SEPARACIONES CROMATOGRFICAS COMPARACIN Dr. Enrique Sauri D.

Instrucciones Lee con mucha atencin el documento que se adjunta (titulado Cromatografa, adaptado de Abbot y Andre s, !"#$% y despu&s resuel'e los aspectos que se solicitan a continuacin(

a% )dentifica cu*les de los procedimientos cromatogr*ficos que se indican en la lectura se reali+an con fase estacionaria dispuesta en forma de pelcula y cu*les en el interior de una columna, ,a+ una tabla de dos columnas con esta informacin-

b% )dentifica cu*les de los procedimientos cromatogr*ficos que se indican en la lectura requieren de un instrumento especial y cu*les no- ,a+ una tabla de dos columnas con esta informacin-

c% )dentifica cu*les de los procedimientos cromatogr*ficos que se indican en la lectura utili+an lquidos como fase m'il y cu*les utili+an gases- ,a+ una tabla con esta informacin-

d% Considerando las caractersticas particulares de los diferentes tipos de separacin cromatogr*fica que se indican en la lectura, y tomando en cuenta las caractersticas de la fase m'il y de la fase estacionaria, la forma fsica en la que &stas se encuentran dispuestas, del objeti'o general de la cromatografa y las caractersticas de los compuestos que se pueden anali+ar, indica tres caractersticas que tengan en com.n los tipos los tipos de separacin cromatogr*fica-

CROMATOGRAFIA Mtodos cro ato!r"#icos

Mtodos variados de separacin de mezclas se conocen como cromatografa. Segn la definicin dada por Keulemans la cromatografa es un mtodo de separacin en el que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye un lec o estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es un fluido que pasa a travs o a lo largo del lec o estacionario. !a cromatografa se introduce en los mtodos de separacin en "#$% y su posterior desarroll y evolucin se produce acia "#%$. !a primera persona que defini la cromatografa fue el bot&nico ruso Miguel 's(ett )"*+,-"#"%. en "#$/ y eligi el trmino cromatografa procedente de las palabras griegas khromatos )color. y graphos )escrito. ya que utiliz el trmino cromatografa para describir la separacin de pigmentos vegetales en distintas zonas coloreadas. 0unque la mayor parte de las separaciones que se realizan actualmente son de compuestos incoloros, el trmino inicial cromatografa se a mantenido. Definicin de cromatografa 1n "#$/ 's(ett defini la cromatografa como2 Mtodo en el cual los componentes de una mezcla son separados en una columna adsorbente dentro de un sistema fluyente. 3ecientemente la 4.5.6.0.7 define la cromatografa de forma m&s amplia como2 Mtodo usado principalmente para la separacin de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es mvil. La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido soportado en un slido o en un gel matriz!. La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, e"tendida en una capa, distribuida como una pelcula, etc... Se utiliza el trmino general de lec o para definir las distintas formas en que puede encontrarse la fase estacionaria. !as separaciones cromatogr&ficas se consiguen mediante la distribucin de los componentes de una mezcla entre la fase fi8a y la fase mvil. !a separacin entre dos sustancias empieza cuando una es retenida m&s fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse m&s r&pidamente en la fase mvil.

!as retenciones mencionadas pueden tener su origen en dos fenmenos de interaccin que se dan entre las dos fases y que pueden ser2 ".-!a adsorcin, que es la retencin de una especie qumica por parte de los puntos activos de la superficie de un slido quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial. ,.- !a absorcin, que es la retencin de una especie qumica por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera, absorcin pura, o a reaccionar qumicamente con la misma, absorcin con reaccin qumica, considerando ambas como un fenmeno m&sico y no superficial Aspectos histricos de la cromatografa 0unque procesos parecidos ocurren en la naturaleza cuando disoluciones pasan a travs de arcilla, rocas, etc... la cromatografa como tal adquiere importancia cuando en "*9$ el qumico :.:.3unge, que traba8aba con tintas, descubri que los cationes org&nicos se separaban por migracin cuando se depositaba una disolucin que los contena sobre un material poroso, como papel. 1n "#$/ el bot&nico ruso 's(ett utiliz la cromatografa en columna para separar e;tractos vegetales coloreados, y a este proceso le di el nombre de cromatografa. 6ero el mayor desarrollo se produce en "#%$ con !ederer cuando consigue separar los colorantes de la yema de uevo. 6osteriormente los qumicos K un, Kamer y 3uzucca desarrollan la cromatografa en el campo de la qumica org&nica e inorg&nica, y obtienen el premio <obel por sus traba8os en "#%+, "#%*, "#%# respectivamente. 0 partir de "#=$ los mtodos cromatogr&ficos adquieren e;tensin mundial de forma que en "#=$ 'iselius divide los mtodos cromatogr&ficos en cromatografa por an#lisis frontal, desarrollo por elucin y desarrollo por desplazamiento, obtuvo el premio <obel por sus traba8os en "#=*. 0l mismo tiempo la cromatografa se aplicaba en el campo de la bioqumica, y as Martin consigue separar algunos amino&cidos acetilados. Aspectos histricos de los distintos tipos de cromatografa Cro ato!ra#$a en %a%e& :ue desarrolla por Martin. 'iene como soporte un papel de celulosa. 0dquiri una gran e;tensin por su sencillez y presenta la venta8a de

poder utilizar miligramos y microgramos, adem&s presenta la opcin de utilizar tanto la tcnica descendente como la tcnica ascendente. Cro ato!ra#$a en ca%a #ina :ue originada por los traba8os de los investigadores rusos 4zmailov y Sc raiberen en "#%* al separar mezclas de tinturas farmacuticas. 1n este tipo de cromatografa la fase estacionaria se e;tiende sobre un soporte inerte formando una pelcula relativamente delgada, la dificultad que presentaba el mtodo era el crear una capa omognea, sin ningn tipo de rugosidad. !a cromatografa en capa fina tuvo valor limitado asta que Sta l estandariz el mtodo para elaborar capas finas por mtodos mec&nicos. Cro ato!ra#$a de interca 'io i(nico 1sta tcnica apareci durante la 44 >uerra Mundial y en principio tena la finalidad de separar las tierras raras y los elementos de transicin. 1n "#%* 'aylor y 5rey utilizan este mtodo para separar istopos de !itio y 6otasio utilizando resinas slidas llamadas zeolita, las cuales tienen la propiedad de intercambiar iones. 1n "#%# Samuel logra sintetizar resinas de intercambio inico. <ormalmente la zeolita se encuentra dentro de una columna. Cro ato!ra#$a de !e&)#i&traci(n :odin y 6orat en "#9* descubren que usando como fase estacionaria ciertos geles porosos )que se depositan dentro de columnas. se consigue separar polmeros sintticos de alto peso molecular. Cro ato!ra#$a de a#inidad 4deada por 6orat en "#/+, usando como fuente un pptido o protena unida covalentemente a un ligando y se utiliza para la separacin de molculas proteicas. Cro ato!ra#$a de !ases 1s una de las tcnicas m&s utilizadas e importantes, de forma que a revolucionado el campo de la qumica analtica. Se caracteriza porque la fase mvil es un gas y se requiere de un instrumento especial para poder realizarla. Se utiliza para separar compuestos vol&tiles o que se pueden volatilizar. Cro ato!ra#$a de &$quidos de a&ta reso&uci(n 1s una de las tcnicas instrumentales m&s utilizadas e importantes, de forma que a revolucionado el campo de la qumica analtica. Se caracteriza porque la fase mvil es un lquido que se desplaza a travs de la fase estacionaria que se encuentra dentro de una columna. 6ermite separar y analizar gran diversidad de compuestos con caractersticas diferentes.

Clasificacin segn el procedimiento de separacin 1l principio b&sico de la separacin de las sustancias que componen una mezcla se fundamenta en una serie de sucesivos equilibrios entre la fase estacionaria y la fase mvil. 1l equilibrio depender& de la particin o diferente adsorcin que tengan la fase estacionaria y los componentes de la mezcla. !a diferencia depender& de las propiedades fsicas y qumicas de los componentes. 1l mayor o menor avance en el sistema cromatogr&fico depender& de la afinidad del componente y la fase estacionaria. 1l componente con menor afinidad por la fase estacionaria en presencia de una fase mvil llamada eluyente ser& eluido en primer lugar, y por tanto se desplazar& con mayor velocidad por el sistema cromatogr&fico. Tabla de clasificacin de mtodos cromatogrficos F. F. mvil Soporte Cromatografa estacionaria slido gas columna slido-gas (adsorcin) lquido columna lquida capa fina en papel y/o capa fina lquido gas columna lquido-lquido (par!icin) liquido columna gas-lquido resina lquido columna in!ercam"io (in!ercam"io inico# (lquidoinico) slido) gel lquido columna fil!racin de gel# (fil!racin en ) (lquido-slido) $H.P.L.C % croma!ografa lquida de al!a resolucin

Siglas G.S.C / G.C C.L / H.P.L.C .L.C C.G.L C.L.L / H.P.L.C

/eferencia Abbot 0-, Adre s 1-2-, !"#$- )ntroduccin a la CromatografaAlhambra, 3adrid-