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PRACTICA 1 LABORATORIO DE MICROBOLOGIA TINCION DE GRAM

GUILLE VILLALOBOS MAT 124105

RESUMEN
En esta prctica de laboratorio realizamos una tincin bsica de Gram, tratando de localizar bacterias, asi como tambin diferenciar las Gram positivas de las Gram negativas. Pudimos localizar bacterias Gram positivas en forma de Streptococcus. La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en Bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado. y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.

INTRODUCCION
Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra e lcido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglucano (tambin conocido como murena)Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada,y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y lipopolisacrido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las Gram negativas.La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a quela membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea.

MATERIAL Y METODOS
MATERIAL
Microscopio ptico Colorantes para tincin de Gram (Cristal violeta, Safranina) 1 encendedor Hisopo de algodn Recipiente de plstico para las tinciones Agua Aceite de inmersin Cultivos bacterianos Lente con resolucin de 100

METODOS
1. Tomar con un Hisopo de algodn una muestra de la colonia de bacterias. 2. Elaborar preparaciones fijas de las bacterias a observar. Esto mediante la aplicacin de calor al portaobjetos. 3. Aadir 1 2 gotas de cristal violeta a la preparacin, hasta que se cubra por completo. Dejar actuar el colorante durante 1 minuto. 4. Una vez transcurrido el tiempo, lavamos la preparacin sobre el recipiente. 5. Agregar 1 2 gotas de solucin de Yodo a la preparacin, y dejar actuar 1 minuto. 1. Transcurrido el tiempo, lavamos. 6. Con cuidado, aadir gota a gota el alcohol-acetona lavando la preparacin durante 2. 10 segundos. 7. Aadir el colorante de contraste, safranina (1 2 gotas) y dejar actuar durante 30 3. segundos. 8. Dejar secar al aire y observar al microscopio, siguiendo la tcnica de la prctica anterior para enfocar correctamente. Observar con el objetivo de inmersin.

RESULTADO Y DISCUSION
Despues de realizar los pasos anteriores y colocar el objetivo al microscopio pudimos observar claramente una colonia da bacterias en forma de Streptococcus Gram positivas. Localizadas en la parte medial izquierda de color morado o violeta fuerte. Tambin localizamos bacilos al parecer Gram negativos.

CONCLUSION
En mi opinin personal considero que esta prctica es muy conveniente ya que es bsica en nuestra carrera, adems que es relativamente sencilla, y prctica. La verdad me agrado mucho.

BIBILIOGRAFIA
http://edicion-micro.usal.es/web/identificacion/AyudaPruebas.html http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcari ontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%203%20Tinci%C3%B3n%20de%20Gram.pdf