L. Pias Caballero y M.

Lpez

TEMA 2: Lesiones inducidas por radicales libres. Necrosis: Morfologa y tipos.

Enero de 2005. Revisado en Enero de 2007 y Enero de 2008

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RADICALES LIBRES.
Se denominan radicales libres a molculas reactivas que tienen un nico electrn (un nmero impar de electrones en los orbitales perifricos) en su orbital externo, como por ejemplo: iones metlicos, el tomo de hidrgeno o algunos compuestos inorgnicos comunes como xido ntrico (NO) o dixido de nitrgeno (NO2), aunque cualquier compuesto se puede transformar en un radical libre al ganar un electrn adicional. Los iones metlicos son los ms predidpuestos a captar esa reactividad (tiene gran importancia el Hierro). La mayor parte de las causas de lesin celular actan por medio de la formacin de radicales libres: inamacin, isquemia, reperfusin y fagocitosis. Los radicales libres, son muy inestables y actan reaccionando con cualquier elemento orgnico o inorgnico de la clula para iniciar un proceso de autocatlisis que se extiende en cadena de molcula a molcula. Estas reacciones comprometen la integridad funcional de las protenas, los lpidos, los hidratos de carbono y cidos nucleicos. En el organismo se forman por los siguientes mecanismos: 1. Absorcin de energa radiante: Con especial importancia la luz ultravioleta y los rayosX. Todas estas exposiciones son acumulativas. 2. Reacciones endgenas oxidativas de las rutas metablicas normales 3. Metabolismo enzimtico de sustancias qumicas y frmacos: por ejemplo CCl3 y CCl4. 4. Radicales derivados del oxgeno: la presencia de oxgeno intracelular genera especies de oxgeno intermedias, parcialmente reducidas, que son txicos celulares que actan como radicales libres. Las formas ms importantes as generadas son: El superxido. Se origina por gnesis directa durante la autooxidacin en las mitocondrias o enzimticamente por las enzimas citoplasmticas como la xantina oxidasa, el citocromo P450 y otras oxidasas. Una vez producido puede ser inactivado espontneamente o, ms rpidamente por la enzima superxido dismutasa; formndose perxido de hidrgeno. El perxido de hidrgeno. Producido por dismutacin del superxido o directamente por las oxidasas presentes en los peroxisomas. Los iones hidroxilo. Tambin llamados radicales hidroxilos son producidos de varias formas: a) hidrlisis del agua por radiaciones ionizantes b) por interacciones de metales transicionales con el perxido de hidrgeno, como por ejemplo:  Reaccin FENTON: Fe++ y H2O2 = in hidroxilo  Reaccin HABER-WEISS: H2O2 + 02 = in hidroxilo 5. Radicales derivados del xido ntrico (NO): El oxido ntrico es un importante mediador qumico que se puede convertir en un radical libre bastante daino al reaccionar con el superxido o el in hidroxilo, generndose formas dainas como el: anin peroxinitrito.

EFECTOS DE LOS RADICALES LIBRES SOBRE LAS BIOMOLECULAS.

Los efectos principales de estas formas reactivas van a producir daos en las membranas, la peroxidacin de los lpidos de membrana generalmente por los radicales hidroxilo que reaccionan con los cidos grasos insaturados, o por peroxidacin en presencia de O2, enlaces suldrilos de las protenas (gnesis de puentes cruzados) y daos en el ADN (mutaciones del cdigo gentico por el cambio de bases que si no son reparadas conducen a alteraciones celulares e inhibicin de la replicacin del ADN). Peroxidacin de los lpidos de las membranas:

19 Los lpidos poliinsaturados como los que estn en las membranas, tienen enlaces dobles entre algunos de los tomos de carbono. Dichos enlaces son vulnerables al ataque de radicales libres derivados del oxgeno. Las interacciones lpido - radical generan perxidos que son muy reactivos e inestables y se produce una reaccin autoltica en cadena originando una lesin en las membranas que daar los organelosy por lo tanto a la clula.

DESAPARICIN DE LOS RADICALES.

Existen varios sistemas que contribuyen a la terminacin o inactivacin de las reacciones de los radicales libres: 1. Los antioxidantes exgenos o endgenos, como la vitamina E, los compuestos que contienen sulfhidrilo (cisterna, glutation, D-penicilamina), protenas sricas como la ceruloplasmina y transferrina, bloquean la iniciacin de la formacin de radicales libres o los inactivan eliminndolos. 2. Enzima eliminadoras (gran importancia en mitocondrias y en peroxisomas): Hay una serie de enzimas, que se encargan de eliminar radicales libres haciendo con ellos reacciones:  SUPERXIDO DISMUTASA: que transforma el superxido en perxido de hidrgeno.  CATALASA: que reside en los peroxisomas y se encarga de descomponer el perxido de hidrgeno en dos molculas de agua y una de oxgeno.  GLUTATION PEROXIDASA: que cataliza la facultad del glutation reducido de liberar hidrgeno del SH a radical hidroxilo o a perxido de hidrgeno. 3. Eliminacin por desaparicin espontnea al existir un sistema de reaccin ptima.

EL CALCIO Y LA LESIN TISULAR.

Cuando dentro de una clula sube el nivel citoslico de calcio, se activan en ella una serie de enzimas como:  Fosfolipasa  Atp-asa  Proteasa que generan lesiones celulares en los fosfolpidos, se produce una disminucin del ATP y se rompen las membranas y protenas del citoesqueleto. Son agresiones tan perjudiciales para la clula como las causadas por los radicales libres. Por lo tanto: El nivel elevado del in de calcio intracelular activa enzimas citolticas empleadas en el proceso de apoptosis que van a desencadenar en la clula de fenmenos dainos. EL CALCIO EN ELEVADAS CONCENTRACIONES INTRACELULALARES ES UN AGENTE DAINO DE MAGNITUD COMPARADA A LOS RADICALES LIBRES.

MUERTE CELULAR: NECROBIOSIS Y NECROSIS.

en: Morfologa de la lesin: Los cambios morfolgicos inducidos por varios estmulos se pueden dividir

1. Patrones de lesin celular aguda: Pueden ser reversibles (tumefaccin celular aguda y los cambios adiposos) o irreversibles (necrosis y apoptosis). 2. Alteraciones subcelulares que se presentan como respuestas a estmulos nocivos crnicos.

20 3. Acumulaciones intracelulares de numerosas sustancias (lpidos, carbohidratos...) como resultado de alteraciones en el metabolismo.

NECROBIOSIS: Son el conjunto de alteraciones subletales que se producen

en la clula. La gran mayora de ellas son reversibles. La clula que avanza por este camino sufre 4 estados: 1. TUMEFACCIN CELULAR AGUDA. (reversible) Es la primera manifestacin ante cualquier agresin aguda y se produce por entrada de agua y/o acumulacin de grasa. Cualquier agresin que consiga daar la membrana plasmtica provoca entrada de agua en la clula o degeneracin hidrpica. La clula aparece hinchada y con hiperclaridad citoplasmtica. Comienza por las mitocondrias y luego afecta al Retculo Endoplsmico y al Aparato de Golgi. 2. DEPLECCIN DEL GLUCGENO. Como resultado de la paralizacin de la fosforilacin oxidativa, y dado que como la clula sigue buscando fuentes energticas mediante vas metablicas alternativas la consecuencia inmediata ser un aumento del cido lctico, liberacin de enzimas lisosomiales (por la disminucin del Ph), liberacin de radicales libres y aumento de la presin osmtica que tendr como resultado la entrada en la lula de ms agua. 3. MODIFICACIONES DE LAS MEMBRANAS. (irreversible y signo de necrosis celular inmediata) Es un estado avanzado y pueden ser modicaciones en forma de : vesculas, guras de mielina, reacciones de precipitacin y coagulacin del citoplasma supercial. 4. CAMBIOS EN LOS ORGNULOS CELULARES. (necrosis activa)

NECROSIS: Dao celular letal e irreversible. Son los cambios morfologicos que siguen a la muerte celular en un organismo o tejido vivo, y que se deben a la progresiva accin degradativa de las enzimas sobre las clulas lesionadas de forma letal. Es por lo tanto la parada denitiva de todas las funciones de la clula. Se puede considerar que inicialmente la clula sufre una serie de modicaciones necrobiticas hasta el punto en que es imposible el retorno y desemboca irremediablemente en la necrosis. Hay dos procesos que desencadenan los cambios de necrosis:
1. La digestin enzimtica de la clula. Vamos a distinguir la autolisis (los enzimas derivan de los lisosomas de la propia clula) y la heterolisis (los enzimas son de los lisosomas de los leucocitos). 2. Desnaturalizacin de proteinas. Son lesiones prenecrticas y necrticas, como: dilatacin y fragmentacin de cisternas del RER, REL, disociacin de ribosomas, rotura de membranas con formacin de guaras de mielina, dilatacin de cisternas y disolucin del aparato de Golgi adems de tumefaccin mitocondrial.

MORFOLOGA DE LAS CLULAS NECRTICAS:

La clula muerta suele mostrar una serie de caractersticas comunes a todas las clulas en necrosis que son bsicamente las siguientes: a) en el citoplasma:       Marcada eosinolia Aspecto ms esmerilado y homogneo, por la prdida del glucgeno Desaparicin de orgnulos Vacuolizacin generalizada Rotura de membranas Densidades oculentas en las mitocondrias

b) en el ncleo:  Rotura de las membranas  Cariolisis o disolucin nuclear  Cariorrexis o fragmentacin del ncleo

21  Picnosis o condensacin del ncleo. La cariolisis y la cariorrexis se pueden dar colectivamente o individualmente. Si se da colectivamente depender de la forma que predomine una u otra.

TIPOS DE NECROSIS.
Los tipos de necrosis son muy variados, dependiendo de la causa, del tipo de tejido, de la rapidez de instauracin y de la temperatura. Los tipos fundamentales de necrosis son 5 y luego pueden describirse 3 ms que se dan en caractersticas especiales: 1. NECROSIS POR COAGULACIN. Se produce por una desnaturalizacin de las protenas que causa una coagulacin de las mismas. Es la forma ms frecuente de necrosis y se ocasiona una prdida de agua que genera la conversin de las clulas en una lpida acidla y opaca, con prdida del ncleo pero conservacin de la morfologa estructural del tejido. No hay liberacin enzimtica ni compromiso de membranas, por ello la clula queda momicada. Puede afectar a grupos de clulas independientes y sobre las reas de necrosis es frecuente que se deposite calcio. Suele ser consecuencia de una isquemia grave y brusca y se d frecuentemente en rganos slidos como: rin, bazo, corazn, y en los tumores de crecimiento rpido y en las necrosis producidas por quemaduras de cidos o bases fuertes. 2. NECROSIS CASEOSA. Es una forma tpica de necrosis de tuberculosis y algunas enfermedades infecciosas granulomatosas como la tularemia, slis, lepra o histoplasmosis. Se genera un proceso de necrosis por coagulacin a la que se aaden lpidos complejos procedentes de la cpsula de los bacilos destruidos, que los macrfagos no son capaces de fagocitar. Al microscopio se observa una masa poco estructurada, homognea y eosinla, con un ncleo central caseoso. Tambin es frecuente la calcicacin. 3. NECROSIS POR LICUEFACCIN O COALICUATIVA. Es la consecuencia de la accin de potentes enzimas hidrolticos producida cuando prevalece la autlisis y heterlisis sobre otras circunstancias. Es el patrn caracterstico de necrosis del tejido cerebral y de las inamaciones purulentas, sobre todo en las lesiones isqumicas, aunque tambin aparece en algunas necrosis cerebrales bacterianas. En este tipo de necrosis el tejido se transforma en una masa de detritus que tiende a salir y forma fstulas de trayectos irregulares que desembocan en cavidades naturales o en la supercie epidrmica. 4. NECROSIS GANGRENOSA. Se produce en los tejidos mesenquimales, especialmente en las extremidades inferiores, por un proceso de isquemia, generalmente debido a trombosis o arteriopatias, que posteriormente sufre una sobreinfeccin. - Los tejidos experimentan muerte celular de tipo isqumico y necrosis de coagulacin como primer patrn. Este tipo de necrosis produce una desecacin de la extremidad, generndose GANGRENA SECA. - Posteriormente se genera una necrosis de coagulacin modicada por la accin colicuativa de las bacterias y de los leucocitos que estn inltrando el tejido. Este tipo de necrosis genera tejido crepitante, bullas de gas y al ser lquida (coalicuativa) se conoce con el nombre de GANGRENA HMEDA. 5. NECROSIS QUMICA. Es una forma de necrosis colicuativa producida por cidos o lcalis fuertes segregados por el pncreas exocrino como ocurre en la pancreatitis aguda y en algunos tumores pancreticos. Las proteasas digieren los tejidos, incluidos los vasos sanguneos y las lipasas hidrolizan la grasa peripancretica, epiploica y del meso. Microscpicamente se forma una masa de clulas digeridas y necrticas y se forman focos de calcicacin frecuentemente. 6. NECROSIS HEMORRGICA. Se produce por un acmulo de sangre en los tejidos que causa una necrosis tisular de carcter isqumico. El tejido aparece de color morado por la hemoglobina reducida y suele darse en: infecciones con lesin de la pared de los vasos, infartos hemorrgicos de rganos con doble

22 circulacin, hemorragias intraparenquimatosas y en el hgado en los pacientes con insuciencia cardaca derecha grave. 7. NECROSIS GRASA DE ORIGEN TRAUMTICO. Los traumatismos sobre el tejido graso producen una rotura de adipocitos con la consiguiente liberacin de grasas neutras que son fagocitadas por macrfagos y clulas gigantes multinucleadas. Sobre el foco de necrosis aparece luego tejido denso y cicatricial. Es la necrosis tpica de la post-ciruga de mama y puede llevar a confusin sobre un nuevo carcinoma radiolgica y clnicamente. 8. NECROSIS FIBRINOIDE. Se produce por depsito de brina en los tejidos por un mecanismo no conocido. Es la forma ms caracterstica de necrosis en las enfermedades en que se dan depsitos de inmunocomplejos. La produccin y acmulo de inmunoglobulinas bloque los vasos, (ya que se deposita preferentemente en la pared y alrededor de los mismos) y se genera necrosis.