Contenido

Diagnstico
Ensayo en fragmentos de hojas de bananos y pltanos (Musa spp.) para el estudio a nivel monocclico de la evolucin de los sntomas de la sigatoka negra causada por Mycosphaerella fijiensis Morelet Luis Prez Vicente, Michel Prez Miranda, Mara Isabel Jimnez y Mara Jama Fitopatgenos en los cultivos de pastos y forrajes en Cuba Gloria Gonzlez Arias, Mara O. Lpez Mesa, Zenaida Amat Novo, Giselle Estrada Vilardel, Danay Lpez Manes, Blanca Bernal Areces, Ana Granda, Giselle Rodrguez Gutirrez, Leidys Figueredo Gonzlez, Ana D. Pupo Zayas, Mara Ramos, Mercedes Gonzlez, Martha Ruiz Guardado, Idiel Prez Guevara, Csar Npoles Albans, Graciela Garca Rivero, Carmen R. Snchez, Carmen Buchilln y Mirtha Lpez Causas de la aparicin de la enfermedad mancha verde en hojas de tabaco (Nicotiana tabacum L.) Danneys Armario Aragn, Sinesio Torres Garca, Oguelis Rodrguez Prez, Iban Arredondo Quevedo, Yunetsy Girado Lpez y ngel Mollineda Trujillo 3 11

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Ecologa
Efecto de los medios de cultivo y la temperatura en el crecimiento de Cladosporium fulvum Cooke (Sin. Passalora fulva) Alexander Bernal Cabrera, Benedicto Martnez Coca, Manuel Daz Castellanos, Lidcay Herrera Isla y Yanelys Alonso Daz 25

Control biolgico
Reproduccin de Heterorhabditis indica en cultivos bidimensionales elaborados con protena animal Yirina Valds Vzquez, Antonio A. Lobaina Audevert, Mara E. Mrquez Gutirrez, Maylen Gmez Pacheco y Mercedes Escobar Hernndez Introduccin de la avispa de Costa de Marfil Cephalonomia stephanoderis Betrem (Hymenoptera: Bethylidae), parasitoide de la broca del fruto del cafeto Hypothenemus hampei Ferrari (Coleoptera: Scolytidae) en Cuba Eliel Pea Marrero, Mario Garca Hernndez, Eliazar Blanco Rodrguez y Juan F. Barreras Gaytn 29

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Manejo de plagas
Variabilidad de Mycosphaerella fijiensis Morelet. Estabilidad de la resistencia a sigatoka negra de los clones hbridos de la FHIA Michel Prez Miranda, Luis Prez Vicente, Roberto Trujillo y Dulce M. Betancourt Efectos de una cobertura viva de Teramnus labialis (L.f.) Sprengel sobre las arvenses en campos citrcolas Ivn R. Gutirrez Rojas, Mara de los A. Felipe Lpez, Rafael Prez Carmenate, Dayam Fontes y Vernon I. Daniel 37 49

Resea
Manejo convencional y alternativo de la sigatoka negra en bananos: estado actual y perspectivas Luis Prez Vicente 55

Comunicacin corta
Nuevos aislados de Bacillus spp. antagonistas a Sclerotium rolfsi, Rhizoctonia solani y Pythium aphanidermatum Acenet I. Sosa Lpez, Victoria Pazos lvarez-Rivera y Marleny Gonzlez Garca 73 75

Insectos del orden Lepidoptera detectados en plantas de noni (Morinda citrifolia L.) Resumen de tesis
Conservacin de artrpodos benficos en un sistema de produccin agrcola urbano Yaril Matienzo Brito

Nancy Gonzlez Garca, Rubn Avils Pacheco, Bienvenido Cruz Daz y Yolanda Martnez Surez

77 79

Epidemiologa de Erwinia spp. en el cultivo de la papa (Solanum tuberosum L.) y medidas para su control Yolanda Morales Gmez

Contents
Phytosanitary diagnosis
An Assay in Banana and Plantain (Musa spp.) Leaf Fragments to Study the Evolution of Symptoms of Black Sigatoka Disease Caused by Mycosphaerella fijiensis Morelet at Monocyclic Level Luis Prez Vicente, Michel Prez Miranda, Mara Isabel Jimnez and Mara Jama Phytopatogens in Grass and Forage Crops from Cuba Gloria Gonzlez Arias, Mara O. Lpez Mesa, Zenaida Amat Novo, Giselle Estrada Vilardel, Danay Lpez Manes, Blanca Bernal Areces, Ana Granda, Giselle Rodrguez Gutirrez, Leidys Figueredo Gonzlez, Ana D. Pupo Zayas, Mara Ramos, Mercedes Gonzlez, Martha Ruiz Guardado, Idiel Prez Guevara, Csar Npoles Albans, Graciela Garca Rivero, Carmen R. Snchez, Carmen Buchilln and Mirtha Lpez Causes of Green Spot Disease Appearance in Tobacco (Nicotiana tabacum L) Danneys Armario Aragn, Sinesio Torres Garca, Oguelis Rodrguez Prez, Iban Arredondo Quevedo, Yunetsy Girado Lpez and ngel Mollineda Trujillo 3 11

19

Ecology
Effect of Culture Media and Temperature on the Growth of Cladosporium fulvum Cooke (Sin. Passalora fulva) Alexander Bernal Cabrera, Benedicto Martnez Coca, Manuel Daz Castellanos, Lidcay Herrera Isla and Yanelys Alonso Diaz 25

Biological control
Reproduction of Heterorhabditis indica in Bidimentional Culture Media Elaborated with Animal Protein Yirina Valds Vzquez, Antonio A. Lobaina Audevert, Mara E. Mrquez Gutirrez, Maylen Gmez Pacheco and Mercedes Escobar Hernndez Introduction of Ivory Coast Wasp Cephalonomia stephanoderis Betrem (Hymenoptera: Bethylidae), Parasitoid of Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei Ferrari (Coleoptera: Scolytidae) in Cuba Eliel Pea Marrero, Mario Garca Herndez, Eliazar Blanco Rodrguez and Juan F . Navarro Gaytn 29

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Pest management
Variability of Mycosphaerella fijiensis Morelet. Durability of the Resistance to Black Sigatoka in the FHIA Hybrids Cultivars Michel Prez Miranda, Luis Prez Vicente, Roberto Trujillo and Dulce M. Betancourt Effects of a Cover Crop Teramnus labialis (L.f.) Sprengel on Weed Populations in Citric Fields Ivn R. Gutirrez Rojas, Mara de los A. Felipe Lpez, Rafael Prez Carmenate, Dayam Fontes and Vernon I. Daniel 37 49

Review
Conventional and Alternative Management of Black Sigatoka Disease in Banana. Current Status and Perspectives Luis Prez Vicente 55

Short communication
New Bacillus spp. Isolates Antagonists to Sclerotium rolfsi, Rhizoctonia solani and Pythium aphanidermatum Acenet I. Sosa Lpez, Victoria Pazos lvarez-Rivera and Marleny Gonzlez Garca Lepidoptera Insects Detected on Noni Plants (Morinda citrifolia L.) Nancy Gonzlez Garca, Rubn Avils Pacheco, Bienvenido Cruz Daz and Yolanda Martnez Surez 73 75

Thesis abstract
Preservation of Benefits Arthropods in an Urban System of Agricultural Production Yaril Matienzo Brito Epidemiology of Erwinia spp. in Potato Crop (Solanum tuberosum L.) and Control Measures Yolanda Morales Gmez
2/fitosanidad

77 79

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

Diagnstico

ENSAYO EN FRAGMENTOS DE HOJAS DE BANANOS Y PLTANOS (MUSA SPP.) PARA EL ESTUDIO A NIVEL MONOCCLICO DE LA EVOLUCIN DE LOS SNTOMAS DE LA SIGATOKA NEGRA CAUSADA POR MYCOSPHAERELLA FIJIENSIS MORELET
Luis Prez Vicente,1 Michel Prez Miranda,1 Mara Isabel Jimnez2 y Mara Jama2
1

Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600 2 Centro Biotecnolgico del Ecuador (CIBE) de la Escuela Politcnica del Litoral en Guayaquil, Ecuador

RESUMEN
Se describe el desarrollo de un ensayo de inoculacin artificial sobre fragmentos de hojas de clones de bananos y pltanos con diferentes niveles conocidos de resistencia parcial a sigatoka negra mantenidos in vitro. Se colectaron fragmentos de hojas de 3,5 x 3,5 cm de la primera hoja completamente expandida (10 frag/clon), los cuales se lavaron con agua estril y colocaron en una placa de Petri de 10 cm con agar agua + benzimidazol (20 g agar.L1 + 40 g.mL1 de benzimidazol). Se inocularon con diferentes concentraciones de conidios de M. fijiensis obtenidos de cultivos in vitro del patgeno e incubaron bajo luz fluorescente. La cantidad de lesiones y su evolucin por estados durante un ciclo infeccioso se evalu en das consecutivos. Se determin la concentracin ptima de inculo para el desarrollo del ensayo. Existi una fuerte correspondencia entre las curvas de aparicin de lesiones en relacin con el tiempo en los fragmentos de hoja in vitro a nivel monocclico y las curvas de desarrollo de la enfermedad en el campo a nivel policclico en los clones respectivos, por lo que el mtodo es aplicable para estimar el nivel de resistencia parcial de los clones frente a sigatoka negra y para comparar la agresividad de los aislamientos bajo condiciones controladas. La duracin de la vida verde de las hojas en el ensayo no permiti determinar la intensidad de la reproduccin sexual del patgeno. Palabras clave: resistencia parcial, sigatoka negra, Mycosphaerella fijiensis, ensayo monocclico

ABSTRACT
An assay of artificial inoculation on banana leaf fragments in vitro was studied. Fragments of 3.5 x 3.5 cm of the first fully expanded leaf (10 fragments/cultivar) were washed with sterilized water and placed in 10 cm Petri dishes containing 20 g agar.L1 + 40 g.mL1 of benzimidazol. The fragments were inoculated with different concentrations of M. fijiensis conidia obtained from in vitro cultures the pathogen and were incubated under fluorescent light. The number of lesions and its evolution to different stages of development were assessed daily in a single infection cycle. The optimal conidial concentration for the development of the assay was determined. A strong correlation between the curves of development of lesions on time in the fragments in vitro at monocyclic level and the curves of development of the disease on time in different cultivars at polycyclic level in the field was observed allowing sustain that the method is useful to compare the level of partial resistance of Musa cultivars to Black Sigatoka disease and the aggressiveness of the populations under controlled conditions. The duration of the fragments green life in vitro in the experiments do not allowed assess the intensiveness of the sexual reproduction of the pathogen. Further research is required to increasing the green life of the fragments of banana leaves to allowing the formation of the sexual reproduction of the pathogen in the spots. Key words: partial resistance, black sigatoka, Mycosphaerella fijiensis, monocyclic assay

INTRODUCCIN

La aparicin de la sigatoka negra en Cuba causada

por Mycosphaerella fijiensis Morelet, a finales de 1990 [Vidal, 1992], tuvo un impacto marcado en los costos de produccin y especialmente en la estructura clonal de la superficie del pas plantada de musceas [Prez et al., 2002]. El uso de variedades resistentes es sin duda la estrategia ms econmica y ambientalmente sostenible de lucha contra esta enfermedad. Se han llevado a cabo nu-

merosos estudios sobre la resistencia de los clones de bananos y pltanos a M. fijiensis [Meredith y Lawrence, 1970; Firman, 1972; Four et al., 1984; Four et al., 1990; Four, 1994; Hernndez y Prez, 2001; Rowe, 1998]. Four (1994) describi dos tipos de reacciones en Musa frente a sigatoka negra: la reaccin de incompatibilidad resistencia muy alta o hipersensibilidad, observada en Yangambi Km 5 del subgrupo Ibota, AAA, donfitosanidad/3

Prez Vicente y otros

de no ocurre reproduccin del patgeno, y la reaccin de compatibilidad con desarrollo de los sntomas y reproduccin del patgeno, en la que se diferencian la resistencia parcial, que se expresa por un alargamiento del ciclo y disminucin de la reproduccin del patgeno con una baja tasa de incremento de la enfermedad, y la sensibilidad observada en los clones Cavendish y pltanos (AAB), caracterizada por un ciclo de la enfermedad corto, reproduccin intensa, alta tasa de incremento de la enfermedad y grandes afectaciones del rea fotosinttica de la planta. Hernndez y Prez (2001) determinaron la reaccin y componentes de la resistencia a sigatoka negra de los clones FHIA 23, FHIA 2, FHIA 3, FHIA 18, SH 3436 y de un grupo importante de clones naturales del banco de germoplasma de Cuba, entre los que se encontraban diferentes clones pertenecientes al subgrupo Cavendish (AAA), pltanos (AAB), el Yangambi Km 5 (subgrupo Ibota, AAA), el Paka (AB) y el Burro CEMSA (ABB), mantenidos sin tratamiento con fungicidas durante todo el tiempo que duraron las observaciones. Los clones FHIA con resistencia parcial a sigatoka negra mostraron un alargamiento estadsticamente significativo de la duracin en das entre la emergencia de las hojas y la aparicin y duracin de la evolucin de las lesiones, en relacin con el clon Gran enano susceptible. La resistencia parcial de estos clones se expresa mediante el alargamiento de la evolucin o transicin de los sntomas de rayas a necrosis y en la reduccin del nmero de pseudotecios por mancha [Prez, 1998]. En el Yangambi Km 5 las aloinfecciones a partir de inculo producido en parcelas vecinas determinaron la aparicin de numerosas manchas y defoliaciones, pero no la formacin de espermogonios y pseudotecios. En Cuba ms de 11 000 ha de superficie de bananos y pltanos estn cultivadas de hbridos FHIA [Prez et al., 2002]. Por cuanto la resistencia parcial es de carcter cuantitativo, el ambiente tiene una fuerte influencia en el resultado de la evaluacin de la reaccin de los clones, por lo que es altamente deseable disponer de un ensayo bajo condiciones controladas que permita determinar la reaccin de los clones y los cambios de agresividad de las poblaciones del patgeno bajo condiciones ambientales estables y comparables. El Hadrami et al. (1998, 2000) desarrollaron ensayos en fragmentos de hojas in vitro de diferentes cultivares de bananos y pltanos, pero no publicaron los detalles de los procedimientos de trabajo.
4/fitosanidad

El objetivo del presente trabajo fue el estudio de la evolucin de los sntomas de sigatoka negra causada por M. fijiensis sobre fragmentos de hojas in vitro bajo condiciones controladas (estudio de la epidemiologa de sigatoka negra a nivel monocclico y su efecto sobre los componentes que caracterizan la resistencia parcial).

MATERIALES Y MTODOS
Con el objetivo futuro de la comparacin de la agresividad de diferentes aislamientos de M. fijiensis y de eliminar la influencia ambiental en los ensayos cuantitativos de desarrollo de la enfermedad en diferentes clones, se estudi un procedimiento de inoculacin en fragmentos de hojas, similar al desarrollado por El Hadrami et al. (1998, 2000) a nivel monocclico sobre un ciclo de infeccin, para lo cual se plantaron plantas de los clones Gran enano, FHIA 2, FHIA 18, FHIA 23 y Yangambi Km 5 en macetas dentro de un aislador. Se colectaron fragmentos de la primera hoja completamente expandida de 3,5 x 3,5 cm y se lavaron con agua destilada estril, luego se colocaron en una placa de Petri con agar-agua + 40 g.mL1 de benzimidazol, con el haz de la hoja en contacto con el agar (Fig. 1A). Para evitar que los extremos del fragmento de hoja se separaran del agar, se coloc sobre este una lmina transparente plstica estril del mismo tamao de la superficie interior de la placa, a la que se le haba eliminado un cuadrado de 3 x 3 cm en su centro (Fig. 1B), de forma que ese sector de la hoja qued expuesto para poder realizar las inoculaciones [J. Carlier, comunicacin personal]. La superficie expuesta de los fragmentos se inocul con 50 L de suspensiones conidiales de M. fijiensis. Para determinar las concentraciones de inculo ms adecuadas para el ensayo se inocularon en 10 fragmentos de hoja tomados de los clones Gran enano, FHIA 23, FHIA 18, FHIA 2 y FHIA 21, conidios procedentes de cultivos de 14 das de edad a las concentraciones de 0, 4, 8, 12, 20 y 40 conid/cm2. Una vez selladas las placas con parafilm se incubaron en un cuarto climatizado (25-27C) bajo dos tubos de luz fluorescente (Fig. 1C). Diariamente se cont el nmero de lesiones que aparecieron por estadios de evolucin (Figs. 1D y 1E). Se compar el nmero de lesiones en el fragmento inoculado de cada clon a la concentracin de 40 conid/cm2 de hoja. Se midi adems la duracin en das de la evolucin de los sntomas. Los resultados de las pruebas monocclicas en fragmentos se compararon con los de las evaluaciones del de-

Ensayo en fragmentos de hojas...

sarrollo de la enfermedad en los estudios policclicos en campo previamente realizados por el primer autor [Hernndez y Prez, 2001].

RESULTADOS Y DISCUSIN
Cualquier procedimiento de inoculacin de patgenos para evaluar la reaccin de las variedades requiere: a) una evaluacin previa de la relacin entre el nmero de esporas depositadas por centmetro cuadrado de superficie del hospedante y el nmero de lesiones que se producen en consecuencia; b) demostrar a diferentes cargas de inculo la tendencia lineal de las curvas para evitar los efectos antagnicos y sinrgicos entre las esporas en relacin con la manifestacin de la enfermedad; c) que la carga de esporas utilizada sea correspondiente en gran medida con la que ocurre naturalmente para poder estimar de forma real cul ser el comportamiento de los genotipos en estudio bajo condiciones naturales [Van der Plank, 1963, 1968]. A

En todos los experimentos realizados la aparicin de sntomas y su evolucin en los fragmentos de hojas fue ms rpida que en condiciones naturales en los mismos clones en el campo. En las Figs. 2A, 3A y 4A aparece la dinmica de aparicin de lesiones en relacin con el tiempo en el test monocclico en fragmentos de hojas de Gran enano (altamente susceptible), FHIA 23 (resistencia parcial moderada) y FHIA 2 (alta resistencia parcial), respectivamente, para diferentes concentraciones de inculo. En el clon Gran enano se observ un incremento del nmero de lesiones en el tiempo en todas las concentraciones de inculo. La concentracin de 40 conid/cm2 de fragmento de hoja inoculada brind la mayor cantidad de lesiones y se alcanz a los 20 das hasta 90. En el caso del FHIA 02 tambin hay un incremento lineal en el tiempo, pero de menor pendiente, por lo que a los 20 das a la concentracin de 40 conid/cm2 aparecieron 23 lesiones en contraste con ms de 90 observadas en el Gran enano. El clon FHIA 23 mostr valores intermedios entre ambos. B

Fragmento sobre el agar

Lmina plstica para evitar separacin del fragmento del agar durante incubacin.

Placas selladas con parafilm incubando a 27C bajo dos tubos de luz fluorescente.

Aparicin de los primeros sntomas de las lesiones.

Desarrollo de sntomas en diferentes estados.

Figura 1. Fragmentos de hoja en placas con agar + benzimidazol.

fitosanidad/5

Prez Vicente y otros

En las Figs. 2B, 3B y 4B se observa una relacin lineal entre la concentracin de conidios por centmetro cuadrado inoculados y el nmero de lesiones que aparecen en los fragmentos de hojas, lo que pone en evidencia una accin independiente de las esporas en la manifestacin de la enfermedad. De esta forma en todos los clones la concentracin de 40 conid/cm2 result la ms adecuada para la inoculacin artificial de los fragmentos sin que ocurra interferencia (sinergismo/antagonismo) entre las esporas. Burt et al. (1998) observaron en Centroamrica depsitos de ascosporas en trampas de esporas volumtricas automticas con una densidad de 40 ascos/cm2, por lo que puede considerarse que esta concentracin de inculo se corresponde con la que se

encuentra en condiciones naturales durante los perodos favorables a la enfermedad. En la Fig. 5 aparece una comparacin de la dinmica de aparicin de lesiones en diferentes clones a la concentracin de 40 conid/mL en el test monocclico en fragmentos de hojas. La dinmica de la aparicin de lesiones en los fragmentos se correspondi con la manifestacin en campo de estudios previos en ensayos policclicos de campo [Hernndez y Prez, 2001]. Como puede apreciarse, se obtuvo una correspondencia entre el comportamiento frente a la enfermedad en los ensayos de campo policclicos y lo obtenido en fragmentos de hojas a nivel monocclico aunque en este ltimo la evolucin de los sntomas fue mucho ms rpida que como ocurre en condiciones naturales.

Figura 2. Relacin entre la concentracin de inculo y el nmero de lesiones individuales en el clon Gran enano (altamente susceptible): A) dinmica de la aparicin de sntomas en relacin con el tiempo; B) relacin lineal entre la concentracin de inculo (conidios por centmetro cuadrado) y el nmero de lesiones individuales en el rea inoculada a los 12 y 20 das de incubacin.

Figura 3. Relacin entre la concentracin de inculo y el nmero de lesiones individuales en el clon FHIA 23 (moderadamente resistente): A) dinmica de la aparicin de sntomas en relacin con el tiempo en diferentes concentraciones de inculo; B) relacin lineal entre la concentracin de inculo (conidios por centmetro cuadrado) y el nmero de lesiones individuales en el rea inoculada a los 20 das. 6/fitosanidad

Ensayo en fragmentos de hojas...

Figura 4. Relacin entre la concentracin de inculo y el nmero de lesiones individuales en el clon FHIA 2 (altamente resistente): A) dinmica de la aparicin de sntomas en relacin con el tiempo en diferentes concentraciones de inculo; B) relacin lineal entre la concentracin de inculo (conidios por centmetro cuadrado) y el nmero de lesiones individuales en el rea inoculada a los 20 das.

Figura 5. Comparacin de los resultados de la reaccin de los clones Gran enano, FHIA 02, FHIA 18 y FHIA 23 a las infecciones naturales en las pruebas policclicas de campo [Hernndez y Prez, 2001] y a las inoculaciones con conidios en pruebas monocclicas sobre fragmentos de hojas in vitro.

En la Fig. 6 aparece la duracin de la evolucin de los sntomas sobre los fragmentos de hojas de los

clones Gran enano, FHIA 02, FHIA 18, FHIA 21 y FHIA 23 .

Figura 6. Duracin en das de la evolucin de los sntomas en los diferentes clones.

fitosanidad/7

Prez Vicente y otros

Se hizo evidente el efecto de la resistencia parcial sobre la evolucin de los sntomas. La evolucin de la incubacin y de la transicin a manchas fue ms corta en el Gran enano (altamente susceptible) que en los clones con resistencia parcial, en correspondencia con los informes de Four et al. (1984 y 1990) y con las observaciones previas en clones FHIA [Hernndez y Prez, 2001]. En el FHIA 18 y el FHIA 21 la evolucin de los sntomas hasta el estado 3 fue el doble ms larga que en el Gran enano. Pudo observarse la aparicin de sntomas 4 en el Gran enano y FHIA 23, y de estado 5 solo en Gran enano. El FHIA 02 detuvo su evolucin en el estado 3 de los sntomas, mientras que el FHIA 23 (FHIA 1-1) lo hizo en el estado 4. Se logr mantener durante 25 das las hojas verdes, lo que es insuficiente para poner en evidencia toda la evolucin de los sntomas, en especial cuando los clones tienen una resistencia parcial elevada, pues no es posible visualizar los estados ms avanzados de los sntomas y la formacin de fructificaciones. Los resultados muestran la potencialidad del ensayo en fragmentos de hojas para la evaluacin de la reaccin de resistencia parcial de clones de bananos; sin embargo, como aspecto negativo hay que considerar que muestra variacin de la supervivencia de los fragmentos de hojas, an provenientes de una misma hoja, por lo que debe continuarse el estudio en el futuro de los factores que inciden en esto para la optimizacin del ensayo y poder evaluar la produccin potencial de cuerpos fructferos. Es por primera vez que se documentan las condiciones especficas para la conduccin de los ensayos en fragmentos de hojas. Los informes anteriores de El Hadrami et al. (1998, 2000) no establecen las condiciones especficas para desarrollarlos.

Este mtodo puede utilizarse para comparar la agresividad en un solo ciclo infectivo de diferentes poblaciones de M. fijiensis bajo condiciones controladas de inoculacin, as como para evaluar el nivel de la resistencia parcial de los clones al patgeno, basada en la velocidad de evolucin de las lesiones. Ello requiere posterior afinamiento para lograr alargar la vida verde de los fragmentos con el objetivo de observar la reproduccin sexual del patgeno en las manchas. Los autores desean hacer constar y expresar su agradecimiento al INIBAP por financiar parte de los estudios realizados; al doctor J. Carlier por las sugerencias realizadas en relacin con la metodologa del ensayo; al estimado amigo, ya fallecido, doctor Rodolfo Maribona, por su acogida en el Laboratorio de Fitopatologa del CIBE en la ESPOL en Guayaquil, donde se replicaron parte de los ensayos durante un entrenamiento ofrecido por el primer autor a investigadores de esa institucin.

REFERENCIAS
Burt, P. J. A.; J. Rutter; F. Ramrez: Airborne Spore Loads and Mesoscale Dispersal of the Fungal Pathogens Causing Sigatoka Diseases in Banana and Plantain, Aerobiology 14:209-214, 1998. El Hadrami, A.; M. F. Zapater; F. Lapeyre; C. Abadie; J. Carlier: Evaluation sur fragments foliaires en survie de la rsistance partielle du bananier et de lagressivit de Mycosphaerella fijiensis agent causal de la cercosporiose noire, CIRAD-FLHOR, Montpellier, Francia, FA176790, INIBAPs data base Musalit 2001, 1998. El Hadrami, A.; C. Abadie; J. Carlier: Evaluation de la rsistance partielle des bananiers Mycosphaerella fijiensis (maladie des raies noires) en conditions contrles et au champ, Journes Jean Chevaugeon, Rencontres de Mycologie-phytopathologie, Aussois, Francia, 2000/ 03/05-09, 1p, INIBAPs database Musalit 2001, 2000. Firman, I. D.: Susceptibility of Banana Cultivars to Fungus Diseases in Fiji, Trop. Agric. Trinidad, 49:189-196, 1972. Four, E.; A. Mouliom-Pefoura; X. Mourichon: Etude de la sensibilit varietale des bananiers et des plantains a Mycosphaerella fijiensis au Cameroun. Caractrization de la rsistance au champ des bananiers et des plantains appartenent au divers groups gntiques, Fruits 45:339-345, 1990. Four, E.: Leaf Spot Diseases of Bananas and Plantain Caused by Mycosphaerella musicola and M. fijiensis, The Improvement and Testing of Musa: a Global Partnership. Proceedings of the First Global Conference of the International Musa Testing Program, INIBAP, Held at FHIA, Honduras, April 27-30, 1994. Four, E.; M. Grisoni; R. Zurfluh: Les cercosporioses du bananier et leurs traitements. Comportement des varits. II. Etude de la sensibilit des bananiers et plantains Mycosphaerella fijiensis Morelet et des quelques caractristiques biologiques de la maladie des raies noires au Gabon, Fruits 39:365-378, 1984. Hernndez, A.; L. Prez: Reaction of Banana and Plantain Cultivars to Black Sigatoka Caused by Mycosphaerella fijiensis Morelet. Epidemiological components of the resistance, Fitosanidad 5 (3):916, 2001. Prez, L.: Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis Morelet) de

CONCLUSIONES
La evolucin de la enfermedad es ms rpida en los fragmentos de hojas in vitro que la ocurrida en las plantas en campo. La curva del desarrollo de lesiones con el tiempo en un ciclo de infeccin en los fragmentos de hojas de los diferentes clones muestra una alta correspondencia con la curva de desarrollo policclico de la enfermedad en relacin con el tiempo en el campo, por lo que es posible estimar el nivel de resistencia parcial de los clones a partir de este ensayo.
8/fitosanidad

Ensayo en fragmentos de hojas...

bananos y pltanos (Musa spp.) en Cuba. Biologa, epidemiologa y manejo integrado de la enfermedad, Simposium Internacional sobre sigatoka negra, Manzanillo, Colima, Mxico, 8-10 de julio de 1998. Prez, L.; J. M. lvarez; M. Prez: Economic Impact and Management of Black Leaf Streak Disease in Cuba, Mycosphaerella Leaf Spot Diseases of Bananas: Present Status and Outlook. Proceedings of the International Workshop on Mycosphaerella Leaf Spot Diseases, San Jos, Costa Rica, 2002, pp. 71-83. Rowe, P.: Latest Developments in the FHIA Banana and Plantain Breeding Program: Bred Hybrids Are Now Being Grown Commercially, Memorias del Seminario Internacional sobre Produccin de Pltano, Armenia Quindo, Colombia, 4-8 de mayo de 1998. Meredith, D. S.; J. S. Lawrence: Black Leaf Streak of Bananas (Mycosphaerella fijiensis). Susceptibility of Cultivars, Trop. Agric. Trinidad, 47:275-287, 1970. Van der Plank, J. E.: Plant Disease Epidemiology, Academic Press New York, 1963, pp.180-181. : Disease Resistance In Plants, Academic Press New York, 1968. Vidal, A.: Sigatoka negra en Cuba. En nuevos focos de plagas y enfermedades, Boletn Fitosanitario, FAO 40:1-2, 1992.

fitosanidad/9

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FITOPATGENOS EN LOS CULTIVOS DE PASTOS Y FORRAJES EN CUBA

Gloria Gonzlez Arias,1 Mara O. Lpez Mesa,1 Zenaida Amat Novo,1 Giselle Estrada Vilardel,1 Danay Lpez Manes,1 Blanca Bernal Areces,2 Ana Granda,3 Giselle Rodrguez Gutirrez,4 Leidys Figueredo Gonzlez,4 Ana D. Pupo Zayas,4 Mara Ramos,5 Mercedes Gonzlez,5 Martha Ruiz Guardado,5 Idiel Prez Guevara,6 Csar Npoles Albans,6 Graciela Garca Rivero,6 Carmen R. Snchez,7 Carmen Buchilln7 y Mirtha Lpez8 Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600, ggonzalez@inisav.cu 2 Instituto de Investigaciones Hortcolas Liliana Dimitrova. Carretera a Bejucal Km 33, Quivicn, La Habana 3 LAPROSAV. Ave. 25 no. 23011 e/ 230 y 234, La Coronela, Playa, Ciudad de La Habana 4 LAPROSAV. Antonio Maceo 22 e/ J. Agero y A. Guardia, Las Tunas, Cuba 5 LAPROSAV. Carretera a Palmira Km 4, Cienfuegos, Cuba 6 LAPROSAV. Ave Finlay Km 2 e/ Planta de Nitrgeno y Circunvalacin Norte, Camagey, Cuba 7 LAPROSAV. Calle Siguanea Km 2, El Abra, Nueva Gerona, Isla de la Juventud, Cuba 8 Estacin de Pastos y Forrajes Nia Bonita, Carretera de Cangrejeras, Bauta, La Habana
1

RESUMEN
Mundialmente se seala la presencia de hongos, bacterias y virus en leguminosas y gramneas utilizadas como pastos y forrajes, los que causan efectos negativos en el crecimiento, en la calidad nutricional y en su capacidad reproductiva. En el presente trabajo se analizaron, por diferentes tcnicas de diagnstico, muestras de estos cultivos provenientes de la Estacin de Pastos y Forrajes Nia Bonita y Laboratorios Provinciales de Sanidad Vegetal. Se registraron, por primera vez en Cuba, 23 especies de hongos, la bacteria Pseudomonas fluorescente del grupo 1b, el virus del mosaico de la soya (soybean mosaic virus) y el virus del moteado amarillo del frijol (bean yellow mottle virus). Palabras clave: fitopatgenos, pastos, forrajes

ABSTRACT
The presence of fungi, bacteria and virus attacking graminous and leguminous plants used as grass and forage, causing negatives effects on their growth, nutritional quality and reproductive capacity is a fact known all over the world. Samples o this kind of plants from Nia Bonita Grass and Forage Institute and Provincial Health Plant Laboratories were analyzed by different diagnosis techniques in this work. 23 fungal species, a fluorescent Pseudomonas group 1b, soybean mosaic virus and bean yellow mottled virus Cuba are reported for the first time to. Key words: phytopathogens, grass, forages

INTRODUCCIN l establecimiento de los pastos y forrajes se afecta por la adaptacin al clima, la resistencia al pisoteo del ganado y la infeccin de hongos, bacterias y virus. Los hongos son los que poseen una mayor participacin, no solo por los daos que producen sobre los rendimientos, sino porque provocan alteraciones importantes en los parmetros del producto cosechado, como la lignificacin de los tallos, la disminucin de la digestibilidad de las paredes celulares [Abe y Okumura, 1972] y del contenido de los aminocidos libres en las hojas y races de las plantas afectadas [Hodges y Robinson, 1977], as como la produccin de micotoxinas

durante el proceso de parasitismo [Delgado y Alonso, 1994], mientras que los patgenos restantes dan lugar a sntomas que afectan los rendimientos como enanismo y marchitez de las plantas. En Cuba las enfermedades fngicas reconocidas como importantes son las pertenecientes a los gneros Puccinia, Bipolaris y Piricularia, las cuales perjudican el follaje de las gramneas. En Panicum maximun Jacq. las principales patologas que afectan el follaje son causadas por especies de Drechslera, y en las espiguillas por el verdadero carbn causado por Conidiosporomyces ayresii (Berk.), que produce ndices de afectaciones
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superiores al 40% [Bernal y Daz, 1988; Delgado et al., 1990]. Respecto a las enfermedades virales, la literatura recoge solamente la presencia, en varios ecotipos de Centrosema spp., de partculas virales semejantes a Potyvirus [Delgado y Machado, 1994], mientras que de las enfermedades bacterianas estn presentes las bacterias Xanthomonas axonopodis pv. sojensis en soya [Albornoz, 1978], Erwinia sp. en Leucaena sp. [Delgado et al., 1989] Dickeya chrysanthemi [Samson et al., 2004] y Erwinia chrysanthemi en el sorgo [Caraballo, 1990]. Debido a los escasos estudios en las condiciones de Cuba sobre las patologas que afectan a los pastos y forrajes y, al considerar que existen programas agrcolas para la produccin de semillas con bajos insumos de las especies de gramneas y leguminosas utilizadas como alimentos para el ganado; con el objetivo de incrementar la recuperacin ganadera, se llev a cabo la identificacin de fitopatgenos que las infectan, lo que constituye un conocimiento de gran utilidad para los interesados.

y siembra por agotamiento en medio de cultivo agar nutriente. Las placas se incubaron durante cuatro das y posteriormente se realiz transferencia de las colonias a las que se les realizaron las pruebas de produccin de pigmentos en medio B de King [King et al., 1954], reaccin de hipersensibilidad Klement (1963), metabolismo oxidativo fermentativo de la glucosa, tincin de flagelos y pruebas de LOPAT [Lelliott et al., 1966], presencia de nitrato reductasa, protopectinasa, utilizacin de malonato, de tartrato de sodio y produccin de catalasa [Delgado et al., 1989]. Para el anlisis de las semillas se aplicaron los mtodos de cmara hmeda tradicional, del papel enrollado y del triturado y remojado de estas durante 24 h a 4oC, y el mtodo peso-agua del grifo [Van Bovenkamp, 1985]. Diagnstico de virus Se realizaron inoculaciones mecnicas a plantas sanas de cada especie de pasto y forraje, despus de una semana de germinadas, mediante el mtodo de frotacin del macerado. Como inculo se utilizaron hojas con los sntomas de amarillamiento, reduccin de la lmina foliar, mosaico y moteado. La maceracin se realiz en morteros sumergidos en hielo con tampn fosfato 0,0025M y pH 7,8, que contena mercaptoetanol a 0,5% + carbn activado en una relacin 3:1:1. Las plantas testigos solo se inocularon con tampn, y todas se mantuvieron en condiciones aisladas. En los casos en que fue necesario se realiz la transmisin mediante saltahojas, para lo cual se utilizaron aquellos que procedieron de colonias establecidas en plantas de maz y que fueron previamente identificadas como Peregrinus maidis (Ashm) y Dalbulus maidis (De Long y Wolcott) [Rodrguez-Len, comunicacin personal]. Las pruebas se realizaron en cubculos o en pequeas jaulas donde se colocaron de 2-20 macetas con dos plantas sanas cada una, a la vez de contar con plantas infectadas de maz que sirvieron de inculos, sobre las que se mantuvieron altas poblaciones de los insectos. La microscopia ptica se realiz mediante las tcnicas de tiras de epidermis [Christie y Edwardson, 1977], de Dienes [June et al., 1979] y de abrasin [Ko et al., 1985] en un rango de 100-1 000X. Las observaciones en microscopa electrnica se realizaron por el mtodo de tincin negativa [Hitchorny y Hills, 1965] y por la tcnica de corte e inclusin. Las muestras se observaron en un rango de 20 000X. La tcnica serolgica fue ELISA-DAS, y se utilizaron jue-

MATERIALES Y MTODOS
Para la determinacin de hongos, bacterias y virus se colectaron muestras frescas y de semillas de especies pratenses y forrajeras del Instituto de Investigaciones de Pastos y Forrajes Nia Bonita, y las procedentes de diferentes estaciones analizadas en los laboratorios provinciales de sanidad vegetal de las provincias de La Habana, Cienfuegos, Camagey, Las Tunas, Granma y el municipio especial de Isla de la Juventud. Diagnstico de hongos Se analizaron porciones de las reas afectadas de cada muestra, las que se lavaron con abundante agua corriente durante 5 min, se desinfectaron en una solucin de hipoclorito de sodio al 2% y se colocaron en placas que contenan agar-agua. De las colonias desarrolladas en las placas de agar-agua se transfirieron discos de 5 mm a cuas de papa dextrosa agar, incubados a 25C con alternancia de luz-oscuridad y se observaron a partir de las 48-72 h, segn se desarrollaron los hongos. Las determinaciones especficas se realizaron al microscopio ptico y al estereoscopio segn los criterios de Ellis (1971, 1976), Domsch et al. (1980), Nelson et al. (1983) y Mercado et al. (1997). Diagnstico de bacterias El procedimiento se realiz mediante el mtodo de extraccin por trituracin del tejido por una hora en PBS
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gos de inmunosueros de la firma AGDIA, con las diluciones de IgG y conjugados recomendados por el fabricante.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Hongos De la totalidad de especies de hongos detectados, 23 de ellas se informan por primera vez en Cuba en los cultivos de pastos y forrajes (Tabla 1), entre las se encuentran Alternaria alternata (Fr.) Keissl, cuyo aislamiento se realiz a partir de pequeas manchas pardo oscuras con un halo fino amarillento, una especie cosmopolita que aparece en muchas clases de plantas y sustratos, incluyendo suelo, alimentos y textiles [Ellis, 1971; Domsch et al., 1980]. Aunque este hongo es considerado de poca importancia en los cultivos que afecta [Shew y Lucas, 1991], en las plantas en que se encontr provoc abundantes sntomas, adems de estar muy bien distribuido. Por otra parte, existen registros de toxicidad en animales de sangre caliente que han ingerido alimentos contaminados con este hongo [Domsch et al., 1980]. Bipolaris cynodontis (Maringnoni) Shoemaker es cosmopolita y causa manchas foliares en varias especies de gramneas [Farr et al., 1995]. En el rea del Caribe solo se haba registrado en Puerto Rico [Minter et al., 2001]. Cercospora canescens Ellis & G. Martn es muy frecuente sobre diferentes leguminosas en trpicos y subtrpicos [Ellis, 1976]. En las muestras analizadas se observ en las hojas provocando manchas redondeadas pardas con el centro grisceo, margen pardo-rojizo oscuro y halo amarillo. Cercospora zebrina se ha registrado en plantas de Medicago, Trifolium y otras en el hemisferio norte, frica y Sudamrica [Farr et al., 1995], pero no se han encontrado registros en Centroamrica. En el diagnstico realizado se detect en Medicago spp. al causar manchas pardo-grisceas muy oscuras, con el centro ms claro, y en algunas un halo amarillento no muy marcado. Colletotrichum dematium (Pers.) Grove es un saprfito comn de tejido vegetal en descomposicin, pero tambin es causante de pudriciones en frutos, manchas foliares y dampingoff en varias especies de plantas, especialmente en leguminosas [Domsch et al., 1980]. En este caso se detect sobre las hojas con sntomas tpicos de antracnosis, donde estaba presente tambin la fase teleomrfica Glomerella cingulata (Stonem) Spaulding and Schrenk. Fusarium semitetectum Berck & Rau es una especie cosmopolita, pero su mayor importancia econmica radica como agente causal de pudriciones

poscosecha en varios cultivos tropicales, y puede causar damping-off en posturas de tomate. En Cuba este hongo es frecuente sobre restos vegetales de numerosas plantas, con accin saproftica fundamentalmente [Gerlach y Nirenberg, 1982; Lpez et al., 1993]. Algunas cepas de esta especie son toxicognicas y pueden producir beauvericina, equisetina, fusapirona y zearalenona [Thrane, 1999]. La zearalenona es un compuesto similar al 17-estradiol, y su consumo puede producir problemas estrognicos en el proceso reproductivo. Se ha comprobado la virulencia de este compuesto, especialmente en cerdos, donde se ha visto que la presencia de esta toxina en alimentos causa hiperestrogenismo, vulvovaginitis en cerdas, abortos espontneos, agalactia e infertilidad, debido a sus marcadas propiedades estrognicas y anablicas. Entre las otras especies detectadas y sealadas con anterioridad en Cuba se encuentra B. bicolor, que caus pudricin en la base del tallo y lesiones foliares en S. halepense y S. verticilliflorum, Bipolaris hawaiiensis, detectados en diferentes especies de plantas, as como en suelo, textiles y otros sustratos, y B. sacchari, que es el agente causal de la enfermedad mancha de ojo en hojas de la caa de azcar; pero en condiciones de extrema humedad tambin puede producir marchitamiento en posturas de esta planta [Ellis, 1971]. Bacterias Se detectaron siete especies de bacterias en los pastos y forrajes analizados (Tabla 2). De estas se registran por primera vez en Cuba cepas oxidasa, levan, protopectinasa y arginina negativas y positivas frente a la reaccin de hipersensibilidad en tabaco, correspondiente a Pseudomonas fluorescentes del grupo 1b en G. max, a partir de hojas afectadas con manchas grasientas, lo que coincide con Lelliot et al. (1966). Por otra parte, se observaron cepas no fluorescentes a partir de las muestras tomadas de L. leucocephala, las que segn las pruebas llevadas a cabo correspondan al gnero Erwinia. En la Tabla 3 se observan los resultados de las pruebas bioqumicas para este gnero, y se compara con los grupos Amylovora y Carotovora, lo que demuestra que L. leucocephala est infectada por una bacteria que tiene caractersticas de ambos grupos. Hasta el momento, en Cuba estaba definida para este cultivo la presencia de una bacteria del gnero Erwinia, asociada a hongos del gnero Fusarium [Delgado et al., 1989].
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Tabla 1. Especies fngicas patgenas y saprofticas detectadas

Especies fngicas Alternaria alternata (Fr.) Keissl * Planta hospedante Lablab purpureus, L. Panicum maximum, Jacq Sorghum halepense, Pers. Leucaena leucocephala, L. Pueraria phaseoloides, Benth Lablab purpureus, L. Lablab purpureus, L. Panicum maximum, Jacq. Cynodon dactylon, (L.) Pers. Sorghum halepense, Pers. Cynodon dactylon, (L.) Pers. Patgeno X Saproftica Provincia H, T

Alternaria tenuissima (Kunze) Wiltshire* Bipolaris sp.

X X

H C

Bipolaris bicolor (Mitra) Shoemaker Bipolaris cynodontis (Marignoni) Shoemaker * Bipolaris hawaiiensis (M. B. Ellis) Uchida Sorghum halepense, Pers. & Aragaki Bipolaris sacchari (E. J. Butler) Shoemaker Panicum maximum, Jacq. Pennisetum purpureum, Schum. Bipolaris spicifera (Bainier) Subram. Sorghum halepense, Pers. Camptomeris leucaenae (F. Stevens & Leucaena leucocephala, L. Dalbey) Syd. Cercospora canescens Arachis pintoi, L. Ellis & G. Martin * Lablab purpureus, L. Pueraria phaseoloides, Benth. Cercospora spp. Centrosema pubescens, Benth. Lablab purpureus, L. Pueraria phaseoloides, Benth. Cynodon dactylon (L.) Pers. Cercospora zebrina Pass.* Medicago sativa, Lin. Lablab purpureus, L. Pueraria phaseoloides, Benth. Cerebella andropogonis Ces. Panicum maximum, Jacq. Sorghum halepense, Pers. Cladosporium oxysporum Centrosema pubescens, Benth. Berk. & M. A. Curtis * Lablab purpureus, L. Medicago sp. Pueraria phaseoloides, Benth. Colletotrichum dematium Lablab purpureus, L. (Pers.) Grove * Colletotrichum gloeosporioides Lablab purpureus, L. (Penz.) Sacc. Clitoria ternatea, L. Glycine max(L.) Merr. Conidiosporomyces ayresii Panicum maximum, Jacq. (Berk.) Vanky & Bauer Corynespora cassiicola Centrosema sp. (Berk. & M. A. Curtis) C. T. Wei Curvularia brachyspora Boedijn * Centrosema pubescens, Benth. Curvularia eragrostidis Pueraria phaseoloides, Benth. (Tsuda & Ueyama) Sivanesan * Curvularia lunata (Wakker) Boedijn Sorghum halepense, Pers. Dischloridium laeense (Matsuchima) B. Canavalia sp. Sutton* Erysiphe polygoni D. C. * Lablab purpureus, L. Exserohilum rostratum (Drechsler) Leonard Centrosema sp. & Suggs* Fusarium incarnatum (Rob.) Sacc.* Lablab purpureus, L. Centrosema sp. Lacellinopsis sacchari Subr.* Brachiaria sp.

H, G M, T H T G C, Cm H, C

X X X X X

H, C, M, T

X X

T, Cm, G H

X X

H H, C, Cm

X X X X X X X X X X

M, T, Cm H H H Cm, G H H H H H

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Melanospora zamiae Corda* Nigrospora sphaerica (Sacc.) Mason* Oidium sp. Periconia atra Corda* Periconia byssoides Persoon* Periconia cookei E. W. Mason & M. B. Ellis * Periconia minutissima Corda* Phaeoramularia fusimaculans (G. F. Atkinson) X. J. Liu & Y. L. Guo Phoma sorghina (Sacc.) Boerema, Dorenb. & Kesteren* Phomopsis sp. Pithomyces graminicola R. Y. Roy & Rai* Puccinia recondita Roberge Puccinia purpurea Cooke Puccinia sp. Stilbella sp.* Uromyces appendiculatus (Pers.) Unger U. setariae-italicae Yoshino Uromyces striatus J. Schrot. Ustilago sp. Brachiaria sp. Brachiaria sp. Glycine maxima (L.) Merr. Leucaena leucocephala, L. Brachiaria sp. Canavalia sp. Centrosem sp. Centrosema pubescens, Benth. Arachis sp. Brachiaria sp. Digitaria decumbens, Stewt. X X X X X X H H H, C H H H

X X

H T

Brachiaria sp. Centrosema sp. Brachiaria sp. Cynodon sp. Sorghum halepense, Pers. Cynodon dactylon (L.) Pers. Lablab purpureus, L. Macroptilium atropurpurium (D. C.) Urb. Brachiaria brizanta, L. Medicago sp. Cynodon dactylon (L.) Pers.

X X X X X X X X X X

H H H C, T Cm M H C C H, T, Cm M, Cm

H: La Habana (Nia Bonita, Cangrejeras); C: Cienfuegos (Barajagua); M : Matanzas (Varadero, EEPF Indio Hatuey); T: Las Tunas (Tunas, Manat, Menndez); Cm: Camagey (EEPF, Jimaguay, Vertientes, Najasa); G: Granma (Jucaibama). *: Detectada por primera vez en Cuba en pastos y forrajes.

Tabla 2. Especies de bacterias detectadas

Especie bacteriana Erwinia sp. Pseudomonas fluorescentes grupo Ib* Planta hospedante Leucaena leucocephala, L. Glycine max (L.) Merri. Provincia H H H, C H, Cm Cm T Cm T T Cm

Xanthomonas axonopodis pv. Glycines Glycine max, (L.) Merr. Acidovorax avenae subsp.avenae Xanthomonas sp. Zea mays, L. Sorghum halepense, Pers. Leucaena leucocephala, L. Zea mays, L. Pectobacterium sp. Dickeya chrysanthemi Pennisetum purpureum, Schum. Chloris gallanes, Kunth Zea mays, L.

H: La Habana (Nia Bonita, Cangrejeras); C: Cienfuegos (Barajagua); T: Las Tunas (Tunas, Manat, Menndez); Cm: Camagey (EEPF, Jimaguay, Vertientes, Najasa). *: Detectada por primera vez en Cuba en pastos y forrajes.

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Tabla 3. Resultados de las pruebas bioqumicas con los aislamientos de L. leucocephala. Comparacin con los grupos Amylovora y Carotovora
Pruebas Reaccin Gram Reaccin oxidasa Metabolismo oxidativo fermentado de la glucosa Pigmentos King B Nitratos Catalasa Tartrato de sodio Malonato de sodio Flagelacin Erwinia sp. Negativa Negativa Fermentativa Negativa Positiva Positiva Positiva Positiva Pertrica Grupo Amylovora Negativa Negativa Negativa Negativa Negativa Positiva Negativa Negativa Pertrica Grupo Carotovora Negativa Negativa Negativa Negativa Positiva Positiva Positiva Positiva Pertrica

Virus En Canavalia ensiformis (L.) P. D. C., y a partir de hojas con sntomas de mosaico y verrugas, se observaron inclusiones de formas irregulares teidas de azul violceo, caractersticas del grupo Bromovirus y pertenecientes al virus del moteado amarillo del frijol (bean yellow mottle virus), detectado por primera vez en este cultivo en Cuba.

Centrosema pubescens, Benth con sntomas de hojas deformadas, mosaico y verrugas, se detect infectada por el Potyvirus, virus del mosaico de la soya (soybean mosaic virus), lo que coincide con lo detectado en Colombia [Morales et al., 1990]. En Cuba la literatura recoge solamente la presencia, en varios ecotipos de Centrosema spp., de partculas virales semejantes a Potyvirus [Delgado y Machado, 1994] (Tabla 4).

Tabla 4. Enfermedades virales detectadas

Planta hospedante Zea mays, L. Canavalia ensiformis (L.) P. D. C. Centrosema pubescens, Benth. Centrosema spp. Dolichos lablad L. y Pennisetum purpureum, Schum. Clitoria ternatea, L. Virus Mosaico del maz Mosaico del pepino Moteado amarillo del frijol * Mosaico de la soya * Potyvirus Potexvirus Provincia H, Cm H, C H H H

H: La Habana (Nia Bonita, Cangrejeras); C: Cienfuegos (Barajagua); Cm: Camagey (EEPF, Jimaguay, Vertientes, Najasa). *: Detectado por primera vez en Cuba.

En muestras de hojas de Z. mays con mosaico en forma de estras se observaron, mediante la microscopa ptica, inclusiones virales que rodeaban al ncleo y estaban distribuidas por toda la clula, especialmente en las parenquimticas, epidrmicas y en empalizadas, y consistan en estructuras cristalinas tridimensionales formadas por partculas virales, mientras que al microscopio electrnico se observaron partculas baciliformes de 300 nm de longitud, pertenecientes al grupo Rhabdovirus y que correspondieron al virus del
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mosaico del maz (maize mosaic virus), transmitido por el saltahojas Peregrinus maidis (Ashm.), artrpodo que fue detectado asociado al cultivo en los muestreos realizados. Esta virosis se encuentra presente en Colombia, Ecuador y Venezuela con una distribucin moderada [De Len y Morales, 1997]. A partir de sntomas de manchas clorticas en las hojas de maz, se determin la presencia del virus del mosaico del pepino (CMV), evidenciado por inclusiones amorfas al microscopio ptico, caracterstica espec-

Fitopatgenos en los cultivos...

fica de este grupo, y es el nico representante que afecta al maz. Su presencia en Cuba es escasa, lo que coincide con De Len y Morales (1997) quienes lo detectaron en algunas zonas de Brasil en una incidencia muy baja. En D. labblab, P . purpureum y C. ternatea se observaron inclusiones citoplasmticas pertenecientes a los grupos Potyvirus y Potexvirus.

Bernal, Blanca; J. A, Daz. Incidencia y distribucin de las principales enfermedades fungosas de pastos y forrajes en dos estaciones de La Habana, Ciencia y Tcnica de la Agricultura. Proteccin de Plantas 11 (1): 99-111, 1988. Caraballo, E.: Sorghum sp., nuevo hospedero de Erwinia crysanthemi en la provincia de Holgun, Lista de bacterias fitopatgenas, Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal de Holgun, abril, 1990. Christie, R. G.; J. R. Edwardson: Light and Electron Microscopy of Plant Vrus Inclusion, Fla. Agr.Exp. Stn. Monogr. Ser. 9, 1977. De Len, C.; F. Morales: Determinacin y efecto de enfermedades virosas del maz en Amrica del Sur, Reunin del Programa Regional de Maiz, marzo, 1997. Delgado, A.; N. Martnez; B. Rodrguez: Estudio de la gomosis bacteriana en legumbres de Leucaena leucocephala (Lam) de Wit., Pastos y Forrajes 12:127-133, 1989. Delgado, A.; H. Machado; G. de la Paz: Evaluacin de la resistencia a hongos de las espculas en una coleccin introducida de Panicum maximun Jacq., Pastos y Forrajes 13:59, 1990. Delgado, A.; R. Machado: Comportamiento de 11 ecotipos de Centrosema ante un mosaico amarillo y confirmacin prctica del agente causal, Pastos y Forrajes 17:55-62, 1994. Delgado, A.; O. Alonso: Las enfermedades fungosas en los pastos tropicales, Pastos y Forrajes 17:89-93, 1994. Domsch, K. H.; W. Gams; T. H. Anderson: Compendium of Soil Fungi, Acad. Press, vol. 1, 1980. Ellis, M. B.: Dematlaceous Hyphomycetes, CMI, Kew, Surrey, 1971. : More Dematlaceous Hyphomycetes, CMI, Kew, Surrey, 1976. Farr, D. F.; F. B. Gerald; G. P. Chamuris; A. Y. Rossman: Fungi on Plants and Plant Products in the Unites States , The American Phytopathological Society, St. Paul., Minnesota, E.U., 1995, pp. 413415. Gerlach, W.; H. Nirenberg: The genus Fusarium . A Pictorial Atlas, Paul Parey, Berlin und Hamburg, 1982. Hitchourny, J. H.; G. B. Hills: The Use of Negative Staining in the Electron Microscopy Examination of Plant Viruses in Crude Extraits ,Virology 27:526-540, 1965. Hodges, C. F.; P. W, Robinson: Sugar and Amino Acid Content of Poa pratensis Infected with Ustilago seriformis and Urocystis agropyri, Phyiologia Plantarum 41:25, 1977. June, D.; A. Stenens; R. T. Fox: Use of Dienesstain to Detect Plant Disease Induced by Mycoplasma Like Organism, Phytopathology 69 (11):1169-1171, 1979. King, R. O.; M. K. Ward; D. E. Rany: Two Simple Media for the Demostration of Pyocianis and Fluorescein, J. Lab. Clin. Med. 44:301-304, 1954. Klement, Z.: Rapid Detection of the Pathogenecity of Phytopathogenic Pseudomonas, Nature 199:300, 1963. Ko, N. J.; F. W. Zettler; J. R. Edwardson; R. G. Christie: Light Microscopie Techniques for Detecting Orchid Viruses, Acta Hortic. 116:241-243, 1985. Lelliot, R. A.; E. Billing; A. Hayward: A Determination Scheme for the Fluorescent Plant Pathogenic Psedomonas, J. Apl. Bact. (3):470489, 1966. Lpez, M. Ofelia; ngela Estrada; Amrica Milla; Iliana Sandoval: Especies de Fusarium frecuentes en plantas cultivadas en Cuba, IV Simposio de Botnica, La Habana, 22-26 de junio, 1993, p. 60. Mercado, A. V.; Holubov-Jechov; J. Mena: Hifomicetes demaclceos de Cuba. Enteroblsticos. Monografia XXIII, Museo Regionale de Science Naturali, Torino, 1997.

CONCLUSIONES
Las especies de hongos A. alternata, A. tenuissima, B. cynodontis, C. canescens, C. zebrina, C. dematium, C. brachyspora, C. eragrostidis, D. laense, E. polygoni, E. rostratum, F . incarnatum, P . byssoides, P . cookei, Stilbella sp., L. sacchari, M. zamiae, N. sphaerica, P . atra, P . minutissima, P . sorghina y P . graminicola son nuevos registros para el cultivo de los pastos en Cuba. Entre los hongos patgenos los gneros Cercospora y Uromyces fueron los ms representados (tres especies), seguidos por Alternaria y Colletotrichum. Se destac la presencia de dos especies de F . incarnatum que, aunque tiene poca importancia como fitoptogeno, es un oportunista con gran capacidad de pudricin y que adems puede resultar toxignico. Se determin que L. leucocephala est infectada por una bacteria no fluorescente del gnero Erwinia, cuya especie tiene caractersticas de E. amylovora y E. carotovor, y se determin la presencia de X. axonopodis pv. glycines en plantas de G. mxima y de A. avenae subp. avenae en semillas de maz (Z. mays, L.). En G. max se observaron cepas fluorescentes, correspondientes a Pseudomonas fluorescentes del grupo Ib, detectadas por primera vez en Cuba. En C. ensiformis se detect el virus del moteado amarillo del frijol, y en C. pubescens el virus del mosaico de la soya, no antes detectados en Cuba. En plantas de maz se determinaron los virus del mosaico del maz y del mosaico del pepino, mientras que P . purpureum y C. ternatea se encontraron infectadas por un Potyvirus y un Potexvirus respectivamente.

REFERENCIAS
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FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

CAUSAS DE LA APARICIN DE LA ENFERMEDAD MANCHA VERDE EN HOJAS DE TABACO (NICOTIANA TABACUM L.)
Danneys Armario Aragn,1 Sinesio Torres Garca,2 Oguelis Rodrguez Prez,3 Iban Arredondo Quevedo,1 Yunetsy Girado Lpez1 y ngel Mollineda Trujillo2 Instituto de Investigaciones en Viandas Tropicales (INIVIT). Apdo. 6, Santo Domingo, Villa Clara, Cuba, CP 53 000, danneys@inivit.co.cu 2 Facultad de Ciencias Agropecuarias (UCLV). Carretera a Camajuan, Km 5, Santa Clara, Villa Clara, Cuba, sinesiotg@agronet.uclv.edu.cu 3 Divisin Centro Oeste de Tabaco. Villa Clara, Cuba, dcotr@enet.cu
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RESUMEN
La enfermedad de la mancha verde del tabaco (Nicotiana tabacum L.), de origen desconocido, es responsable de considerables prdidas en las hojas para el tabaco torcido y para las capas que se comercializan; por lo tanto, el objetivo de este trabajo es mostrar que la aparicin de la enfermedad de la mancha verde est relacionada con los fungicidas compuestos por manganeso (Mn) y zinc (Zn), como en el caso del mancozeb y con las caractersticas morfolgicas de cada variedad. El mayor nmero de hojas manchadas apareci en los niveles medio e inferior de las plantas tratadas y no se observaron manchas en las no tratadas. Las hojas hervidas de plantas sin aplicacin tomaron un color oscuro tpico de la feofitina, mientras que las hojas tratadas presentaron tonalidades verdes. Las manchas aparecieron en las partes de las hojas donde la concentracin de Mn era la misma o mayor que el magnesio (Mg). La enfermedad fue evidente solo en las plantas tratadas, lo que demuestra que la causa de la mancha verde del tabaco est dada por la acumulacin de Mn en las regiones del limbo; o sea, tiene lugar un exceso de Mn por encima de las concentraciones mnimas permisibles y una sustitucin del Mg por el Mn en las molculas de la clorofila. La variedad Habana 2000 result ser la ms susceptible y la de ms bajo ndice de esclerofilia, mientras Criollo 98 fue la ms tolerante y de mayor ndice de esclerofilia, caractersticas que se relacionan directamente con la incidencia de la mancha. El estrato foliar superior fue el menos afectado Palabras clave: mancha verde, tabaco, manganeso, Mancozeb, clorofila

ABSTRACT
Tobacco green spot disease, of unknown origin, is responsible of considerable losses in leaves for twisted tobacco and layers for marketing, in that way it was realized a research work to show that appearance of green spot disease is related with fungicides composed by Mn and Zn, like mancozeb, and to morphologic characteristics of tobacco varieties too. The highest number of spotted leaves appeared in middle and low levels of treated plants, and there were no spot in non-treated plants. Non-treated boiled leaves got the typical brown color of feofitine, while treated leave presented green tonalities. Spots appear in leaf parts where Mn concentration was the same or bigger than Mg concentration. The disease was evident only in treated plants, showing that the cause of tobacco green spot is due to Mn accumulation in leaf limb regions, that is an excess of Mn above minimum concentrations takes place, as well as, a replacement by Mg in the chlorophyll molecules. Havana 2000 variety was the most susceptible and showed the lowest sclerophyllous rate, while, Criollo-98 variety was more tolerant and presented the highest sclerophyllous rate which are characteristics closely related with the spot incidence. The superior leaf stratum was the least affected one. Key words: green spot, tobacco, manganese, Mancozeb, chlorophyll

INTRODUCCIN
ntre los mecanismos que explican la declinacin de la fotosntesis en las plantas estn el dao peroxidativo de las funciones de la membrana del tilacoide que repercute sobre la actividad fotoqumica de los fotosistemas I y II de los cloroplastos, el decrecimiento de la actividad de las enzimas fotosintticas por los productos de la polifenoloxidacin y la disminucin en la actividad de carboxilacin de la ribulosa 1-5 bifosfato carboxilasa/oxigenasa (rubisco) [Kitao et al., 1997a; 1998], observados en hojas de plantas de trigo y tabaco, con la aplicacin de alta concentracin de Mn.

Segn Jordan y Ogren (1981), la sustitucin del Mg por el Mn puede ocurrir, dado el cambio de las propiedades de la enzima rubisco, donde es posible con adiccin de Mn ocasionar el remplazo del Mg de tal enzima por Mn y formar la rubisco Mn, con lo cual tiene una mayor proporcin de actividad oxigenasa que carboxilasa. Por su parte, Pequeo (1964) report que en condiciones artificiales, al aadir acetato de cobre (Cu) y zinc (Zn) a hojas fotosintticamente activas y mediante calentamiento, se origina una modificacin en la estructura de la clorofila, los protones de hidrgeno pueden sustituir temporalfitosanidad/19

Armario y otros

mente al Mg de la clorofila (formacin de fofitina), solo que el sitio que le corresponda al Mg es ocupado por el Cu o el Zn y toma un color verde azulado. Adems, se ha observado que la tasa fotosinttica de hojas jvenes de tabaco Burley disminuy hasta 60% en comparacin con el control, con altos tratamientos de Mn cuando este aument a 5 mg.g1 de peso seco (PS) [Nable et al., 1988]. El objetivo de este trabajo fue demostrar que la aparicin de la mancha verde se relaciona con los fungicidas compuestos por Mn y Zn, componentes del fungicida mancozeb 80% PH, y que las caractersticas morfolgicas inherentes a cada variedad inciden en su susceptibilidad.

cin del protn H+, proveniente de la ionizacin de los cidos orgnicos de la vacuola, al cloroplasto. Se determin el pH del jugo vacuolar en la disolucin por medio de un conductmetro-pH metro INOLAB, Level 1, de fabricacin alemana. 2. Estudio del comportamiento varietal con aplicacin del fungicida mancozeb 80% PH a 3 kg.ha1 Se utilizaron las variedades Habana 2000, Criollo 98 y Corojo 99. Las plantas por evaluar se subdividieron en tres niveles foliares de acuerdo con la seleccin de produccin: inferior (libre pie y uno medio), medio (primer y segundo centro ligeros) y superior (primer y segundo centro fino), y en ellos se determin el nmero de hojas con manchas verdes por nivel. En total se evaluaron 36 hojas por planta y 12 hojas por nivel. El rea foliar (AL) se determin por la frmula: AL = (l x a) x f donde: l: Longitud de la hoja a: Ancho de la hoja f: Coeficiente de rea foliar para el tabaco (f = 0,70) El ndice de esclerofilia (IE) o masa seca (MS) por unidad de rea del limbo (AL) se determin por variedad y estratos a travs del mtodo del coeficiente de rea foliar, y se calcul mediante la ecuacin: IE = PS/AL donde: PS: Peso seco del limbo (g) AL: Unidad de rea del limbo (dm2)

MATERIALES Y MTODOS
La investigacin se llev a cabo en los laboratorios de la Universidad Central de Villa Clara, con plantas procedentes de las CCS El Vaquerito, en Santa Clara, de enero a junio del 2002. Se realizaron dos experimentos sobre suelo pardo con carbonatos con diseos de bloques al azar y cuatro rplicas, uno para evaluar el efecto del fungicida a base de Mn y Zn, y otro para valorar la sensibilidad varietal. 1. Estudio del efecto de la aplicacin del fungicida mancozeb 80% PH en la aparicin de la mancha verde Se evalu un tratamiento con aplicacin de fungicida mancozeb 80% PH a la dosis de 3 kg.ha1 [MINAGRI, 1999] y otro sin aplicacin de fungicida (testigo absoluto) sobre la variedad de tabaco Habana 2000. Se determin el nmero de hojas con manchas verdes (NHM) por estrato foliar, clasificadas con respecto al grado de afectacin segn una escala de patrn de colores elaborada al efecto, con la siguiente gradologa: 0: No presencia de mancha. 1: Manchado ligero. 2: Manchado medio. 3: Manchado fuerte. De las hojas se extrajeron las reas manchadas con los diferentes grados y se determin la concentracin de microelementos (Mg, Mn, Zn y Cu), para lo cual se utiliz un espectrofotmetro de absorcin atmica marca SP-9 Pye Unican. Hojas verdes de ambos tratamientos se cocieron en agua destilada a temperaturas entre 80 y 100C para favorecer la ruptura de las membranas y facilitar la penetra20/fitosanidad

RESULTADOS Y DISCUSIN
1. Estudio del efecto de la aplicacin del fungicida mancozeb 80% PH en la aparicin de la mancha verde Con aplicaciones del fungicida cada siete das se presentaron las mayores incidencias sobre los estratos medios e inferior (Tabla 1). Donde no se aplic el producto no hubo aparicin de la enfermedad en ninguno de los estratos. De acuerdo con Kitao et al. (1997b), la causa de la mancha verde est asociada a la capacidad de los iones de Mn y/o Zn para sustituir el Mg de la molcula de clorofila a nivel celular. As forma una clorofila que no puede ser degradada por la accin de la clorofilasa y no ser convertida en feofitina por la actividad de los protones H+ del jugo celular (al menos al

Causas de la aparicin de la enfermedad...

pH presente en el tejido celular del tabaco). Kitao et al. (1997b) plantean el efecto peroxidativo sobre las membranas

de los cloroplastos y todo el sistema membranoso, con lo cual hace a las clulas ms permeables incluso a este mismo in.

Tabla 1. Efecto de la aplicacin del fungicida mancozeb 80% PH sobre la aparicin de la mancha verde en los distintos estratos foliares (12 hojas evaluadas por estrato)
Hojas afectadas por nivel de la planta Nivel Inferior Medio Superior ES Con aplicacin Nmero 6,50 b 6,00 b 3,50 a 0,40 Por ciento 54,16 50,00 29,16 0 0 0 Sin aplicacin Nmero Por ciento 0 0 0

Medias con letras diferentes difieren para Duncan (p < 0,05).

Que la mancha verde aparezca indistintamente en cualquier zona de las hojas significa que el efecto de la sustitucin del Mg por el Mn fue solo donde la concentracin alcanz un valor superior a 5,9 mg de Mn.g1 de

MS de hoja (Tabla 2), y se hacen ms intensas (grados 2 y 3) cuando son mayores las concentraciones de Mn y Zn. Se observ que el dao aparece cuando la concentracin de Mn se iguala o sobrepasa a la de Mg.

Tabla 2. Concentracin de micronutrientes en zonas de tejido foliar con mancha verde y sin ella
Grado de afectacin Mg Testigo absoluto No manchada (0) Manchado ligero (1) Manchado medio (2) Manchado fuerte (3) ES (+) 6,20 cb 6,23 cb 6,40 c 5,60 ab 5,40 a 0,22 Concentracin del microelemento (mg.g1) Mn 0,066 a 0,081 a 5,900 b 7,650 c 9,310 d 0,08 Zn 0,135 a 0,110 a 0,346 b 0,369 b 0,396 b 0,01 Cu 0,173 c 0,043 b 0,038 a 0,036 a 0,045 b 0,001

Medias con letras diferentes difieren para Duncan (p < 0,05).

Las hojas tratadas con Mancozeb mantuvieron su color verde inicial total o parcialmente una vez que fueron hervidas. Esto prueba que la clorofila con Mn no puede ser convertida en feofitina por accin de los protones H+, como sucede con la clorofila magnsica, a pesar que en el anlisis del jugo celular de las hojas de tabaco el pH estuvo entre 5,04 y 5,08 (cido), lo cual favorece la transformacin de la clorofila hacia feofitina por calentamiento, estrs hdrico o peroxidacin de las membranas. Estas se hacen permeables a los iones H+, los que pueden migrar de la vacuola al interior del cloroplasto [Vzquez y Torres, 1995]. Tal es la causa

por lo que la mancha verde perdura en las hojas secas, aun despus del curado. Es comn que los botnicos apliquen el principio de la sustitucin del Mg de la clorofila en condiciones artificiales, con la utilizacin de soluciones concentradas de acetato de Zn o Cu en caliente [Pequeo, 1964], pero no se ha reportado que estos iones estn asociados a la sustitucin de micronutrientes en condiciones naturales, y mucho menos que lo haya hecho el Mn; sin embargo, debido a su mayor variacin en el nmero de valencias (2+, 3+ y 4+) en dependencia del pH del medio y la alta concentracin en el tejido de la hoja (ms de 5 mg.g1 MS), el Mn
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Armario y otros

perfectamente puede sustituir al Mg en la clorofila en condiciones naturales. 2. Estudio del comportamiento varietal con aplicacin del fungicida mancozeb 80% PH El comportamiento de las variedades con la aplicacin de una dosis de 3 k.ha1 fue diferente. La menor afectacin se observ en la variedad Criollo 98, seguida de Corojo 99, ambas procedentes del cruzamiento entre las variedades Habana PR y Habana 92, cuyo origen es el cruce entre Corojo con RxT de Polonia [Espino et al., 2000]; sin embargo, la Habana 2000 fue la ms afectada (Tabla 3). Esta variedad procede del cruzamiento entre Corojo y Habana 2.1.1, y esta ltima el resultado del cruce de Corojo con la variedad norteamericana Bell 61-9 [MINAGRI, 2001]. Es posible que entre las caractersticas morfolgicas heredadas por la Habana 2000 se encuentren la presencia de hojas de lminas foliares ms onduladas y finas, con formacin de fosos, y conjuntamente paredes celulares y cutculas ms delgadas respecto al resto, factores que facilitan la permeabilidad a agentes externos (iones) acumulados en el limbo, junto con los pesticidas en altas concentraciones, durante un prolongado tiempo, y que a su vez esto no suceda de igual forma en otras variedades.
Tabla 3 Comportamiento de las hojas encontradas con manchas por cada variedad de un total de 36 evaluadas
Variedades Criollo 98 Corojo 99 Habana 2000 ES Nmero de hojas afectadas 7,25 a 9,75 b 16,00 c 0,45

de la planta de tabaco, lo que pudiera ser motivo de otra investigacin posterior.

Tabla 4. Nmero de hojas manchadas por estrato en cada variedad evaluada

Nmero de hojas/estrato Estrato inferior Estrato medio Estrato superior ES Variedades Criollo 98 3,25 b 2,50 a 1,50 a 0,27 Corojo 99 3,75 b 4,25 b 1,75 a 0,25 Habana 2000 3,75 a 10,00 b 2,25 a 0,45

ndice de esclerofilia (IE) para cada variedad y estrato La variedad Criollo 98 mostr el mayor valor de esclerofilia, y Habana 2000 el ms bajo. Este ltimo valor est vinculado a cutculas finas y peor estructuradas, clulas de paredes ms delgadas y bajos valores de esclerofilia. Las condiciones de sombreo creadas, tanto por el efecto de la tela como por la superposicin de las hojas de los estratos superiores, da lugar a una alta humedad relativa, y por ende es menor la intensidad de la transpiracin, factores estos que inducen la formacin de cutculas y paredes celulares ms delgadas [Fonseca y Medina, 2002]. Muestran adems una baja esclerosis debido a su mayor grado de suculencia por constituir tejido joven (Tabla 5). Estas caractersticas dan lugar a la presencia de hojas finas que permiten la permeabilidad a microelementos depositados en la superficie como Mn y Zn, los que penetran a travs de la membrana hasta el interior de los cloroplastos.

Tabla 5. Comportamiento del ndice de esclerofilia en cada variedad

Variedades Criollo 98 Corojo 99 ndice de escerofilia 0,74 a 0,63 b 0,53 c 0,01

Las afectaciones en cada variedad se distribuyeron de diferente forma. Criollo 98 mostr mayor nmero de hojas manchadas en el estrato inferior y menos en el superior, el cual result estadsticamente similar a la porcin media de la planta. Por su parte, en Corojo 99 el dao se produjo en igual proporcin en los estratos inferior y medio, y muy bajo en el superior. En Habana 2000 esta afectacin se apreci en mayor cuanta en el estrato medio valor que correspondi al mximo de afectacin de todas las variedades seguido del inferior, y tambin menos afectadas las hojas de la porcin superior, al igual que en las dos anteriores (Tabla 4). En estos valores podra estar influyendo la arquitectura
22/fitosanidad

Habana 2000 ES

CONCLUSIONES
La aplicacin del fungicida mancozeb es la causa de la mancha verde en la hoja de tabaco al tener como ingrediente activo el Mn. La mayor incidencia de la aparicin de la mancha verde es en los estratos inferiores. Los menos afectados fueron los superiores. El testigo no tuvo afectacin. La variedad Habana 2000 result ser la ms susceptible y la de ms bajo ndice de esclerofilia, mo-

Causas de la aparicin de la enfermedad...

tivado en gran medida por sus caractersticas morfolgicas. La variedad Criollo 98 fue la ms tolerante y la de ms alto ndice de esclerofilia, por lo que este aspecto se relaciona con incidencia de la mancha verde.

Kitao, M.; T. T. Lei; T. Kioke: Comparison of Photosynthetic Responses to Manganese Toxicity of Deciduous Broad-Leaved Trees in Northern Japan, Environmental Pollution l.97 (1-2):113-118, 1997a. Kitao, M.; T. T. Lei; T. Kioke: Effects of Manganese Toxicity on Photosynthesis of White Birch (Betula platyphylla var. japonica) Seedlenys, Plant Physiol. 101:249-256, 1997b. : Application of Chlorophyll Fluorescence to Evaluate Mn Tolerance of Deciduous Broad-Leaved Tree Seedlings Native to Northern Japan, Tree Physiology 18:135-140, 1998. MINAGRI: Manual tcnico para la produccin del tabaco negro tapado, Ed. Ministerio de la Agricultura, La Habana, 2001. : Programa de defensa del cultivo del tabaco campaa 1999/2000, Centro Nacional de Sanidad Vegetal, Subdivisin de Proteccin de Plantas, Departamento Programas de Defensa, La Habana, 1999. Nable, R. O.; R. L Houtz; G. M. Cheniae: Early Inhibition of Photosynthesis During Development of Mn Toxicity in Tobacco, Plant Physiol. 86:1136-1142, 1988. Pequeo, J.: Prcticas de fisiologa vegetal, Editora del Consejo Nacional de Universidades, La Habana, 1964. Vzquez, Edith; S. Torres. Fisiologa vegetal, Ed. Pueblo y Educacin, La Habana, 1995.

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24/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

Ecologa

EFECTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Y LA TEMPERATURA EN EL CRECIMIENTO DE CLADOSPORIUM FULVUM COOKE (SIN. PASSALORA FULVA)
Alexander Bernal Cabrera,1 Benedicto Martnez Coca,2 Manuel Daz Castellanos,1 Lidcay Herrera Isla1 y Yanelys Alonso Daz1 Universidad Central de Las Villas. Carretera a Camajuan Km 5, Santa Clara, Villa Clara, Cuba, CP 54830, alexanderbc@agronet.uclv.edu.cu 2 Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). Apartado 10, San Jos de las Lajas, La Habana
1

RESUMEN
El moho de la hoja causado por Cladosporium fulvum es una de las enfermedades ms comunes del tomate en los invernaderos cubanos. Para conocer la influencia del medio de cultivo y la temperatura se estudi el crecimiento micelial y la esporulacin de tres aislamientos de C. fulvum (nos. 3, 6 y 10), procedentes de plantaciones comerciales de tomate bajo condiciones de invernadero, en cuatro medios de cultivo (PDA, SDA, AEM y Czapek) y cinco temperaturas en un rango entre 15 y 35C. Los medios de cultivos papa-dextrosa agar y sabouraud-dextrosa-agar, as como las temperaturas comprendidas entre 20 y 25C, y 25 y 30C, fueron las condiciones ptimas para diferenciar los aislamientos de este hongo en cuanto a su crecimiento micelial y esporulacin. Palabras clave: medios de cultivo, temperatura, esporulacin, crecimiento micelial

ABSTRACT
Leaf mould caused by Cladosporium fulvum is one of the most common tomato diseases in Cuban greenhouses. In order to know the effect of culture media and temperature on mycelial growth and sporulation of three C. fulvum isolation (numbers 3, 6 and 10), coming from commercial tomato plantation under greenhouse conditions, was realized a study in four culture media (PDA, SDA, MEA and Czapek) and five temperatures (from 15 to 35C). Potato-Dextrose-Agar and Sabouraud-Dextrose-Agar culture media, as well as temperatures between 20-25C and 25-30C, were the optimum conditions to differ among the isolations of this fungus as for their mycelial growth and sporulation. Key words: culture media, temperature, sporulation, mycelial growth

INTRODUCCIN
Cladosporium fulvum (sin. Passalora fulva) [Braun et al., 2003] es uno de los principales hongos fitopatgenos que incide en el tomate en Cuba, bajo las condiciones de cultivo protegido. Este microorganismo provoca, junto a otros agentes fngicos, prdidas importantes [Bernal et al., 2001], y est ampliamente distribuido en las regiones donde se siembra el cultivo [Blancard., 1992; Jones et al., 1997]. La temperatura y el medio de cultivo son aspectos fundamentales en la fisiologa y distribucin de los hongos [Thomma et al., 2005]; sin embargo, existen pocas experiencias sobre la influencia de estos factores en el hongo mencionado, y son en la mayora de los casos empricas. Por ello el presente trabajo se propone estudiar el efecto del medio de cultivo y la temperatura sobre el crecimiento de este patgeno, y as incrementar los conocimientos acerca de su biologa con el fin de poder ejercer sobre l un control ms eficaz.

MATERIALES Y MTODOS
Se evalu la influencia de los medios de cultivo papa dextrosa-agar (PDA), czapek dox-agar (ACZ), agar extracto de malta (AEM) y Sabouraud-dextrosa-agar (SDA) con pH 5,6 y las temperaturas 15, 20, 25, 30 y 35C sobre el crecimiento de C. fulvum. Para ello se sembraron discos de micelio de 7 mm de dimetro de cultivos monospricos de tres aislamientos de este patgeno (Tabla 1) en cada una de cuatro placas Petri por variante, las que contenan los medios de cultivo respectivos, y se incubaron a las temperaturas sealadas. El dimetro de las colonias por aislados se midi a los siete y catorce das, y la esporulacin a los catorce das de incubacin. Se vertieron 10 mL de agua destilada sobre las colonias y se barri suavemente con la ayuda de un pincel. La concentracin de conidios en la suspensin obtenida se determin mediante la cmara de Neubauer por observacin al microscopio ptico Olympus con 40X de aumento.
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Bernal y otros

Tabla 1. Descripcin de los aislamientos seleccionados de C. fulvum

Aislamiento 3 6 10 Provincia La Habana Villa Clara Ciego de vila Localidad San Jos de las Lajas Santa Clara Ceballos Hbrido de procedencia HA-3108 FA-180 HA-3019 Ao de aislamiento 2001 2004 2004

Los datos de las evaluaciones se procesaron por anlisis de varianza de clasificacin doble. Las comparaciones de medias se realizaron mediante las pruebas de Dunnett C y Duncan. Para la aplicacin de los mtodos, procedimientos y pruebas se utiliz el paquete estadstico Stagraphics plus 4.1, sobre Windows.

y catorce das, respectivamente (Tabla 2), no ocurri as con la esporulacin, donde la mayor concentracin de conidios se alcanz en el medio sabouraud-dextrosaagar (Tabla 3). Los resultados presentan utilidad prctica, pues permiten disponer de varias opciones de sustratos para los trabajos de rutina en relacin con el mantenimiento y conservacin del cepario en el laboratorio, adems de constituir una alternativa para la obtencin de conidios in vitro, ya que admite utilizar otro medio sinttico como el sabouraud-dextrosa-agar y no solo el papa-dextrosa-agar y agar V-8, referidos en la literatura cientfica para estos fines [Oliver et al., 2000].

RESULTADOS Y DISCUSIN
Los resultados muestran que el hongo estudiado crece en todos los medios y temperaturas probadas, excepto a 35C. Los mayores valores de crecimiento micelial se obtuvieron en el medio papa-dextrosa-agar a los siete

Tabla 2. Crecimiento micelial de aislamientos de C. fulvum en diferentes medios de cultivos

Medios de cultivo Aislamientos PDA 3 6 10 SDA 3 6 10 AEM 3 6 10 Czapek Dox 3 6 10 ES () Cv (%) Crecimiento Crecimiento micelial (7 das) micelial (14 das) 3,22 a 2,37 e 3,1 ab 2,85 bc 2,37 e 2,95 ab 2,30 e 1,92 f 2,77 cd 1,82 f 1,87 f 2,2 e 0,07 19,35 5,75 a 4,50 c 5,40 b 4,57 c 3,75 ef 4,75 c 4,05 de 3,52 fg 4,6 c 2,82 h 2,7 i 4,15 d 0,13 21,85

Medias con letras diferentes difieren para p ? 0,05 por la prueba de Duncan.

26/fitosanidad

Efecto de los medios de cultivo...

Tabla 3 Esporulacion de aislamientos de C. fulvum en diferentes medios de cultivo

Medios de cultivo Aislamientos PDA 3 6 10 SDA 3 6 10 AEM 3 6 10 Czapek dox 3 6 10 ES () CV(%) Esporulacin (107 esp/mL) 3,12 ef 4,84 cd 4,37 d 5,45 b 7,18 a 5,00 bc 5,30 bc 2,95 f 3,58 e 1,40 g 0,76 h 1,71 g 0,54 23,0

las mejores en cuanto al crecimiento micelial de este fitopatgeno en los dos momentos de evaluacin ensayados, y difieren significativamente de las dems. Temperaturas superiores a 30C presentan una tendencia a la disminucin progresiva del crecimiento del hongo. Los datos obtenidos son similares a los informados por Chupp y Sherf (1960) y Mayea et al. (1983), quienes reportan que el desarrollo del micelio de C. fulvum tiene lugar en un rango ptimo entre 21 y 25C, pese a que estos mismos autores reportan un rango mucho ms amplio que oscila desde 4 hasta 32C. Esto podra ser una evidencia de la existencia de aislamientos con diferentes grados de adaptacin a las temperaturas. Al evaluar la concentracin de conidios se encontr, de igual forma, diferencias entre los aislados a las diferentes temperaturas ensayadas. Se determin adems que las temperaturas comprendidas entre 25 y 30C favorecen la esporulacin de este agente fitopatgeno. Diferentes temperaturas de incubacin se han utilizado in vitro para la produccin de conidios de C. fulvum. Lindhout et al. (1989) y de Wit (1977) utilizaron 22C y obtuvieron una concentracin de 106 conid/mL en medio de cultivo papa-dextrosa-agar.

Medias con letras diferentes difieren para p ? 0,05 por la prueba de DunnettC.

En la Tabla 4 se aprecia que las temperaturas probadas permitieron diferenciar los aislamientos de C. fulvum. Las temperaturas comprendidas entre 20 y 25C fueron

Tabla 4. Crecimiento micelial y esporulacin de tres aisladosde C. fulvum en diferentes condiciones de temperaturas
Temperaturas Aislamientos Crecimiento micelial (7 das) 3,35 c 2,60 e 2,90 d 4,50 a 4,20 b 3,37 c 4,00 b 3,17 c 3,42 c 2,27 f 1,90 g 2,25 f 0,00 h 0,00 h 0,00 h 0,121 25,31 Crecimiento micelial (14 das) 5,87 de 4,97 g 5,17 f 8,22 a 7,12 b 6,47 c 6,97 b 5,72 e 6,35 cd 4,05 g 2,50 i 3,37 h 0,00 j 0,00 j 0,00 j 0,236 29,1 Esporulacin (107 esp/mL) 1,08 fg 1,71 de 0,76 gh 1,40 ef 2,18 d 0,92 fg 4,21 b 4,84 a 2,96 c 3,90 b 4,37 ab 2,96 c 0,00 i 0,00 i 0,00 i 0,2 25,1*

15C

3 6 10

20C

3 6 10

25C

3 6 10

30C

3 6 10

35C

3 6 10

ES () CV (%)

Medias con letras diferentes difieren para p ? 0,05 por la prueba de Dunnett'C.

fitosanidad/27

Bernal y otros

Estos hallazgos resultan de importancia para trabajos genticos con este hongo y en la obtencin de material para estudios de patogenicidad.

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CONCLUSIONES
Los mayores valores del crecimiento micelial y esporulacin para los tres aislamientos se obtuvieron en los medios de cultivo papa-dextrosa-agar y sabouraud-dextrosa-agar. Las temperaturas entre 20 y 25C permitieron diferenciar los aislamientos en cuanto a su crecimiento micelial, mientras que las comprendidas entre 25 y 30C permitieron diferenciar los aislamientos en cuanto a la esporulacion. La temperatura de 35C no permite diferenciar los aislamientos en cuanto al crecimiento micelial y esporulacin.

REFERENCIAS
Blancard, D.: Enfermedades del tomate. Observar, identificar y luchar, INRA, Ed. Mundi-Prensa, 1992.

28/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

Control biolgico

REPRODUCCIN DE HETERORHABDITIS INDICA EN CULTIVOS BIDIMENSIONALES ELABORADOS CON PROTENA ANIMAL

Yirina Valds Vzquez,1 Antonio A. Lobaina Audevert,1 Mara E. Mrquez Gutirrez1, Maylen Gmez Pacheco2 y Mercedes Escobar Hernndez1
1

Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal Calle 110 no. 514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600, yvaldes@inisav.cu 2 Instituto de Investigaciones de Fruticultura Tropical. Calle 7a. no. 3005 e/ 30 y 32, Playa, Ciudad de La Habana, ecologia@iift.cu

RESUMEN
La reproduccin in vivo de nematodos entomopatgenos es altamente costosa y laboriosa, lo que trae aparejado una gran necesidad de elaboracin de metodologas para su reproduccin in vitro a gran escala. Con este objetivo se evalu la reproduccin y desarrollo de juveniles infectivos de Heterorhabditis indica [Poinar, Karunakar y David, 1992] sobre diferentes medios de cultivo bidimensionales, que se elaboraron por la combinacin de hgado de pollo con almidn, as como hgado de cerdo con melaza, almidn y polvo de arroz. Los cuatro medios de cultivos permitieron la reproduccin de los nematodos. Se destaca la variante con hgado de cerdo-polvo de arroz, que evidenci que la combinacin entre la fuente de cidos grasos y carbohidratos fue ms eficaz que en el resto de las variantes. Palabras clave: Heterorhabditis indica, nematodos, reproduccin

ABSTRACT
In vivo reproduction of entomopathogenic nematodes is highly cost and laborious, so it necessary to develope new methodologies for high level in vitro reproduction. The objective of this project was to evaluate the reproduction and development of infective juveniles of Heterorhebditis indica [Poinar, Karunakar y David, 1992] in four bidimentional culture media. These culture media were elaborated combining chicken liver with starch and pork liver with molasses, starch and rice powder. Every culture medium allowed the reproduction of the nematodes primarily the variant with pork liver-rice powder due to the combination of fatty acids and carbohydrates present in this culture medium were more effective than in the rest culture media. Key words: Heterorhabditis indica, nematodes, reproduction

INTRODUCCIN

Los nematodos entomopatgenos ocupan un lugar muy

importante en la lucha biolgica como una alternativa ms dentro de los mtodos de control de plagas [Kaya y Gaugler, 1993] debido a que el uso indiscriminado de los plaguicidas qumicos causa grandes afectaciones en la diversidad biolgica. A pesar de haberse estudiado significativamente desde 1980 y de emplearse con buenos resultados en cultivos como ctricos, arroz, maz y hortalizas [Arteaga, et al., 1996], an su produccin est muy limitada y no satisface la demanda. La reproduccin de estos organismos sobre larvas de insectos es muy costosa [Bedding, 1984], por lo que existen numerosas patentes que se refieren fundamentalmente a tecnologas para la reproduccin masiva de forma artificial, como son el cultivo bidimensional, el tridimensional y la fermentacin lquida. Estos mto-

dos de reproduccin in vitro se deben ajustar a la disponibilidad de materias primas, y que a su vez permitan una eficiente reproduccin de los nematodos. Con este objetivo se evalu en este trabajo la reproduccin y desarrollo de juveniles infectivos de Heterorhabditis indica [Poinar, Karunakar y David, 1992] sobre cuatro medios de cultivo bidimensionales.

MATERIALES Y MTODOS
Se elaboraron cuatro medios de cultivos nutritivos bidimensionales en combinaciones de hgado de pollo con almidn e hgado de cerdo con melaza, almidn y polvo de arroz. Por cada una de estas variantes se prepararon cuatro rplicas que se inocularon primeramente con la bacteria simbionte Photorhabdus luminescens
fitosanidad/29

Valds y otros

[Boemare, Akhurst y Mourant, 1993]. A las 48 h se realizaron dos perforaciones de 1 cm de dimetro en el centro de cada placa, donde se inocularon 6 000 juveniles infectivos de H. indica, previamente esterilizados con hipoclorito de sodio, y finalmente todo se incub a 28oC. El diseo empleado en este experimento fue completamente aleatorizado. A partir de las 24 h se realizaron observaciones diarias, y a los 13 das comenz la recoleccin de los juveniles mediante el lavado de las placas con agua destilada esterilizada. Esta operacin se repiti cuatro veces a intervalos de 24 h. Se cont la cantidad de nemtodos extrados de cada uno de los medios de cultivo y se analizaron los datos mediante la dcima de comparacin mltiple de Newman-Keuls con 5% de probabilidad de error.

veniles infectivos se extrajo un gran nmero de hembras en estado de gravidez. Se conoce que cuando el nematodo llega al hemocele del insecto, sale de su estado de juvenil infectivo para reiniciar su desarrollo, proceso que es denominado recuperacin. La mayora de las seales para la ocurrencia de este evento se producen en la hemolinfa del hospedero; pero Grewal et al. (1997) demostraron que la bacteria simbionte tambin produce seales que controlan el desarrollo del nemtodo. Muchas de estas seales deben estar altamente relacionadas con la produccin de metabolitos, pues cuando el simbionte bacteriano se cultiva artificialmente produce diferentes combinaciones de enzimas durante la etapa postexponencial del crecimiento [Thaler et al., 1998], y en el caso especfico de la especie P . luminescens, Daborn et al . (2001) plantearon que tambin produce una metaloproteasa en esta misma fase del cultivo. Todo este fenmeno antes descrito explica por qu la reproduccin de H. indica sobre medios de cultivo elaborados con hgado de pollo ocurri con tanto tiempo de diferencia con respecto a la reproduccin sobre hgado de cerdo. Como estas fuentes de protena tienen diferente composicin, el hgado de pollo result de ms difcil degradacin para el simbionte bacteriano, la fase postexponencial de crecimiento se alcanz ms tarde, se retard la produccin de metabolitos y consigo la seal alimenticia que desencadenara la recuperacin de los juveniles infectivos. En la Fig. 1 se evidencian las diferencias significativas de la reproduccin de H. indica. En las variantes con hgado de cerdo el nmero de juveniles obtenidos fue superior que con hgado de pollo. Este resultado tambin est relacionado con la asincrona observada en el desarrollo de los juveniles, causado por su pobre recuperacin. Gaugler y Han (2002) plantearon que esto conlleva la obtencin de bajos rendimientos en las producciones. Otra causa importante es que el contenido lipdico en el hgado de cerdo es superior que en el de pollo. En este sentido Yoo et al. (2000) enfatizaron la importancia de los lpidos ricos en cidos grasos monoinsaturados para la elaboracin de un medio de cultivo para Heterorhabditis bacteriophora. Hatab y Gaugler (1997) plantearon adems que los lpidos metabolizados por los nematodos le proporcionan el 60% del total de su energa, de manera que su presencia es primordial en los medios de cultivo que se elaboren artificialmente para su reproduccin.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Los cuatro medios evaluados permitieron la reproduccin de H. indica. Se observ que los juveniles inoculados en las placas se ubicaron en reas con abundante crecimiento bacteriano, es decir, alrededor de las colonias de P . luminescens. Esto representa la gran relacin que existe entre los nematodos y sus simbiontes, pues ellas son las responsables de transformar el sustrato y convertirlo en una fuente asequible para su alimentacin [Forst y Clarke, 2002]. Como organismos microvvoros, estos nematodos pueden adems alimentarse de la biomasa bacteriana, y esto garantiza que las nuevas generaciones tambin presenten la bacteria simbionte alojada en su intestino, lista para ser liberada en el interior de otro insecto hospedero [Boemare, 2002]. Otros autores plantean tambin la necesidad que tiene el nematodo de su simbionte bacteriano, fundamentalmente para el gnero Heterorhabditis, donde no se ha logrado la reproduccin de nematodos axnicos [Gerritsen y Smits, 1993; Lunau et al., 1993], es decir, que no contengan la bacteria simbionte en su intestino. A las 72 h de incubacin se observaron hembras gigantes en todos los medios elaborados con hgado de cerdo, lo que evidenci el desarrollo de los juveniles infectivos a estado adulto. Durante la recoleccin de las nuevas generaciones de juveniles infestados (JI) la presencia de adultos fue mnima; sin embargo, en la combinacin hgado de pollo-almidn las primeras hembras gigantes aparecieron a los 13 das, y el ciclo reproductivo se extendi hasta los 24. Cuando se recolectaron adems los nemtodos de las placas, conjuntamente con los ju30/fitosanidad

Reproduccin de Heterorhabditis...

Figura 1. Nmero de juveniles infectivos obtenidos por medio de cultivo. (Letras iguales no difieren, p < 0,05).

Si se tiene en cuenta que los medios ensayados no fueron suplementados con lpidos ni sales, se puede corroborar que los hgados de cerdo y pollo aportaron suficiente cantidad de nutrientes como para permitir la reproduccin de H. indica, pese a que los rendimientos no fueron tan elevados. Finalmente estos resultados arrojaron que componentes del medio de cultivo como fuentes de protenas, lpidos y carbohidratos, su origen y la forma en que ellos se combinan, influyen en la reproduccin de H. indica, lo que coincide con autores como Gaugler y Han (2002). No obstante, ellos tambin plantearon que el establecimiento de todos estos parmetros depende de la especie de nemtodo por reproducir.

Bedding, R. A.: Large Scale Production, Storage and Transport of the Insect-Parasitic Nematode Neoaplectana spp. and Heterorhabditis spp., Ann. Appl. Biol. 104:117-120, 1984. Boemare, N.: Biology, Taxonomy and Systematics of Photorhabdus and Xenorhabdus, Entomopathogenic Nematology, New York, CABI Publishing, 2002, pp: 35-56. Daborn, P. J.; N. Waterfield; M. A. Blight; R. French-Constant: Measuring Virulence Factor Expression by the Pathogenic Bacterium Photorhabdus luminescens in Culture and During Insect Infection, Journal of Bacteriology 183:5834-5839, 2001. Forst, S.; D. Clarke: Bacteria-Nematode Symbiosis, Entomopathogenic Nematology, New York CABI Publishing, 2002, pp. 57-77. Gaugler, R.; R. Han: Production Technology, Entomopathogenic Nematology, New York, CABI Publishing, 2002, pp. 289-310. Gerritsen, L. J. M.; P. H. Smits: Variation in Pathogenicity of Recombinations of Heterorhabditis and Xenorhabdus luminescens strain, Fundam. Appl. Nematol. 16:367-373, 1993. Grewal, P. S.; M. Matsuura; V. Converse: Mechanisms of Specificity of Association Between the Nematode Stinernema scapterisci and Its Symbiotic Bacterium, Parasitology 114:483-488, 1997. Hatab, M. A.; R. Gaugler: Growth-Mediated Variations in Fatty Acid of Xenorhabdus sp., Journal of Applied Microbiology 82:351-358, 1997. Kaya, H. K.; R. Gaugler: Entomopathogenic Nematodes, Annu. Rev. Entomol. 38:181-206, 1993. Lunau, S.; S. Stoessel; A. J. Schmidt-Peisker; R. U. Ehlers: Establishment of Monoxenic Inocula for Scaling Up for in Vitro Culture of Entomopathogenic Nematodes Steinernema spp. and Heterorhabditis spp., Nematologica 39:385-399, 1993. Thaler, J. O.; B. Duvic; A. Givaudan; N. Boemare: Isolation and Entomotoxic Properties of the Xenorhabdus nematophilus F1 Lecithinase, Applied and Environmental Microbiology 64:23672373, 1998 Yoo, S. K.; I. Brown; R. Gaugler: Liquid Media Development for Heterorhabditis bacteriophora: Lipid Source and Concentration, Applied Microbiology and Biotechnology 54:759-763, 2000.

CONCLUSIONES
Los cuatro medios de cultivo estudiados permitieron la reproduccin y el desarrollo de H. indica. La mayor productividad se obtuvo con la combinacin hgado de cerdo-polvo de arroz, mientras la variante hgado de pollo-almidn fue la menos productiva.

REFERENCIAS
Arteaga, E.; M. Montes; E. Fernndez; B. Chang; V. Calzadilla; O. Vzquez; G. Plumas; V. Garca: Organization of the Work with Entomopathogenic Nematodes in Cuba, Third Internacional Nematology Congress, Grosier, Guadalupe Antilles, French West Indies, 1996.

fitosanidad/31

32/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

INTRODUCCIN DE LA AVISPA DE COSTA DE MARFIL CEPHALONOMIA STEPHANODERIS BETREM (HYMENOPTERA: BETHYLIDAE), PARASITOIDE DE LA BROCA DEL FRUTO DEL CAFETO HYPOTHENEMUS HAMPEI FERRARI (COLEOPTERA: SCOLYTIDAE) EN CUBA
Eliel Pea Marrero,1 Mario Garca Hernndez,2 Eliazar Blanco Rodrguez2 y Juan F. Barreras Gaytn3 Centro de Servicios Ambientales de Matanzas. CITMA. Autopista Sur, Km 14, Los Tanos, Varadero, Matanzas, Cuba 2 Centro Nacional de Sanidad Vegetal. Ayuntamiento no. 231, e/ San Pedro y Lombillo, Plaza de la Revolucin, Ciudad de La Habana 3 El Colegio de la Frontera Sur. ECOSUR. Tapachula, Chiapas, Mxico
1

RESUMEN
En mayo del 2003 se recibieron en Cuba 1 022 ejemplares adultos del parasitoide Cephalonomia stephanoderis Betrem (Hymenoptera: Bethylidae), provenientes de los Laboratorios de Cra del Colegio de la Frontera Sur (ECOSUR) en Tapachula, Chiapas, Mxico. Esta introduccin se realiz con el objetivo de adaptar los individuos a las condiciones climticas del pas para el desarrollo de estudios bioecolgicos, su cra masiva en laboratorio y su posterior liberacin y establecimiento en las reas cafetaleras afectadas por la plaga Hypothenemus hampei Ferrari. La introduccin se consider un xito, ya que el anlisis arroj que el ndice de mortalidad total fue de 6,75% (machos 31,1% y hembras 4,23% respectivamente), donde el ndice de sobrevivencia de viaje total fue de 93,2%. Palabras clave: Cephalonomia stephanoderis, parasitoides, broca del caf, Hypothenemus hampei, control biolgico

ABSTRACT
A total of 1 022 individual adults of Cephalonomia stephanoderis Betrem (Hymenoptera: Bethylidae) parasitoid were received in Cuba in May of 2003 from Mass Rearing Laboratories of Colegio de la Frontera Sur (ECOSUR) in Tapachula, Chiapas, Mexico. This introduction was realized for adapting the insects to Cuban climatic conditions and thus develope bio-ecologic studies, massive rearing in laboratories and their subsequent release and establishment in coffee areas affected by the pest Hypothenemus hampei Ferrari. The introduction was considered a success, since the analysis give out that the total death rate was to 6.75 % (male 31.1% and female 4.23% respectively), where the total index of journey survival was 93.2%. Key words: Cephalonomia stephanoderis, parasitoids, coffee berry borer, Hypothenemus hampei, biological control.

INTRODUCCIN

Hypothenemus hampei Ferrari se ha fundamentado en el uso de insecticidas; sin embargo, la resistencia de la broca al endosulfan, uno de los insecticidas ms utilizados para el control, as como los problemas de contaminacin ambiental y las caractersticas de la biologa de esta plaga, limitan el uso de estos productos qumicos. Por ello, en los ltimos aos se han incrementado los estudios para generar estrategias de lucha ms biorracionales, donde el control biolgico es el de mayor nivel de investigacin y aplicacin en la actualidad [Brun et al., 1989; Mansingh, 1991]. Los programas de control biolgico clsico para la lucha contra H. hampei se han sustentado en la importacin de parasitoides especficos, obtenidos en la re-

En la mayora de los pases cafetaleros el control de

gin de origen de la plaga (frica), en unos casos directamente y en otros desde pases de la regin donde se han establecido [Barrera et al., 1990a]. Murphy y Moore (1990) plantean que en el mundo se han realizado, bsicamente, introducciones de cuatro especies: Cephalonomia stephanoderis Betrem (avispa de Costa de Marfil), Prorops nasuta Waterston (avispa de Uganda), Phymastichus coffea La Salle (avispa de Togo) y Heterospilus coffeicola Schmiedeknecht; sin embargo, se ha demostrado en los diferentes pases en que la plaga est presente, que el control biolgico con el parasitoide C. stephanoderis ha logrado disminuir considerablemente las poblaciones, y adems se considera la especie ms estudiada y utilizada en estos programas, por poseer cualidades superiores a las restanfitosanidad/33

Pea y otros

tes, aunque existen referencias de complementacin en el efecto supresor de las poblaciones de la broca, en liberaciones combinadas de estos parasitoides especficos [Barrera et al., 1990b]. Las autoridades de Sanidad Vegetal del Ministerio de la Agricultura de Cuba consideran que la broca del caf constituye el principal organismo nocivo en este cultivo, no solo por los daos causados en diferentes reas cafetaleras del macizo montaoso oriental del pas, sino adems por su posible diseminacin al resto de las reas cafetaleras de la isla, motivo por el cual se solicit la introduccin del parasitoide C. stephanoderis, avispa especfica de esta plaga. Este enemigo natural se considera una alternativa viable y con efectividad comprobada en diversos pases de la regin neotropical, por lo que con su utilizacin se contribuir a reducir los ndi-

ces de la plaga y la utilizacin de insecticidas sintticos. Mediante esta introduccin se podr disponer de una nueva alternativa para la proteccin de reas del agroecosistema cafetalero de montaa que puedan infestarse con la plaga, y de obtener un sistema de manejo acorde con la tecnologa de este cultivo e integrar el uso de esta avispa parsita al programa de manejo de la broca en Cuba.

MATERIALES Y MTODOS
Durante los primeros das de mayo del 2003 se introdujeron en Cuba los ejemplares adultos del parasitoide C. stephanoderis provenientes de los Laboratorios de Cra del Colegio de la Frontera Sur (ECOSUR) de Tapachula, Chiapas, en Mxico. En la Tabla 1 se describen los elementos esenciales de la introduccin.

Tabla 1. Elementos que describen la introduccin de la especie Cephalonomia stephanoderis Betrem en Cuba
Aspectos Fechas de envo Descripcin Fecha de embalaje: 8 de mayo de 2003 Fecha de transportacin desde su origen hasta Ciudad de La Habana: 9 de mayo de 2003 Fecha de transportacin en destino desde Ciudad de La Habana hasta los laboratorios del Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria para la Montaa, Buey Arriba, Granma: 10 de mayo de 2003 (seis de la tarde) Mxico Laboratorios del Colegio de la Frontera Sur. ECOSUR, Tapachula, Chiapas, Mxico Laboratorio de Cuarentena del Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal (INISAV), Cuba Laboratorios del Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria para la Montaa (CNRFM), Buey Arriba, Granma, Cuba Area desde Mxico a Ciudad de La Habana y Terrestre desde Ciudad de La Habana a Buey Arriba, Granma Satisfactorias Caja unicel de 30 x 20 x 25 cm, aditada con gel preservante de la temperatura 100 viales de vidrio de 7 x 1,5 cm provistos con tapa de malla organd Ninguno Cephalonomia stephanoderis Betrem (Hymenoptera : Bethylidae) Ninguna Colecta no aplicable Cra de laboratorio s No aplicable (El material procede de un laboratorio de cra masiva) 1 022 ejemplares adultos alimentados con solucin de miel de abeja

Pas exportador Lugar de procedencia Institucin receptora Destinatario Va de transportacin Condiciones del envo Tipo de embalaje Vial o paquete Insecto husped Especie benfica Planta husped Procedencia del material Fecha de la colecta Cantidad de individuos recibidos

El material vena amparado por los documentos legales siguientes: Certificado Fitosanitario Internacional (emitido por las autoridades de Sanidad Vegetal de Mxico). Certificado de Origen y Pureza (emitido por ECOSUR).
34/fitosanidad

Certificado de envo de parasitoides de la broca del caf con vistas a satisfacer todos los requisitos para el movimiento de material biolgico en territorio mexicano, los cuales son solicitados por las autoridades de aduana, sanidad vegetal y SEMARNAP (medio ambiente) respectivamente.

Introduccin de la avispa...

Licencia de Importacin, Produccin y Ensayo emitida por el Centro Nacional de Seguridad Biolgica de Cuba. Licencia Ambiental del Laboratorio del Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria para la Montaa emitida por el Centro Nacional de Seguridad Biolgica de Cuba.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Para el correcto desarrollo del trabajo fue necesario realizar el Registro del Procedimiento Diario con los individuos introducidos en el laboratorio. Este requera que primeramente se examinaran por los especialis-

tas del Laboratorio Central de Cuarentena Vegetal del Centro Nacional de Sanidad Vegetal para determinar si se trataba de la especie deseada, y mediante el empleo de las claves taxonmicas de Betrem (1961) se corrobor que corresponda a Cephalonomia stephanoderis Betrem (Hymenoptera: Bethylidae), parasitoide especfico de la broca del fruto del cafeto Hypothenemus hampei Ferrari. Por otro lado, se analiz y determin que a los individuos no les acompaaba ningn insecto husped, y que la unidad reproductiva lo representaban 1 022 ejemplares adultos de la especie antes mencionada. En la Tabla 2 se muestra la cronologa de las acciones desarrolladas durante el arribo del lote de parasitoides.

Tabla 2. Acciones desarrolladas durante el proceso de introduccin y cuarentena post entrada del parasitoide Cephalonomia Stephanoderis Betrem en Cuba
09/5/03 Acciones Vivos Muertos Estado de Desarrollo Adultos Evolucin Buena Descendencia

El material arrib a Cuba sobre las tres de la tarde, por la Terminal 3 del Aeropuerto Internacional Jos Mart de Ciudad de La Habana. Se entreg la documentacin requerida por las autoridades fitosanitarias del aeropuerto y se emiti el Acta de Liberacin correspondiente. Luego el material importado se llev al Laboratorio de Cuarentena del Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal para su traslado al da siguiente al Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria para la Montaa, ubicado en Buey Arriba, Granma Vivos Muertos Estado de Desarrollo Adultos Evolucin Buena Descendencia

10/5/03 Acciones

El traslado se realiz por carretera en auto climatizado, en un perodo aproximado de 10 h y se arrib al Centro Nacional de Referencia aproximadamente a las seis de la tarde. En el Laboratorio de Cuarentena Vegetal de ese centro se confirm la pureza del material y su diagnstico. Se observ, adems la vitalidad de los individuos con vistas a comenzar el proceso de reproduccin Vivos 953 Muertos 69 Estado de desarrollo Adultos Evolucin Buena Descendencia No aplicable

11/5/03 Acciones

Se determin el ndice de mortalidad total (6,75%) y por sexo (macho 31,1% y hembra 4,23% respectivamente), as como el ndice de sobrevivencia de viaje total equivalente a un 93,2%. Los individuos vivos fueron liberados en frascos plsticos de 1,5 L de capacidad que contenan 400 cotiledones de caf pergamino infestados con H. hampei, a razn de 40 ejemplares del parasitoide por frasco. Estos se trasladaron a un cuarto de cra masiva climatizado con temperatura entre 21-27C. Los individuos muertos se separaron y colocaron en cmara hmeda para su posterior observacin a las 72 h. Se colectaron ejemplares de referencia para su conservacin en el Laboratorio de Cuarentena Vegetal del CNSV Vivos Muertos 69 Estado de desarrollo Adultos Evolucin Muertos Descendencia No aplicable

14/5/03 Acciones

A las 72 h se observaron bajo el estreo los 69 individuos muertos que fueron colocados en cmara hmeda; solo se apreci en algunos individuos la presencia de hongo del gnero Aspergillus sp., el cual es comn observar cuando el material entra en contacto con el ambiente

Se aprecia que los elementos ms importante por destacar lo constituyen el ndice de mortalidad de la especie introducida, que fue de 6,75%, y el ndice de sobreviviencia de viaje total con 93,2%. Este ltimo elemento hace considerar que la introduccin fue exitosa debido al alto porcentaje de individuos vivos que sobrevivieron el viaje desde ECOSUR, Mxico, hasta Cuba, incluso, se registr un porcentaje de sobre-

viviencia de viaje mayor al alcanzado por Mxico cuando se realiz la introduccin de esta misma especie con individuos procedentes de Togo en 1988, que fue de 88,5% y con 11,5% de mortalidad [Barrera et al., 1990c]. Otra de las acciones desarrolladas por los especialistas correspondi al Registro de Desechos con los elemenfitosanidad/35

Pea y otros

tos que contena la muestra recibida. En este anlisis se determin que lo integraban dos elementos con los cuales se procedi a su incineracin: 1. Caja unicel de poliespuma con dimensiones de 30 x 20 x 25 cm. Causa por la que se desecha: material desechable. 2. Caja de cartn con secciones divisorias. Causa por la que se desecha: material desechable.

REFERENCIAS
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CONCLUSIONES
El lote de individuos de parasitoides vena amparado con todos los documentos legales para su salida del pas de procedencia e introduccin en Cuba. Se comprob que la especie introducida corresponda a Cephalonomia stephanoderis Betrem, parasitoide especfico de la broca del fruto del cafeto Hypothenemus hampei Ferrari. Al material introducido se le realiz el proceso de cuarentena postentrada en los laboratorios del Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria para la Montaa en Buey Arriba, Granma. La introduccin de Cephalonomia stephanoderis Betrem en Cuba se consider un xito.

36/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

Manejo de plagas

VARIABILIDAD DE MYCOSPHAERELLA FIJIENSIS MORELET. ESTABILIDAD DE LA RESISTENCIA A SIGATOKA NEGRA DE LOS CLONES HBRIDOS DE LA FHIA
Michel Prez Miranda,1 Luis Prez Vicente,1 Roberto Trujillo2 y Dulce M. Betancourt3 Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600, lperezvicente@hotmail.com 2 LAPROSAV. Carretera Central, Extremo Oeste, Ciego de vila, Cuba 3 ETPP Baracoa. Delegacin de la Agricultura del municipio de Baracoa, Guantnamo, Cuba
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RESUMEN
La sigatoka negra (SN) causada por Mycosphaerella fijiensis Morelet (Mf) es la enfermedad ms importante de los bananos y pltanos. En Cuba hay ms de 12 000 ha sembradas de clones con resistencia parcial, por lo que la presin de seleccin de patotipos con mayor agresividad puede considerarse elevada. Se evalu la severidad del ataque, la velocidad de evolucin de la enfermedad, as como la formacin de fructificaciones en las manchas de parcelas de clones susceptibles y con resistencia parcial en dos localidades de la provincia de La Habana, en la empresa La Cuba, en la provincia de Ciego de vila, y en Baracoa, en la provincia de Guantnamo. Paralelamente se inocularon, en condiciones controladas de laboratorio, fragmentos de hojas colocados en agar con benzimidazol en placas de Petri plsticas, con suspensiones de conidios provenientes de aislamientos obtenidos de poblaciones de Mf salvajes y de clones con resistencia parcial, en los que se evalu diariamente la cantidad de lesiones y la velocidad de evolucin de los sntomas. Los clones de la FHIA en las dos localidades de La Habana y en Baracoa mostraron una resistencia elevada a la enfermedad, mientras que los niveles de ataques y la produccin de pseudotecios en plantas de FHIA 18 de La Cuba, en Ciego de vila, fue similar a la de los clones susceptibles, y mucho ms intensa que la observada en 1994-1995, cuando los clones con resistencia parcial se introdujeron por primera vez en Cuba. Las inoculaciones sobre fragmentos de hojas del clon FHIA 18 y de Gran enano con aislados salvajes demostraron la mayor agresividad de los ltimos sobre el clon FHIA 18. Este constituye el primer informe de cambios de la agresividad de las poblaciones del patgeno o de erosin de la resistencia parcial a sigatoka negra del clon FHIA 18. Palabras clave: variabilidad patognica, sigatoka negra, Mycosphaerella fijiensis, test monocclico

ABSTRACT
Black Sigatoka (BS) caused by Mycosphaerella fijiensis Morelet (Mf) is the most important disease of banana and plantains. In Cuba exist more than 12 thousand planted of FHIA hybrids with partial resistance and hence, the pressure of selection of pathotypes with an increased aggressiveness could be considered to be high. Experimental plots with susceptible and partially resistant cultivars in Alquzar and Gira de Melena in Havana province, La Cuba in Ciego de Avila, and Baracoa in Guantnamo were established where disease severity and the fructifications development in the spots were assessed. A laboratory experiment under controlled conditions using leaf fragments of Grand Nain and FHIA 18 placed on agar + benzimidazole in plastic Petri plates and inoculated with conidial suspensions belonging to single ascospore isolates from wild Mf populations and partial resistant cultivars showing strongly BS attack were carried out where he amount of lesions and the speed of evolution of symptoms were daily assessed. FHIA cultivars in the two localities of Havana and in Baracoa showed a high resistant reaction to the disease meanwhile the level of attack and the pseudothecia production in Ciego de Avila was similar to Cavendish cultivars, and more severe than the observed in 1994/95, when the cultivars these cultivars were introduced in Cuba for first time. Conidial inoculations on Grand Nain and FHIA 18 leaf fragments with isolates from the strongly attacked FHIA 18 plants from Ciego de Avila and from Cavendish cultivars (wild type) showed the higher aggressiveness of the former. This is considered the first report of a change of aggressiveness of Mf populations or the erosion of the partial resistance to BS in the FHIA 18 cultivar. Key words: black sigatoka, pathogenic variability, Mycosphaerella fijiensis, monocyclic test

INTRODUCCIN

La aparicin de la sigatoka negra en Cuba, causada

por Mycosphaerella fijiensis Morelet a finales de 1990 [Vidal, 1992], tuvo un impacto marcado en los costos de produccin, pero especialmente en la estructura clonal de la superficie del pas plantada de musceas

[Prez et al., 2002]. Los bananos Cavendish (AAA) fueron sustituidos por los clones FHIA 23 (AAAA) y FHIA 18 (AAAB), que junto al FHIA 3 (AABB) ocupan alrededor de 12 000 ha. Asimismo, en la actualidad solo se mantiene el 18% de las ms de 43 000 ha de
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pltanos (AAB) existentes en 1990. Los pltanos se han sustituido por el cultivo a gran escala del clon Burro CEMSA (ABB), que ocupa unas 63 000 ha, y por el FHIA 3 (AABB). El uso de variedades resistentes es, sin duda, la estrategia ms econmica y ambientalmente sostenible de lucha contra sigatoka negra. Se han realizado numerosos estudios sobre la reaccin de los clones de bananos y pltanos a M. fijiensis [Meredith y Lawrence, 1970; Firman, 1972; Four et al., 1984; Four et al., 1990; Four, 1994; Hernndez y Prez, 2001; Rowe, 1998]. Four (1994) describi tres tipos de reacciones en Musa frente a sigatoka negra: a) la reaccin de resistencia muy alta o hipersensibilidad observada en Yangambi Km 5 (subgrupo Ibota, AAA); b) la resistencia parcial, que se expresa por un alargamiento del ciclo y la disminucin de la reproduccin del patgeno; c) la reaccin compatible o de sensibilidad observada en los clones Cavendish y pltanos (AAB). En 1996 Hernndez y Prez [citados por Prez, 1998] determinaron la reaccin y componentes de la resistencia a sigatoka negra de los clones FHIA 23, FHIA 2, FHIA 3, FHIA 18, SH 3436 y de un grupo importante de clones del banco de germoplasma de Cuba, entre los que se encontraban diferentes clones pertenecientes al subgrupo Cavendish, pltanos (AAB), el Yangambi Km 5, el Paka y el Burro CEMSA (ABB), mantenidos sin tratamientos con fungicidas durante todo el tiempo que duraron las observaciones. Los clones FHIA mostraron un alargamiento estadsticamente significativo de la duracin en das entre la emergencia de las hojas y la aparicin de los primeros sntomas, en relacin con el clon Gran enano susceptible. La resistencia parcial de estos clones se expresa mediante el alargamiento de la evolucin o transicin de los sntomas de rayas a necrosis y en la reduccin del nmero de pseudotecios/mancha [Prez, 1998]. En el Yangambi Km 5 las aloinfecciones a partir de inculo producido en parcelas vecinas determinaron la aparicin de numerosas manchas y defoliaciones, pero no la formacin de espermogonios y pseudotecios. Fullerton y Olsen (1995) informaron de la presencia en Nueva Guinea y las Islas del Pacfico de poblaciones de M. fijiensis virulentas sobre los clones Musa acuminata burmannica Calcutta 4, (T8), Paka y Yangambi Km 5. Melioum (1999) inform del cambio de reaccin en el clon Yangambi Km 5 a las infecciones de sigatoka negra en Camern 10 aos despus de los informes de Four et al. (1990).
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La aparicin de nuevos genotipos virulentos de patgenos capaces de vencer la resistencia de variedades resistentes es un fenmeno de presin de seleccin, determinado en gran medida por condiciones ambientales y de manejo del cultivo favorables a la reproduccin del patgeno y por la extensin ocupada por los genotipos resistentes, o ms directamente por la superficie ocupada por los genes de resistencia desplegados en la poblacin [Van der Plank, 1963, 1968]. En Cuba ms de 12 000 ha de superficie de banano y pltanos estn cultivadas de hbridos FHIA [Prez et al., 2002]. Estos clones crecen en una gran diversidad de condiciones, y en la mayora de los casos cerca de plantaciones de bananos y pltanos susceptibles con ataques severos de sigatoka negra, por lo que estn expuestos a una carga severa de inculo durante la poca lluviosa. La presin de seleccin de patotipos con mayor agresividad capaces de producir infecciones severas sobre estos clones es por tanto elevada. Con estos antecedentes se desarroll una investigacin con los siguientes objetivos: a) Conocer la estabilidad de la resistencia de los clones hbridos de la FHIA y diferentes clones de referencia de reaccin conocida, en un estudio de tres aos con diseos experimentales de bloques colocados en diferentes condiciones ecolgicas de Cuba. b) Comparar la virulencia in vitro de diferentes aislamientos de M. fijiensis bajo condiciones estandarizadas de incubacin.

MATERIALES Y MTODOS
1. Medicin de la virulencia/patogenicidad en campo de las poblaciones de M. fijiensis en un grupo de clones diferenciales e hbridos en diferentes localidades del pas. Epidemiologa de sigatoka negra a nivel policclico En mayo del 2001 se seleccionaron parcelas de ms de 5 ha de los clones FHIA 2, FHIA 3, FHIA 18, FHIA 23 y Gran enano en la finca Pulido, en Alquzar, La Habana; tambin de los clones FHIA 2, FHIA 3, FHIA 18, FHIA 21, FHIA 23 y Gran enano en la empresa La Cuba, en Ciego de vila, en el occidente y centro del pas respectivamente, ambas localidades con pluviometra anual promedio entre 1 100 y 1 300 mm de lluvia; adems parcelas de 50 plantas en Baracoa, provincia de Guantnamo, en las localidades de San Luis con los clones FHIA 18 y Robusta, y en la de Mosquitero con los clones FHIA 2, FHIA 3, FHIA 18, FHIA 19, FHIA 20, FHIA 21, FHIA 23 y Robusta (subgrupo

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Cavendish, AAA). Esta regin presenta una pluviometra de ms de 1 700 mm de lluvia anuales. Debido a que el huracn Michel destruy totalmente la plantacin de Alquzar, se estableci inmediatamente otra en la Empresa de Cultivos Varios (ECV) de la localidad de Gira de Melena, en la misma provincia de La Habana, con los clones FHIA 1, FHIA 2, FHIA 18, FHIA 20, FHIA 21, Yangambi Km 5 y Gran enano, donde se mantuvieron las observaciones hasta junio del 2003. Evaluacin del desarrollo de la enfermedad. Se evalu la severidad de los ataques en las diferentes parcelas por mediciones del rea foliar afectada total, la hoja ms joven manchada [Stover y Dickson, 1970]; hoja ms
Valor 0 1 2 3 4 5 6

joven abierta promedio con 10 o ms lesiones en estado 5 y 6 de la descripcin de Four (1982)], as como del nmero de pseudotecios por mancha en 200 manchas tomadas al azar en cada parcela. Para garantizar la uniformidad de las evaluaciones se imprimieron las escalas grficas del desarrollo de la enfermedad y se procedi a uniformar los criterios de evaluacin. Con el objetivo de detectar diferencias en el comportamiento de los clones, en relacin con cambios de patogenicidad en las poblaciones de M. fijiensis o de la estabilidad de la resistencia, la escala de Stover (1971), transformada por Gauhl (1990), fue modificada a su vez de la siguiente forma:
Caractersticas

Sana (libre de sntomas o rayas en estado 1 a 3) Hasta el 1% de rea necrosada (o hasta 10 manchas en estado 4 al 6 de la descripcin de la evolucin de los sntomas de Four et al. (1984) Hasta el 5% del rea foliar necrosada De 6 a 16% del rea foliar necrosada De 16 a 33% del rea foliar necrosada De 33 a 50 % de rea foliar necrosada Ms del 50% del rea foliar necrosada

Los datos obtenidos se utilizaron en el clculo del porcentaje de hojas sanas y el ndice de infeccin II valor medio ponderado del rea foliar afectada o ndice de McKinney [McKinney, 1923, citado tambin por Towsend y Heuberguer segn Unterstenhefer (1963): II = ( an/6N) x 100 donde: a: Grado de la escala n: Nmero de hojas en cada grado de la escala N: Total de hojas evaluadas Se determin adems la velocidad de evolucin (suma bruta (SBEE) de la enfermedad en las diferentes parcelas de acuerdo con el procedimiento descrito por Four (1988). Determinacin de la produccin de fructificaciones. Se muestrearon en los das 28 de febrero (estacin seca y fra) y 14 de septiembre de 2003 (estacin caliente y lluviosa), 200 manchas en estado 6 de hojas de los clones FHIA 18 y Gran enano, previamente marcadas en el momento de su emergencia, para realizar conteos de la cantidad de fructificaciones presentes en las localidades de Gira de Melena en La Habana, y La Cuba, en Ciego de vila. Las manchas se colocaron en un beaker

con lactofenol, que a su vez se puso en un bao con agua hirviendo durante 3-5 min para aclararlas; se observaron al microscopio ptico y se cont el nmero de pseudotecios, espermogonios y conidiforos de M. fijiensis. 2. Comparacin de la agresividad de diferentes aislamientos de M. fijiensis. Epidemiologa de la sigatoka negra a nivel monocclico en condiciones controladas Se obtuvieron aislamientos monoascsporicos de plantaciones afectadas de FHIA 18 de La Cuba y de bananos susceptibles Cavendish (AAA), de zonas donde nunca se haban introducidos clones con resistencia parcial en la zona del Cerro en la Ciudad de La Habana, que se mantuvieron en PDA a 27C y colocados durante 48 h a 16C para inducir la formacin de conidios. Para poner en evidencia diferencias de agresividad entre aislados provenientes de fincas plantadas de FHIA 18 (AAAB) con fuertes afectaciones de sigatoka negra con los obtenidos de zonas donde no existen clones con resistencia parcial bajo condiciones controladas (a partir del hecho que la resistencia parcial es expresada cuantitativamente y que el ambiente tiene una influencia marcada sobre el desarrollo de la enfermedad), se
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condujo un ensayo monocclico en fragmentos de hojas de FHIA 18 y Gran enano bajo condiciones controladas en laboratorio, de acuerdo con el procedimiento descrito por Prez et al. (en prensa), para lo cual se fijaron plantas de los clones Gran enano y FHIA 18 en macetas en un aislador. Se colectaron fragmentos de la primera hoja completamente expandida de 3,5 x 3,5 cm, se lavaron con agua destilada estril y colocaron en una placa de Petri con agar agua + 40 g/mL de benzimidazol, con el haz de la hoja en contacto con el agar. Para evitar que los extremos del fragmento de hoja se levantaran, se coloc sobre este una lmina transparente plstica estril del mismo tamao del fragmento, que en su centro se le haba eliminado un cuadrado de 3 x 3 cm de forma que ese sector de la hoja quedara expuesto para poder realizar las inoculaciones. La superficie de los fragmentos se inocul con 50 L de suspensiones conidiales de los aislamientos de M. fijiensis CAF18-1, obtenido de plantas afectadas de FHIA 18 de La Cuba, y el aislado Cm-1, tomado de una parcela de Gran enano, en el municipio de Cerro en Ciudad de La Habana, donde nunca se haban plantados clones con resistencia parcial. Se inocularon concentraciones de conidios procedentes de cultivos de 14 das de edad de 40 conid/cm2 de hoja en 10 fragmentos de hojas tomadas de los clones Gran enano y FHIA 18. Las placas se sellaron con parafilm y se incubaron en un cuarto climatizado

(25-27C) bajo dos tubos de luz fluorescente colocados a 40 cm sobre ellos. Se cont diariamente el nmero de lesiones de cada estadio de evolucin que aparecieron. Se compar el nmero de lesiones en el fragmento inoculado de cada clon y se midi adems la duracin en das de la evolucin de los sntomas.

RESULTADOS Y DISCUSIN
1. Medicin de la virulencia/patogenicidad en campo de las poblaciones de M. fijiensis en un grupo de clones diferenciales e hbridos en diferentes localidades del pas. Epidemiologa de sigatoka negra a nivel policclico Parcelas de La Habana. En la Fig. 1 aparecen los datos de las observaciones realizadas hasta finales de octubre del 2001 en la parcela establecida en la finca Pulido, en Alquzar. A excepcin del FHIA 23, los clones hbridos de la FHIA mostraron una buena resistencia parcial a la sigatoka negra al compararlos con el clon Gran enano susceptible a la enfermedad. Los niveles ms altos de resistencia se encontraron con el FHIA 2 y FHIA 18, mientras que el FHIA 23 mostr susceptibilidad a la enfermedad y un nivel de afectacin foliar ligeramente inferior al de los Cavendish. Estos resultados concuerdan con las observaciones realizadas inicialmente en fincas de la empresa La Cuba, en Ciego de vila, cuando se estudiaron estos clones en los primeros experimentos de campo en 1995-1996 [Hernndez y Prez, 2001].

Figura 1. Comportamiento de la enfermedad en las parcelas de la finca Pulido, en Alquzar, en el 2001.

En los primeros das de noviembre del 2001 el huracn Mitchel destruy completamente el experimento en la finca Pulido, en Alquzar. Se establecieron de nuevo las parcelas en un jardn clonal de Gira de Melena sobre
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los clones FHIA 01, FHIA 02, FHIA 04, FHIA 18, FHIA 19, FHIA 20, FHIA 21, FHIA 22, Yangambi Km 5, FHIA 23 tambin conocido en Cuba como FHIA 1-1 y el Gran enano.

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Similarmente al caso de Alquzar, los clones FHIA, con excepcin de FHIA 04 y FHIA 23, mostraron un elevado nivel de resistencia parcial frente a la sigatoka negra, a pesar de la fuerte presin de inculo debido a la presencia en el rea de clones muy susceptibles altamente infectados (Fig. 2). El clon Gran enano (AAA) mostr altos niveles de ataque, lo que determin que en noviembre la mayora de las plantas tuvieran tan solo dos hojas funcionales que impidi el desarrollo de la totalidad de los raci-

mos en las plantas florecidas. Los clones FHIA 2, Yangambi Km 5, FHIA 18, FHIA 01 y FHIA 21 exhibieron los mayores niveles de resistencia. En los clones ms susceptibles (Gran enano y el FHIA 23) ocurrieron cuatro aumentos marcados de la velocidad de evolucin de la enfermedad (Fig. 3), mientras en los diferentes clones con resistencia parcial los aumentos de la velocidad de evolucin en el mismo perodo fueron dos (clones FHIA 19 y FHIA 21) o no ocurrieron.

Figura 2. Comportamiento de la enfermedad en Gira de Melena en el 2002-2003.

Figura 3. Velocidad de evolucin de la enfermedad expresada como SBEE, Gira de Melena, 2002-2003.

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El Yangambi Km 5 mostr un nmero importante de lesiones de hipersensibilidad, pero tambin desarrollo de parches necrticos en la hojas debido a la concurrencia de un gran nmero de lesiones por unidad de rea a causa de la aloinfeccin desde parcelas de clones susceptibles. En las manchas decoloradas no se observaron fructificaciones sexuales, lo que indica que no ocurri cambio en la patogenicidad de M. fijiensis. El FHIA 18, similar al ocurrido en Alquzar, a pesar de la fuerte presin de inculo mostr un adecuado nivel de resistencia parcial con niveles mximos de infeccin de 20% del rea foliar necrtica. El clon FHIA 23 reflej una susceptibilidad que no le permiti llenar los racimos bajo la presin de inculo existente. El comportamiento de los clones fue por tanto similar al observado en los estudios iniciales de campo. Parcelas de Baracoa, Guantnamo. En la Fig. 4 aparecen las curvas de las evaluaciones realizadas en las parcelas de San Luis, Baracoa, hasta noviembre de 2002. La precipitacin en Baracoa es la ms alta de todo el pas, y por tanto las condiciones ambientales son las ms favorables al desarrollo de la enfermedad. Los clones hbridos de la FHIA con resistencia parcial a sigatoka negra se introdujeron recientemente en extensiones limitadas en una plantacin en los alrededores de la ciudad de Baracoa, por lo que puede considerarse que las poblaciones de M. fijiensis existentes desde hace

muy poco tiempo estn sometidas a seleccin para agresividad por el despliegue de genes de resistencia parcial en la poblacin de musceas de esta regin, y puede considerarse, particularmente en San Luis y Mosquitero, que son poblaciones esencialmente salvajes. El clon Robusta present una alta intensidad de ataque durante todo el ao, en el que solo dispuso de una o dos hojas funcionales hasta la entrada de los meses ms secos, cuando el nivel de severidad de la enfermedad decreci. El FHIA 18, por el contrario, mostr niveles fluctuantes de la severidad del ataque todo el tiempo por debajo del 20% de rea foliar afectada, lo que se corresponde con las observaciones realizadas en las parcelas de La Habana y en los estudios iniciales llevados a cabo en 1995-1996 en la regin de La Cuba, en Ciego de vila. A finales de julio se cosecharon las parcelas y se estableci un segundo ensayo en la misma zona con los clones FHIA 23, FHIA 02, FHIA 03, FHIA 18, FHIA 19, FHIA 20, FHIA 21 y FHIA 22. En la Fig. 5 aparecen los datos del desarrollo de la enfermedad en trminos de rea foliar afectada en las parcelas de los clones situadas en la zona de Mosquitero, en Baracoa. En ella la mayora de los clones de la FHIA mostraron ndices de infeccin inferiores al del clon Robusta. A diferencia del resto de las localidades, el clon FHIA 23 no reflejaba una gran severidad del ataque.

Figura 4. Dinmica de la enfermedad en San Luis, Baracoa, en los clones Robusta (subgrupo Cavendish, AAA) y FHIA 18 (AAAB).

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Figura 5. rea foliar afectada por sigatoka negra en diferentes clones en las parcelas situadas en Mosquitero, Baracoa, Guantnamo.

Parcelas de La Cuba en Ciego de vila. Las parcelas de los clones FHIA 2, FHIA 3, FHIA 18, FHIA 21 y Gran enano quedaron seriamente afectadas despus del paso del cicln Mitchel. Se restablecieron las observaciones sobre los clones FHIA 18, FHIA 01 y Gran enano en produccin con proteccin a partir de febrero, cuando

las plantaciones se uniformaron de nuevo. El desarrollo de la enfermedad durante la primera mitad del 2002 fue muy intenso en las parcelas de FHIA 18 y FHIA 1, y la situacin mejor hacia la segunda mitad del ao (Fig. 6). Un ciclo similar, pero algo ms extendido, ocurri en el 2003 con fuertes afectaciones en el FHIA 18.

Figura 6 . Comportamiento de la sigatoka negra en las parcelas de observacin ubicadas en plantaciones de La Cuba, Ciego de vila.

En la Fig. 7 aparecen las curvas del desarrollo de la sigatoka negra en el FHIA 18 en las diferentes parcelas que permiten comparar mejor el comportamiento de la enfermedad durante el 2002. Es de hacer notar que las plantas evaluadas en la zona de Baracoa, a pesar de su mayor pluviometra, exhi-

bieron ndices notablemente ms bajos de la enfermedad que en La Cuba. Lo mismo ocurre si se compara la incidencia de la enfermedad en los clones FHIA 18 y FHIA 23 de La Cuba con los mismos clones de Gira de Melena, de muy alta presin de inculo (Figs. 2 y 4).
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Figura 7. Desarrollo de la sigatoka negra (rea foliar afectada) en el clon FHIA 18 en cuatro localidades de Cuba en 1996, 2001 y 2002.

En la Tabla 1 aparece la comparacin de los conteos de fructificaciones en las manchas tomadas de las parce-

las de Gira de Melena, en La Habana, y de la ECV La Cuba.

Tabla 1. Comparacin de la produccin de fructificaciones en los clones Gran enano y FHIA 18 en La Cuba y en Gira de Melena
Fecha Localidad Pseudotecios FHIA 18 28 de febrero de 2003 Gira de Melena La Cuba 14 de septiembre de 2003 Gira de Melena La Cuba 101,8 a 208,5 b 33,0 a 394,8 b Gran enano 305,3 b 353,0 b 303,4 b 405,5 b Espermogonios FHIA 18 71,4 a 323,8 b 46,4 a 293,6 b Gran enano 337,9 b 378,7 b 426,6 b 408,4 b Conidiforos FHIA 18 19,0 a 23,1 a 25,6 a 23,3 a Gran enano 29,5 ab 46,6 b 23,7 a 28,0 a

Letras diferentes indican diferencias significativas para p = 5%.

Como puede apreciarse hay una marcada diferencia entre los clones Gran enano y FHIA 18 en relacin con la produccin de pseudotecios y espermogonios en las manchas maduras de sigatoka negra de las parcelas de Gira de Melena en ambos muestreos. La produccin de pseudotecios fue entre 4,5 y 8,3 veces mayor en el Gran enano que en el FHIA 18, y la de espermogonios fue entre 4,1 y 9,1 veces mayor. En las parcelas ubicadas en La Cuba, en cambio, no existen diferencias significativas de produccin de cuerpos fructferos entre ambos clones. Las relaciones entre Gran enano y FHIA 18 para los pseudotecios oscil entre 1,3 y 2,0, y entre 1,2 y 1,3 para los espermogonios, lo que indica que el patgeno en las plantas de FHIA 18 de las parcelas de La Cuba se reprodujo casi con la misma intensidad que en
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el Gran enano, lo que sugiere una prdida de una de las caractersticas de la resistencia parcial de este clon frente a las poblaciones de M. fijiensis en La Cuba. Estos resultados demuestran una prdida de la eficacia de la resistencia parcial en la depresin del desarrollo de la enfermedad y de la reproduccin del patgeno en las plantaciones de FHIA 18 en La Cuba. Comparacin de la agresividad de diferentes aislamientos de M. fijiensis. Epidemiologa de la sigatoka negra a nivel monocclico en condiciones controladas En la Tabla 2 aparece el resultado de las evaluaciones del ensayo para medir las diferencias de agresividad de los aislados de M. fijiensis de diferentes localidades.

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Tabla 2. Nmero de lesiones a los 14 y 20 das en los fragmentos de hojas inoculados con diferentes aislamientos del patgeno Aislamientos CAF 18-1/Gran enano Cm-1/Gran enano CAF 18-1/FHIA 18 Cm-1/FHIA 18 Nmero de lesiones A los 14 das 60 c 58 c 31 b 13 a A los 20 das 81c 71 c 38 b 21 a

Letras diferentes indican diferencias significativas segn el test de Neumann-Keuls para p = 5%.

Ambos aislados se comportaron de manera similar en el clon Gran enano muy susceptible, pero mostraron una agresividad diferente sobre los fragmentos de FHIA 18. El aislado CAF 18-1, obtenido de plantaciones de FHIA 18 con fuertes afectaciones de sigatoka negra, present una evolucin ms rpida sobre este clon que el obtenido de Robusta de un rea donde no se han plantado clones FHIA. La duracin del ensayo no permiti establecer diferencias en relacin con la produccin de fructificaciones debido al tiempo en que se mantienen viables los fragmentos de hojas. No obstante, estos resultados se corresponden con las evaluaciones de la capacidad reproductiva del patgeno que aparecen en la Tabla 1, en el sentido de que la reproduccin de los aislados de La Cuba no es inhibida de la forma que ocurra en las evaluaciones originales de estos clones en esa ECV [Prez, 1998; Hernndez y Prez, 2001], y pone en evidencia cambios en la capacidad patognica de la poblacin de M. fijiensis en La Cuba.

en las manchas en hojas del FHIA 18 y en Gran enano en fincas no tratadas de la empresa La Cuba y de Gira de Melena en La Habana permitieron constatar diferencias marcadas entre las dos localidades en relacin con la inhibicin de la formacin de pseudotecios y espermogonios en las manchas, que es parte de la expresin del mecanismo de resistencia parcial de estos clones. Por ltimo, las comparaciones de la velocidad e intensidad del desarrollo de la enfermedad bajo condiciones controladas en laboratorio, donde se limita la influencia ambiental sobre la evolucin de la enfermedad, permitieron detectar diferencias de agresividad entre aislados monoascospricos procedentes de plantas severamente afectadas del clon FHIA 18 de fincas La Cuba y de aislados procedentes de plantas Cavendish de una regin donde no existen clones con resistencia parcial, y no ha ocurrido seleccin para agresividad, por lo que puede considerarse una poblacin salvaje en relacin con este carcter. Los resultados indican por primera vez la seleccin de poblaciones de M. fijiensis con agresividad sobre el clon FHIA 18 con resistencia parcial en esta localidad, posiblemente por presin de seleccin direccional [Mather, 1953; Wolfe, 1982] debido a la extensin de la superficie cultivada de este genotipo y a las condiciones desfavorables de nutricin que han prevalecido en los ltimos aos en la mayora de las reas de bananos del pas. Prez et al. (2002) observaron una relacin entre los niveles de potasio y la severidad de sigatoka negra en fincas de Ciego de vila. Se ha informado que el potasio tiene una influencia importante sobre el desarrollo de las enfermedades en diferentes cultivos por su funcin como regulador mvil de la actividad enzimtica y su participacin en las funciones celulares, como son la fotosntesis, fosforizacin, sntesis de protenas, engrosamiento de las paredes celulares y la acumulacin de aminocidos [Huber, 1980].
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DISCUSIN GENERAL
Los resultados de los estudios de campo demostraron el comportamiento ms susceptible frente a sigatoka negra del clon FHIA 18 en La Cuba donde esta variedad se introdujo en pequeas parcelas en 1994, cuando la empresa cultivaba esencialmente el clon Gran enano susceptible a la enfermedad, en relacin con el comportamiento evidentemente resistente de este clon en el resto de las localidades del pas. Cuando se introdujo este clon en el pas por primera vez en esta empresa mostr una buena resistencia parcial frente a la enfermedad basada en el alargamiento del ciclo de evolucin de la enfermedad y en una reduccin drstica de la capacidad de produccin de pseudotecios y ascsporas [Prez, 1998; Hernndez y Prez, 2001]. Las comparaciones de la produccin de pseudotecios y espermogonios

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Hasta el presente la seleccin de poblaciones ms agresivas de M. fijiensis sobre clones con resistencia parcial no se haba documentado, y debe tenerse en cuenta en los programas de mejora de musceas actuales. El patgeno muestra una importante capacidad de variacin y adaptabilidad, como lo ha demostrado la seleccin de poblaciones resistentes a triazoles (de carcter polignico) en Cuba y otros pases [Prez y Batlle, 1993; Chin et al., 1996; Prez et al., 2003] y a diferentes genes de resistencia de los clones con resistencia parcial de la FHIA desplegados en la empresa La Cuba. Estos resultados sealan la necesidad de introducir nuevas fuentes de resistencia a la enfermedad en los programas de mejora convencional y biotecnolgica y mejorar las condiciones de nutricin de los clones que permitan potenciar los mecanismos de defensa de los clones en explotacin comercial. Deben establecerse estrategias de cultivo que disminuyan la presin de seleccin direccional, rompan el desarrollo politico del patgeno y disminuyan el estrs fisiolgico para potenciar los mecanismos de defensa de las plantas a la enfermedad. El cultivo anual intensivo puede romper el desarrollo politico de la enfermedad y disminuir la presin de seleccin anual. Las reas bajo cultivo convencional, donde se ha constatado la presencia de poblaciones agresivas, deben someterse a saneamiento intensivo de hojas, mejorar los niveles de nutricin, ir al cultivo anual (siempre que sea posible), y finalmente adoptar tratamientos con fungicidas siempre que las medidas anteriores no garanticen los niveles necesarios de control.

entre ambos clones, lo que pone en evidencia la prdida de este carcter. Se constat la existencia de diferencias de agresividad entre aislados de M. fijiensis de plantas de FHIA 18 de campos severamente afectadas por la enfermedad y lo obtenido de plantas Cavendish de zonas libres de clones con resistencia parcial. Las diferencias en campo son sin embargo mayores que las observadas en los ensayos en fragmentos de hojas.

REFERENCIAS
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CONCLUSIONES
Los clones FHIA 2, FHIA 18, FHIA 01, FHIA 21, y FHIA 20 mantienen su resistencia parcial a sigatoka negra en las zonas de Baracoa y La Habana y en la mayora de las reas del pas. En las parcelas de La Cuba el clon FHIA 18 mostr durante dos aos consecutivos afectaciones severas de la enfermedad, muy superiores a las de Baracoa, donde el rgimen de lluvias es superior y ms distribuido. Las comparaciones de la capacidad del patgeno de formar fructificaciones (pseudotecios, espermogonios y conidiforos) en manchas de hojas de FHIA 18 y Gran enano desarrolladas en la misma semana permiti establecer que en las reas donde el FHIA 18 muestra su resistencia parcial es 75-80% menor que en el clon Gran enano, mientras que en reas donde est afectado no existen diferencias significativas
46/fitosanidad

Variabilidad de Mycosphaerella...
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fitosanidad/47

48/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

EFECTOS DE UNA COBERTURA VIVA DE TERAMNUS LABIALIS (L.F.) SPRENGEL SOBRE LAS ARVENSES EN CAMPOS CITRCOLAS
Ivn R. Gutirrez Rojas,1 Mara de los A. Felipe Lpez,2 Rafael Prez Carmenate,3 Dayam Fontes1 y Vernon I. Daniel1 Universidad de Ciego de vila. Carretera a Morn, Km 9, Ciego de vila, Cuba, pfa_ivanr@agronomia.unica.cu 2 Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera Central, Extremo Oeste, Ciego de vila, Cuba 3 Centro de Investigaciones en Bioalimentos de Ciego de vila (CIBA). Carretera a Patria Km 1, Morn, Ciego de vila, Cuba
1

RESUMEN
Los resultados en la dcada del noventa del pasado siglo en Ciego de vila, Cuba, dirigidos al estudio del uso de leguminosas como coberturas vivas en campos citrcolas, determin que se probara la efectividad de la introduccin de la especie Teramnus labialis (L.f.) Sprengel var. semilla oscura como una va para lograr la sostenibilidad de la produccin de naranja Valencia Late (Citrus sinensis L. Osbeck), especialmente en cuanto a la conservacin del suelo y el desarrollo y produccin de la variedad citada, una vez comprobada su utilidad en la mayor parte de los indicadores productivos de esas plantaciones. A partir de estos resultados, en la Cooperativa de Produccin Agropecuaria Jos Mart, en Ceballos, provincia de Ciego de vila, se llev a cabo un experimento para la determinacin de las bondades de esa leguminosa nativa de estos suelos, en cuanto a su empleo para manejar las poblaciones de arvenses. De esta manera se redujo el nivel de diseminacin de todas las especies de arvenses en las reas objeto de estudio, en las que se estableci la leguminosa como cobertura viva, donde Malvastrum coromandelianum (L.), Garke fue la especie que mostr una mayor persistencia ante las interferencias de la cobertura utilizada. Palabras clave: arvenses, leguminosas, Teramnus labialis, coberturas

ABSTRACT
Results about the study of leguminous cover crops in citrus fields obtained during the 90s in Ciego de vila, Cuba, determined to evaluate the effectiveness of introducing the cover crop plant Teramnus labialis (L.f.) Sprengel cv dark seed as a way to obtain a sustainable production of Valencia Late orange ( Citrus sinensis L. Osbeck), basically focused on both soil conservation and the development and improved production of that cultivar. The introduced species demonstrated its usefulness in most of productive indicators of those citrus plantations. From the results obtained, an experiment was carried out in order to determine the feasibility of the use of that native leguminous cover crop to effectively manage weed populations. The experiments were conducted at the Agricultural Production Cooperative Jos Mart in Ceballos in the province of Ciego de vila. It was achieved a decrease in dissemination of every weed species in the areas under the cover crop treatment. Malvastrum coromandelianum was the more persistent species. Key words: weeds, leguminous, Teramnus labialis, cover crop

INTRODUCCIN

venta del pasado siglo el uso de coberturas en los ctricos fue un tema poco estudiado y debatido que, de acuerdo con Ingels (1994), se ha retomado por los investigadores citrcolas. No son muy abundantes las referencias en cuanto a las propuestas sobre el uso de coberturas en frutales y especficamente en ctricos. En Mxico se han llevado a cabo estudios fundamentalmente dirigidos al control de arvenses [Osorio, 2000] o agroecolgicos [Lpez, 1996], as como en Estados Unidos, especialmente en California y Arizona [OConnell, 2000; Mc Closkey y Wright, 2000; Sakovich y Faber, 1996]. En este sentido

A partir de la dcada del cincuenta y hasta la del no-

Zaragoza (1997) plantea que el manejo de arvenses puede lograrse con el establecimiento de una cobertura vegetal, y en este caso especfico puede ser a base de plantas espontneas o introducidas, las que facilitan el paso de la maquinaria con el suelo hmedo, entre otros factores, aunque aclara que la competencia en aos secos o en zonas semiridas puede ser drstica. En muchos pases altamente productores, tal vez las texturas del suelo y las condiciones climticas no se adapten siempre a los criterios tcnicos de algunos especialistas citrcolas que exigen suelo desnudo. El propio Zaragoza (1994, 1997) plantea que el arrope vivo se prefiere para un manejo natural de las lneas o entrecalles, y que generalmente se buscan especies poco competitifitosanidad/49

Gutirrez y otros

vas, con los frutales sembrados a una densidad suficientemente elevada para ahogar o reducir el crecimiento de las arvenses. En Costa Rica, Argel y Villareal (1998) afirman que Arachis pintoi Krap. & Greg. es una leguminosa preferida en plantaciones de caf, ctricos, rboles maderables y otros, y aunque se ha cuestionado en ese pas por posibles infecciones de nemtodos, no hay reportes sobre estudios concluyentes al respecto. En Cuba se han recogido resultados sobre el uso de coberturas vivas de leguminosas en cocoteros [Prez et al., 1996], pltano [Gutirrez et al., 2002a] y ctricos [Gutirrez et al., 2002b]. Resulta necesario realizar serios esfuerzos por dominar las tcnicas de manejo de las arvenses en los cultivos, y especialmente en los ctricos. En cuanto al perodo crtico de interferencia, los daos promedio pueden alcanzar a reducir los rendimientos hasta en 5 t/ha mensualmente cuando se enyerban las reas, lo que provoca afectaciones irreversibles en las plantaciones ms jvenes. Casamayor (1999) inform las especies de arvenses de gran importancia en un gran listado de las ms abundantes en los suelos del pas, y defini como las ms problemticas a Ruellia tuberosa L., Struthantus densiflorus (Benth.) Standl., Panicum maximum Jacq. y Cynodon dactylon (L.), Pers. Esta informacin resulta de extraordinaria importancia para decidir las medidas oportunas que han de tomarse en cuanto a la posible utilizacin de coberturas naturales o mejoradas con leguminosas para procurar la sofocacin de las especies dainas. La principal estrategia en los ctricos para el control de las arvenses siempre ha sido la de utilizar herbicidas de larga residualidad; sin embargo, algunos investigadores dirigen sus esfuerzos hacia la agricultura ecolgica. Tal es el caso de Primavesi (1990), quien recomienda que en el manejo de especies invasoras, cuando no es posible disminuir los espaciamientos, se recurra a las coberturas del suelo, con la sustitucin de las hierbas indiscriminadas por la escogida. As se obtiene un cultivo protector que debe ser un ecotipo adecuado para asegurar la supresin de arvenses nativas. Los tratamientos con herbicidas son los que imperan en la actualidad para el control de arvenses en ctricos, y en general se desestiman las tcnicas agroecolgicas, razones por las que se llev a cabo el siguiente trabajo con el objetivo de comprobar los efectos del uso de una
50/fitosanidad

cobertura de la leguminosa forrajera Teramnus labiales (L.f.) Sprengel var. semilla oscura en el manejo de arvenses en plantaciones de naranjos establecidas en suelos ferralticos rojos en la provincia de Ciego de vila.

MATERIALES Y MTODOS
El experimento se desarroll en una plantacin de naranja valencia (Citrus sinensis L. Osbeck) de 16 aos en produccin, con un marco de plantacin de 8 x 4 m, en un suelo ferraltico rojo (Eutric ferralsol segn FAO), perteneciente a la Cooperativa de Produccin Agropecuaria (CPA) Jos Mart, en Ceballos, Ciego de vila. El trabajo constituy la fase extensiva de anteriores resultados experimentales relacionados con el uso de coberturas vivas de leguminosas y la utilizacin de la especie Teramnus labialis var. semilla oscura, por haber mostrado el mejor comportamiento entre las especies nativas de estos suelos de la zona. Los resultados de las evaluaciones realizadas se compararon con los correspondientes a las mismas calles antes de ser sembradas con la leguminosa, y se utilizaron como tratamiento control del experimento, en su condicin de suelo con cobertura natural inicial. Se definieron tres calles para establecer la cobertura propuesta y cinco plantas en cada calle, para un total de 15 plantas evaluables. Se efectuaron 10 muestreos por calle con marcos de 0,25 m2 despus de determinar el rea mnima de muestreo. Se emple el herbicida glyphosate 15 das antes de la siembra con dosis de 5 L/ha para lograr el establecimiento de las leguminosas. Se utiliz una grada ligera de 540,5 kg, con dos pases por cada calle seleccionada de la plantacin objeto de anlisis. Las especies se sembraron a voleo despus de la escarificacin de la semilla y la inoculacin con las cepas especficas de Bradyrhizobium sp. a una densidad de 2 kg de semilla pura germinable por hectrea (SPG/ha). Se tomaron muestras, y una vez identificadas las especies, se determinaron las frecuencias relativas (Fr), as como las densidades relativas (Dr) de las arvenses en las reas objeto de estudio. El clculo de la frecuencia relativa [Prez y Pedroso, 1987] se realiz basado en las reas en las que cada especie se encontr o era dominante, en relacin con el rea total evaluada respectivamente segn la frmula:

Fr (%) =

a x 100 A

Efectos de una cobertura...

donde: Fr: Frecuencia o frecuencia de dominancia a: rea en la que se present la especie o era dominante A: rea total evaluada La densidad relativa representa la proporcin de individuos de cada especie en relacin con el total de individuos presentes en el rea de muestreo, y fue calculada segn:

RESULTADOS Y DISCUSIN
El desarrollo de las especies de arvenses en sus posibles interferencias se muestra en las Tablas 1 y 2. De acuerdo con Casamayor (1996), si bien los ctricos en desarrollo presentan asociaciones de arvenses entre 100 y 150 especies diferentes, a medida que aumenta la edad disminuye el nmero de especies, y solo unas 50 se presentan de manera sistemtica. Tal razonamiento se ajusta para los resultados, sin embargo, para el citado autor en los campos citrcolas del pas predominan las gramneas seguidas de leguminosas, euphorbiceas, compuestas, convulvolceas y malvceas, por lo que resulta evidente que el empleo de leguminosas conlleva a un mejoramiento de las coberturas naturales, o las sofoca de forma tal que prevalecen las ltimas despus de un proceso de interferencia en el que regularmente pueden persistir algunas especies de la familia Malvaceae.

Dr (%) =
donde:

Nc x 100 N

Dr: Densidad relativa Nc: Nmero de individuos de la especie definida N: Nmero total de individuos de todas las especies

Tabla 1. Cambios en la composicin general en las arvenses de las reas con coberturas mejoradas en la CPA Jos Mart entre 2002 y 2003
Especie Ind/m2 Control (2001) Parthenium hysterophorus L. Malvastrum coromandelianum L. Garcke Ipomea spp. Eleusine indica L. Gaertn. Lepidium virginicum L. Oxalis corniculata L. Euphorbia heterophylla L. Amaranthus dubius Mart. Borreria Laevis (Lam.) Griseb. Ageratum conyzoides L. Emilia sonchifolia (L.) D. C. Commelina erecta L.
Cob: Cobertura de leguminosa.

Fr Control (2001) 90,0 100,0 30,0 70,0 20,0 80,0 30,0 30,0 10,0 10,0 10,0 10,0 Cob. (2002) 0,00 50,00 0,05 0,15 0,00 0,00 0,05 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

Cob. (2002) 0,0 3,4 0,2 0,6 0,0 0,0 0,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

9,2 18,4 2,0 5,2 1,2 20,4 1,2 3,6 0,4 1,2 0,4 4,0

La poblacin de Parthenium hysterophorus se redujo drsticamente tanto en los niveles de diseminacin por las reas (Fr) como en el nmero relativo de individuos de la especie (Dr) (Tabla 1). Esto muestra una elevada sensibilidad a los efectos de la leguminosa establecida. Al respecto debe destacarse que esta especie mostr depresin en reas citrcolas ante una cobertura de la especie tambin forrajera Neonotonia wightii (Am.) Lackey [Gutirrez et al., 2002a]. Similar comportamiento mostr Oxalis corniculata con una sensible disminucin ante la cobertura en todos los indicadores evaluados, tal y como se manifest tambin en los niveles de diseminacin de Euphorbia

heterophilla, especie que, sin embargo, elev discretamente el nmero relativo de individuos como resultado de los muestreos efectuados. Otra de las arvenses que se redujo favorablemente fue Amaranthus dubius, que present 30% en su frecuencia de aparicin, y un ao ms tarde no mostr emergencias en las calles muestreadas. A partir de los elementos expuestos es posible inferir que se manifiesta una disminucin significativa de la aparicin de especies de arvenses en las reas cubiertas con Teramnus labiales, y existe una dominancia en la existencia de especies de la clase magnoliatae, con prefitosanidad/51

Gutirrez y otros

dominio de Malvastrum coromandelianum, la que persisti a los niveles de interferencia de la cubierta vegetal; sin embargo, otras especies que se observaron en las reas son, aunque no formaron parte de las muestras tomadas: Para la cobertura natural. Priva lappulacea (L.) Pers., Solanum nigrum Jacq., Ageratum conyzoides L., Cissus cisyoides L., Emilia sonchifolia (L.) D. C., Rottboellia cochinchinensis Lour. Clayton. Para la cobertura de leguminosas. Paspalum fimbriatum H. B. K., Cissus cisyoides L., Eleusine indica L. Gaertn, Ageratum conyzoides L., Borreria laevis (Lam) Griseb, Brachiaria fasciculata (Sw.) Blake.

Otro de los resultados de significacin es el referido a las especies que muestran persistencia bajo la cobertura de la leguminosa, y que en consecuencia deben ser manejadas por otros medios, de ser imprescindible por efectos negativos relacionados con el desarrollo del cultivo o la influencia que puedan ejercer sobre la aparicin de otras plagas. Malvastrum coromandelianum, Euphorbia heterophilla y Eleusine indica, esta ltima de las poceas, mostraron las mayores proporciones relativas de individuos en las calles, en las que se estableci la leguminosa citada como cobertura viva, tal y como se indica en la Fig. 1.

Figura 1. Especies de arvenses que muestran persistencia a las interferencias de Teramnus labialis.

Sin embargo, a pesar de no haberse obtenido un control total en todas las especies de arvenses, resulta posible afirmar que fue significativa la disminucin de individuos por efecto de la cobertura vegetal del suelo.

REFERENCIA
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CONCLUSIONES
Todas las especies de arvenses redujeron su nivel de diseminacin (Fr) en las reas objeto de estudio en las que se estableci la leguminosa como cobertura viva. Solo 33% de las especies mostraron incrementos en sus densidades relativas. La especie Malvastrum coromandelianum fue la que mostr una mayor persistencia ante las interferencias de la cobertura utilizada. Son favorables los efectos que en general puede ejercer la leguminosa nativa de estos suelos Teramnus labialis sobre la emergencia de las especies de arvenses.
52/fitosanidad

Efectos de una cobertura...

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fitosanidad/53

54/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

Resea

MANEJO CONVENCIONAL Y ALTERNATIVO DE LA SIGATOKA NEGRA EN BANANOS: ESTADO ACTUAL Y PERSPECTIVAS

Luis Prez Vicente Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600, lperezvicente@hotmail.com

RESUMEN
La lucha contra Mycosphaerella fijiensis en bananos y pltanos se ha desarrollado dentro de sistemas de manejo que integran el saneamiento, medidas culturales que tienden a crear condiciones ms desfavorables al desarrollo de la enfermedad y al control qumico. Se revisa el estado del conocimiento de los mecanismos de accin bioqumico de los diferentes grupos de ingredientes activos, su efecto sobre el desarrollo del patgeno y los problemas de emergencia de poblaciones con sensibilidad reducida. Para el control de Mycosphaerella fijiensis se han utilizado fungicidas de contacto como los alquilenbisdithiocarbamatos y el clorotalonil, y sistmicos inhibidores de la mitosis como los benzimidazoles, inhibidores de la biosntesis de ergosterol (principalmente triazoles y morfolinas), inhibidores del transporte de electrones en las mitocondrias QoIs (estrobilurinas y oximino acetatos), inhibidores de la produccin de enzimas en el patgeno (anilinopyrimidinas) e inductores de resistencia (ASM), los que en general se han utilizado en emulsin de aceite y agua o directamente en aceite. El patgeno muestra una alta capacidad de variacin y adaptacin, desarrollo de poblaciones competitivas con las cepas salvajes, con baja sensibilidad a benzimidazoles, triazoles y methoxyacrilatos en diferentes pases. La creciente preocupacin de los consumidores sobre los residuos de agroqumicos en frutos, as como la emergencia de poblaciones con sensibilidad reducida y los costos crecientes de la proteccin contra sigatoka negra, han compulsado a la bsqueda de nuevas alternativas al manejo, entre las que se encuentran el uso de clones con resistencia parcial mediante mejora convencional e ingeniera gentica, el estudio del efecto secundario de agroqumicos para la nutricin, as como el uso de compostaje y lixiviados de humus, los cuales muestran eficacia en diferentes sistemas de produccin para el control de la enfermedad. La lucha biolgica con antagonistas bacterianos no brinda resultados de inters prctico para el manejo de clones susceptibles en el trpico hmedo. Finalmente las alternativas del manejo son distintas para los diferentes escenarios climticos epidemiolgicos y sistemas de produccin. Palabras clave: Mycosphaerella fijiensis, bananos, pltanos

ABSTRACT
The management of Mycosphaerella fijiensis in banana and plantains has been carried out integrating sanitation measures, cultural practices conducing to create unfavorable conditions to disease development and the chemical control. The stage of the current knowledge is reviewed on the biochemical action mechanism of different active ingredient groups, its effects on pathogen development and the problem of emergence of populations with reduced sensibility to them. For Mycosphaerella fijiensis control, contact fungicides as bisdithiocarbamates and chlorotalonil, and systemics inhibidors of mitosis as the benzimidazole, has been used; inhibitors of ergosterol biosntesis (mainly triazole and morpholines); inhibitors of electron transport in the mitocondria QoIs (strobilurines and oximino acetates); inhibitors of production of enzymes in the pathogen (anilinopyrimidines) and inductors of resistance (ASM), which has been in general used in plain oil or as oil in water emulsions. The pathogen shows a high capacity of variation and adaptation and has developed low sensitive competitive populations with the wild type populations to benzimidazole, triazole and methoxyacrilates in different countries. The raising concern of consumers on the agrochemical residues in fruits, as well as the emergence of resistant populations of the fungus and the rising costs of protection against Black Sigatoka has compelled the search of new alternatives of management, among them, the use of cultivars with partial resistance developed by conventional breeding and genetic engineering; the study of secondary effect of fertilizers as well as the use of compost and lixiviates of humus which has been effective in different systems of banana production. Biological control by use of antagonists does not have brought practical results for disease control in susceptible cultivars particularly in the humid tropics. Finally, the alternative of management are different for the different climatic scenario and production systems. Key words: Mycosphaerella fijiensis, bananas, plantains

INTRODUCCIN

Los bananos y pltanos no pueden producirse co-

mercialmente sin control de las manchas de las hojas por Mycosphaerella spp. Mycosphaerella fijiensis Morelet, agente causal de la raya negra o sigatoka negra, es sin duda, uno de los patgenos que mayor impacto econmico, social y ambiental ha tenido en la historia de la agri-

cultura, y particularmente en la produccin mundial de bananos y pltanos. La enfermedad puede reducir entre el 25 y el 90% los rendimientos [Four, 1985; Stover, 1983]. Los costos de manejo de la enfermedad en plantaciones comerciales oscilan usualmente entre 15 y 25% de todos los costos de produccin [Stover, 1980, Prez et al., 2002b].
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El manejo de la enfermedad se basa en la implementacin de medidas culturales drenajes para reducir la humedad interna de la plantacin, una adecuada densidad de plantas, saneamiento de hojas enfermas, nutricin equilibrada para garantizar una rpida salida de hojas y potenciar las defensas naturales de la planta, y un adecuado sistema de cosecha, el uso de clones con resistencia parcial, donde estos son aceptados, y el empleo de agroqumicos y compuestos de origen natural para el control [Prez, 1997; 1998; Romero, 2000]. La implementacin de programas de manejo eficientes requiere disponer adems de tres tipos de informaciones bsicas: 1) climticas: particularmente cantidad y frecuencia de la lluvia y duracin de la humectacin de las hojas, que permite valorar la evolucin epidemiolgica futura [Gauhl, 1990; Prez, 1998; Prez et al., 2000a,b]; 2) biolgicas: velocidad o ritmo de salidas de hojas, hojas ms jvenes con sntomas y manchas necrticas; severidad en la floracin y a las 7-9 semanas de paridas [Stover y Dickson, 1970; Robert et al., 1982]; velocidad de la evolucin de la enfermedad [Four, 1988c]; 3) sensibilidad de las poblaciones a los principales fungicidas utilizados. El manejo qumico de sigatoka negra El uso de fungicidas para la proteccin contra la enfermedad recibe una atencin importante, porque en reas con una adecuada pluviometra para la produccin bananera de clones susceptibles las medidas no qumicas no permiten alcanzar un control satisfactorio de la enfermedad. El 41,6% de los ms de setecientos setenta artculos publicados hasta 1990 en relacin con Mycosphaerella musicola y M. fijiensis se referan al manejo qumico de ambas enfermedades [Barrantes, 1990]. Se han realizado adems revisiones sobre este tpico [Meredith, 1970; Stover, 1972; 1990; Romero, 2000]. El manejo qumico de la sigatoka negra se ha llevado a cabo con el uso de fungicidas protectores y sistmicos en suspensin acuosa, en emulsiones de aceite y agua, o en mezcla directamente con aceite mineral solo, con activadores de mecanismos de resistencia del hospedante, y ltimamente mediante el uso de compuestos relacionados con la nutricin, tanto de origen qumico como naturales, con efecto sobre la fisiologa de la planta y el desarrollo de la enfermedad. Fungicidas protectores. Al no penetrar al interior de los tejidos de las hojas, su actividad sobre el patgeno es principalmente por inhibicin de la germinacin y el
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crecimiento de los tubos de las esporas que se depositan sobre la superficie tratada antes de la penetracin por los estomas, as como la formacin de conidios al contaminar los conidiforos durante el tratamiento de las hojas o mediante la redistribucin del ingrediente activo que ocurre en el agua del roco o la lluvia que se deposita en la lmina foliar. Fungicidas cpricos. Entre 1930 y 1957 Mycosphaerella musicola estuvo sometida a control mediante aspersiones a alto volumen de mezcla bordeleza en muchos pases [Meredith, 1970]. Estas aspersiones se realizaron con la utilizacin de aspersores porttiles, mquinas de aspersin y por sistemas de tuberas permanentes alimentadas por estaciones centrales de bombeo. Se asperjaron volmenes de hasta 2 500 L.ha1 a intervalos de 2-5 semanas, de acuerdo con las condiciones locales. Alquilenbisdithiocarbamatos. Se han utilizado ampliamente Maneb y Mancozeb para el control de las manchas de hojas tipo sigatoka [Guyot y Cuill, 1954a,b; Cuill y Guyot, 1956; Meredith, 1970; Stover, 1972; Prez, 1978a]. En general reaccionan de forma inespecfica con grupos tiol (SH) que causan bloqueo de la respiracin y de otros procesos metablicos donde median protenas con estos grupos [Kaars Sijpesteijn et al., 1977]. En la actualidad existen diferentes formulaciones de mancozeb que permiten realizar tratamientos en emulsiones de aceite y agua, o directamente en aceite, solos o como parte de cocteles con fungicidas sistmicos para reducir la presin de seleccin de poblaciones tolerantes a los fungicidas de alto riesgo de seleccin de poblaciones resistentes en los programas de tratamientos contra sigatoka negra. Se ha utilizado en aspersiones foliares a dosis de 1,5-2,0 kg del ingrediente activo.ha1. Inhiben la germinacin de las esporas del patgeno que entran en contacto con la superficie de la hoja tratada o que se contaminan durante su desarrollo debido a la redistribucin del ingrediente activo por el agua libre disponible en la superficie de las hojas. Derivados de phtalimidas (clorotalonil). El clorotalonil presenta una baja solubilidad en agua. Su mecanismo de accin est relacionado con la reaccin del glutatin, coenzima A, 2-mercaptoetanol y otros compuestos que forman derivados del S [Vincent y Sisler, 1968; Kaars Sijpesteijn et al., 1977]. Por esto, el contenido de SH de la clula se reduce significativamente, lo que resulta en inhibicin de todas las reacciones dependientes de los grupos tiol. El glutatin es un componente importante

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del metabolismo celular y se afecta rpidamente por el clorotalonil, por lo que su accin es inespecfica y multisitio. Existe la formulacin Bravo 500 SC que presenta una fuerte resistencia al lavado por la lluvia y el roco [Washington et al., 1998b], y en aspersiones a intervalos semanales inhibe la germinacin de los conidios y su formacin sobre las manchas [Washington et al., 1998a,b]. La aparicin de poblaciones con sensibilidad reducida a los benzimidazoles y triazoles en los ltimos aos ha determinado un incremento del uso de clorotalonil a dosis de 1-2 kg.ha1, en aspersiones acuosas sin aceite, porque la mezcla con aceite causa daos a las hojas. Se debe tener cuidado con los tratamientos de clorotalonil a hojas que presentan depsitos anteriores de aceite y viceversa. Fungicidas sistmicos. El uso de ingredientes activos que penetran las barreras estructurales naturales de la planta y se incorporan al apoplasto, donde son traslocados hacia los puntos de mayor transpiracin, permiti una mejora importante del control de M. fijiensis debido a una distribucin y proteccin de la superficie tratada de la hoja ms completa, y en proceso de expansin a la posibilidad de acceso a estructuras fngicas que se desarrollan en el interior de los tejidos, y a una mayor resistencia a los factores ambientales. La absorcin y la traslocacin de los ingredientes activos sistmicos, y por tanto sus propiedades fungicidas, dependen en gran medida de su lipofilia y solubilidad en agua. La lipofilia permite la penetracin a nivel de las capas cerosas y la cutcula de la hoja; la traslocacin sistmica est determinada por la solubilidad en agua. Mientras ms alta es la lipofilia ms reducida es la traslocacin en el interior de la planta [Edginton y Petersen, 1977; Edginton, 1981; Pontsen y Wissfeld, 1996]. Como medida de la lipofilia se utiliza el coeficiente de particin octanol/agua (Pow) o el log Pow, el cual muestra una adecuada correlacin con la traslocacin de diferentes fungicidas. La eficacia y la estrategia de uso de los fungicidas sistmicos en los programas de control de sigatoka negra se determina no solo por la actividad txica intrnseca del ingrediente activo sobre el patgeno, sino tambin por las propiedades fsicoqumicas, y por tanto de traslocacin de la molcula en las hojas de la planta. En la Tabla 1 aparecen los valores de log Pow de diferentes fungicidas utilizados en bananos. Entre las principales familias qumicas de fungicidas utilizados en el control de sigatoka negra en bananos se encuentran los benzimidazoles y tiofanatos, aparecidos a principios de

la dcada del setenta del pasado siglo; los triazoles e imidazoles, las morfolinas, utilizados en bananos a mediados de la dcada del ochenta; las estrobilurinas y methoxyacrilatos aparecidas comercialmente en 1998; la spiroketalamina (spiroxamina) y las anilinopyrimidina (pyrimethanil, informado en 1988) con uso a nivel comercial despus del 2000 para el control de sigatoka negra en bananos. Derivados de benzimidazol. Se utilizaron desde inicios de la dcada del setenta en el control de sigatoka negra. En este grupo se incluyen el benomyl, thiabendazol, carbendazim (metil benzimidazol carbamato o MBC) y metil tiofanato, entre otros. Este ltimo no es un benzimidazol hasta que ocurre su metabolizacin en la clula del hongo [Delp, 1995]. El benomyl se ha usado ampliamente a la dosis de 140-150 g.ha1, en emulsin de aceite agua o solo en aceite. Presenta una excelente actividad sistmica y teraputica, y muestra un fuerte efecto sobre la formacin de fructificaciones en las manchas. Todos, en dilucin acuosa, forman por diferentes vas el compuesto MBC o carbendazim (agente fungitxico), que bloquea la formacin de microtbulos, al unirse selectivamente con las -tubulinas fngicas (no as en mamferos), e impiden el acoplamiento de los dmeros de y -tubulinas, y por tanto la mitosis celular [Davidse, 1981]. Las ascosporas de poblaciones sensibles de M. fijiensis descargadas en agar envenenado con concentraciones letales de benzimidazoles presentan inhibicin total de la germinacin o tubos germinativos deformados. Los cambios de un solo aminocido en la -tubulina determina la prdida de sensibilidad al ingrediente activo en diferentes especies de hongos (Tabla 2). Las mutaciones ocurridas en campo han sido restrictas a los codones 198 y 200, las cuales aparentemente no tienen implicaciones en la habilidad competitiva de las lneas [Davidse e Ishii, 1995). Para el monitoreo de los cambios de la sensibilidad de las poblaciones usualmente se determina la germinacin normal o anormal de las esporas en medio de cultivo, con una concentracin umbral de 5-10 g.mL1 de benomyl. Segn recomendaciones del Fungicide Resistance Action Committee (FRAC) del Banana Working Group, se deben considerar resistentes las poblaciones que tienen >10% de germinacin normal a 10 g.mL1. Se ha desarrollado una tcnica para el diagnstico de la resistencia al carbendazim mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) [Martin et al., 1992]. Caas et al. (2004) amplificaron un fragmento de 527pb de cepas de M. fijiensis resistentes al
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benomyl, con los cebadores Resistencia 1 reverse y Diagnstico forward, que muestran un cambio en el codn 198 de una citosina por una adenina, lo cual se corresponde con un cambio de un cido glutmico por una alanina a nivel del de la -tubulina, as como un fragmento de 635 pb de

cepas sensibles con los cebadores Sensible 2 forward y B2Ali. Estos dos cebadores permiten diferenciar de forma confiable, mediante una PCR, las cepas del patgeno resistentes y sensibles al benomyl, por medio de la utilizacin de la enzima Bsh12361 (FunDII; MBI Fermentas).

Tabla 1. Valores de los coeficientes de particin octanol/ agua (como log Pow) de diferentes ingredientes activos sistmicos utilizados en el control de M. fijiensis en bananos y pltanos (valores de log Pow tomados de Tomlin (2003))

Fungicidas estudiados para control de Mycosphaerella spp. en banano

Benomyl Carbendazim Tiofanato metilo Azoxystrobin Spiroketalamina Pyrimethanil Cyproconazol Tetraconazol Triadimefon Fenbuconazol Triadimenol Epoxyconazol Tebuconazol Propiconazol Flusilazol Imazalil Hexaconazol Pyraclostrobin Bitertanol Tridemorph Difenoconazol Trifloxystrobin Log Pow 1,4 1,5 1,5 2,5 2,8 2,8 2,9 3,1 3,1 3,2 3,3 3,4 3,7 3,7 3,7 3,8 3,9 3,9 4,1 4,2 4,3 4,5 Alta

Baja

La prdida de sensibilidad es un proceso gobernado por un solo par de genes, y los riesgos de seleccin de poblaciones tolerantes competitivas con las poblaciones salvajes son elevados [Wolfe, 1981, Georgopoulos, 1985]. La seleccin de poblaciones de M. musicola y M. fijiensis con resistencia a benzimidazoles (seleccin disruptiva) ha sido ampliamente informada en casi todas las reas productoras de bananos y pltanos [Stover, 1977; Prez et al., 1985; Jimnez y Rodrguez, 1985; Romero y Sutton, 1998; Marn et al., 2003]. Las poblaciones de M. musicola y M. fijiensis resistentes al benomyl son frecuentemente insensibles a altas dosis del ingrediente activo y competitivas con las poblaciones salvajes. Puede presentarse una alta frecuencia de individuos resistentes en la poblacin aun despus de no utilizar el ingrediente activo por muchos aos [Prez, indito; Marn et al., 2003].
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En la actualidad el FRAC recomienda para las reas en que an puede utilizarse no realizar ms de tres tratamientos por ao [Kuck et al., 2004]. Inhibidores de la sntesis de ergosterol (EBI). Los EBI son de dos tipos: 1) inhibidores de C14 a-demetilasa o DMI [Sisler et al., 1984; Kller y Scheinflug, 1987; Sisler, 1996]. En bananos y pltanos se utilizan esencialmente triazoles e imidazoles; 2) aminas cclicas (inhibidores de D8-D7 isomerasa, C 14 reductasa y escualeno epoxidasa). En bananos y pltanos se utilizan morfolinas y spiroketalaminas. Inhibidores de demetilasa (DMI). Los DMI utilizados para el control de Mycosphaerella spp. en Musa spp. son esencialmente triazoles. El primero y ms ampliamente utilizado de los triazoles es el propiconazol, que se introdujo en Cuba para el control de sigatoka en

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1982 [Prez et al., 1983] debido a los frecuentes problemas de resistencia al benomyl y comercializado para su uso en bananos en Amrica Central a partir de 1987 [Carlier et al., 2000]. Al inicio de su uso (a 100 g.ha1 tanto en aceite como en emulsiones de aceite y agua) mostr una alta eficacia y una reduccin apreciable del nmero de tratamientos requeridos para obtener elevados niveles de control de la enfermedad, una significativa reduccin del tamao de las manchas en las hojas tratadas y de la frecuencia e intensidad de la formacin de fructificaciones [Prez et. al., 1983; Prez y Mauri, 1994]. Otros triazoles utilizados son el flusilazol, fenbuconazol, tebuconazol, hexaconazol (utilizados a 100 g.ha1, bitertanol a 150 g.ha1), epoxiconazol, difenoconazol y cyproconazol (80 g.ha1), que muestran diferencias de eficacia entre s y del nivel de la traslocacin sistmica en las hojas, demostrada por los diferentes patrones de daos de la enfermedad [Four, 1983; 1988a, 1988c, 1988d, 1990; Prez et al., 1993a; Prez, 1998]. Los de mayor actividad sistmica se mueven rpidamente hacia el borde de las hojas, as permiten dosis subletales alrededor del nervio central de la hoja y la aparicin de un patrn tpico de lesiones a ambos lados. El fenbuconazol y el hexaconazol presentan una menor traslocacin en las hojas que el propiconazol y el cypendazol, mientras el bitertanol y el difenoconazol son esencialmente translaminares y no se observan estos patrones de daos alrededor de la nervadura central. Todos inhiben la sntesis de novo de ergosterol en la clulas fungosas al bloquear la citocromo P450 esterol C14 demetilasa [Sisler et al., 1984; Kller y Scheinflug, 1987; Sisler, 1996]. Las esporas depositadas en un medio envenenado con propiconazol u otro IBE germinan y se desarrollan a partir del ergosterol constitutivo hasta su agotamiento. En una poblacin de M. fijiensis se pueden encontrar diferentes niveles de inhibicin del crecimiento de los tubos germinativos de ascsporas y conidios a una concentracin dada del fungicida; por lo tanto, la determinacin de la prdida de sensibilidad es ms complicada en los IBE que en el caso de los benzimidazoles. En la Fig. 1A se observa la distribucin de frecuencias del crecimiento de los tubos germinativos de ascsporas de M. fijiensis en PDA envenenado con 0,01 g.mL1 de propiconazol. En ella se aprecian las diferencias de sensibilidad de las esporas en una poblacin del patgeno. En la Fig. 1B se muestran las distribuciones de frecuencias de la inhibicin del crecimiento de los tubos germinativos de dos fincas, una no tratada y otra tratada con triazoles en un medio envenenado con 0,01 g.mL1 de tebuconazol,

donde se pueden ver las diferencias de la sensibilidad de las poblaciones de M. fijiensis de ambas [Prez y Battle, 1993b; Prez et al., 2000c, 2003]. En la finca tratada las mayores frecuencias de esporas se encuentran entre los valores ms bajos de inhibicin. Se han sugerido diferentes mecanismos de resistencia para los DMI [Buchenauer, 1995; Sisler, 1996]: prdida de afinidad en el citocromo P45014DM, defectos en el citocromo P45014DM, detoxificacin, sobreproduccin del citocromo P450, falta de activacin, la expulsin activa del ingrediente activo de la clula, protonacin, circunvencin al sitio de accin, tolerancia a esteroles txicos, entre otros. La evidencia fragmentaria de muchos estudios ha permitido establecer, por tanto, que operan diferentes mecanismos de resistencia, y que en general el proceso de prdida de sensibilidad a los DMI es polignico [Van Tuyl, 1977; Kalamarakis et al., 1991], por lo que ocurre gradualmente y bajo un proceso de seleccin direccional [Wolfe, 1981; Georgopoulos, 1985]. Los cambios resultantes de la resistencia polignica son menos factibles de conducir a prdidas totales de control, y el gran nmero de mutaciones requeridas para una alta resistencia conducen a una alta probabilidad de que los individuos resultantes presenten una capacidad competitiva reducida [Buchenauer, 1995; Sisler, 1996]. La aparicin de poblaciones tolerantes de M. fijiensis a benzimidazoles estableci una mayor dependencia en el uso de triazoles, y por tanto en el nmero de ciclos por ao en la mayora de las reas de cultivo. Esto determin cambios graduales en la composicin de las poblaciones y la aparicin de fenotipos del patgeno con diferentes niveles de sensibilidad. Los primeros sntomas en Cuba de la prdida de sensibilidad al propiconazol fue la prdida del efecto depresivo inmediato de los tratamientos sobre la velocidad de evolucin de la enfermedad y de la reduccin del tamao de las lesiones junto a su inhibicin de la formacin de fructificaciones del patgeno. En los tratamientos con aviso bioclimtico, la duracin del perodo entre dos ciclos se acort de 21-24 das hasta 14-12 das [Prez et al., 2000c]. El monitoreo de la sensibilidad se desarrolla por la determinacin de los cambios en el tiempo de las frecuencias de ascsporas, obtenidas de muestras de hojas de fincas tratadas y no tratadas, con diferentes niveles de inhibicin del crecimiento de los tubos germinativos, en PDA envenenado con concentraciones de 0; 0,001; 0,01; 0,1 y 1 g.mL1y de las DE50 de las poblaciones [FRAC, 1996]. Todos los DMI presentan resistencia cruzada entre ellos [Chin et al., 1996], aunque los factores de resistencia entre estos sean muy
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variables [Kller y Wubben, 1989]. La presencia de prdida de sensibilidad a los triazoles se ha evidenciado a nivel mundial [Marn et al., 2003]. Una variacin significativa ocurri en Costa Rica, Panam y el norte de Guatemala [Kuck et al., 2004], principalmente en fincas situadas en zonas de muy alta pluviometra, donde se requieren ms ciclos [Guzmn et al., 2004]. En el resto de reas de Centroamrica, Mxico, Colombia,

Ecuador Camern y Filipinas han ocurrido prdida de sensibilidad ms leves. La integracin del uso de los triazoles en mezclas con tridemorph y mancozeb, y el uso de altas dosis de aceite junto a la adopcin de medidas estrictas de saneamiento y drenaje de los campos, ha permitido que los triazoles se mantengan como la principal herramienta de control [Marn et al., 2003; Guzmn et al., 2004].

Tabla 2. Sustituciones de aminocidos en -tubulinas de mutantes de laboratorio y aislados de campo con resistencia a benzimidazoles segn revisin de Davidse y Ichii (30) modificada
Codn 6 50 134 165 167 198 Sustitucin His por Leu His por Tir Tir por Asn Tir por Ser Gln por Lis Ala por Val Fen por Tir Glu por Ala Glu por Asp Glu por Gln Glu por Gly Glu por Lis Glu por Val Cit por Ade 200 241 257 Ala por Tir Arg por His Met por Leu A. nidulans (a)1 Organismo A. nidulans (a) y S. nodorum (b) A. nidulans (c) A. nidulans (c) A. nidulans (c) A. nidulans (d) N. crassa (e) B. cinerea (f, g), N. crassa (b); P. aurantiogriseum (i); P. expansum (c); P. puberulum (i); V. inaequalis (c) A. nidulans (a) A. nidulans (a) N. crassa (b); R. secalis (i); V. inaequalis (i) A. nidulans (a); B. cinerea (g); M. fructicola (i); P. digitatum (c); P. italicum (c); R. secalis (i) P. expansum (c) M. fijiensis2 B. cinerea (g); P. aurantiogriseum (i); P. italicum (i) S. saccharomyces (j) A. nidulans (c)

Datos citados por Davidse y Ichii, (1995) tomados de: 1a) Jung et al., 1992; b) Cooley y Caten, 1993; c) Koenraadt et al., 1992; d) Jung and Oakley, 1990; e) Orbach et al., 1986; f) Martin et al., 1992; g) Yarden y Katan, 1993; h) Fujimura et al., 1992; i) Wheeler et al., 1994; j) Thomas et al., 1985; 2: Caas et al., 2004.

Figura 1. Frecuencias de inhibicin del crecimiento de los tubos germinativos de ascsporas de M. fijiensis. A) De una finca tratada con poblaciones de M. fijiensis sensibles en medios envenenados con diferentes concentraciones de propiconazol; B) de dos fincas, una no tratada nunca y otra tratada en un medio envenenado con 1 g/mL1 de tebuconazol. 60/fitosanidad

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Aminas cclicas. En bananos y pltanos se utilizan morfolinas y spiroketalaminas. Morfolinas. En control de sigatoka negra se ha utilizado esencialmente el tridemorph (450 g.ha 1 ) en emulsiones de aceite y agua y en aceite solo. La duracin de su eficacia para el control de la enfermedad es ms corta que la de los benzimidazoles y triazoles contra poblaciones sensibles a estos ingredientes activos, en tratamientos mediante aviso bioclimtico; muestra excelente eficacia en tratamientos mezclados con triazoles al 75% de las dosis de ambos ingredientes activos [Prez, 1993a]. El tridemorph inhibe la 8-7 isomerasa y la C14 reductasa [Leroux y Gredt, 1983; Kerkenaar, 1995] en la ruta metablica de la sntesis de ergosterol presenta un riesgo reducido de seleccin de poblaciones resistentes, por lo que afecta seriamente la funcionabilidad de las membranas celulares fngicas. Su traslocacin es limitada en musceas y es esencialmente translaminar [Cronshaw y Akers, 1990]. Con ms de veinticinco aos de uso en cereales no hay casos establecidos de seleccin de poblaciones resistentes [Hollomon, 1994]. Tampoco hay casos documentados de poblaciones resistentes a este ingrediente activo en bananeras de exportacin. Es un importante componente en las estrategias antirresistencia a benzimidazoles, DMI y QoI. Las recomendaciones de FRAC [Kuck et al., 2004] establecen no realizar ms de doce tratamientos por ao de morfolinas, ya sean solas o en mezclas. En Cuba se han estudiado adems el fenpropimorph y el aldimorph, los que mostraron una eficacia comparable al tridemorph. Spiroketalaminas. La spiroxamina, descubierta en 1987 e informada por primera vez en 1996 [Dutzmann et al., 1996], despus del 2000 se comercializa para el control de sigatoka negra en bananos en Centroamrica. La absorcin por las hojas es rpida y su traslocacin acropetal sistmica, y por tanto presenta una buena distribucin en las hojas [Tomlin, 2002]. Su eficacia a la dosis de 240 g.ha1 es similar a la del tridemorph [Arias et al., 2002]. La spiroxamina inhibe de forma principal la C14 reductasa adems de la 8-7 isomerasa y la escualeno epoxidasa [Tiemann et al., 1997], por lo que el riesgo de seleccin de poblaciones resistentes es muy reducido. El FRAC tiene establecida una recomendacin de uso para el control de sigatoka negra similar a la del tridemorph [Kuck et al., 2004]. Inhibidores del transporte de electrones en el sitio QoI. Los compuestos ms utilizados en bananos en

emulsiones de aceite y agua son el azoxystrobin [Godwin et al., 1992] usado a la dosis de 100 g.ha1 e introducido comercialmente en 1996, y el trifloxystrobin [Margot et al., 1998], usado a dosis de 75 g.ha1 [Prez et al., 2000c y 2002a), los que muestran una excelente eficacia en el control de sigatoka negra. Se introdujo para el control de sigatoka en Centroamrica en el 2002 el pyraclostrobin [Ammermann et al., 2000], que ha mostrado una eficacia similar a la del azoxystrobin a la dosis de 100 g.ha1 [Faras-Larios y Orozco-Santos, 2002], y el picoxystrobin a la de 250 g.ha1 [Godwin et al., 2000]. Los derivados de estrobilurinas mantienen su mejor eficacia en tratamientos tempranos previos a la infeccin. Inhiben la germinacin de las esporas y el crecimiento de las hifas, y presentan por dems una buena eficacia sobre la formacin de fructificaciones en las manchas tratadas. Al introducir el azoxystrobin se recomendaron entre seis y ocho tratamientos por ao. Poco tiempo despus de su entrada al mercado se informaron los primeros casos de resistencia de M. fijiensis en bananos [Wirtz y Chin, 2000; Chin et al.; 2001]. En la actualidad se han documentado casos de resistencia del patgeno a este grupo de fungicidas en varios pases exportadores [Guzmn et al., 2004]. El modo de accin se basa en el bloqueo de la transferencia de electrones a nivel del sitio o centro externo del citocromo bc1 de la membrana externa de las mitocondrias, se inhibe la respiracin y por tanto la sntesis de ATP [Sauter et al., 1999]. Aunque se han reconocido once posibles puntos de mutaciones en dos regiones del citocromo b [Geier et al., 1992, 1993], en la mayora de los casos de prdida de sensibilidad de fitopatgenos fungosos a los QoI, esta se ha determinado por una mutacin puntual en el gen cyt b del gen mitocondrial que da lugar a un cambio de una glicina a una alanina en posicin 143 (G143A) en el citocromo bc1 en la mitocondria [Sierotsky et al. 2000a,b; Heaney et al., 2000], la que se ha encontrado en poblaciones de M. fijiensis resistentes a azoxystrobin y trifloxystrobin, y se asocia a factores de resistencia tpicamente altos (FR >100) en las poblaciones [Gisi et al., 2000; Chin et al., 2001]. Se ha planteado que esta mutacin no afecta la eficiencia de la enzima, por lo cual no establece una penalidad sobre la compatibilidad de los mutantes, como se ha comprobado en Blumeria graminis s.sp. tritici [Gisi et al., 2002], aunque esto requiere comprobacin en otros patgenos. Otro punto de mutacin en el citocromo b es la sustitucin de una fenilalanina con leucina en la posicin
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129 (F129L), que en contraste confiere una resistencia ms moderada con un FR entre 10-50 [Kuck y Mehl, 2003]. Aunque esta mutacin no se ha confirmado en M. fijiensis, la falta de correspondencia entre los resultados de ensayos de sensibilidad de laboratorio y de la frecuencia de la mutacin G143A en las poblaciones pudiera estar condicionada por la presencia de esta mutacin. La enzima oxidasa alternativa (AOX) permite la circunvencin de los complejos III y IV y la aceptacin de electrones directamente de la ubiquinona, mientras que la dehidrogenasa alternativa permite oxidar tanto el NADH mitocondrial como citoplasmtico sin involucracin del complejo I de la cadena del transporte de electrones en las mitocondrias [Word y Hollomon, 2003]. De esta forma, existen tres posibles sistemas de transporte de electrones del NADH exgeno al oxgeno en las mitocondrias: 1) la ruta de los citocromos, la cual es sensible a los QoI (methoxyacrilatos y otros) y a los QiI (Antimycin A); 2) el sistema de la NADHcitocromo C reductasa con circunvencin de la inhibicin de los metoxyacrilatos en el complejo bc1; 3) la oxidasa alternativa, que es funcional solo en mitocondrias aisladas de mutantes resistentes a azoxystrobin y que es inhibida por el cido salicilhidroxmico [Ziogas et al.,1997]. Por este motivo es importante incluir en el medio para el monitoreo de la sensibilidad a QoI 100 g.mL1 de SHAM para inhibir la oxidasa alternativa, la cual distorsiona los resultados de los tests de monitoreo de sensibilidad. Por cuanto la resistencia est controlada por genes mitocondriales, su herencia se asume que es no mendeliana [Gisi et al., 2002]. Anilinopyrimidinas (pyrimethanil). El pyrimethanil [Neumann et al., 1992] es un fungicida de ms reciente introduccin en los programas de control de sigatoka negra. Este ingrediente activo inhibe la extensin de los tubos germinativos y la biosntesis de metionina al inhibir la cistationa-liasa, y por tanto la sntesis de protenas [Pontzen, 1997], y da lugar a la inhibicin de la secrecin de cutinasas, pectinasas y celulasas, enzimas necesarias para la degradacin de la pared celular del hospedante y para la infeccin [Milling et al., 1993, Milling y Daniels, 1996]. Presenta actividad sistmica con una buena absorcin dentro de la hoja y retencin en la cera, lo que previene su arrastre por la lluvia. Su distribucin es eminentemente translaminar. Se utiliza a razn de 250-300 g/ha1 en tratamientos en aceite mineral, y su actividad es comparable a la del tridemorph [Gonzlez et al., 2000; Orozco-Santos et al., 2004].
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Un estudio realizado con 469 aislamientos de Venturia inaequalis mostr que la sensibilidad de las poblaciones al pyrimethanil y al myclobutanil (DMI perteneciente al grupo de las pyrimidinas) estuvieron significativamente correlacionadas, y se sugiri que uno de los mltiples genes que condicionan la resistencia a los DMI pudieran tambin condicionar la resistencia a las anilinopyrimidinas [Kller et al., 2004]. Se recomienda realizar el monitoreo de la sensibilidad de las poblaciones mediante la medicin del crecimiento de los tubos germinativos de las ascsporas en 0; 1; 10,0; 30,0; 100,0 g.mL1 [Duvert et al., 2002]. Inductores de reacciones de resistencia sistmica adquirida. Las plantas pueden inducirse localmente o sistmicamente a hacerse ms resistentes a las enfermedades mediante varios estreses biticos o abiticos (resistencia sistmica adquirida (SAR)). A travs de una red de seales, inducen un espectro de protenas vinculadas a la resistencia ( -1,3 glucanasas y quitinasas, protenas ricas en cistena relacionadas a la taumatina) caractersticas de diferentes especies de plantas y sistemas de activacin y por su dependencia del cido saliclico [AS; Gaffney et al., 1993; Delaney et al., 1994; Kessman et al., 1994a,b; Kessman et al., 1996; Friedrich et al., 1996; Oostendorp et al., 2001]. El nivel del AS endgeno se ha correlacionado estrechamente con la induccin de protenas PR y a una catalasa que se une al AS, la cual potencia la generacin de H2O2 [Chen y Klessig, 1991; Chen et al., 1993; 1994; Lawton et al., 1996]. Se ha informado de la presencia de otra protena de enlace con el AS con una afinidad ciento cincuenta veces mayor que entre el SA y la catalasa, y de mayor nivel de produccin de radicales superxido [Du y Klessig, 1997]. Diferentes ingredientes activos mostraron inducir SAR, pero el ms estudiado y conocido es el acybenzolar-S-methyl (ASM) [Grlach et al., 1996], el cual se trasloca sistmicamente en las plantas y que puede tomar el lugar del cido saliclico en la ruta metablica natural del SAR, e inducir el mismo espectro de resistencia y los mismos marcadores moleculares. Su actividad en la induccin de SAR se ha relacionado a la capacidad de unirse a la protena para generar H2O2. Est demostrada la eficacia del ASM en el control de sigatoka negra y nemtodos en bananos [Madrigal y Ruess, 1998; Madrigal y Corrales, 2000] a dosis de 40 g.ha1 en mezclas con otros fungicidas en tratamientos a intervalos entre 35 y 40 das utilizando dosis mnimas de aceite mineral. El ASM supera la eficacia de los fungicidas mejorando su nivel de control y/

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o extendiendo el intervalo entre tratamientos. En ensayos realizados en Costa Rica, Corrales et al. (2002) informaron una reduccin de 46% de consumo de aceite mineral, de seis ciclos menos de fungicidas y de dos aplicaciones de nematicidas en un perodo de un ao en las reas tratadas con cuatro ciclos de ASM + fungicidas que en las tratadas con fungicidas en la forma convencional. Las manchas en las hojas tratadas con ASM adquieren un aspecto distintivo, pierden sus mrgenes bien delimitados y reducen marcadamente la velocidad de evolucin, su tamao y la formacin de fructificaciones [Prez, 2000b]. Aceites y su uso en el control de Mycospherella spp. en bananos y pltanos. Los aceites como fungicidas pueden ser clasificados de acuerdo con su origen: del petrleo se derivan los aceites minerales constituidos por mezclas complejas o hidrocarburos; de las plantas y animales se derivan cidos grasos constituidos por triglicridos de cidos grasos; de las plantas tambin se derivan los aceites esenciales voltiles y odorferos constituidos por mezclas de terpenoides, aldehdos o steres. Los aceites minerales han sido ampliamente empleados para el manejo de manchas de las hojas por Mycosphaerella spp. en bananos, y se encuentran en estudio los aceites de cidos grasos derivados de plantas, particularmente de palma aceitera ( Elaeis guiinensis J.). Los aceites tienen un triple papel en los tratamientos en bananos para el control de manchas por Mycosphaerella spp.: 1) permiten reducir los volmenes de aplicacin al poderse producir una nube de aspersin compuesta de pequeas gotas sin que se volatilicen, y que garantiza una adecuada distribucin o reparticin del fungicida sobre la hoja; 2) limitan el lavado de los fungicidas por la lluvia que permite una mejor penetracin de los fungicidas sistmicos en las hojas; 3) inhiben los procesos de desarrollo del patgeno y de la evolucin de la enfermedad, en tratamientos en las primeras fases del desarrollo de las lesiones. Aceites minerales. Investigadores franceses introdujeron la utilizacin de aceites minerales (AM) para el control de sigatoka a principios de la dcada del cincuenta [Guyot, 1953; Guyot y Cuill, 1954a,b, 1955 y 1956], as como la tecnologa de su uso a bajo volumen en tratamientos areos [Cuill y Guyot, 1954, 1956 y 1957]. Estos estudios brindaron las bases para los mtodos de control actuales en la mayora de las plantaciones bananeras del mundo.

Los AM pueden ser definidos en funcin de su composicin qumica y su peso molecular, el contenido de residuos no sulfonados, la viscosidad y el rango de destilacin. Composicin qumica y peso molecular (nmero de tomos de carbono). Los AM pueden ser de estructura parafnica, naftnica, olefnicas y aromtica [Calpouzos et al., 1961; Calpouzos y Colberg, 1964]. Los olefnicos y aromticos contienen grupos no saturados con dobles enlaces entre dos carbonos, mientras que los parafnicos y naftnicos tienen todos sus carbonos saturados y no presentan doble enlaces. Los aceites parafnicos tienen la mayor actividad como pesticidas, y es deseable que su contenido sea alto (> 60%) en los aceites de uso agrcola con este fin. La presencia de enlaces no saturados dobles en los aromticos los hace ms qumicamente reactivos y presentan una mayor fitotoxicidad y riesgo a la salud humana [Jacques y Kuhlmann, 1999]. La eficacia est relacionada con el tamao de la molcula de parafina, y es ptima cuando se acerca a 23 tomos de C. El riesgo de fitotoxicidad aguda se incrementa cuando el nmero de C es menor de 18 [Madsen y William, 1967]. La fitotoxicidad crnica se incrementa con el aumento del peso molecular, especialmente por encima de 25 tomos de C. Residuos no sulfonados (RNS). El residuo no sulfonado es el volumen porcentual del aceite que no reacciona con cido sulfrico 37 N. Los grupos no saturados o los dobles enlaces de C en las molculas aromticas reaccionarn o se volvern sulfonados en presencia de cido sulfrico 37 N. Los aromticos se consumen segn avanza la sulfonacin. El nivel de compuestos no saturados en un aceite tiene un significativo efecto en su potencial de dao agudo a las hojas. La fitotoxicidad de un aceite aumenta en la misma medida en que disminuyen los residuos no sulfonados por debajo del 90%. Debido a la precisin y reproducibilidad de los sistemas de anlisis (ASTM D 483) se ha fijado un nivel mnimo del 92% para los aceites de uso en proteccin de plantas [Calpouzos y Colberg, 1964; Calpouzos et al., 1961; Walker, 1972]. Volatilidad. La volatilidad est considerada tambin como una caracterstica importante que ha de tenerse en cuenta en relacin con la calidad de los aceites minerales para el control de sigatoka [Calpouzos et al., 1959; Delfel et al., 1962; Calpouzos, 1968; Walker, 1972]. La volatilidad del aceite determina la cantidad que queda
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en la hoja posterior al tratamiento, y por tanto tiene influencia sobre el control y la fitotoxicidad [Riedhart, 1961]. A medida que su volatilidad es menor mejora el control y son mayores los riesgos de fitotoxicidad. Lo ms deseable es disponer de un aceite con un balance ptimo de sus parmetros principales. En la Tabla 3 se reproducen las caractersticas de varios aceites minerales [Jacqques y Kauffman, 1999]. El efecto biolgico de los AM y su papel en el control se ha estudiado ampliamente [Brun, 1958; Calpouzos et al., 1959; Klein, 1961; Calpouzos, 1968; Stover y Dickson, 1968; Prez 1978a,b; Prez et al., 1981]. Los AM se utilizan a dosis entre 5 y 15 L.ha1. Su dosis de empleo depende de la severidad de la infeccin, de la epidemiologa de la enfermedad y de la sensibilidad de las poblaciones de Mycosphaerella spp. a los fungicidas en uso, as como de las condiciones ambientales predominantes cuando se realizan los tratamientos. A dosis de 5 L/ha1 e inferiores acta fundamentalmente como

vehculo para permitir obtener gotas finas, bajos volmenes de aplicacin y mejorar la penetracin de algunos ingredientes sistmicos. En el caso de los tratamientos a dosis mayores de 10 L.ha1 inhiben adems la germinacin, el crecimiento de los tubos germinativos y formacin de apresorios, la penetracin y, sobre todo, la evolucin de los estados de sntomas primarios de rayas a manchas. Brun (1958) inform de la inhibicin de la germinacin de conidios de M. musicola y de la evolucin de los sntomas en funcin de su estado al realizar el tratamiento de AM, propiedad en la que se bas Klein (1960) para desarrollar un sistema de tratamientos contra sigatoka basado en conteos de rayas en hojas. En Cuba Prez et al. (1981) encontraron en tres ensayos repetidos en diferentes momentos del ao una inhibicin altamente significativa de la germinacin de los conidios y la penetracin de los tubos germinativos por los estomas en hojas tratadas con aceite con 10 y 15 L.ha1, as como una inhibicin marcada de la evolucin de los sntomas de rayas 1 y 2 a manchas.

Tabla 3. Caractersticas fsico-qumicas de diferentes aceites minerales

Parmetro RNS (%) Parafinas (%) Naftnicos (%) Destilacin (C) 50% (punto medio) 90-10% (rango) Nmero de carbono % < C18 (riesgo fitox. aguda) % < C20 (menor eficacia) % < C20-C26 (zona ptima) % < C26 (riesgo de fitox. crnica) % < C28 (mayor riesgo de fitox. crnica) Orchex 796 95,4 67,5 29,8 227,3 36,7 2 9 77 14 3 Prorex 38 90 65,3 29,6 216,3 79,1 5 22 54 24 15 Banole HV 97 75,5 21,1 216,3 47,8 10 22 70 8 3 Spraytex M 93,8 60,6 36,4 225,7 43,8 3 14 64 22 10

Prez et al. (1993c) informaron de la eficacia de los tratamientos con fungicidas sistmicos en mezcla con aceite mineral de 10-12 L.ha1 en el control de sigatoka negra al utilizar tratamientos por pronstico bioclimtico (preaviso). La eficacia de los tratamientos sobre la evolucin de los sntomas de la enfermedad mejor significativamente al usar ms aceite a razn de 10 L.ha1. Guzmn y Romero (1996) encontraron una relacin lineal entre la dosis de AM utilizado y la severidad del ataque de sigatoka negra en campo. Segn aument la dosis de 5 a 10 y 15 L.ha1, disminuy el rea foliar afectada significativamente; observaron perodos de incubacin ms largos y menor severidad de los ata64/fitosanidad

ques en plantas tratadas con 10 L de aceite que las no tratadas, y que las tratadas con clorotalonil a 1,44 kg.ha1. La fitotoxicidad producida por los tratamientos con AM puede ser aguda o crnica. La aguda se manifiesta primeramente como pequeas pecas de color claro que inmediatamente se tornan de violceas a oscuras, producen quemaduras necrticas y se deben principalmente a la calidad del aceite, a la acumulacin de depsitos excesivos. La crnica se manifiesta por la aparicin de pequeas lesiones, primeramente acuosas, que ms tarde tornan la hoja de color bronceado, y se debe a la acumulacin en tratamientos sucesivos que reduce el rendimiento debido a la interferencia con el intercambio

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de gases y la fotosntesis [Riedhart, 1961; Israeli et al., 1993]. La aparicin de este tipo de fitotoxicidad depende en buena medida de la calidad del aceite y del nmero de tratamientos que se realicen y la predisposicin de la planta por presencia de estrs hdrico y de temperatura. Con los aceites utilizados en Cuba los sntomas fitotxicos caractersticos se hacen evidentes en plantas que han recibido alrededor de 70 L de aceite aplicados en la estacin. Las plantas son adems ms susceptibles a mostrar sntomas cuando hay estrs hdrico y de temperatura, como el que ocurre a la salida de la estacin ms lluviosa y hmeda, y el inicio de la seca y ms fra. En Costa Rica, Romero y Marn en 1993 [citados por Guzmn y Romero, 1996] encontraron un aumento de la fitotoxicidad cuando la dosis de aceite alcanz los 330 L.ha1, que se reflej en una disminucin del 5% del peso del racimo. Aceites de palma aceitera . El aceite de palma se obtiene del mesocarpo del fruto de la palma de aceite Eleasis guineensis [Rutengwe, 2004; Choo, 2004]. El rea mundial cosechada de aceite de palma en el 2004 fue de 12 115 000 ha, y la produccin mundial fue de alrededor de 162 000 000 t, de los cuales Malasia (43,6%) e Indonesia (37,2%) fueron los mayores productores. Centroamrica y Colombia producen cada uno 3 100 000 t [FAOSTAT data, 2005]. El aceite de palma muestra utilidad en el manejo de plagas insectiles, como emulsificantes y coadyuvantes. En tratamientos a dosis entre 9 y 12 L.ha1 fue efectivo para el manejo de sigatoka negra tanto en mezcla con fungicidas en sustitucin del aceite mineral como solo. No se conocen antecedentes de fitotoxicidad hasta la dosis de 12 L.ha1. Se informa la inhibicin de la germinacin y de la esporulacin en las manchas. Estas caractersticas lo hacen una alternativa natural adaptable en el manejo de sigatoka negra en la produccin orgnica y como remplazo del aceite agrcola. Vas alternativas al uso de fungicidas qumicos. A pesar de que el control qumico sigue siendo la va ms comnmente utilizada para el control de sigatoka negra, los costos crecientes de las nuevas tecnologas para la proteccin, la cada vez ms frecuente aparicin de poblaciones del patgeno con sensibilidad reducida a los ingredientes activos en uso, y la casi universal preocupacin por el contenido de residuos qumicos en la fruta, ha establecido una creciente presin por encontrar vas alternativas al control qumico. Estas son en ge-

neral solo factibles de uso en esquemas de manejo integrado de la enfermedad para reducir la presin del mal, ya sea junto al uso de los diferentes grupos de ingredientes activos en la produccin convencional de bananos o solas en esquemas de produccin orgnica. Uso de clones resistentes a la enfermedad. El uso de clones resistentes es el mtodo ms econmico y ambientalmente seguro de manejo de sigatoka negra, y prcticamente el nico mtodo de control disponible para pequeos agricultores en reas de media y alta pluviometra [Hernndez y Prez, 2001]. Se han descrito los tipos de interacciones existentes entre Mycosphaerella fijiensis y Musa spp. [Four et al., 1984; Four et al., 1990; y Four, 1994]. Una de las interacciones ms frecuentemente explotada en los programas de mejora para resistencia a sigatoka negra es la resistencia parcial utilizada ampliamente en el programa de obtencin de hbridos de la FHIA [Rowe y Richardson, 1975; Rowe y Rosales, 1994]. La resistencia parcial se manifiesta por el alargamiento de la incubacin, de la transicin de las lesiones de los estados iniciales de rayas a manchas y de la formacin de cuerpos de reproduccin sexual y asexual del patgeno que permite llegar con ms hojas funcionales a la cosecha [Prez, 1998; Hernndez y Prez, 2001]. Se han desarrollado y distribuido por la FHIA y el IITA clones con resistencia parcial aptos para los mercados locales, lo que en algunos casos ha obligado al cambio de las preferencias gustativas. En Cuba se encuentran en produccin ms de 12 000 ha de clones tetraploides sintticos de la FHIA (FHIA 23, FHIA, 18 y FHIA 21) con resistencia parcial, lo que ha permitido una importante disminucin de los costos de produccin [Prez et al., 2002b]. Clones resistentes va transgnesis. Los bananos del grupo Cavendish, hoy comercializados a gran escala, presentan alta susceptibilidad a sigatoka negra y esterilidad femenina, por lo que son difcilmente mejorables mediante el mejoramiento convencional. Se han puesto a punto metodologas eficientes para la transformacin gentica de bananos para resistencia a sigatoka negra mediante uso de bombardeo de partculas y de plsmidos en Agrobacterium tumesfaciens [Sgi et al., 1995a,b; Arinaitwe et al., 2004; Gmez-Koski et al., 2004]. En Cuba se han realizado transformaciones a partir de suspensiones de clulas embrionarias del clon Gran enano mediante A. tumesfaciens cepa EHA 105 portadora de los plsmidos pHCG59 (gen de -glucanasa, aislado de plantas de frijol), y con los genes pHA C58 y
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pHGA91 (gen de quitinasa clase 1 y gen AP24 relacionado a la osmotina respectivamente, aislados de plantas de tabaco [Gmez-Koski et al., 2004; 2005; Bermdez et al., 2005]. Despus de obtener los permisos correspondientes de la Agencia Nacional de Bioseguridad, se llevaron al campo 150 lneas, junto a los clones originales no transformados, y se seleccionaron un total de 15 lneas transgnicas (en total de las tres construcciones genticas utilizadas de protenas PR), las que tuvieron un comportamiento superior al control en relacin con el ndice de infeccin y la severidad de la enfermedad a la floracin. Se transformaron adems suspensiones embrionarias del clon de pltano Navolean (AAB) y se seleccionaron un total de cuatro lneas transgnicas, tres de estas con la construccin glucanasa + AP24 y una con la construccin quitinasa + AP 24. Los ndices de infeccin en los controles (clones originales no transformados) variaron entre el 33,7 y el 40,2%, mientras que los de las lneas transformadas variaron entre el 7,35 y el 10,4%. Estos materiales tienen un gran valor para reas de clones Cavendish bajo gran presin de enfermedad en regiones con altos patrones pluviomtricos. Las perspectivas futuras del uso comercial de estos clones depender en gran medida de los cambios de la percepcin pblica sobre el consumo de alimentos procedentes de plantas transgnicas, y de la informacin futura que se genere sobre la inocuidad para el consumo humano de los productos de los genes procedentes de plantas de cultivo utilizados en las transformaciones. Antagonistas microbianos. La lucha biolgica en general se ha estudiado para el manejo de sigatoka negra debido a diferentes factores tcnicos y de financiamiento. Jimnez et al. (1987) evaluaron contra sigatoka negra ms de doscientos aislados de bacterias epifticas de las hojas de pltanos, y encontraron en invernadero un solo aislado de Pseudomonas sp. que brind una actividad comparable a la del clorotalonil. Gonzlez et al. (1997) estudiaron la actividad de Serratia marcesens (cepas A23 y R1), Serratia entomophyla (cepa A100) y de Bacillus cereus (cepa A30) en aplicaciones de estos microorganismos con quitina, en comparacin con la quitina sola y el fungicida en invernadero y campo, y obtuvieron una eficacia insuficiente para garantizar el control. Tratamientos realizados con un bioproducto basado en metabolitos purificados de Pseudomonas aeuroginosa, aislado Pss en estudios de campo, brindaron un control parcial e insuficiente de
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la enfermedad, aun cuando fueron aplicados a intervalos cortos [Prez, indito]. En general, los niveles de control hasta el presente informados en la literatura cientfica hasta el presente no permiten considerar el control biolgico con antagonistas como una va alternativa al control qumico para el manejo de la enfermedad en plantaciones de clones susceptibles en regiones con alta y media pluviometra (> de 200 mm/ao). Uso de compuestos vinculados a la nutricin con actividad sobre sigatoka negra. Entre estos se encuentran compuestos qumicos y derivados orgnicos de compostaje. Vigor Cal-Phos. El calcio y el fsforo tienen un efecto marcado sobre el desarrollo de las enfermedades en las plantas mediante la inhibicin de enzimas pectolticas utilizadas por los patgenos para destruir la pared celular y el engrosamiento de la cutcula. Jcome et al. (2004) y Pasbergh-Gauhl et al. (2004) informaron el efecto secundario de los tratamientos con Vigor Cal-Phos a dosis de 3 L.ha1 en combinacin con triazoles y otros fungicidas convencionales en el control de sigatoka negra, los cuales permitieron mejorar el nivel de control, alargar el intervalo entre ciclos y reducir en consecuencia el nmero total de ciclos de fungicidas por ao, as como el volumen de aceite en la mezcla fungicida sin prdida de eficacia, adicionalmente a un mayor tamao de las plantas, un mejor tamao de los racimos y un mejor comportamiento frente a los diferentes tipos de estrs en las plantas. El silicato de calcio y potasio induce la expresin de mecanismos de defensa a la infeccin de Magnaporthe grisea y Tanathephorus cucumeris, Monographiella albensis, Cochliobolus miyabeanus en arroz [Datnoff et al., 1991; Rodrigues et al., 2002a,b; Kim et al., 2002], Sphaeroteca fuliginea y Pythium ultimum en cucurbitceas [Cherif, et al., 1994. Fawe et al., 1998], Cercospora coffeicola en caf [Pozza et al., 2004]. Entre los mecanismos asociados a la induccin de resistencia se han mencionado incrementos significativos en la produccin de quitinasas, -1-3 glucanasa, peroxidasas, fenilalanina amonio liasas, polifenoloxidasas y acumulacin de compuestos fenlicos, as como la formacin de una capa de alta densidad de Si a los lados de la pared celular. Los resultados de los ensayos en invernadero y campo han permitido una inhibicin marcada del desarrollo de estos patgenos y un aumento importante de los rendimientos, acompaado de una disminucin marcada o abandono del uso de fungicidas. La ausencia de informes en revistas cientficas indica que se le ha prestado poca o ninguna atencin para su uso en el caso de las

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musceas, lo que sera un aspecto importante por estudiar en el futuro. Derivados de compostaje y lixiviados de humus de lombriz. Hay antecedentes del uso de bioproductos resultantes del compostaje y de lixiviados de la humificacin con lombrices de estircol y residuos de cosechas (casting) para el control eficiente de sigatoka negra en plantaciones orgnicas, tanto de clones susceptibles como resistentes [Caarte, 2003; lvarez, 2004]. Caarte (2003) inform de la eficacia de las aplicaciones semanales en una finca de 300 ha de banano Cavendish en zona tropical hmeda de Guayaquil, Ecuador, con una mezcla en aceite mineral de 2 L.ha1, del bioproducto resultante de la fermentacin en biorreactores artesanales durante 21 das, de estircol vacuno en mezcla con melaza de caa, a la que se les aadi microorganismos de suelo. Los tratamientos inhibieron o retardaron la evolucin de las manchas. Los productos de las fermentaciones son ricos en macro y microelementos, as como en cidos orgnicos. En Cuba se utilizan 2 L de lixiviado de la lombriz californiana Eisenia foetida obtenido de la suspensin en agua de humus, resultante de la descomposicin bajo techo de estircol y residuos de plantas de pltano, a una concentracin del 50% v/v, la cual se aplica semanalmente a las plantas de bananos y pltanos a alta densidad [lvarez, 2004]. Las plantas tratadas muestran un excelente control de la enfermedad y retardo de la evolucin de los sntomas. Se requiere de estudios para dilucidar los mecanismos de accin de los lixiviados de humus de lombriz. Zhang et al. (1998) informaron que los tratamientos con suspensiones acuosas de humus de lombricultura indujeron SAR en cucurbitceas y Arabidiopsis. No obstante, hay evidencias de la presencia en los lixiviados de una flora bacteriana con una fuerte actividad antagnica [Alvarado, comunicacin personal]. Balance de las alternativas para el manejo de la sigatoka negra El manejo de la sigatoka negra en el futuro seguir enfocado en la integracin de procedimientos culturales y qumicos. Los cambios en la percepcin de los consumidores de productos ms sanos y en la preocupacin pblica por detener la contaminacin ambiental tendr una influencia marcada en el futuro en las tecnologas de control que se implementarn. En este sentido hay que considerar los diferentes escenarios de produccin de musceas. Las producciones

tradicionales de bananos Cavendish y pltanos altamente susceptibles a la enfermedad en zonas de alta pluviometra en grandes superficies, por algunos aos, mantendrn su dependencia del uso de fungicidas qumicos, del saneamiento y de la mejora de las condiciones culturales para hacer ms desfavorables las condiciones ambientales al desarrollo de la enfermedad. En estas reas los antagonistas hasta el momento parecen tener pocas oportunidades como opcin de control. Mucho se ha avanzado en el desarrollo de grupos qumicos ms eficaces y menos riesgosos ambientalmente, y se ha ganado conocimiento en sus mecanismos de accin, lo que permite establecer recomendaciones slidamente fundamentadas de las estrategias de utilizacin para disminuir la presin de seleccin de poblaciones resistentes a los ingredientes activos en uso. El patgeno ha mostrado en el tiempo una gran capacidad de variacin y adaptacin, y desarrollado poblaciones con baja sensibilidad a las diferentes familias de ingredientes activos que salen al mercado. La principal participacin la tendrn en el futuro los productos de contacto apoyados por el uso de sistmicos, particularmente los triazoles, a pesar de que hay evidencias en estas regiones de problemas crecientes de prdida de sensibilidad. A largo plazo, para estas regiones con alta pluviometra y presin de infeccin la resistencia gentica es la nica solucin econmica y ambientalmente factible. Un poco de resistencia parcial brinda grandes beneficios desde el punto de vista epidemiolgico, y puede ser integrada a los sistemas de manejo para complementar o sustituir los tratamientos qumicos [Hernndez y Prez, 2001; Prez y Prez, 2003]. Esta puede obtenerse en el caso de las producciones de bananos Cavendish y pltanos mediante transgnesis, lo que depender de una amplia concientizacin del efecto de los productos de los genes antifngicos provenientes de plantas cultivadas a la salud. La situacin de los productores pequeos de bananos y pltanos vinculados a la cadena de exportacin, situados dentro de los grandes macizos bananeros en el trpico hmedo, es muy variable y requiere de ms atencin y asesoramiento en el manejo de fungicidas y de la enfermedad. Muchos no resisten un aumento de los costos de las medidas de proteccin. Las producciones de bananos y pltanos en trpicos semihmedo y seco tienen ms opciones mediante integracin de sistemas de manejo cultural (densidades de
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plantacin, nutricin, drenajes, nmero de manos/racimo), adopcin de sistemas de monitoreo de la enfermedad para optimizar los momentos de los tratamientos. En estas reas hay fuertes oportunidades para las producciones orgnicas. Un caso exitoso que ha de seguirse investigando cmo funcionan son los tratamientos con lixiviados de compost y vermicompost que han venido establecindose en alguna extensin en Ecuador y Cuba en plantaciones de clones susceptibles y con resistencia parcial. Se requiere continuar el estudio de compuestos que induzcan mecanismos de defensa para integrarlos a las estrategias de manejo de sigatoka negra. Entre estos habra que determinar la factibilidad del uso del silicato de calcio y potasio como inductor de mecanismos de resistencia contra patgenos de las races hojas y frutos en Musa.

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Luis Prez Vicente

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Comunicacin corta

NUEVOS AISLADOS DE BACILLUS SPP. ANTAGONISTAS A SCLEROTIUM ROLFSI, RHIZOCTONIA SOLANI Y PYTHIUM APHANIDERMATUM
Acenet I. Sosa Lpez,1 Victoria Pazos lvarez-Rivera2 y Marleny Gonzlez Garca1 Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no.514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600, asosa@inisav.cu 2 Facultad de Biologa de la Universidad de La Habana. Calle 25 no. 453 e/ J e I, Vedado, Plaza de la Revolucin, Ciudad de La Habana, CP 10500
1

l cultivo del tabaco ocupa un lugar importante en la agricultura cubana por los aportes y beneficios que reporta anualmente al pas, y al poseer amplia venta en el mercado europeo adquiere una elevada importancia, por lo que recibe una atencin priorizada [Prez et al., 2000]. Anualmente los semilleros de tabaco muestran afectaciones provocadas por numerosas plagas y enfermedades, cuyos daos severos ocasionan el colapso total de las plntulas, fundamentalmente en la fase temprana del cultivo; por lo general los hongos fitopatgenos del suelo ocasionan estas enfermedades. Hay estudios que muestran que las especies pertenecientes a los gneros Fusarium , Pythium , Sclerotium , Rhizoctonia y Phytophthora son las ms frecuentemente encontradas, en muchas ocasiones debido a las condiciones climticas que se registran anualmente en el pas [Brada et al., 1995]. El control biolgico como alternativa o como complemento del control qumico ocupa un lugar muy importante en el control de plagas y enfermedades. El grupo de las Pseudomonas fluorescentes, el hongo Trichoderma harzianum y bacterias pertenecientes al gnero Bacillus se caracterizan por presentar un elevado potencial en el control de tales patgenos. Estas ltimas son productoras de hormonas, antibiticos y metabolitos termoestables que les confieren una alta capacidad de colonizacin en los ambientes agrcolas y a su vez impide el establecimiento de otros microorganismos patgenos [Bochow et al., 1995]. El objetivo de este trabajo fue obtener aislados bacterianos, pertenecientes al gnero Bacillus, con efec-

to antagonista para el control de Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani (Rs10) y Pythium aphanidermatum en condiciones in vitro, a partir de muestras de hojas, suelo, races y rizosferas colectadas en las provincias de Pinar del Ro, La Habana, Ciudad de La Habana, Sancti Spritus, Cienfuegos, Granma, Santiago de Cuba y Las Tunas. Los patgenos empleados en este estudio para la realizacin de las pruebas de antagonismo pertenecen a la coleccin del Laboratorio de Fitopatologa del INISAV . Las muestras se procesaron segn procedimiento descrito por Fernndez-Larrea (1999). Para determinar las caractersticas morfolgicas y culturales de las colonias y de las clulas cultivadas en agar nutritivo se realizaron observaciones al microscopio estereoscpico (100X) y al microscopio ptico (1000X). Para la determinacin del gnero Bacillus se utiliz el Manual de Bergey [Claus y Berkeley, 1986]. La actividad biolgica de los aislados identificados como Bacillus spp. se evalu in vitro mediante un enfrentamiento dual con los patgenos Sclerotium rolfsii, Rhizoctonia solani (Rs10) y Pythium aphanidermatum. Como testigo se emple solo el patgeno, sembrado en el centro de las placas de Petri que contenan PDA; luego se incub todo por el perodo de veintin das y se realizaron observaciones diarias del experimento, con el fin de detectar alguna manifestacin de antagonismo, y adems observar el comportamiento de ambos microorganismos durante el perodo de incubacin. Las evaluaciones se hicieron a los cinco, quince y veintin das, adems de repetirse el experimento tres veces.
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Sosa y otros

Se obtuvo un total de 323 aislados nativos, con caractersticas semejantes a las descritas para el gnero Bacillus al presentar clulas en forma de bastn, alargadas, presencia de endoesporas y esporas, por responder positivamente a la tincin de Gram y ser catalasa positiva. Dentro de ellos, 17 mostraron efecto antagonista a los hongos S. rolfsii, R. solani (Rs10) y P . aphanidermatum, ya que al tercer da de iniciado el experimento los testigos de los tres patgenos haban cubierto la placa de Petri completamente; sin embargo, al enfrentarse con los Bacillus fueron susceptibles a 17 de ellos, al presentar diferentes manifestaciones de antagonismo. En una el crecimiento micelial del patgeno fue diferente al testigo, con el micelio enroscado y sin llegar a cubrir la placa completa; en otra el micelio alcanz a cubrir la placa, pero no se distingui a simple vista, sino mediante el microscopio estereoscpico 100X debido a que no presentaba la misma coloracin con respecto al testigo, y adems era un micelio empobrecido pegado a la superficie del medio de cultivo. Otro caso present una inhibicin total del crecimiento micelial del patgeno, y por ltimo se observ la presencia de una zona clara que separaba a un microorganismo de otro sin crecimiento aparente por parte de ambos. Todo parece indicar que tanto el hongo como la bacteria segregan algn tipo de metabolito al medio que impide el crecimiento del patgeno, y aunque a simple vista no se observa crecimiento bacteriano, se demostr experimentalmente que s, pero que la poblacin de este ltimo fue menor que en el resto de la placa, lo que prueba que este grupo es resistente al metabolito producido por el patgeno. El proceso de seleccin de bacterias antagonistas in vitro se considera el paso ms difcil en el desarrollo de un candidato promisorio para el control biolgico de enfermedades [Talavera et al., 1998]. Estos autores plantean adems que de 25 aislamientos a partir de la rizosfera de cereales, solo uno produjo una zona de in-

hibicin contra algunos de los microorganismos probados, mientras que Jimnez et al. (2001) seleccionaron solo una cepa que poda inhibir diferentes tipos de patgenos entre los 30 aislamientos obtenidos de rizosfera de papa. Este trabajo demuestra metodolgicamente que a partir de este tipo de interaccin antagnica es posible encontrar bacterias antagonistas evaluables para el biocontrol, a pesar de la desproporcin entre el total de aislamientos obtenidos y el nmero de antagonistas encontrados, lo que indica que pese a que la microbiota del suelo es abundante y diversa, el nmero de antagonistas no es proporcional.

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INSECTOS DEL ORDEN LEPIDOPTERA DETECTADOS EN PLANTAS DE NONI (MORINDA CITRIFOLIA L.)
Nancy Gonzlez Garca, Rubn Avils Pacheco, Bienvenido Cruz Daz y Yolanda Martnez Surez Instituto de Investigaciones Fundamentales en Agricultura Tropical Alejandro de Humboldt. Calle 1a. esq. a 2, Santiago de las Vegas, Ciudad de La Habana

l noni (Morinda citrifolia L.), conocida en Cuba tambin con los nombres de mora de la India, guanbana cimarrona, empella y rbol del pan, pertenece a la familia Rubiaceae y est considerada como originaria de La Polinesia [Roig, 1965, 1974]. Debido a los resultados teraputicos positivos atribuidos a la ingestin de los jugos de sus frutos, que contribuyen a la disminucin de afectaciones causadas por distintas enfermedades, y a las cualidades antioxidantes que posee, as como que algunos estudios comprueban el potencial de noni para estimular el sistema inmunolgico y para inhibir el crecimiento de los tumores, regularizar el funcionamiento de las clulas y regenerar las daadas [Solomon, 2005], esta planta se ha distribuido por todo el pas en patios y parcelas [Rodrguez y Snchez, 2004]. La planta de noni es atacada por un grupo de plagas y enfermedades que afectan su crecimiento y produccin, dentro de las cuales se destaca la bibijagua u hormiga arriera [Hidalgo, 2004]. En evaluaciones realizadas a plantas sembradas en pequeas parcelas en patios, en la provincia de Ciudad de La Habana, se observ un fuerte ataque a su sistema radical causado por nemtodos de las agallas (Meloidogyne spp.) [Cuadra et al., 2005]. Regularmente se han visto daos en las hojas atribuibles al ataque de lepidpteros, los que se diferencian evidentemente de los de la bibijagua, ya que esta, al comer, hace cortes en forma de media luna en los bordes de las hojas, y los lepidpteros comen en cualquier lugar de ella, sin que hayan sido identificados. En el municipio de Boyeros, en Ciudad de La Habana, se encontraron sobre plantas de noni de tres me-

ses de sembradas larvas de un lepidptero de color verdoso a marrn, con una cabeza semejante a la de un perro y cuyas caractersticas correspondan a una larva de primavera perteneciente a la familia Sphingidae; en plantas de ms edad se hallaron larvas conocidas comnmente como ositos peludos, de color marrn claro de la familia Arctiidae, por lo que se procedi a obtener los adultos de ambas especies en el laboratorio para su posterior identificacin mediante comparacin con los ejemplares de la coleccin de insectos del INIFAT. Los adultos de la primavera (Fig. 1) correspondieron a la especie Xylophanes pluto (F.), informada por Bruner (1975) sobre plantas de jib (Erythroxylon havanense Jacq.). Los del osito peludo (Fig. 2) correspondieron a la especie Maenas jussiaeae (Poey), informada por Bruner (1975) sobre bag Spilosoma sp., ocuje (Calophyllum sp.), frutabomba (Carica papaya Lin.), girasol (Helianthus annuus Lin.), Ipomoea sp., clavellina ( Jussiaea repens L.), Musa spp., higuereta (Ricinus communis Lin.), aguinaldo blanco (Rivea corymbosa (L.)), may. f., Rosa spp., por lo que este trabajo constituye el primer informe del ataque de estos lepidpteros en Cuba sobre las plantas del noni. Las larvas de ambas especies son voraces y pueden consumir grandes cantidades del rea foliar para su desarrollo, lo que retrasa el crecimiento de las plantas, de ah que se recomiende tomar las medidas adecuadas al aparecer los primeros sntomas de hojas comidas. Pueden realizarse eliminaciones manuales de las larvas, en caso de tratarse de pocas plantas, o en plantaciones mayores la utilizacin de controles biolgicos apropiados.
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Gonzlez y otros

Figura 1. Xilophanes pluto, primavera encontrada en la planta de noni Morinda citrifolia.

Figura 2. Maenas jussiaeae osito peludo encontrado en la planta de noni Morinda citrifolia.

REFERENCIAS
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Resumen de tesis

CONSERVACIN DE ARTRPODOS BENFICOS EN UN SISTEMA DE PRODUCCIN AGRCOLA URBANO

Yaril Matienzo Brito Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5a. B y 5a. F, Playa, Ciudad de La Habana, CP 11600, ymatienzo@inisav.cu

Tesis en opcin al grado acadmico de Mster en Agroecologa y Agricultura Sostenible

control biolgico por conservacin de especies benficas, es preciso realizar cambios significativos en los sistemas agrcolas y desarrollar tecnologas de manejo de organismos nocivos con enfoque agroecolgico. Estudiar la diversidad y el incremento de las poblaciones de artrpodos benficos con la utilizacin de tcnicas de conservacin en un sistema de produccin agrcola urbano, ha sido el objetivo de este trabajo de investigacin, realizado en el perodo comprendido de enero del 2002 a marzo del 2004 en la UBPC Organopnico Vivero Alamar, perteneciente al municipio de La Habana del Este de la provincia de Ciudad de La Habana. Se realiz una caracterizacin del subsistema de produccin de cultivos varios y se efectuaron muestreos con una frecuencia semanal, en los que se seleccionaron plantas al azar, distribuidas en zig zag, para relacionar las especies de artrpodos benficos y nocivos presentes en las hortalizas Solanum melongena L., Vigna unguiculata (L.) y Cucumis sativus L., as como en las especies botnicas introducidas como tcnicas de conservacin. La diversidad de artrpodos en el subsistema estudiado se

Para lograr un avance eficiente en la utilizacin del

estim con la utilizacin de ndices estadsticos de informacin adaptados a la ecologa, se realiz un anlisis de las relaciones de similitud en las comunidades de especies de artrpodos en las diferentes etapas del trabajo y se evalu la actividad biorreguladora de los artrpodos benficos mediante los indicadores relacin depredador-presa y porcentaje de parasitoidismo. Se evidenci el bajo nivel de conocimiento del personal vinculado a la produccin en relacin con la utilizacin de tcnicas conservacionistas, y que la inapropiada distribucin de cultivos y la implementacin de prcticas agronmicas inadecuadas limitaban la presencia y actividad de los artrpodos benficos. La capacitacin brindada posibilit un mayor conocimiento de estas poblaciones y de las prcticas que favorecen el mantenimiento y su preservacin en sistemas de produccin agrcola, as como la utilizacin de prcticas conservacionistas; posibilit tambin la tendencia hacia una mayor diversidad de especies de artrpodos, en la que los benficos mostraron una mayor expresin cuantitativa, adems de favorecerse su actividad biorreguladora.

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Normas Editoriales
Fitosanidad tiene como objetivo divulgar de forma sistemtica el quehacer de los investigadores y especialistas del Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal, as como de otros centros del pas o extranjeros, vinculados al trabajo de la sanidad vegetal. El Comit Editorial de esta publicacin, que se edita trimestralmente, agradece el envo de colaboraciones y observaciones que ayuden a hacer mejor nuestra labor. Los artculos deben reflejar los resultados de investigaciones bsicas o de aplicacin prctica, asimismo aquellos que se encuentren en proceso de extensin o generalizacin. Igualmente resultan de importancia los trabajos en que se comuniquen nuevos procedimientos o innovaciones, as como los que aborden temas novedosos. Tipo de artculos La revista acepta manuscritos originales (inditos) en cualquiera de las especialidades directa e indirectamente vinculadas a la sanidad vegetal. Estos pueden ser: artculos cientficos, reseas, comunicaciones cortas, resmenes de tesis, informes tcnicos. Los artculos cientficos no deben exceder de siete cuartillas, las reseas de quince, las comunicaciones de dos y los informes tcnicos de cinco. Lenguaje El lenguaje oficial de la revista es espaol, aunque excepcionalmente se aceptarn contribuciones en ingls, francs y portugus. El estilo de escritura debe ser totalmente impersonal, con criterio de exactitud, brevedad y prrafos cortos. Debe utilizarse el sistema mtrico decimal. Los nombres cientficos se escribirn completos, incluyendo el autor, y siguiendo los cdigos internacionales (ejemplo: Leucoptera coffeella Guerin Meneville). Si es necesario utilizarlos en varias partes del texto, entonces se escribirn completos la primera vez que aparezcan y luego se abrevian (ejemplo: L. coffeella). Se escriben en cursiva o se subrayan. Estructura de los artculos Los artculos cientficos tendrn la estructura siguiente: ttulo, autor(es), afiliacin de los autores, resumen y palabras claves (espaol e ingls), introduccin, materiales y mtodos, resultados y discusin, conclusiones (si las hubiera), agradecimientos (si los hubiera), referencias. Las reseas adoptarn la siguiente estructura: ttulo, autor(es), afiliacin de los autores, resumen y palabras claves (espaol e ingls), introduccin, el contenido se estructura a criterio del autor, agradecimientos (si los hubiera), referencias. Las comunicaciones cortas incluirn: ttulo, autor(es), afiliacin de los autores, texto de la comunicacin, incluyendo las referencias principales. La estructura de los informes tcnicos ser: ttulo, autor(es), afiliacin de los autores, resumen y palabras claves (espaol e ingls), introduccin, desarrollo y referencias. Elaboracin del texto El ttulo debe ser claro y conciso, procurando que no sea extenso. Debe tener correspondencia con el contenido. No se incluirn abreviaturas. De los autores se escribirn nombres y dos apellidos. Si el autor tiene un segundo nombre, este se abrevia con la inicial. La afiliacin de los autores se escribir con su nombre completo, las siglas slo se emplearn entre parntesis, si lo consideran necesario. Debe incluirse la direccin postal, fax y correo electrnico si los posee. El resumen no debe exceder de 250 palabras, y debe tener una sntesis de los mtodos y resultados, mencionndose los nombres cientficos completos y valores cuantitativos de los resultados, es decir, debe tener el contenido suficiente de forma comprimida. Las palabras claves son aquellas que permiten identificar el contenido del artculo y que facilitan la identificacin en los ndices de materia. Debe incluir las taxas de los entes biolgicos. La introduccin debe tener una breve referencia de los antecedentes especficos del trabajo, as como una revisin breve de las referencias ms recientes que se relacionan con el tema que se presenta. Tambin se incluir el objetivo del trabajo. Los materiales y mtodos deben ser claros y concretos, se redactarn segn un orden lgico de los mtodos empleados. De igual forma se escribirn claramente los procedimientos analticos y estadsticos utilizados. Se pueden citar los mtodos y procedimientos, siempre que hayan sido publicados en revistas cientficas. Los resultados se pueden expresar apoyados en tablas y/o figuras, con una discusin a partir de referencias actuales. Deben presentarse de manera lgica, interpretando las conclusiones. Las figuras se deben elaborar solamente en Word u otro programa compatible.

Las referencias slo sern de publicaciones disponibles en las bibliotecas, y se presentarn en orden alfabtico. Se colocar el primer apellido del autor principal y luego las iniciales de los nombres; para los dems autores, primero la inicial y luego los apellidos, en todos los casos separados por comas. Cuando una obra lleve ms de tres autores, se pondr el apellido y nombre del primero y a continuacin et al. (en cursiva). A continuacin, el ttulo del artculo, el nombre de la revista, as como volumen, nmero, pginas y ao. En el caso de los libros y folletos, despus del ttulo, nmero de la edicin, lugar de la publicacin (ciudad), casa editorial y pginas. Los ttulos de los artculos y ponencias se entrecomillarn, mientras que los referidos a libros y publicaciones peridicas irn en cursiva, o en su defecto subrayados. En el texto las referencias se citan con el apellido del primer autor y el ao entre parntesis; ms de un autor se anota como et al.

Envo de manuscritos Deben entregarse un original mecanografiado, a doble espacio, en papel blanco tamao 28 x 21,5 cm, utilizando una sola cara, con mrgenes de dos centmetros a los lados y tres en la parte superior e inferior. Cada cuartilla debe ser enumerada. La letra que ha de utilizarse debe ser Arial, con puntaje 11. Adems, debe entregar una copia en disquete, utilizando el procesador de texto Word, ya que el consejo de redaccin no dispone de capacidades para mecanografiar los artculos. Se acepta el envo de manuscritos por correo electrnico, como documentos adjuntos al mensaje o carta de presentacin, siempre que no posean figuras. Los manuscritos se enviarn a: Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5a.B y 5a.F, Playa, Ciudad de La Habana No se aceptan manuscritos que no estn acompaados de la Declaracin del Autor. Tambin pueden enviarse por correo electrnico: lvazquez@inisav.cu Revisin de los manuscritos Los trabajos enviados al Comit Editorial sern sometidos a un proceso de arbitraje y correccin de estilo. Los autores colaborarn con los rbitros y correctores a evacuar cualquier duda al respecto y efectuar, si es preciso, las modificaciones que se le sugieran. El Comit Editorial se reserva el derecho de aprobar o rechazar los trabajos propuestos, lo cual ser notificado oportunamente a los interesados.

FITOSANIDAD vol. 10, no. 1, marzo 2006

EPIDEMIOLOGA DE ERWINIA SPP. EN EL CULTIVO DE LA PAPA (SOLANUM TUBEROSUM L.) Y MEDIDAS PARA SU CONTROL
Yolanda Morales Gmez Facultad de Ciencias Agropecuarias. Departamento de Agronoma, Universidad Central de Las Villas, Carretera a Camajuan, Km 5, Santa Clara, Villa Clara, Cuba

Tesis en opcin al grado acadmico de Mster en Sanidad Vegetal

lvaro Barba y el Laboratorio de Fitopatologa pertenecientes ambos a la UCLV , y en la Empresa de Cultivos Varios Valle del Yab de 1988 a 1996. Se realizaron experimentos de laboratorio donde se aisl e identific la bacteria, se llevaron a cabo estudios de resistencia varietal, influencia de la edad de la planta al cosechar en la manifestacin de las pudriciones, fertilizacin y su influencia en la manifestacin de los sntomas, y estudios de infeccin latente en el peridermo de los tubrculos. Se realizaron adems investigaciones en frigorficos, naves de piln y agromercados en relacin

El trabajo se desarroll en la Estacin Experimental

con Erwinia spp. y su manifestacin en los tubrculos, as como estudios de campo. Se encontr que no existi variedad con respuesta inmune. Las mayores pudriciones se presentaron a los 60 das; las dosis de fertilizantes utilizadas no influyeron en la manifestacin de los sntomas; en todas las muestras procesadas se detect infeccin latente en las lenticelas del tubrculo; se reportaron cuantiosas prdidas en frigorficos, naves de piln y agromercados, y lo que representan desde el punto de vista econmico. Se recomend una metodologa para el control de esta bacteria en el cultivo de la papa en Cuba.

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Rgxkuvc Fitosanidad

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RRECIO DE SUSCRIRCIN
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