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Prcticas
Bibliografa Recomendada
Rodrguez, F. et al (2006). Fundamentos de Neurociencia. Manual de Laboratorio. McGraw-Hill.
Temario de Prcticas
Bloque I
Uso del microscopio. Tcnicas Neurohistolgicas. Tipos celulares. Microestructura de la corteza del cerebelo.
Prctica 1.
COMPONENTES
Elementos mecnicos Elementos pticos
Aunque ambas clases de elementos son importantes para el funcionamiento y rendimiento del microscopio, son los componentes pticos los que realmente definen su calidad.
Los objetivos son sistemas de lentes convergentes dispuestas en el interior del tubo. Los objetivos modernos son parafocales. Diferentes clasificaciones:
Los oculares: Sistema de lentes, acopladas en la parte superior del tubo del microscopio, cuya funcin es formar una imagen virtual y amplificada de la imagen real creada por el objetivo.
Aunque la fotomicrografa permite reproducir con mayor exactitud las preparaciones, el dibujo ofrece la posibilidad de representar estructuras tridimensionales mediante enfoques sucesivos.
TCNICAS NEUROHISTOLGICAS
I. Endurecimiento y conservacin de la pieza mediante el empleo de soluciones fijadoras. II. Corte de la misma en secciones seriadas. III. Tincin.
Inmersin directa
Perfusin transcardaca
La perfusin transcardaca es la tcnica de fijacin ms eficaz porque proporciona un tejido limpio de clulas sanguneas.
La utilizacin de las vas del sistema circulatorio para la difusin del reactivo permite una fijacin homognea e in situ de todo el tejido nervioso, que reduce el riesgo de deformaciones y facilita la extraccin del cerebro.
Una de sus ventajas es que permite obtener secciones de tejido nervioso muy finas, de hasta 4 micras de grosor. El tejido debe ser previamente deshidratado (parafina: sustancia hidrfoba)
II
III
La calidad de las secciones depende en gran medida del ngulo de incidencia de la cuchilla.
A menor ngulo, menor compresin sufren las secciones y por tanto, MAYOR CALIDAD de las mismas.
La gelatina (diluda en agua caliente) facilita la adherencia de los cortes a la superficie del portaobjetos.
II
III
Ventajas vs Inconvenientes
V: Este tipo de aparato es muy til para obtener secciones relativamente gruesas (20-200 micras)
I: Los requerimientos de ciertas tcnicas de tincin hacen imprescindible el empleo del microtomo de congelacin. P.e.: tincin inmunohistoqumica.
II
III
IV
TIPOS DE TINCIONES
Cul es el objetivo bsico de todas las tcnicas de tincin? Qu tipos existen? de tinciones
PROCEDIMIENTO de TINCIN
Tras la seccin del tejido nervioso y una vez montados los cortes en el portaobjetos, puede procederse a la tincin de las muestras. La deshidratacin del tejido incrementa la transparencia de la preparacin y contribuye a su conservacin.
II
III
TINCIN DE NISSL
de cresilo, rojo neutro o azul de toluidina. Se obtienen preparaciones que ofrecen panormica general de la distribucin de las neuronas y de su organizacin citoarquitectnica.
20
40
100
100
TINCIN DE KLVER-BARRERA
Permite observar tanto los cuerpos neuronales como los axones mielinizados. Uso combinado de dos colorantes diferentes: azul luxol y rojo neutro. Proporciona una visin integrada de la distribucin y relacin entre la sustancia gris y la sustancia blanca del sistema nervioso.
40
100
TINCIN DE GOLGI
Permite observar la imagen completa de las clulas del sistema nervioso. Base del mtodo de tincin: impregnacin con nitrato de plata. til para la caracterizacin morfolgica de los diferentes tipos celulares del SN, as como de los circuitos neurales. Tincin selectiva (bajo nmero de clulas). Variabilidad de los resultados.
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1.
Fijacin tejido.
estructural
del
2. Mordentado, induracin, cromacin o fase preimpregnadora (dicromtico potsico). 3. Impregnacin con nitrato de plata. 4. Corte del tejido (previa encastracin en parafina).
Aplicacin de la tcnicas de Golgi para la caracterizacin morfolgica de las clulas del Sistema Nervioso
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PSEUDOUNIPOLAR
BIPOLAR
MULTIPOLAR
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En base a LA MORFOLOGA DEL SOMA Y ESTRUCTURA DEL ARBOL DENDRTICO: - C. Piramidales, estrelladas, fusiformes (corteza cerebral). - C. de Purkinje, de Golgi, de los granos, en cesta (cerebelo).
En base a CONEXIONES, su PAPEL y POSICIN en los circuitos nerviosos: - Neurona sensorial primaria. - Interneuronas. - Motoneuronas.
CLULAS GLIALES La neurogla no interviene en el procesamiento y transmisin de la informacin en el sistema nervioso. Tipos: Astrocitos, oligodendrogla, clulas de Schwann o microgla.
La neurogla proporciona sostn estructural a las neuronas, as como los nutrientes necesarios.
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