UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

2da PRCTICA Medios de cultivo: clasificacin y preparacin

Curso: Microbiologa pesquera

Alumna: Marilli Milagros Sosa Sarmiento

Profesora: Nancy Martinez Ordinola

Grupo: F*

Mesa: 1

Fecha de ejecucin: 28 marzo del 2011

Fecha de entrega: 4 abril del 2011

2011

INTRODUCCION Medios de cultivo de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.

REVISION BIBLIOGRAFICA Refutacin de la teora de la generacin espontnea Es sorprendente el impacto que caus sobre occidente la idea creada por Aristteles sobre la generacin espontnea, aunque hoy nos parezca absurda fue tomada en tiempos atrs como nica verdad sobre el origen de la vida. Esta idea permaneci durante mil aos y en ese lapso sufri grandes cambios, sobre todo los hechos por la Iglesia, gracias a santo Toms de Aquino (cuyas ideas an permanecen vigentes), pero no fue sino hasta despus de la creacin del microscopio cuando la idea de la generacin espontnea fue refutada por completo, los experimentos de Francisco Redi,Lazzaro Spallanzani, Luis Pasteur y John Tyndall dieron paso a la desaparicin paulatina de la errnea creencia sobre el origen de la vida. El proceso de la extincin de la generacin espontnea inicia con Francisco Redi (1626-1698) cuyos experimentos abren puerta al largo camino que signific un lucha poltico-religiosa e intelectual. Su inconformidad con las creencias establecidas lo llevaron a poner a prueba la veracidad de las mismas, por lo que ide un experimento sencillo pero magistral, con el cual pudo comprobar su hiptesis. Redi coloc en varios frascos un trozo de carne; sell la mitad, despus de una minuciosa esterilizacin y dej abiertos la otra mitad. Al cabo de varios das descubri que la mitad de los frascos con el trozo de carne y que no haban sido sellados tenan en su interior larvas de moscas deslizndose sobre la carne, en contraste con los otros frascos que a pesar de haberse podrido lo que contenan en el interior, no presentaban larva alguna. Redi realiz otro experimento creyendo que el aire podra ser el culpable de la aparicin de las larvas, por lo que haciendo algo similar que en la ocasin pasada, pero con el nico detalle de que esta vez no sell los frascos hermticamente, sino que coloc una gasa que impidiera el paso de todo organismo (moscas) pero no el del aire, esper para ver que suceda, encontrndose das despus con los mismos resultados que el experimento anterior. Estos sencillos resultados pusieron la piedra inicial que marc el principio de la biognesis. Aunque los descubrimientos de Redi sacudieron por completo todas la creencias sobre el origen de la vida, la generacin espontnea result ser ms resistente de lo pensado, esto gracias a los agregados del bilogo ingls John Needham, los cuales hablan sobre fuerzas vitales que animan la materia inerte. Muy a pesar de los descubrimientos de Lazaro Spalanzani la generacin espontnea no se vio enterrada sino hasta la llegada de Louis Pasteur y su pasteurizacin. Pasteur descubri que el aire contena organismos invisibles que eran los culpables de la descomposicin de los alimentos, utiliz un matraz de cuello de cisne (matraz Pasteur) con el cual asegur un libre flujo de aire dentro del matraz, pero no un libre flujo de los microorganismos que ste transportaba, quedando atrapados en un filtro dentro de la u del cuello, con este mtodo

asegur que los alimentos perduraran durante tiempos largos sin echarse a perder. Gracias a esto y a los descubrimientos de Lazaro Spallanzani, la generacin espontnea qued bajo tierra, pero fue John Tydall quien coloc el epitafio. John Tydall estudi fsica y se interes mucho en los fenmenos de la luz, con la que pudo estudiar las partculas suspendidas en el aire y que fueron llamadas tiempo atrs por Ferdinan Cohen bacterias. Tyndall descubri que estas partculas desviaban la luz y se dio cuenta de que el proceso de putrefaccin estaba estrechamente relacionado con la presencia de estas partculas suspendidas. Con esto se ha visto de manera somera la trayectoria que sigui la idea de la generacin espontnea desde sus inicios hasta su desaparicin total (hablando con hiperbolismo, pues aun hoy en da quedan secuelas de su paso por nuestra cultura) en la que se involucraron fuertemente Redi, Spallanzani, Pasteur y Tyndall. Creo que aunque en este trabajo no se habl con decencia sobre Spallanzani, es de menester decir que sus investigaciones junto con las de Redi, son el mazo que destruy casi por completo la creencia de la generacin espontnea.

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Segn su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente. b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida cual y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura Segn su estado fsico: 1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin. 2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su punto de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede utilizarse para cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar:Es un polmero de azcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molcula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39C y nose funde por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez fundido alrededor de los 45C. 3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias Segn su utilizacin: 1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms

conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

MATERIALES Y MTODOS -polvos de los medios de cultivo -balanza -incubadora -tubos -agua destilada -Bao Maria (100C) -pipetas -autoclave

MESA 1 a) 200ML DE SOLUCION SALINA PEPTONADA Ingredientes: o o o NaCl Peptona Agua destilada 8.5g 1g 1L

Colocar la solucin en tubos de 9ml. Taponar y esterilizar.Disolver los componentes hirvindolos en aprox. 1000 ml de agua destilada .ajustar el PH de solucin .Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presin (121C)

b) 300ML DE PLATE COUNT AGAR Ingredientes: o o o o o Triptona Glucosa Extracto de levadura Agar Agua destilada 5g 1g 2.5g 15g 1L

Hacer disoluciones de la muestra al 1/10. 1/100.etc, segn estime el grado de contaminacin. Poner 1mL de cada disolucin decimal en placas de Petri (por duplicado).Aadir 15ml de medio de cultivo (fundido, a 45C en un bao termosttico) y dar movimientos circulares y de vaivn para que se distribuya la muestra uniformemente. Incubar: una serie de placas a 20C/ 3 das (psicrfilos) y otra serie de placas a 35C/ 2 das (mesfilos). Para incubar las placas introducirlas invertidas en la estufa. c) 100ML DE CALDO LAURIL SULFATO Ingredientes: o o o o o o Triptosa Lactosa NaCl Laurel sulfato de sodio Fosfato dipotsico Fosfato monopotsico 20g 5g 5g 0.1g 2.75g 2.75g

Suspender 35,6g del polvo en 1litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullicin hasta la disolucin total. Distribuir en tubos conteniendo tubos de fermentacin. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121C.

RESULTADOS Y DISCUSIONES El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas,Qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. Los diferentes medios de cultivo muestran diferente crecimiento bacteriano debido a que cada medio de cultivo tiene su propia tcnica de disponer a la suspensin bacteriana. Las bacterias deben ser evaluadas luego de 24h tras ser inoculadas y estar bajo las condiciones dadas, puesto que se asume que ha asimilado todo el nutriente proporcionado por el agar en su diferente consistencia.

CONCLUSIONES Creo que es sper importante los medios de cultivo bacterianos, ya que gracias a ellos podemos investigar los miles de tipos de bacterias, su composicin, su alimentacin, la manera en que se reproducen y cuan patgenos son. Gracias a estos medios podemos incubar las bacterias provenientes de cualquier lugar, pues como ya sabemos las hay en todos lados. Es importantsima esta incubacin, ya que es aqu donde se desarrollaran las bacterias, claro dependiendo de factores qumicos y fsicos para su desarrollo incluyendo tambin los mltiples agares, caldos o semi- agares, ya que estos son el medio nutricional para que nuestros microorganismos puedan crecer y as poder estudiarlos. Por medio de esta practica y al realizar su investigacin correspondiente, la preparacin para un medio de cultivo de logro, a pesar de algunos errores que creo son naturales al ser la primera vez que realizamos un trabajo de este tipo. Son muchos los progresos obtenidos a partir de estos medios, obviamente cultivando bacterias, uno de los ms importantes ha sido la Pasteurizacin, creada por Louis Pasteur.

RECOMENDACIONES Que el uso de los guantes y el cubre bocas, as como la limpieza del lugar donde realizaremos la practica, son aspectos muy importantes para un desempeo y resultado mucho mas favorable.

CUESTIONARIO MANITOL SALT AGAR Ingredientes o o o o o o o Extracto de carne 1g

Peptona de casena 5g Peptona de carne NaCl Manitol Rojo de fenol Agar 5g 75g 10g 0.025g 15g PH 7.4

Preparacin

Pesar 11g de esta mezcla y se deja en erlenmeyer y se aade el agua destilada 1 litro, se homogeniza en caliente, luego se esteriliza en autoclave 15 libras de presin por 15 minutos. El servido se realiza cuando el medio esta 45C a 50C, se agita suavemente el erlenmeyer para una total homogenizacin y con toda asepsia, junto con el mechero encendido, se vierte el medio aproximadamente 15ml dentro de la placa estril, endurar y rotular. La siembra se practica con una buena asada, se realizan las estras girando la placa para abarcar toda el rea del medio, las placas se dejan en la estufa a 37C durante 3 das.

Microorganismos que crecen en el medio Es un medio selectivo para el asilamiento de staphylococcus, presenta alta concentracin de salinidad que inhibe el desarrollo de bacterias halofitas y el manitol es desdoblado por especies patgenas, debe sembrarse con un buen inoculo a partir de muestras donde se sospecha presencia de sthaphylococcus

BAIRD PARKER AGAR

Ingredientes

o o o

Extracto de levadura Extracto de carne Triptosa

1g 5g 10g

o o o o o

LiCl Glicina Piruvato de sodio Agar Agua destilada

5g 12g 10g 15g 1000ml

Preparacin Pesar 60 gramos de este polvo( Baird Parker agar) en 1000 ml de agua destilada, disolver en caliente y esterilizar en autoclave a 121C X 15 minutos, cuando la temperatura esta 50C aadir una emulsin filtrada de yema de huevo, disuelto en una solucin salina 1+1(una yema mas una volumen de solucin salina igual al de la yema), homogenizar y verter para verter sobre el frasco que contiene el medio base, lo mismo aadir 1 ml de solucin de telurito de potasio al 3.5%, luego repartir el medio en placas petri, hacer el control de esterilidad por 24 horas.

Microorganismos que crecen en el medio Este medio se desarrollan staphylococcus,bacillus,micrococcus y levaduras

SALMONELLA SHIGELLA AGAR Ingredientes o o o Extracto de carne Peptona Lactosa 5g 5g 10g

o o o o o o o o

Sales biliares Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato ferrico Rojo neutro Verde brillante Agar agua destilada

8.5g 8.5g 8.5g 1g 0.025g 0.033g 12.5g 1000ml

Preparacin Pesar 60g del polvo para 1 litro de agua destilada, usar papel manteca para un solo uso, espolvear directamente del frasco al papel, evitar inhalar el polvo del medio de cultivo, en el ermeleyer disolver bien el medio antes de calentar , luego continuar disolviendo sumergiendo el frasco en agua hirviente en ebullicin 2 -3 minutos, este medio no es necesario esterilizar en autoclave por si solo ya inhibe a las bacterias ambientales, rotar el frasco para homogenizar bien el medio y servir en placas petri estriles,15ml X placa, dejar enfriar.

Microorganismos que crecen en el medio Este medio se desarrollan las colonias de salmonellas grandes, hmedas y shigellas son circulares transparentes y en caso de las coliformes sern cremosas y rojizas

A. Klebsiella pneumoniae D: Proteus mirabilis

B. Escherichia coli E: Pseudomona aeruginosa

C. Salmonella

AGAR TSI (AGAR HIERRO TRES AZUCARES) Ingredientes o o o o o o o o o o o o o Extracto de carne Extracto de levadura Peptona Proteosa peptona Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato ferroso Tiosulfato de sodio NaCl Rojo fenol Agar Agua destilada 3g 3g 15g 5g 10g 10g 1g 0.2g 0.2g 5g 0.024g 12g 1000ml PH 7.4

Preparacin Pesar 60g de TSI para 1000ml de agua destilada, remueve el polvo en el erlenmeyer usando bagueta de vidrio y agitndose dentro de una olla con agua hirviente o bao mara 100C, se homogeniza el medio , luego se esteriliza en autoclave 121C X 15 minutos, al retirar el medio de la autoclave se rota el frasco para que la homogenizacin sea pareja, se reparte en tubos estriles , medio volumen del tubo y se semi inclina apoyndose en un soporte horizontal, el xito de la reaccin depende de cmo se sirve este medio, al sembrar debe usarse asa de siembra en punta, practicar la estra en plano inclinado y hacer la picadura hasta al fondo del tubo por la central sin romper el medio, estos medios deben ser controlados 24 horas antes de ser sembrados, para estar seguros de su esterilidad. Microorganismos que crecen en el medio Es uno de los medios bioqumicos, una de las caractersticas de este medio es que no tienen inhibidores pero puede llevar indicadores de viraje de PH. El TSI, se usa para el estudio metablico de Enterobacterias, Bacillus, Clostridium, Vibrio, Sptreptococcus.

LIA (AGAR LISINA HIERRO) Ingredientes o o o o o o o o o Peptona Lisina Extracto Levadura Tiosulfato de Sodio Glucosa Citrato de Hierro y Amonio Prpura Bromocresol Agar Agua destilada 5g 10g 3g 0.04g 1g 0.5g 0.02g 14g 1000ml

Preparacin Suspender 23 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa Disolucin y hervir durante un minuto. Dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar en posicin horizontal. 1. A partir de una colonia aislada sembrar el medio por picadura en el fondo y por estra en la Superficie. 2. Incubar a 35 2C durante 18 a 48 horas. 3. Examinar los tubos para observar cambios de color y ennegrecimiento

Microorganismos que crecen en el medio Este medio bioquimico contiene lisina, un aminocido que puede descarboxilarse, posee 6 carbonos con un COOH y 2 NH2. Dentro de las Enterobacterias: Shigella, Salmonella, Proteus vulgaris y proteus mirabilis

CALDO SELENITO Ingredientes o o o o o Peptona Lactosa Fosfato de sodio Selenito de sodio Agua destilada 5g 4g 10g 4g 1000ml

Preparacin Suspender 23 g del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar ligeramente hasta su disolucin completa. Evite el calentamiento excesivo. No esterilizar en autoclave. Distribuir en tubos estriles un volumen no menor a 5 ml. Se recomienda guardar en heladera si no se usa de inmediato.

Microorganismos que crecen en el medio Caldo selenito recomendado para o enriquecimiento de Salmonella sp. selenito como inibidor da microbiota entrica, principalmente Escherichia coli e Enterococcus, favoreciendo o crecimiento das especies de Salmonella

AGAR BISMUTO SULFITO Ingredientes o Extracto de carne 5g o Digerido pancretico de casena 5g o Digerido pptico de tejido animal 5g o Dextrosa 5g o Fosfato de sodio 4g o Sulfato ferroso 0.3g o Indicador de sulfito de bismuto 8g o Agar 20g o Verde brillante 0.025g o Agua destilada 1.000 ml

Preparacin Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando Frecuentemente y dejar hervir no ms de 1 a 2 minutos. Evitar el sobrecalentamiento. Enfriar entre 50C y 55C, mezclar suavemente para que se disperse el precipitado, colocar 20 mL de medio por cada placa y dejar solidificar. Este medio no puede ser esterilizado en autoclave.

Microorganismos que crecen en el medio Salmonella typhi Salmonella typhimurium Colonias con centro negro, bordes claros, a las 48 h con halo negro grisceo y brillo metlico Colonias negras a verdes

Escherichia coli Proteus mirabilis Staphylococcus aureus

Crecimiento inhibido o colonias verdes Colonias pequeas verde plido a veces mucoides, sin swarming Crecimiento inhibido

CALDO TETRATIONATO Ingredientes o o o o Mezcla de Peptonas 5g Carbonato de Calcio 10g Sales biliares 1g Tiosulfato de Sodio 30g

Preparacin Suspender 46 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa Disolucin y hervir durante un minuto. No esterilizar en autoclave. Adicionar 20 mL de solucin yodo-yodurada (6 g de yodo en cristales y 5g de yoduro de potasio en 20mL De agua) antes de utilizarse. Dispensar en tubos estriles y utilizar inmediatamente. Referirse a los procedimientos y Mtodos Estndar para el aislamiento e identificacin de Salmonella. Despus de incubar a 35 C por 12 a 24 horas, observar la presencia de desarrollo indicada por la Turbidez del medio. Subcultivar en medios selectivos apropiados.

Microorganismos que crecen en el medio Es un medio selectivo utilizado para el enriquecimiento de Salmonella.

BILIS (CALDO LACTOSA VERDE BRILLANTE BILIS) Ingredientes o o o o Peptona Lactosa 10g 10g

Sales biliares 20g Verde brillante 0.013g

Preparacin Disolver 40g de polvo en 1000ml de agua destilada, homogenizar en caliente y repartir en tubos que contiene el tubito Durham, para que el liquido ingrese totalmenmte al tubito invertido, colocar celofan en le tubo grande y voltear con fuerza con el pulgar asegurndose que no debe quedar burbuja dentro del tubo Durham, tapar con algodn y estrelizar a 121C X 15minutos en autoclave.

Microorganismos que crecen en el medio Medio selectivo para la deteccin del grupo coliforme a partir de agua, leche, derivados lcteos y otros productos de importancia sanitaria e investigar la presencia rpida de Escherichia coli por fluorescencia y confirmacin por la formacin de gas y prueba del indol

CALDO ESCHERICHIA COLI

Ingredientes

o o o o o o o

Cloruro de sodio 4-Metilumbeliferil--D-glucornido Fosfato dipotsico Peptona biotriptasa Fosfato monopotsico Lactosa Sales biliares

5g 0.05g 2.75g 20g 2.75 5g 1.5g

Preparacin

Rehidratar 37 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el Punto de ebullicin durante 1 minuto para disolverlo por completo. Distribuir en tubos de ensayo o frascos con campana de Durham. Esterilizar en autoclave a 121C (15 lbs de presin) durante 15 minutos. Conservar en refrigeracin de 2 a 8C. Antes de utilizar el medio verificar que en la campana no existan burbujas de aire.

Microorganismos que crecen en el medio

Para deteccin de coliformes y demostracin rpida de Escherichia coli por fluorescencia a partir de agua, alimentos y diversas muestras, despus de incubar 18 24 h a 35C. Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella typhimurium

TCBS (AGAR TIOSULFATO, CITRATO, BILIS SACAROSA) Ingredientes o o o o o o o o o o o o o o Extracto de Levadura 5g Sacarosa 20g Peptona de Casena 5g Cloruro de Sodio 10g Peptona de Carne 5g Tiosulfato de Sodio 10g Citrato de Sodio 10g Bilis disecada Colato de Sodio 3g Citrato de Hierro 1g Azul de Timol 0.04g

5g

Azul de Bromotimol 0.04g Agar Agua destilada 14g 1000ml

Preparacin Suspender 86 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir Durante un minuto. Enfriar a una temperatura entre 45-50 C y vaciar en placas Petri estriles. No esterilizar en autoclave. Sembrar las muestras tan pronto lleguen al laboratorio. Muestras como hisopos rectales, heces, pescado y otros alimentos pueden ser depositadas directamente en el medio. Se recomiendan colocar inculos pesados ya que los vibrios tienden a morir rpidamente, esto especialmente cuando las muestras no son frescas. Si las muestras tienen que ser transportadas al Laboratorio, se recomienda utilizar el medio de Cary Blair como medio de transporte. Las muestras no deben ser congeladas. Incubar las placas protegidas de la luz a 35 2C durante 18 a 24 horas. Si los resultados son negativos, reincubar por 24 Horas ms. Microorganismos que crecen en el medio Vibrio cholerae,vibrio parahaemolyticus, vibrio alginolyticus, Pseudomonas, Aeromonas, Enterobacteriaceas.

CALDO LAUREL SULFATO TRIPTOSA Ingredientes o o o o o o Triptosa Lactosa NaCl Laurel sulfato de sodio Fosfato dipotsico Fosfato monopotsico 20g 5g 5g 0.1g 2.75g 2.75g

Preparacin Suspender 35,6 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullicin hasta la disolucin total. Distribuir en tubos conteniendo tubos de fermentacin. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121C.

Microorganismos que crecen en el medio Medio rico en nutrientes, que permite un rpido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la lactosa, an de los fermentadores lentos. La triptosa es la fuente de nitrgeno, vitaminas, minerales y aminocidos, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompaante. Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y gas, ste ltimo se evidencia al utilizar las campanas Durham.

BIBLIOGRAFIA ABALDE, J.E., CID, A. y TORRES, E. 1999. "Ensayos microbiolgicos". Faculta de de Ciencias. Universidad de Corua. A Corua. DAZ, R., GAMAZO, C. y LPEZ-GOI, I. (Drts.) 1995. "Manual prctico de Microbiologa". Ed. Masson S.A. Barcelona. INGRAHAM, J.L. y INGRAHAM, C.A. 1998. "Introduccin a la Microbiologa". Vol.1 y 2. Ed. Reverte S.A. Barcelona. GRANADOS, R. y VILLAVERDE, M.C. 1997. "Microbiologa. Bacteriologa. Medios de cultivo.". Ed. Paraninfo. Madrid. MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. y PARKER, J. 1997. "Brock. Biologa de los microorganismos". 8 Edicin. Ed. Prentice Hall. Madrid.

SANCHO, J., BALDRS, R. Y SNCHEZ, M. 1996. "Medios de cultivo para Microbiologa". ADSAMICRO.