citocalasina D (cyD) comporta sin embargo su compactacin (C).

Los microfilamentos tienen tambin unas protenas motoras asociadas denominadas miosinas (myosins; Sellers, 1999). La velocidad de transporte de las vesculas a travs de los microfilamentos es sensiblemente inferior a la que acontece sobre los microtbulos por lo que los microfilamentos de actina equivaldran a las vas de baja velocidad intracelular. Sin embargo, la disposicin reticular de los microfilamentos permitira que las vesculas pudiesen llegar a todos los rincones de la clula. Vendran a cubrir aquellas rutas de cercanas en donde prevalece la accesibilidad de las distancias cortas con numerosas paradas intermedias frente a la alta velocidad requerida para las largas distancias. Por ltimo, en el aparato de Golgi tambin se encuentran otros componentes estructurales como ciertas isoformas de la espectrina (spectrin) y la anquirina (ankyrin) (Holleran y Holzbaur, 1998), se supone actuaran a modo de los andamiajes de las construcciones arquitectnicas. El citoesqueleto basado en la espectrina est muy estudiado en los hemates y es el responsable de su flexibilidad y deformabilidad a su paso por los estrechos capilares de la microcirculacin sangunea. Se desconoce, sin embargo, su papel en el aparato de Golgi, pero podran estar ms implicadas en la configuracin aplanada de las cisternas que sobre el transporte intracelula