Resumen Los microorganismos son capaces de producir vitaminas en forma de metabolitos, que son nutrientes esenciales, en el metabolismo de la produccin

de energa. Por lo tanto, la produccin microbiana se ha investigado por ao. La riboflavina es una de las menores Bvitaminas producidas biotecnolgicamente. Hay muchos factores que afectan a la biosntesis de riboflavina, que vara en cada microorganismo. Sin embargo, se han realizado pocos estudios sobre el efecto de diferentes tomos de carbono y fuentes de nitrgeno en la produccin de riboflavina. Por lo tanto, nuestro objetivo en este estudio fue el de trabajar en el efecto del carbono previamente seleccionada y fuentes de nitrgeno en la produccin de riboflavina por la levadura de tipo natural blindado Candida sp. LEB 130. Se utiliz sistema de recipiente de fermentacin sacudido clsica, controlar la temperatura y la agitacin, con la concentracin de oxgeno fijo. Un diseo 25 de deteccin se utiliz para analizar el efecto de los componentes del medio tales como sacarosa, aceite de linaza, y extracto de levadura. Un segundo experimento de diseo factorial 24 arroj una produccin de riboflavina 105,7 ug / ml, 4,2 veces ms alta que 25 diseo. riboflavina anlisis se realiz en un espectrofotmetro. Diseo de deteccin como la evaluacin del desempeo medio termin siendo muy ventajoso para la produccin de riboflavina por esta levadura. introduccin

Los aceites se han utilizado comnmente como fuentes para la produccin de metabolito (Zhou y Kosaric 1993, 1995;. Vance-Harrop et al 2003). Sin embargo, existen pocos estudios sobre la produccin de riboflavina se han hecho (Demain 1972, Lim et al 2003;. Karos et al. 2004; Ming et al. 2003; Pessoa et al. 2003) y ninguna participacin ya sea extracto de levadura Prodex Lac o el aceite de linaza, especialmente teniendo en cuenta el diseo central compuesto como una tcnica para mejorar el proceso de fermentacin. La eleccin de la mejor medio para que un microorganismo que produce sus metabolitos es laborioso y requiere mucho tiempo. Diseo estadstico es una herramienta en la que se hacen pruebas de planificada a fin de tener un enfoque muy cientfico. Otra ventaja sera la variacin simultnea de factores, lo que resulta en una metodologa analtica mejorada, reduciendo el nmero de experimentos o repeticiones (Rodrigues y Iemma 2005). Por lo tanto, con el fin de optimizar la produccin de un metabolito, que parece ser una herramienta muy til. Bajo diferentes condiciones ambientales, sistemas microbianos muestran patrones de comportamiento complejos que son difciles de expresar cuantitativamente por mtodos mecanicistas; Patnaik (2009) propone el uso de nuevas metodologas basadas en diferentes formas de inteligencia artificial como las redes neuronales, sistemas expertos, y los algoritmos genticos a describir el comportamiento celular, tal vez se trata de una alternativa para el futuro.

A pesar de unos pocos estudios sobre la produccin de riboflavina (Wu et al 2007;. Pujari y Chandra 2000a, b), un diseo factorial y metodologa de superficie de respuesta como una estrategia de optimizacin es una prctica comn en la biotecnologa, y se ha informado de una gran cantidad de investigacin (Dedavid et al. 2008; Gnen y Aksu 2008). Optimizacin del rendimiento medio puede ser llevada a cabo por la eleccin de un diseo estadstico para investigar los datos experimentales de inters despus de la identificacin de cada factor de proceso posible. En nuestro estudio, la influencia de los factores nutricionales fue tomada en cuenta con el fin de mejorar la produccin de riboflavina por Candida sp. LEB 130 recin aisladas de levadura. Despus de un experimento de "one-at-a-time" con anterioridad, nuestro objetivo principal aqu es explorar la influencia del nitrgeno elegido y fuentes de carbono junto con otros com-puestos de los medios de comunicacin que utilizan minerales diseo experimental como herramienta para mejorar la vitamina B2 produccin por Candida sp. LEB 130. Materiales y Mtodos

Microorganismos y Cultura Mantenimiento

La cepa de Candida sp. LEB 130 de tipo salvaje, que fue aislado de una muestra de suelo recogida de la planta de caa de azcar en el estado de So Paulo en el Laboratorio de Bioqumica de Alimentos de la Facultad de Ingeniera de Alimentos, Unicamp, fue identificado por la Qumica, Biolgica, y el Centro de Investigacin Agrcola pluridisciplinaria, Campinas , Estado de So Paulo, Brasil. Se mantiene en criotubos que contienen 10% de glicerol a -80 C. Para preparar subcultivos, la levadura se inocul en agar de levadura de malta (2% de glucosa, 1% de extracto de levadura, 2% de peptona, y 3% de agar) y se incubaron a 30 C durante 24 h antes de las pruebas fermentativos. Se almacena en la qumica, biolgica, y coleccin de cultivos del Centro de Investigacin Agrcola pluridisciplinaria, Campinas, So Paulo, Brasil.

Medio y riboflavina Produccin

En la tcnica de inoculacin lquida, se aadi 1 ml de agua destilada estril para el agar inclinado, utilizando para inocular en los matraces agitados. El tubo se agit suavemente para obtener las

clulas a partir del medio slido de tener una suspensin homognea que contiene 8,2 107 UFC / ml. El medio estndar utilizado en este estudio estaba compuesto de 25 g / l de sacarosa, KH2PO4, MgSO4 7H2O, ZnSO4 (solucin al 0,2%) y 10% de tampn fosfato de sodio 0,1 M, pH 7,0. La fermentacin se llev a cabo en matraces de 50 mL Erlenmeyers que contienen 15 ml de medio de cultivo esterilizado en autoclave para 20 min a 121 C, 1 atm. El experimento de fermentacin se llev a cabo para 24, 48, y 72 horas a 30 C y 100 rpm en un agitador rotativo TECNAL TE 421, en condiciones aerbicas. Produccin de riboflavina se ensay en el caldo de cultivo despus de cada 24 h como se describe a continuacin, despus de centrifugacin a 1250 g durante 15 min, 5 C (Beckman J2-21). Cada experimento se llev a cabo en la oscuridad para evitar la Riboflavina Evaluacin de carbono y nitrgeno Fuentes Efectos sobre la produccin de riboflavina por Candida sp. LEB 130 Uso del anlisis estadstico

Los experimentos preliminares utilizando la tcnica de uno-a-un-tiempo para el carbono y el nitrgeno fuentes de evaluacin se llev a cabo (datos no mostrados) con el fin de seleccionar las fuentes potenciales de los estudios secuenciales. Como fuentes de carbono, sacarosa se puso a prueba (1% en medio de cultivo) contra la sustitucin de la glucosa, galactosa, fructosa, maltosa, lactosa, glicerol, sorbitol, cido oleico, cido linoleico, cido palmtico, y aceite vegetales (arroz, cacahuetes, aceite de oliva , palma, maz y semillas de lino). Como fuentes de nitrgeno, peptona, urea, extracto de levadura, extracto de malta, cloruro de amonio, nitrato de amonio, sulfato de amonio y se ensayaron a la concentracin de 0,5% w / v en medio de cultivo. Por lo tanto, se utiliz la tcnica de diseo experimental factorial para determinar el componente que tiene mayores efectos sobre la produccin de riboflavina (Rodrigues y Iemma 2005). Software Statistica versin 7.0 (StatSoft Inc., 2325 Medio 13th Street, Tulsa, OK, 74104, EE.UU.) se utiliz para estimar la respuesta de las variables dependientes. La significacin estadstica de los coeficientes de regresin se determin mediante la prueba de la t de Student.

Estudio de Nutrientes Medio Efectos: 25 Diseo Factorial

Con el fin de identificar qu componente (s) del medio tiene un efecto significativo sobre la produccin de riboflavina, se realiz primero paso optimiza-cin. A 25 diseo factorial con cuatro repeticiones en el punto central (n0 = 4) con un nmero total de 36 experimentos se emple. Las variables seleccionadas fueron sacarosa, extracto de levadura, aceite de linaza, y sales de potasio y de zinc. La gama de cinco variables: sacarosa, KH2 PO4, ZnSO4 7H2O, aceite de linaza, extracto de levadura Prodex -Lac se enumeran en la Tabla 1, con sus valores codificados y codificado. La matriz de diseo con cinco variables se presentan en la Tabla 3.

Conclusiones

Desde Candida sp. LEB 130 se aisl en un estudio preliminar y no es una cepa mutante, se saba poco acerca de s misma levadura y, en consecuencia, los factores que afectan a la biosntesis de riboflavina. En la biosntesis de riboflavina, hay seis vas enzimticas especficas. Sin embargo, el flujo metablico a la riboflavina tambin est determinada por numerosas reacciones no especficas. Esto significa que la produccin de riboflavina puede ser mejorada por la suplementacin. Estas fueron la principal motivacin para este estudio: ensayo de diferentes fuentes de nitrgeno y el carbono con el fin de evaluar su influencia en la produccin de riboflavina por Candida sp., una cepa de tipo salvaje con potencial para producir riboflavina. Un mximo de produccin de riboflavina por Candida sp. era 105,7 mg / ml a una concentracin de sacarosa de 40 g / l, KH2PO4 2 g / l, ZnSO4 1,5 ml / L, y el aceite de linaza 45 g / L. No obstante, es preciso tener en cuenta que cada microorganismo tiene su propio mecanismo de regulacin, indicando sus preferencias de sustrato no importa cun equilibrado es el medio. Por lo tanto, son necesarios ms estudios para optimizar el medio de fermentacin para una mayor produccin de vitamina por Candida sp. LEB 130. La produccin microbiana de riboflavina se incrementar con el progreso de estos metablico, biosntesis y desarrollos genticos. La comprensin de la ruta metablica del microorganismo para producir riboflavina es esencial, y el papel de diferentes nutrientes en el medio es el principio de que, por el uso de las fuentes de petrleo, el azcar, y nitrgeno, es posible, como se muestra en la literatura.