IV.

DISCUSIN

La neosporosis est considerada en la actualidad como una de las principales causas de aborto en ganado vacuno de todo el mundo (Anderson y col., 2000; Dubey, 2003; Dubey y col., 2006). En numerosos pases de Amrica Latina se ha detectado N. caninum mediante tcnicas serolgicas e IHQ. Sin embargo, en la mayora de las ocasiones, no se pueden realizar comparaciones de los datos entre pases, ya que se utilizaron diferentes tcnicas, como tambin se consideraron distintos tipos de animales entre los estudios, siendo en algunas determinaciones animales al azar y en otras, animales que han presentado problemas reproductivos previos. En concreto, en Venezuela, estudios previos sobre N. caninum han puesto de manifiesto la presencia de la infeccin en los rebaos mediante serologa (Lista-Alves y col., 2006, Escalona y col., 2010). Adems, Obando y col., (2010) reportan una asociacin significativa entre la seropositividad frente N. caninum y la ocurrencia de los abortos (P = 0,009) en un rebao con abortos endmicos en Venezuela, indicando que el protozoario tiene una elevada implicacin en la etiologa de los mismos.

En esta tesis, el diagnstico serolgico se realiz mediante la tcnica de ELISA, usando el ELISA IDEXX que ha sido ampliamente utilizado en estudios previos a ste (Schares y col., 1999; Wouda y col., 1998; Bartels y col., 2005; Schares y col., 2004; Von Blumrder y col., 2004) para el diagnstico especfico de abortos y /o obtencin de informacin sobre la infeccin con posibilidad de identificar los animales seropositivos y la va de transmisin de la infeccin en los rebaos vacunos (Par y col., 1995; Par y col., 1997). Todos los rebaos analizados presentaron algn animal con anticuerpos frente a N. caninum, lo que evidenci la gran diseminacin de la infeccin por N. caninum en la zona. La prevalencia total del estudio fue del 28,1% con tasas de prevalencia que variaron entre fincas. El resultado global obtenido supera los valores de seropositividad encontrados en estudios previos realizados en Venezuela, donde se report una prevalencia de infeccin con N. caninum de 20,66% en el estado Falcn (Fernndez, 2004), 11,3% reportado por Lista-Alves y col. en el 2006, 13% en el estado Gurico y 17% en el sur del estado Aragua (Len y col., 2007), o 17,09% en el estado Yaracuy (Escalona y col., 2010). Por otro lado, es inferior al 44% de prevalencia encontrada por Obando y col., (2010), en un rebao con abortos endmicos. De igual forma, los resultados obtenidos son similares a los valores reportados en diversos pases del mundo (Jensen y col., 1999; Moore y col., 2002; Ragozo y col., 2003; Sartor y col., 2005; Corbellini y col., 2006).

Se observaron diferencias significativas entre los estados analizados, con una mayor seroprevalencia de anticuerpos frente al parsito en el estado Falcn (39,1% de seroprevalencia), seguido por el estado Lara (27,1% de seroprevalencia) y finalmente el estado Portuguesa (24,3% de seroprevalencia). De acuerdo con estos resultados, Del Campo y col., (2003), reportaron diferencias significativas en diversas regiones geogrficas del Per.

El ciclo de vida de los protozoarios tiene una estrecha relacin con el medio ambiente, principalmente con la temperatura, la humedad relativa, la humedad del suelo, la precipitacin pluvial, el tipo de pastura, y la radiacin solar. Los mayores porcentajes de seroprevalencia contra el parsito se encontraron en el Estado Falcn, que posee un clima semirido hmedo, con escasas precipitaciones y elevadas temperaturas anuales promedio. Por otro lado, se observaron menores porcentajes de prevalencia en el estado Lara, donde el clima es tropical seco y con temperatura media anual relativamente menores que las vistas en Falcn y Portuguesa. Es posible pensar, que las condiciones de alta humedad relativa y de altas temperaturas, favorecen de alguna manera la presencia del parasito en las ganaderas incluidas en el estudio. As, los resultados parecen indicar la influencia de las caractersticas climticas de los estados respecto a la infeccin por N. caninum en Venezuela. Estudios previos han indicado el papel de la temperatura ambiental, las lluvias y la humedad, en los niveles de seroprevalencia y ocurrencia de abortos asociados a N. caninum (Schares y col., 2004; Rinaldi y col., 2005; Lpez-Gatius y col., 2005a). Romero y col. (2005) sugieren que la seroprevalencia del parsito en el rebao y entre rebaos, podra verse favorecida por la supervivencia de los ooquistes del parsito y por su diseminacin en los distintos perodos climticos del ao. En este sentido, se ha mencionado que la incidencia de temperaturas ambientales elevadas podra representar un factor predisponente para la infeccin por este protozoario (Cheadle y col., 1999; Wouda y col., 1999). Un estudio epidemiolgico realizado en dos regiones diferentes de Brasil, detect que los animales ubicados en la regin con mayor humedad relativa, presentaban ms riesgo de exposicin (Corbellini y col., 2006). De igual modo, en Francia se mostr que, aunque los abortos asociados a Neospora se presentan durante todo el ao, presentan un pico en el verano (Pitel y col., 2001). Un mayor riesgo en la poca de temperaturas elevadas sugiere que una esporulacin ms rpida en estas condiciones, lo cual puede incrementar la oportunidad de infeccin de los bovinos, si el alimento, los pastos o el agua de bebida contaminados son ingeridos (Schares y col., 2004). Por otro lado, estudios realizados en Alemania (Schares y col., 2003) e Italia indicaron relacin entre la temperatura y los perodos de lluvias con la presencia de abortos por N. caninum. (Bartels y col., 2006). Esta relacin se observ tambin en zonas ridas de Espaa (Lpez-Gatius y col., 2005) donde se encontr un incremento en la probabilidad de aborto en el segundo trimestre de la gestacin, a medida que aumentaban los valores de precipitacin. Tales hallazgos suponen que el aumento de las precipitaciones representa un estrs directo e indirecto en los animales, lo que poda convertirse en un factor inmunosupresor que provoca recrudescencia de neosporosis crnica. Incluso, en el 2004, Nelson afirma que la actividad del sistema inmune puede variar dependiendo de las condiciones ambientales. Siendo posible pensar, que las altas temperaturas, lluvias y la humedad relativa puedan tener un efecto en la funcin inmune, cambiando la sensibilidad a la enfermedad.

Las tasas de prevalencia encontradas en esta tesis, tambin variaron entre fincas y se pudieron observar diferencias estadsticamente mayores entre las fincas Tucacas y Torrellero en los estados de Falcn y Lara, respectivamente. La finca Sicarigua, en el estado Lara, present la menor seroprevalencia, mientras el resto de fincas no mostraron diferencias significativas respecto a las anteriores. Por tanto, adems de las caractersticas climatolgicas de cada estado el efecto del manejo de cada finca pareci influir en la seropositividad encontrada en los animales. Todo esto podra llevar a considerar, que adems de las condiciones ecolgicas del parsito, los factores de manejo, factores reproductivos, y la posible interaccin entre hospedadores definitivos y bovinos existentes en los sistemas de produccin en cuestin como parte de los factores que influyeron en la infeccin del ganado vacuno por N. caninum en Venezuela. Un dato interesante fue el hecho de que, aunque las tasas de prevalencia en los rebaos variaron mucho entre ellos, la relacin entre la seropositividad frente a N. caninum y los abortos fue clara, incluso en los rebaos con bajas prevalencias. Entre los factores que resultaron significativos sobre los niveles de seroprevalencia se encontraron tanto factores de manejo como factores reproductivos. Entre los factores de manejo, se encontr menor seroprevalencia de anticuerpos contra el protozoario cuando el hbito de pastoreo no era parte de las prcticas de manejo. Estudios previos muestran que en el ganado lechero criado a pastoreo, los valores de seroprevalencia suelen ser generalmente ms bajos (Barr y col., 2001). Sin embargo, otros estudios consideran que en fincas de gran tamao, con manejos intensivos; la influencia del factor no pastoreo sobre la seroprevalencia de anticuerpos frente a N. caninum, est ms relacionada con la densidad de animales en el rebao, que con las actividad propia de manejo (Otranto y col., 2003). En nuestro caso, los sistemas de produccin que no pastorean a sus animales, tienen un sistema de manejo intensivo y son particularmente muy extensos (ms de 1000 Has); pero la densidad bovina (nmero de bovinos/Has) no es mayor a 2 animales por Has; lo cual, muy posiblemente, influye sobre los menores porcentajes de seroprevalencia encontrados en ellas. Los sistemas de produccin intensivos constituyen un factor de riesgo asociado a la neosporosis bovina (Moore y col., 2002), contrario a lo encontrado para los sistemas extensivos (Moore y col., 2003). En Venezuela, particularmente los rebaos productores de carne son manejados en condiciones extensivas de pastoreo, mientras que los animales productores de leche tienden a manejarse bajo un sistema de semiestabulacin. A la vista de los presentes resultados, estas diferencias en las prcticas de manejo, podran influir en la posibilidad de exposicin al parsito. Otro factor de manejo que influy en la seroprevalencia frente N. caninum fue la fuente de agua en las fincas, en concreto la toma de agua procedente de pozos. Con la necesidad de utilizacin del agua para el riego de cultivos, para dar agua al ganado y para satisfacer las necesidades del mismo hombre; se origin el pozo de agua, que consiste en una excavacin en la tierra hasta encontrar una

vena de agua o reserva de agua subterrnea. Aquellas explotaciones que slo usan pozos, para el agua de bebida de sus animales, tienen mayores valores de seroprevalencia de anticuerpos contra N. caninum. Este resultado podra ser atribuido a que los ooquistes del parsito, presentes en las heces de los perros, pueden contaminar con mayor facilidad los pozos que otro tipo de fuentes de agua, usados en los sistemas de produccin. Adicionalmente, la contaminacin con heces de perros y otros cnidos silvestres, con ooquistes viables, puede realizarse de diversas formas, principalmente por el viento, y no necesariamente por el depsito de heces contaminadas en el agua o en los alrededores de los depsitos de la misma. La regiones incluidas en el estudio poseen un clima muy clido durante todo el ao, en el cual la radiacin solar intensa y las altas temperaturas que se presentan durante el da, desecan en poco tiempo la materia fecal, particularmente en los meses secos, donde el viento puede transportar el excremento de caninos como partculas suspendidas por el aire; los depsitos de agua de bebida son abiertos y susceptibles de ser receptculos de las partculas de polvo transportadas por el viento (Sierra y col., 2011). En ningn establo se filtra o potabiliza el agua de bebida que se distribuye a los corrales, aunque no se tiene informacin acerca del impacto de estas medidas sobre la supervivencia de los ooquistes de N. caninum. Cuando el nmero de animales y el nmero de Has, en el sistema de produccin es mayor, las posibilidades de encontrar animales seropositivos frente al protozoario disminuyen. Igualmente, otros estudios realizados en Venezuela (Escalona y col., 2010), han reportado que la frecuencia de animales seropositivos a N. caninum es considerablemente menor en las fincas con ms de 1.000 animales, en comparacin con las que tienen menor cantidad, aumentando dicha prevalencia en la medida que disminuye la poblacin. Sin embargo, un trabajo realizado en Brasil (Corbellini y col., 2006), mostr que ni el nmero, ni la concentracin de vacas dentro de la finca se asociaron al riesgo de exposicin a N. caninum. Dado que las fincas que tenan ms animales eran tambin las de mayor extensin en Has, se obtuvo que la frecuencia de animales seropositivos a N. caninum fue considerablemente menor en las fincas con ms de 1000 Has, en comparacin con las que tenan menor extensin, aumentando la prevalencia en la medida que disminuy la extensin, observndose una menor presencia de anticuerpos en las fincas con ms de 1000 Has. Adicionalmente, la mayor extensin de la finca en Has, result ser un factor de riesgo asociado a menores valores de seroprevalencia frente al protozoario en los rebaos evaluados; 2,357(1,386:4,006: P<0,05). Estos resultados se atribuyen a la mayor probabilidad de interaccin que puede darse cuando densidad poblacional vacuna es mayor, en espacios ms reducidos, y por tanto a la mayor carga animal que soportan las pasturas en este caso, resultando en una mayor probabilidad de exposicin al agente parasitario. Otros estudios muestran, que la mayor densidad de poblacin bovina en los sistemas de produccin, est asociada a una mayor probabilidad de infeccin con N. caninum (Schares y col., 2009; Escalona y col., 2010).

De igual modo, estudios realizados en rebaos productores de carne de diferentes pases, reportan que la prevalencia de anticuerpos contra N. caninum se asocia a la densidad de animales en las fincas (Barling y col., 2000, 2001; Sanderson y col., 2000; Moore y col., 2003). Sin embargo, otros autores no han encontrado asociacin entre dichas variables (Aguiar y col., 2006; Corbellini y col., 2006). Las diferencias reportadas en la seropositividad a N. caninum con respecto a la aptitud de los animales, pueden ser debidas a las diferencias de manejo existentes en los distintos sistemas de produccin bovina (Moore y col., 2002, 2003b; Corbellini y col., 2006; Dubey y col., 2007). Los sistemas de produccin con mayor nmero de visitas veterinarias por mes, mostraron menores porcentajes de seroprevalencias contra N. caninum. Es importante mencionar que todas las fincas evaluadas cuentan con asistencia veterinaria. Sin embargo, menores prevalencias de anticuerpos contra el protozoario fueron detectados en aquellos rebaos donde la presencia del mdico veterinario en la finca fue ms frecuente, lo que va unido a un mejor manejo reproductivo y de salud animal en esas fincas. En este sentido, el asesoramiento continuo del profesional veterinario brinda la ventaja de establecer un plan de prevencin de enfermedades y minimiza las perdidas posibles por patologas que afectan negativamente el desarrollo del potencial productivo y reproductivo de los animales. Otros factores implicados como la presencia de zorros en las fincas evaluadas y el tipo de reemplazo empleado en los sistemas de produccin, no afect significativamente la seroprevalencia de anticuerpos contra el protozoario en los animales en las fincas analizadas. La introduccin de animales de reemplazo procedentes de otras explotaciones, no es una prctica de manejo habitual en las fincas analizadas excepto en algunos casos que solan comprar animales de feria con fines de mejora gentico. Sin embargo, la influencia de estos casos aislados no afect de manera significativa la presencia de anticuerpos contra N. caninum en el rebao. Hasta la fecha los hospedadores definitivos de N. caninum son cnidos domsticos y silvestres, como el perro, el coyote, el lobo y el dingo (McAllister y col., 1998; Gondim y col., 2004c; King y col., 2010; Dubey y col., 2011). El papel del zorro como hospedador definitivo de N. caninum no est aclarado; en Espaa, se observ la presencia de DNA en tejido cerebral de zorros, que por tanto son hospedadores intermediarios naturales (Almera y col., 2002), pero no se pudo observar la presencia de ooquistes en las heces. Un estudio en Canad observ la presencia de ooquistes en las heces de zorros pero dado que se trataba de infecciones naturales, no fue posible verificar si realmente esos ooquistes haban sido eliminados por los zorros en el ciclo parasitario o haban sido consumidos y eliminados como tales (Wapenaar y col., 2006). Numerosos estudios han observado anticuerpos frente N. caninum en zorros, en algunas ocasiones en prevalencias muy elevadas como las observadas por Marco y col., (2008) en el Noreste de Espaa. Por otro lado, Constantin y col., (2011), concluyen que los zorros, no forman parte del ciclo selvtico de N. caninum. En nuestro

estudio, la presencia de zorros, no parece ser un factor determinante para el mantenimiento de la enfermedad en el pas, pero; no se descarta su participacin en la epidemiologa de la enfermedad en Venezuela. Adems de los factores de manejo previamente citados, los factores reproductivos mostraron una gran influencia en los niveles de seroprevalencia observados en el estudio. De hecho los factores reproductivos explicaron un elevado porcentaje de las variaciones observadas en el estudio. De inters, fue que la presencia de anticuerpos frente N. caninum estuvo relacionada significativamente con el reporte de aborto previo en los animales en los ltimos 3 aos. Estudios previos han indicado que el estado serolgico puede considerarse como un adecuado indicador del riesgo de aborto por N. caninum (Par y col., 1998; Wouda y col., 1998; Davison y col., 1999; Weston y col., 2012). Diferentes estudios epidemiolgicos evidencian que es ms probable que aborten vacas seropositivas a N. caninum, que las seronegativas (Wouda y col., 1999; Anderson y col., 2000; Stenlund, 2000; Dubey, 2003; Moore y col., 2005), siendo el riesgo de abortar 3 a 7 veces mayor en las vacas infectadas, que en las no infectadas (Innes y col., 2001; Williams y col., 2003). Algunos estudios han llegado a encontrar relaciones incluso superiores, como por ejemplo en un brote de abortos asociados a N. caninum se observ que las vacas seropositivas tenan ms de 12 veces ms probabilidades de abortar que las vacas seronegativas (Lpez-Gatius y col., 2004a). La prevalencia general y, en particular, la determinada en vacas con antecedentes de aborto, puede deberse a la situacin endmica de la parasitosis en la zona, donde la transmisin vertical podra ser el mecanismo predominante para mantener la infeccin a travs de sucesivas generaciones, situacin que se ha observado en otros estudios (Schares y col., 2002). Igualmente otros autores han reportado mayor prevalencia de anticuerpos contra el parsito en vacas con antecedentes de aborto (Morales y col., 2001; Locatelli-Dittrich y col., 2001). De igual forma, en un estudio previo en Venezuela, Lista y col., (2006) reportaron que las vacas con historial de aborto tenan 2,71 veces ms riesgo de ser seropositivas que las vacas que no haban abortado. Adems el mayor ndice de abortos se present en aquellos rebaos con mayores porcentajes de seroprevalencia de anticuerpos frente al parsito (39,1%) que podra indicar una cierta relacin causal de N. caninum como causa importante de los abortos en las fincas analizadas. Sin embargo, la relacin directa entre el aborto y la presencia de anticuerpos frente a N. caninum ha de ser muy prudente, dado que N. caninum es un parsito muy bien adaptado al ganado con una transmisin transplacentaria muy eficiente, pero que no produce abortos en un cierto nmero de animales seropositivos. La serologa positiva frente a N. caninum en una hembra que ha abortado, indica que N. caninum podra estar asociada con el aborto y en estos casos individualizados el diagnstico ha de sustentarse en la demostracin de la infeccin en el feto (Jenkins et al., 2000). Es por ello que para considerar a la infeccin por N. caninum como la causa de un brote de abortos, es necesario el estudio de los rebaos completos para comprobar la presencia directa del aborto en las hembras seropositivas y

analizar los fetos abortados para observar lesiones y la presencia del parsito en relacin con los abortos. La confirmacin de DNA en fetos abortados procedentes de madres seropositivas y con lesiones asociadas a N. caninum, fue crucial para indicar que s parece existir una relacin de la presencia de N. caninum como causa de aborto en las fincas analizadas. El hecho de que el componente reproductivo asociado al historial de abortos previos y a los resultados de PCR positivas en las fincas lograron explicar hasta un 67,3% de las varianza encontrada en las fincas, parece ser una prueba ms de la implicacin de N. caninum en los casos de abortos en las fincas de Venezuela. Es posible que otras causas pudieran haber contribuido con la ocurrencia de abortos, siendo conocido que el aborto puede ser ocasionado por muchos factores, infecciosos y no infecciosos (Evermann y col., 1982). Por tratarse de un rebao libre de brucelosis y donde los registros muestran un programa de vacunacin sistemtica contra Leptospira spp. Campylobacter spp y Trichomonas foetus, tambin agentes abortivos, su posible implicacin es muy difcil de aceptar, por tratarse de rebaos donde el manejo reproductivo se fundamenta exclusivamente en la inseminacin artificial y, en consecuencia, no estn dadas las condiciones para que ocurra infeccin y persistencia de estos agentes en el tracto genital de las vacas (Abbitt B., 1998; Horlein y col., 1980). Es conocido, desde hace muchos aos, que el uso de la inseminacin artificial por dos aos consecutivos garantiza la eliminacin del Campylobacter spp del rebao (Clark., 1967). En relacin con los agentes virales, particularmente los virus de rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR) y diarrea viral bovina (DVB), por ser los virus mayormente aceptados como causantes de abortos (Kirbride y col., 1992; Smith C. K., 1997), su contribucin en alguno de dichos eventos pudo haber sido posible, ya que es conocido que el aborto ocasionado por estos virus puede ocurrir an en animales vacunados (Schultz R., 1994; Van Oirschot y col., 1996). Adems ha sido demostrado que el virus de DVB tiene la particularidad de potenciar el efecto abortifero de N. caninum (Bjorkman y col., 2000), as como de otros agentes infecciosos (Potgieter L.N.D., 1995). Sin embargo, los animales de todos los grupos estuvieron sometidos al mismo programa de vacunacin contra estos virus, por lo que la diferencia significativa observada entre las proporciones de abortos ocurridos en las hembras infectadas y no infectadas con N. caninum, no puede ser relacionada directamente con la accin de dichos virus. El aborto tuvo lugar mayoritariamente en el segundo trimestre de la gestacin, lo cual coincide con las observaciones de otros investigadores, que indican que aunque N. caninum puede causar abortos desde los tres meses hasta el final de la gestacin, la mayora de ellos tiene lugar a los 5-7 meses de gestacin (Anderson y col., 1991; Thornton y col., 1991; Wouda y col., 1997; Lpez-Gatius y col., 2004b). Tales resultados pueden atribuirse a que en el segundo trimestre de la gestacin, la capacidad de respuesta inmune de las vacas disminuye. Adicionalmente, se ha sugerido que los estrgenos placentarios se incrementan durante la mitad de la gestacin bovina y ello tiene efecto negativo

sobre la inmunocompetencia, favoreciendo la reactivacin de bradizotos y la parasitemia (Quinn y col., 2002). Otros autores hablan de un efecto inmunosupresor debido a los elevados niveles de progesterona existentes desde los primeros meses de la gestacin hasta semanas antes del parto (Innes y col., 2001a). Por otro lado, se ha evaluado la respuesta inmune humoral y mediada por clulas, en vacas preadas y sus fetos, y se ha reportado la invasin del parsito en ambos, durante el segundo perodo de la gestacin (Bartley y col., 2004). Finalmente, nuestros resultados concuerdan con otros estudios, an en diferentes sistemas productivos y condiciones de manejo en todo el mundo, que indican que la presencia de anticuerpos frente a N. caninum en el ganado vacuno puede utilizarse como indicador de aborto en los animales tras los 90 das de gestacin (Moen y col., 1998; Par y col., 1997; Dubey y col., 1997; Thurmond y col., 1997, Lpez-Gatius y col., 2007a LpezGatius y col., 2007b). El aborto es el principal sntoma clnico asociado a la infeccin por N. caninum en ganado vacuno lechero, aunque no est claro cmo y el por qu ocurre. S se conoce con mayor exactitud cuando ocurren la mayora de abortos, y este conocimiento es clave para entender la patogenia y poder acercarnos ms a las causas del aborto, su prevencin y control. En efecto, el hecho de que en el estudio de la tesis, la seropositividad no estuviera relacionada con la presencia de mortinatos o partos prematuros, indica que N. caninum no fue causa directa de estos problemas que estaran asociados a otras causas, no relacionadas con la parasitacin, aunque en un estudio realizado por McAllister y colaboradores (2000) s se observ que la presencia de abortos y nacimientos prematuros estaba asociada a la prevalencia de anticuerpos contra de N. caninum.

El manejo de los productos y desechos generados en el aborto de los animales fue inadecuado en todos los sistemas de produccin incluidos en el estudio, por lo que no hubo diferencias significativas entre las prcticas vinculadas al destino de las placentas y de los fetos abortados. Sin embargo, es importante destacar que la inadecuada disposicin de los productos y desechos del partos y abortos favorece la ruta de transmisin horizontal (Bergeron y col., 2001b), que se produce cuando los bovinos ingieren alimentos y agua contaminados con ooquistes de las heces de los hospedadores definitivos. stos, a su vez se infectan por el consumo de las placentas contaminadas con los taquizoitos y los quistes tisulares del parsito (Bergeron y col., 2001b), y tambin por la ingestin de cadveres de los animales infectados (Dijkstra y col., 2001; Gondim y col., 2005), aunque a veces no tras ingerir tejidos de fetos abortados (Bergeron y col., 2001a). En el intestino de los hospedadores definitivos, el parsito completa su ciclo, y es expulsado en forma de ooquistes al medio ambiente a travs de las heces (Basso y col., 2001; Slapeta y col., 2002; McGarry y col., 2003). Los hospedadores intermediarios (bovinos) se infectan cuando ingieren los alimentos o el agua de bebida contaminada con las heces que contienen los ooquistes esporulados (McGuire y col., 1998; Dubey y col., 2002; Trees y col., 2002). Estos animales quedan infectados, y pueden sufrir reactivaciones de la infeccin a lo largo de toda su vida productiva (Dannatt L. C. 1998; Buxton y col., 2002; Maley y col., 2003; Revisado por Dubey y col., 2006).

Se comprob una amplia presencia del hospedero definitivo en las fincas debido a su cercana a los centros urbanos. De hecho, no fue posible valorar el efecto de la presencia o no de perros sobre la seroprevalencia en los bovinos, dado que todos los rebaos haban tenido perros en la finca (aunque en uno de los rebaos los perros haban sido eliminados de la finca 1 mes antes del muestreo). Tambin cuando se evalu la relacin entre el nmero de perros presentes en la explotacin y la presencia de anticuerpos contra N. caninum en su suero sanguneo, encontramos que la seroprevalencia puntual contra el protozoario en los caninos, no estuvo condicionada al nmero de perros que coexistan en la finca. La presencia de un nico HD eliminador sera suficiente para el inicio de la infeccin en las fincas de bovino, en las que la transmisin vertical entre generaciones actuara en el mantenimiento de la infeccin en los rebaos. Por otro lado, la prevalencia de anticuerpos contra N. caninum, encontrada en los perros que comparten su ambiente con los bovinos evaluados en este trabajo, fue del 23,5%; y el 80% de establos incluidos en el anlisis posea al menos un perro infectado, lo cual demuestra que la infeccin se encuentra presente en la mayora de los perros de nuestras ganaderas. Existen reportes que refieren que la va de infeccin en los perros, involucra primariamente a otras especies (bovinos, fauna silvestre, entre otros), incluso existen estudios epidemiolgicos que demuestran que los perros de zonas urbanas presentan una tasa de infeccin menor que aquellos que viven en los establos (Basso y col., 1999; Sicupira y col., 2011). En otros pases, los valores de seroprevalencia obtenidos en estudios similares fueron; 19.4 7.0% en el Per (Cornejo y col., 2004); en perros de centros ganaderos de Uruguay se obtuvo prevalencias similares a este estudio (20%) (Barber y col., 1997), mientras que en otras latitudes los resultados fueron superiores: 31, 36 y 73% en perros de establos lecheros de Japn (Sawada y col., 1998), Brasil (Belo y col., 1999) y Argentina (Basso y col., 1999), respectivamente. En la tesis, ningn animal muestreado present signos clnicos de neosporosis; aunque la presencia de anticuerpos contra el parsito en el suero, slo demuestra infeccin y no enfermedad (Dubey, 2003). Los estudios de seroprevalencia en perros han indicado que existe una mayor cantidad de animales con infeccin subclnica que animales con enfermedad (Dubey y Lappin, 2000). A pesar de esto, la neosporosis debe ser considerada como diagnstico diferencial en perros con sintomatologa nerviosa. Adems de los perros y cnidos silvestres, se observ la presencia de zamuros (buitres) en la mayora de las fincas, los cuales se ha observado ingieren desechos y restos generados durante los partos y abortos que ocurren en las unidades de produccin. Ello hace necesario estudiar el efecto de las aves carroeras-carnvoras en la epidemiologa de N. caninum. En este aspecto, un trabajo muy reciente ha observado la presencia de DNA del parsito en algunas especies de aves silvestres en Espaa, dentro de las que se incluy una especie de buitre (Darwich y col., 2012), que representa un avance en el establecimiento de las pautas que caracterizan el ciclo biolgico de este protozoario. Sin

embargo, aunque no parece probable que las aves carnvoras acten como HD, s podran favorecer la diseminacin de los ooquistes, aunque este aspecto necesita ser estudiado en mayor profundidad. Adicionalmente, se ha reportado que los pollos ( Gallus domesticus) son huspedes intermediarios naturales de N. caninum (Costa y col., 2008), y experimentalmente se ha logrado la infeccin en palomas domsticas, Columbia livia (McGuire y col., 1999), incluso. Otros estudios, mencionan la presencia de aves, como factor de riesgo asociado con episodios de abortos epidmicos (Bartels y col., 1999). La transmisin vertical de la N. caninum es muy eficiente y puede adoptar dos formas; la transmisin trasplacentaria endgena como resultado de la activacin de la fase de reposo de los bradizotos durante el embarazo, o la transmisin trasplacentaria exgena derivada de la ingestin de los ooquistes durante el embarazo. Los terneros nacidos portadores de infeccin derivada de una transmisin trasplacentaria endgena o exgena son capaces de infectar a sus hijos cuando empiezan a reproducirse (Williams y col., 2009). Estas son las formas de infeccin ms frecuente en bovinos (Moore y col., 2005). Adicionalmente, el hecho de haberse determinado que los bovinos pueden tener seroconversin por una exposicin postnatal (Hietala y Thurmond, 1999; McAllister MM y col., 1998; Thurmond y col., 1997) avala la importancia de la transmisin horizontal (Thurmond y col., 1997). Cuando se analizaron las principales vas de transmisin en las fincas, en concreto en una finca en la que se analizaron todos los animales presentes en la misma, no se observaron diferencias estadsticamente significativas entre los diferentes grupos de edad lo que es indicativo de transmisin vertical como la principal va de transmisin en el rebao, aunque la va horizontal tambin estuvo presente en una moderada proporcin. En un estudio en Venezuela (Escalona y col., 2010) tampoco observaron asociaciones significativas del grupo etario y la presencia de anticuerpos frente N. caninum en vacuno bovino. En otros estudios a nivel mundial, en infecciones crnicas, resultados similares han sido observados, con niveles de transmisin vertical hasta del 95% (Anderson et al., 1995). En Espaa un 90,6% de la descendencia estuvo congnitamente infectada en una finca que no haba tenido perros en los 7 aos anteriores al brote de abortos asociados a N. caninum (Lpez-Gatius y col., 2004a). Las vacas seropositivas tienen una alta probabilidad de producir descendencia infectada (Davison y col ., 1999, Lpez-Gatius y col., 2004a) y de hecho, una fuerte correlacin entre el estado serolgico de las madres y sus hijas ha sido mostrado en numerosos estudios (Par y col., 1996; Schares y col., 1998; Wouda y col.,1998; Davison y col., 1999; Dijkstra y col., 2001; Campero y col., 2003; Piergili Fioretti y col., 2003; Lpez-Gatius y col., 2004a) que indicara la importancia de la va vertical en la transmisin de los rebaos. Subsecuentemente, en algunos de esos estudios, se ha observado bajas tasas de transmisin horizontal <8.5%, (Par y col., 1997; Davison y col., 1999., Lpez-Gatius y col., 2004a). Sin embargo, esta ltima es determinante para el mantenimiento de la infeccin en el rebao. Incluso, ante la alta probabilidad de transmisin

vertical, la persistencia de la enfermedad es mediada en gran medida por transmisin horizontal (Antony y Williamson , 2001). . El estudio de las causas de aborto en los fetos, sera realmente el primer estudio a tener en cuenta, pero desafortunadamente debido al manejo de las explotaciones y a pesar de los esfuerzos por obtener tejidos de los fetos abortados muchas veces resulta imposible contar con este tipo de muestras en el momento del aborto. El estudio de fetos en esta tesis, fue reducido pero sirvi para confirmar los estudios serolgicos realizados, lo cual fue evidenciado de manera similar en otros estudios (Yao y col., 2009; Ghalmi y col., 2011). La presencia de niveles altos de anticuerpos frente N. caninum en las vacas que abortaron en dos de los fetos que pudimos recolectar , los resultados del estudio histopatolgico de los fetos abortados y la evidencia del ADN del parasito en las muestras de corazn de los mismos suponen la primera confirmacin de casos de aborto asociados a N. caninum, en Venezuela.

En el modelo final de regresin logstica entre los principales factores de riesgo se observ la presencia de aborto previo, aunque pudo apreciarse un cierto factor protector en las vacas que haban abortado previamente. Hay estudios que han indicado que vaca que abort previamente por Neospora tiene un menor riesgo de abortar en su siguiente gestacin por esta causa, pero este dato es posible que est influido por el grado de eliminacin selectiva de las vacas que han abortado en un predio (Anderson y col., 2000; Innes y col., 2001). Los resultados de esta tesis estn de acuerdo con esta afirmacin. Tal situacin, podra atribuirse a una cierta respuesta inmune protectora del animal ante la infeccin crnica con el parsito. La infeccin previa hace ms resistentes a las vacas frente a una reinfeccin. Este hecho es vlido tanto en rebaos con brotes epidmicos (Schares y col., 2002) como en los rebaos con infeccin endmica, pues estudios epidemiolgicos indican que en rebaos crnicamente infectados las hembras son ms resistentes ante un reinfeccin y los fetos estn ms protegidos (revisado por Dubey y Schares 2006). En este sentido, la falta de efecto abortivo en los animales crnicamente infectados por N. caninum antes de la gestacin, puede tener dos explicaciones: 1) que en los estados iniciales de gestacin los taquizoitos en placenta o feto no alcanzan suficiente nmero para producir abortos, pero que s son capaces de causar dao en perodos posteriores cuando se replican en mayor cantidad, o 2) que hay reactivacin y una migracin repentina del parsito en el segundo trimestre de gestacin, cuando se ha observado que el sistema inmune de la vaca gestante puede estar debilitado (Innes y col., 2001; Almeria y col., 2003; Almeria y col., 2012). Estudios realizados en ratones experimentalmente infectados con N. caninun, antes de la gestacin, no evidencian la presencia de taquizoitos (ni en la placenta ni en los tejidos fetales), al inicio de la gestacin, pero s a partir de la segunda mitad de la gestacin (Long y Baszler., 1996). Sumado a esto, existen estudios que mencionan que vacas con evidencia de exposicin previa a N caninum suelen ser menos propensas a abortar o tener partos

prematuros, lo cual sugiere el desarrollo de inmunidad protectora en estos animales (McAllister y col., 2000). Sin embargo, debe indicarse que a pesar de que se cree una cierta inmunidad protectora frente la neosporosis clnica, las vacas crnicamente infectadas pasan la infeccin en sucesivas gestaciones y pueden causar abortos repetitivos en los rebaos (Barr y col., 1993; Anderson y col., 1995; Williams y col., 2003; Pabn y col., 2007). Se ha demostrado que aunque una infeccin preexistente sea capaz de prevenir un contacto exgeno, dicha inmunidad no es capaz de evitar la transmisin trasplacentaria endgena en las vacas (Williams y col., 2003). Las medidas de control propuestas en nuestro caso en rebaos con alta seroprevalencia de infeccin seran: El anlisis serolgico del rebao completo (exceptuando los terneros de menos de 6 meses, en los que pueden quedar anticuerpos calostrales) de manera anual o con mayor frecuencia si es posible siguiendo las recomendaciones de Dijkstra y col. (2003), Larson y col. (2004) y LpezGatius y col. (2004a), y basado en los datos de animales individualizados, la retirada del rebao de animales seropositivos si han abortado previamente y la inseminacin con semen de vacuno de carne de las hembras seropositivas. La inseminacin de las vacas lecheras seropositivas con semen de vacuno de carne, adems de tener como aspecto prctico, no dejar reposicin seropositiva en el rebao, reduce de manera significativa el riesgo de aborto en las mismas. Se ha observado, que las vacas lecheras seropositivas a N. caninum que son inseminadas con semen de toros de carne, tienen 1,9 (Lpez-Gatius y col., 2005a) y 2,8 (Lpez-Gatius y col., 2005b) veces menos probabilidad de abortar que las inseminadas con semen de toros Holstein. Estos resultados se han corroborado en estudios posteriores de los mismos autores en un elevado nmero de animales analizados (Almera y col., 2009a, Yaniz y col., 2010). Este efecto podra deberse a una menor transmisin trasplacentaria del parsito en razas de carne o a una mejora de la funcin placentaria (Lpez-Gatius y col., 2005a). En conclusin, los resultados de esta tesis, ponen de manifiesto la importancia de la neosporosis en las regiones ganaderas de Venezuela y que en casos de aborto el estudio de la neosporosis debe ser incluida en los protocolos de diagnstico. Entre los principales datos, aunque las tasas de prevalencia en los rebaos variaron mucho entre ellos, la relacin entre la seropositividad frente a N. caninum y los abortos fue clara, incluso en los rebaos con bajas prevalencias. Tomando en consideracin, que N. caninum es reconocido como una de las principales causas de fallos reproductivos en bovinos a nivel mundial (Dubey, 2003), y que en algunas explotaciones bovinas de Venezuela, hasta un 10% de las gestaciones pueden perderse anualmente debido a enfermedades enzoticas que causan abortos y baja de la eficiencia reproductiva (Bermdez, 2001), se hace necesaria su inclusin, en el diagnstico diferencial de causas de prdidas reproductivas en los rebaos bovinos del pas.