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Microbiología parcial 2.

Citoplasma Bacteriano (protoplasma).
1. Parte de la célula que está dentro de la membrana citoplasmática. 2. Tiene una consistencia parecida a un gel: compuesto de agua, enzimas, sustancias nutritivas, desechos, y gases. 3. Contiene estructuras celulares: ribosomas, cromosoma y plásmidos. 4. La matriz citoplasmática son las sustancias dentro de esta membrana, excluyendo el material genético. 5. Material genético. En bacterias el 90% es expresable y 10 % es regulatorio (no se expresa); en levaduras el 70% es expresable, mientras que en el ser humano, sólo el 3%.  Cromosoma (ADN) disperso en el citoplasma bacteriano (También es llamado nucleoide). Puede ser circular o lineal (como en actinomicetos o streptomyces). El ADN circular se encuentra superenrollado y se organiza en dominios mediante las proteínas like histonas (por ejemplo H, HU, IHF, H1, HLP1, P), para formar hebras infraenrolladas. Existen enrollamientos positivos (hélice sobreenrollada, que se protege contra radiaciones) y negativos (infraenrollada, es más común). En el proceso de enrollamiento, participan las enzimas topoisomerasas que tuercen la hebra. Ejemplos de topoisomerasas: ADN-girasa (clase II): Es blanco de algunos antibióticos, está presente en bacterias y muchas arqueas. Topoisomerasa I: elimina el superenrollamiento y regresa la cadena al estado relajado  Plásmidos. Son porciones de material genético extracromosómico, en general son circulares pero existen algunos lineales. Pueden ser unicopia (una sola replicación por ciclo celular que se coordina con la replicación genómica) o multicopia (pueden reproducirse varias veces, independientes a la reproducción de la bacteria). Algunos de ellos contienen genes que proporcionan características diferentes a las bacterias, como el plásmido F (plásmido conjugativo) que puede transferirse a otras bacterias mediante la conjugación, tiene una región denominada región Tra que se excreta por el pili sexual mediante un sistema de secreción tipo IV, éste sólo es recibido una vez y se vuelve una bacteria F+. Otros, llamados plásmidos episomales, pueden integrarse al cromosoma y se replican bajo control de éste. Existen plásmidos que se combinan con el ADN cromosómico llamados transposones. Secuencias de inserción. Transposasas transposones(elaborada). Normales y Replicativos. Modelo de círculo rodante. Endonucleasa (enzima que puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos). Griffith: Ciertos péptidos activan señales de la célula. Transcriptasa reversa: se utiliza en eucariontes para copiar una parte de ADN. Bacteriófagos: abren canales.
Becerril Román María del Mar J. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.

Un transposón o elemento genético transponible es una secuencia de ADN que puede moverse de manera autosuficiente a diferentes partes del genoma de una célula, un fenómeno conocido como transposición. En este proceso, se pueden causar mutaciones y cambio en la cantidad de ADN del genoma. Anteriormente fueron conocidos como "genes saltarines" y son ejemplos de elementos genéticos móviles. El transposón modifica el ADN de sus inmediaciones, ya sea arrastrando un gen codificador de un cromosoma a otro, rompiéndolo por la mitad o haciendo que desaparezca del todo. En algunas especies, la mayor parte del ADN basura (hasta un 50% del total del genoma) corresponde a transposones. A diferencia de los provirus, los transposones se integran en el ADN celular en lugares bien determinados. Su existencia fue propuesta por Barbara McClintock en el maíz, sin embargo, su existencia no se demostró hasta mucho más tarde en bacterias. Por ello fue laureada con el Premio Nobel en 1983.

Los plásmidos son herramientas muy importantes en los estudios de biología molecular, se emplean como vectores (agentes generalmente orgánicos que sirven como medio de transmisión de un organismo a otro) de genes para la transformación de células. Los eucariontes no contienen plásmidos, pero pueden insertárseles para que produzcan
una determinada proteína.

Teniendo un plásmido, se puede insertar material genético a través de enzimas de restricción.  ARN. En la célula existen tres tipos principales de ARN (ácido ribonucleico). •ARNm (mensajero) •ARNt (de transferencia) •ARNr (ribosomal). S son unidades de sedimentación que no son aditivas, sino que se les aplica una centrifugación y las subunidades corren diferente que el ribosoma completo. Los polisomas o polirribosomas son los ribosomas unidos a una molécula de ARN mensajero y que se encuentran sintetizando los péptidos. Son visibles al microscopio electrónico.

http://www2.uah.es/biomodel/model1j/rna-prot/ribosoma.htm 6. A diferencia de los eucariotes, en las bacterias no existen compartimentos, por los que los procesos de replicación de ADN, transcripción (ADN → ARNm) y traducción (ARNm + ARNt + ARNr → Proteínas) ocurren en el citoplasma.

7. Inclusiones citoplasmáticas. (presentes en algunos microorganismos)
 Gránulos de polisacáridos. Unidades de glucosa que son reserva de carbono y energía que se forma en un exceso de carbono.

Glucógeno.
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Almidón(se identifica con lugol: solución yodo-yodurada).
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Inclusiones lipídicas. Aparecen en varias especies de Micobacterium, Bacillus, Azotobacter (alginatos), Spirillum. Su nombre genérico es poli-β-hidroxialcanoatos (PHA) que se forman en exceso de carbono. Pueden observarse al microscopio electrónico de transmisión o con colorantes solubles en aceites.

Gránulos metacromáticos (volutina). Reserva de fosfato que se ponen en evidencia con una tinción con el azul de toluidina, al combinarse con el polifosfato da un color violeta rojizo. Este fenómeno se denomina metacromasia.

Gránulos de azufre. Reserva de fosfato que se ponen en evidencia con una tinción con el Bacterias quimiolitotrofas y fototróficas que oxidan el H2S a Sº, este último forma acumulaciones refringentes y visibles al microscopio (brillan en fondo oscuro). El Sº puede ser oxidado nuevamente para producir SO42- y las inclusiones desaparecen.  Cianoficinas. Polímero de carbono y nitrógeno que se forma en cianobacterias

(bacterias fotosintéticas). Es el único material de reserva conocido de nitrógeno y no es sintetizado en los ribosomas. Se tiñen con azul de metileno.  Carboxisomas. Son acumulaciones de la enzima 1,5-di fosfato carboxilasa/oxigenasa (RuBisCO) empleada por los microorganismos autótrofos para fijar CO2 mediante el ciclo de Calvin, donde se une a una pentosa y la molécula de 6C puede ser aprovechada en el metabolismo para formar finalmente AcCoA.   Magnetosomas. Partículas de magnetita (Fe3O4). Imparten propiedades magnéticas, lo

cual se cree orienta a las bacterias. Rodeados por una membrana. Vacuolas de gas. Formadas por dos diferentes proteínas: GvpA (Gas Vacuole Protein A) y GvpC. Estas vesículas permiten a los microorganismos flotar en los sistemas acuáticos. Hay desplazamiento vertical en una columna de agua en respuesta a cambios ambientales (inflan las bolsitas). Las producen las cianobacterias, las bacterias fototróficas verdes y púrpura, y algunas aqueobacterias. Parecen como granitos de arroz.

Preparaciones microbiológicas.
http://microexpfqunam.blogspot.mx/

1. Preparaciones en fresco (microorganismos vivos). Tinciones supravitales, se introducen en el organismo mientras las células aún se encuentran vivas, colorante muy diluido. 2. Preparaciones fijas y teñidas (microorganismos muertos) Hongos Condiciones ácidas. Exoenzimas secretadas.

Frotis:

capa delgada de muestra extendida

sobre un portaobjetos que permite el paso de la luz a través de ella.

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Gutiérrez Hernández Bernardo

Novelo Carmona Milton B.

A los micobacterium puede fijárseles con solución de albúmina. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.) y compuestas (como Gimsa. (ZIehl-Neelsen. Se unen a proteínas o ácidos nucleicos. Se puede fijar con calor (frotis seco) o con solventes como etanol o metanol. Gota en portaobjetos especial. Flagelo. algodón o un abatelenguas. se mezclan los colorantes con glicerina. y un grupo auxócromo que al formar sales le permite disociarse y combinarse. Cultivo sólido suspendido. Pueden usarse mordentes (compuestos químicos intensificadores de color aumentando la afinidad colorante-molécula) y decolorantes.    Impronta. 4. Positivas. Generalmente. seco. Tinción simple. Frotis fijo con calor. Puede ser de alginatos. Se toma una gota y se coloca en portaobjetos. fucsina). Ácidos El cromóforo es el anión de la molécula (eosina). . Diferenciales. Técnicas de tinción. 1. Frotis sanguíneo. 2. Se usa para buscar protozoarios. Se pueden diferenciar las distintas especies por su coloración. cristal violeta. 2. Sobre un portaobjetos limpio y desengrasado. Gota de cultivo líquido. Se observa teñida la célula sobre un fondo claro. 3. cápsulas o diferenciales. la molécula deja de tener color. etc. El cromóforo es el catión de la molécula (azul de metileno. 1. Compuestos coloridos que al combinarse con otras sustancias les imparten color. ya que pueden ser muy agresivos y dañar a la célula. safranina. Gram). Hisopo. Tinciones. Selectivas. Si se rompen los enlaces conjugados. El fondo se tiñe de oscuro para observar células o estructuras refringentes. Núcleo). Wright y May Crünwald). están formados por un grupo cromóforo que es la parte responsable del color. Son utilizadas para dar color y aislar partes específicas de los microorganismos (Endosporas. agrupación Becerril Román María del Mar J. Simples (1 solo colorante: azul de metileno. Negativas. cristal violeta. es como un sello y se obtienen muestras delgadas. Nos señala la forma. safranina. Básicos.   Cinta adhesiva transparente. Colorantes. como la cápsula donde se usa tinta china (tinción negativa de cápsula) 3.

4. Se cultiva en agar inclinado. se seca al aire. Etanol-Acetona 70:30 hasta eliminar el exceso de colorante para que no Penetra en las células. 8. 7.5. en G. . Se toma la primera expectoración del día. Tinción de flagelo. Muestra + tinta china o nigrosina (carbón activado) Safranina de Gram (es mejor la safranina 0. se gotea SSI (solución salina) en la parte alta y se separan dos fases (la mitad es medio de cultivo líquido). Cristal violeta 1% en sol. Sólo se tiñe el exosporio. Mordente. Colorante primario.   se mezclen. Verde de maquila 5% con emisiones de vapor de agua (10 minutos). Tampoco se puede fijar el colorante con una tinción simple. Serología (anticuerpos) PCR Baciloscopía: es la técnica más segura para detectar tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis). Pararosa anilina (preparada en el momento). Situación estresante para que permita el paso del colorante.25% (1 minuto). de oxalato de amonio al 0.85% (1 min). Medio de cultivo 37 °C. Neutralizar ácido.  Colorante de contraste Safranina 0. Las G. más concentrada) o Cristal Violeta (1 min) 5. no se puede fijar al calor porque se deshidratan las cápsulas. Colorante de contraste. Acido tánico. Lavar con agua Safranina 0. Mordente. Decoloración. se mantiene a 37°C.no pasa a citoplasma. principalmente al flagelo. permite la fijación. porque su pared está hecha de quitina. Forma complejos. Tinción de Gram. Tinción de Ziehl-Neelsen. Ácidos micólicos retienen la fucsina básica (Bacterias AAR: ácido alcohol resistentes) El azul de metileno de Loeffler. Frotis: se toma la muestra con mucho cuidado con una pipeta Pasteur y se coloca en un portaobjetos con un rectángulo marcado con marcador de cera. Las G+ deshidratan su pared y no permiten salir el colorante.5% (1minuto) 6. Lugol Iº/KI 1g/2g en 300 mL de agua (1 minuto). se ha dejado oxidar 6 meses. Proteus: Vibrio con flagelo perítrico. Se deja secar una gota de muestra (frotis) y se sella con albúmina. Tinción de endosporas (Selectiva). Se deja depositar. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.  Colorante primario. Tinción de cápsula (Selectiva) Extendido. Becerril Román María del Mar J. También tiñe esporas. Azul de metileno. Los hongos no tienen Gram.pierden cristal violeta ya que se daña su membrana externa. se deja secar sin calor y se procede a la tinción.

Becerril Román María del Mar J. reducen la energía de activación de una reacción Son para un química. el cual es utilizado en las reacciones anabólicas para sintetizar el material celular a partir de nutrientes. específicas sustrato. 1. . Enzimas: proteínas con función de catalizadores biológicos. Tipos de microscopías: Metabolismo microbiano. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.Microscopía. Las reacciones catabólicas producen energía como ATP. Suma de reacciones bioquímicas requeridas para la generación de energía (catabolismo) y el uso de ella para sintetizar material celular a partir de moléculas del medio ambiente (anabolismo).

Un inhibidor alostérico modifica la afinidad de la enzima por el sustrato. INHIBIDORES ENZIMATICOS. éste es un inhibidor de una enzima reguladora. REGULACIÓN DE LAS VÍAS METABÓLICAS. Becerril Román María del Mar J. La enzima se satura a cierta concentración del sustrato. FAD+. Vitaminas.  Coenzimas de oxido-reducción: NAD+(principal coenzima de óxido-reduccion. impidiendo la entrada y unión del sustrato. también influirá sobre la actividad enzimática. Cofactor (inorgánico) o coenzima (orgánico): se unen a la enzima para que aumente la afinidad por el sustrato. El pH que al influir sobre las cargas eléctricas.  Otras coenzimas: CoA. podría alterar la estructura del centro activo y. o sea que aunque aumentemos la concentración. acarreador de electrones). al unirse en un sitio distinto (sitio alostérico) al sitio activo. La actividad enzimática es la cantidad de producto formado por unidad de tiempo.Grupo prostético: molécula no proteica que se une a la proteína(enzima) y forma parte de su estructura. generalmente la primera para que no se siga efectuando la vía. Regulación por producto final de la reacción -> Cuando hay suficiente producto. La enzima cuando no está unida al cofactor se le llama apoenzima. Es modificada por factores que afectan a las proteínas. no aumentará la velocidad de la catálisis puesto que se ha alcanzado la velocidad máxima de la enzima. La temperatura elevada desnaturaliza las moléculas proteicas por lo que los sitios activos se ven modificados. Un inhibidor competitivo se une a la enzima en el sitio activo. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. por lo tanto. . por ejemplo: la temperatura y el pH. FMN+. NADP+.

que se da en la membrana plasmática de bacterias y en la mitocondria en eucariotes. Becerril Román María del Mar J. en un sitio alostérico de una enzima que cataliza una reacción que libera energía. convirtiéndose en ADP. Los pigmentos captan la energía luminosa proveniente del sol (fotones) y la llevan al fotosistema uno (P680). ATP. En la primera etapa hay gasto de 2 moléculas de ATP por molécula de glucosa La glucosa siempre que entra a la célula es fosforilada. además.REGULACIÓN DE LA EXPRESION DE LA SINTESIS DE LAS ENZIMAS (nivel genético).  Nivel transcripcional: inducción (mayor transcripción) y represión (menos transcripción)-> operones. Inhibición de la síntesis de proteínas. quien recibe otro fotón. (los enlaces fosfato son muy energéticos y por ello son usados por medio de su formación y rompimiento para almacenar y liberar la energía obtenida de los procesos catabólicos). se encuentra en todos los eucariotes y muchas especies de bacterias. a manera de que no salga de nuevo por la membrana y se encuentre en un flujo constante hacia el interior de la célula. 1. orgánicos fotoheterótrofos Luz fotótrofas Fuente de carbono CO2 fotoautótrofos Fuente de energía c. orgánicos mixótrofos c. Compuesto de alta energía. . donde esta clorofila es excitada a un estado de mayor energía (mayor potencial). generado por el paso del electrón disminuyendo gradualmente su potencial a través de distintos complejos proteicos. (fosforilación oxidativa. algunos de los cuales son canales para H+ que se abren al pasar por ellos el electrón y van generando un gradiente elctroquímico de protones. orgánicos quimioheterótrofos Fuente de carbono c. por lo que el electrón va disminuyendo su potencial a medida que pasa por distintos complejos acarreadores de electrones. generando un gradiente electroquímico de protones a medida que el electrón pasa por las proteínas canal con centros redox. esta glucosa-6-fosfato se isomeriza a fructosa-6P y luego se vuelve a fosforilar a fructosa-1. Fotofosforilación. por medio de un gradiente de H+ y en algunos casos Na+. Nivel traduccional: Regulación de la síntesis de las proteínas ribosómicas. quien pasa a un estado excitado y vuelve a disminuir su potencial gradualmente. 2. luego pasa al fotosistema dos (P700). por medio de una ATPasa. los cuales pasan a través de una proteína ATPasa que se encarga de fosforilar ADP) (Justo debajo de ciclo de Krebs viene la explicación más completa) 3. orgánicos quimioheterótrofos CO2 Redox quimiótrofas c. utilizando esa energía para crear el enlace fosfato) Cadena respiratoria. Fosforilación a nivel de sustrato.6-bisfosfato que ya es una molécula simétrica. Atenuación y c. inorgánicos quimilotótrofos Fuente de carbono CO2 litoautótrofos Glucólisis La vía de la glucólisis (EMP). cada fosforilación requiere de un ATP que done su grupo fosfato. (se forma el ATP apartir de ADP + Pi. Formación de enlaces fosfato: 1. procesamiento del ARNm. el cual es dispersado de manera similar a la cadena respiratoria. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.

Se produce en está vía NADPH. y NADPH es un poder reductor biosintético) y varias de sus reacciones las comparte con el ciclo de Calvín (fase independiente de la luz en la fotosíntesis. resultando otra fructosa 6P y un gliceraldehído3P. Las 6-fosfogluconolactonas se rompen para formar 3 moléculas de 6-fosfogluconato. se rompe en dos moléculas de 3 carbonos: gliceraldehído3P y 3dihidroxiacetonafosfato. 3. 3. Se tienen 3 moléculas de glucosa6P que se oxidan a a 6-fosfogluconolactona (una lactona es un éster cíclico). para formar ATP) y 2 moléculas de NADH (molécula reducida a la que se conoce como poder reductor que si suponemos que el ATP es el efectivo en energía. Ciclo de las pentosas fosfato Es una vía anabólica. Esa fructosa1. reduciendo 3 NADP+ a NADPH y se descarboxilan. liberando 3 moléculas de CO2 y son transformadas así en ribulosa5P (Ru5P) que es un azúcar de 5 carbonos (pentosa). se formaron una de 3 carbonos y una de 7 carbonos. que después son oxidadas. el NADH es como un cheque que se va a canjear en la cadena de transporte de electrones por 3 ATPs por cada molécula de NADH que cede su electrón). produciéndose 3 NADPH. formando ahora un azúcar de 4 carbonos (eritrosa4P) y un azúcar de 6 carbonos (fructosa6P) 5. 4. es isomerizada a ribosa5P (R5P). Becerril Román María del Mar J. que se isomeriza a gliceraldehido3P éste gliceraldehído va sufriendo cambios conformacionales y va pasando por intermediarios de alta energía que ceden su grupo fosfato a un ADP en 2 ocasiones. se generan en total 4 ATP en esta parte. . La ganancia total son 4 ATP y 2 NADH. Una de esas Ru5P. Dos carbonos de la Xu5P son transferidos por medio de una trancetolasa a una R5P. En la segunda parte se forman 4 moléculas de ATP por fosforilación a nivel de sustrato (cuando una molécula fosforilada posee una gran energía de hidrólisis puede ceder su grupo fosfato a un ADP. formando sedoheptulosa7P y gliceraldehído3P.2. la ganancia neta es de 2 ATP por molécula de glucosa que se convierte por esta vía en piruvato (molécula de 3 C sin grupo fosfato). y como se invirtieron 2 ATP para fosforilar la glucosa. Esa eritrosa recibe 2C de la otra Ru5P. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. y las otras dos se isomerizan a xilulosa5P (Xu5P).6bisP.6bisP. como teníamos 2 moléculas de gliceraldehído 3P por gaca molécula de fructosa1. además en una de las reacciones. Se remueven 3C de la sedoheptulosa7P y se unen al gliceraldehído3P . 2. la mayor fuente de electrones de la biosíntesis (NADH se le llama poder reductor. se libera NADH que también se multiplica por 2. para formar los ácidos nucleicos y provee de eritrosa fosfato (4 carbonos) como precursor de aminoácidos aromáticos. ya que produce los precursores de la ribosa (5 carbonos). donde se utiliza la energía ganada en la fase luminosa para formar fructosa mediante la fijación de CO2) Mecanismo: 1. obsérvese que de dos moléculas de 5 carbonos.

La acetil-CoA también se forma por la β-oxidación de los ácidos grasos.). Se realiza en condiciones anaeróbicas. etanol vino. ya que no hay O2 para que acepte los electrones. ácido láctico (lactobacillus). en la cual la glucosa 6P es convertida a del 6-fosfogluconato que es deshidratado a 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato (KDPG) que ya se rompe en 2 moléculas e 3C (piruvato y Gliceraldehído-3-fosfato). etc… Madre de vinagre: consorcio formado por levadura y bacteria. Una vía alterna es Entner-Doudoroff. ácido propiónico. Fermentación. (saccaromyces) (malta-> cerveza. .Vía Entner-Doudoroff Muchos tipos de bacterias no poseen la enzima fosfofructocinasa-1 (PFK1 de la glucólisis. frutas-> etc. Utiliza el NADH producido en la glucólisis que no es canjeado en la cadena respiratoria. (etanol-> ácido acético)(acetobacter aceti). acetobacter y saccaromyces. donde la fructosa6P se fosforila mediante un gasto de ATP a ADP a fructosa1. Otras fermentaciones Ácido propiónico y CO2 Leche → Queso freudenreichii) Acetona y acetobutylicum) suizo (Propionibacterium (Clostridium Granos → Pan de centeno (Lactobacillus bulgaricus) Col → Chucrut o Sauerkraut (Lactobacillus plantarum) Carne → Salchichas (Pediococcus) butanol Glicerol (Saccharomyces cerevisiae) Ácido cítrico → melazas (Aspergillus niger) Metano → Ácido acético (Methanosarcina) Ácido ascórbico → Sorbitol (Acetobacter) Ciclo de Krebs = Ciclo de los ácidos tricarboxílicos = Ciclo del ácido cítrico Piruvato Acetil-CoA (enzima: piruvato deshidrogenasa). por lo que emplea como aceptor de electrones a una de molécula orgánica: reduce el ácido pirúvico (piruvato generado) ya sea por glucólisis. vía las pentosas o vía de Entner-Doudoroff. Becerril Román María del Mar J. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Ácido fórmico. Acido láctico Leche → Yogurt Streptococcus) y queso (Lactobacillus.6bisP).

y los H+). ambos complejos donan su electrón a las quinonas. el electrón pasa al complejo 4. transfieren los electrones a un aceptor final oxidado. acarreador de electrones). No proteínas  Quinonas. embebidas en la membrana que también transfieren los e. conociéndose este proceso como fosforilación oxidativa. liberando NADH. 2. una de NADPH y una de FADH2. liberando otro NADPH a oxalacetato. sino a través de una cadena transportadora de electrones al final de la cual existe un aceptor exógeno oxidado. es una proteína tipo canal que al pasar el electrón por ella. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.   Respiración aerobia: el aceptor final es el O2 Respiración anaerobia: el aceptor final es distinto del O2 (nitrato. que es oxidado a su vez.    En la fosforilación aerobia: Los electrones pasan primero al complejo 1 (si provienen del acarreador NADH) o al complejo 2 (si provienen de FADH2). Éste ácido cítrico es isomerizado y oxidado.) Menor potencial redox La transferencia de electrones se da en la dirección de mayor potencial redox. Fosforilación oxidativa. liberando FADH2 (que es otro poder reductor. (coenzimas Q. El oxalacetato u ácido oxalacético es una molécula de 4C. no directamente (como en la fermentación). La membrana interna es pues. Los complejos 1.y los H+ del NADH. El donador es el NADH o el FADH2.y los H+. ATP y CO2 a ácido succínico (4 carbonos). sulfato. Citocromos. con la liberación de energía libre que se va a traducir en un potencial electroquímico de protones. liberando NADH y CO2. cuya disipación a través de ATPasas de membrana origina ATP. moléculas orgánicas no proteicas. Las coenzimas reducidas (como el NADH). quienes lo transfieren al complejo 3. Acarreador de electrones. que finalmente. dona el electrón al oxígeno (O 2 O22-). etc. (complejo proteico 1) Transfiere los e. que se reduce. Mecanismo: 1.Éste piruvato es oxidado a CO2 en el CK (ciclo de Krebs). Acarreador de electrones. Por Acetil-CoA se forman 2 moléculas de NADH. por lo que nos queda una molécula de 5C. Becerril Román María del Mar J.3 y 4 son canales de protones. se abre y hace pasar H+ contra gradiente (es un tipo de transporte activo). Proteínas de hierro y azufre. Éste es oxidado a ácido fumárico. muy selectiva y rica en proteínas que llevan a cabo el proceso de transporte de electrones:  NADH deshidrogenasa. o la membrana interna en cloroplastos y mitocondrias. 3. . mientras que el complejo 2 es simplemente un acarreador. que pasa a su vez. que se une al grupo acetil (2C) para formar ácido cítrico. quien se une a dos protones H+ (que ya pasaron a través de la ATPasa hacia el citoplasma) para formar H2O. llamada ácido-α-cetoglutárico. del citocromo C. el aceptor es el O2 y el producto final es H2O. Transfieren los e. Flavoproteínas. Mayor potencial redox Éste proceso se da en la membrana citoplasmática en procariontes. éste lo transfiere al citocromo C (citocromo es una proteína periférica pequeña que posee un centro redox). además de un ATP por FNS (fosforilación a nivel de sustrato).

. Se encuentra en el lado citoplasmático. es utilizado para la síntesis de ATP mediante una proteína ATPsintasa (ATPasa). los compuestos que se reducen en lugar del O2 pueden ser: Oxidación del Hidrógeno. Embebido en la membrana citoplasmática. estar en el citoplasma y utilizar esos hidrógenos para generar NADPH. quien posee dos complejos: Complejo F0 responsable de la transferencia de protones a través de la membrana.El gradiente de protones generado. que junto con el CO2 entran a ciclo de Calvin para generar carbohidratos. Complejo catalítico F1 responsable de la interconversión de ADP+ Pi y ATP. puede funcionar como bomba de protones contra gradiente. Las bacterias captan H2 y poseen la enzima hidrogenasa (que tiene un cofactor de Ni 2+ en su estructura). o bien. Becerril Román María del Mar J. así como transferir los electrones a una cadena de transporte. mediante la hidrólisis de ATP. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. ésta rompe la molécula en dos átomos de H y puede estar en la membrana y generar un gradiente de protones. http://www.youtube.com/watch?v=WggF8DGEmEs La ATPasa es reversible. En la respiración anaerobia.

Bacterias púrpura. Proteína periplásmica que contiene Cobre. para formar ATP. metanogénicas (Methanobacterium thermoautotrophicum) y autótrofas sulfato reductoras (Defulfobacterium autotrophicum) Ciclo de Calvin. para formar ATP. La adenosina fosfosulfato reductasa (APS) la emplean pocos microorganismos que oxidan el sulfito. cianobacterias. plantas verdes.(nitrito). muchas bacterias quimiolitótrofas y algunas arqueobacterias halófilas e hipertermófilas. Becerril Román María del Mar J. Proteína periplásmica.+ 2 H+ + H2O Proteínas de membrana citoplasmática que llevan a cabo éstas funciones : Amonia Monooxigenasa (AMO).  . El NADH es producido por un flujo reverso de electrones para producir NADH necesario para la fijación del CO2 en el ciclo de Calvin (Ver página 14). El NADH es producido por un flujo reverso de electrones para producir NADH necesario para la fijación del CO2 en el ciclo de Calvin. Oxidación del azufre 1. Organismos Autótrofos Organismos que utilizan el CO2 como fuente de carbono y lo pueden incorporar por diversas vías:    Ciclo de Krebs reverso. Proteína transmembranal. 2. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Bacterias verdes del azufre (Chlorobium) Vía del Hidroxipropionato. Hidroxilamina oxidoreductasa (HAO). Acetobacterium woodii). Nitrificación paso 1: Oxidan el amonio a nitritos. Los electrones liberados entran a nivel del citocromo C. Oxidación del hierro Fe2+ + H+ + 1¼O2 → Fe3+ + ½H2O Rusticianina.Oxidación del azufre La vía de la sulfito oxidasa es la más común en la oxidación de compuestos de sulfito. NO2. Las bacterias nitrificantes fijan CO2 por el ciclo de Calvin. Nitrificación paso 2: Nitrito Oxidoreductasa (NOR). Las que oxidan nitrito pueden ser heterótrofas con glucosa y otros compuestos orgánicos. Oxida el NH4+ a hidroxilamina (NH2OH). Los electrones liberados entran a nivel del citocromo C. Bacterias verdes (Chloroflexus) Vía Acetil CoA reductiva. Oxida la hidroxilamina a NO2.+ ½O2 → NO33. Bacterias acetogénicas (Clostridiumthermoaceticum. La bacteria vive en pH bajos. algas. NH4+ + 1½O2 → NO2 . Proteína transmembranal. para obtener su gradiente de protones.

Cianobacterias. Después se da la regeneración de Ribulosa bifosfato. la cual es fosforilada y reducida a gliceraldehido3P. Consta de 2 fases: 1. crecimiento Mecanismo del ciclo de Calvin: La enzima RUBISCO fija el CO2 a la ribulosabisfosfato (5 carbonos) y divide la molécula en 2 moléculas de 3fosfoglicerato (cada una de 3C). involucra la fijación CO2 1 2 carbono celular. . Fotosíntesis. es precursor de la fructosa. Fase independiente de la luz: ciclo de de como para el Calvin-Benson fuente de (anabólica). en energía química (ver en la página 8). que como sabemos. que es el sustrato para la fijación de nuevas moléculas de CO2. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.La fijación es realizada por la enzima Ribulosa bifosfato carboxilasa (RubisCO) que forma cúmulos llamados carboxisomas.  Fotosíntesis oxigénica. la energía solar es transformada 2. Los organismos fotótrofos convierten la energía luminosa en energía química para formar ATP. algas y plantas Becerril Román María del Mar J. Fase Luminosa: fotofosforilación (catabólica).

S2O32-. Hay producción de oxígeno. Sº. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. . Crecen en agua de mar (salmuera) en las salinas de evaporación. verdes y heliobacterias. Becerril Román María del Mar J.  Fotosíntesis anoxigénica.  Fotofosforilación no fotosíntetica (mediada por el pigmento bacteriorodopsina). Los donadores de electrones son principalmente: H2S. El donador de electrones es el agua y el aceptor final es una coenzima oxidada. Fotofosforilación acíclica Ocurre en la fotosíntesis anoxigénica. Bacterias púrpura. Los electrones son devueltos a la bacterioclorofila por medio de transportadores (cadena reversa). Halobacterium sp (arquea halofílica).Fotofosforilación acíclica Ocurre en la fotosíntesis oxigénica.

Medios de cultivo 1. la ficoeritrobilina y la ficocianobilina como pigmentos capturadores de la luz. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Estas son las principales estructuras de captación de luz en los microorganismos. En cianobacterias. El cromóforo retinal todo-trans (púrpura) esta unido covalentemente mediante una base de Schiff al grupo ε-amino de una Lys. . ficocianina (PC) y aloficocianina (AP). Las ficobilinas están unidas covalentemente a proteínas de unión específicas. que se asocian en complejos ordenados llamados ficobilisomas. La energía de los fotones absorbidos por PE o PC es transmitida por AP a la clorofila a del centro de reacción mediante un proceso conocido como transferencia de excitones.La bacteriorrodopsina tiene siete hélices alfa que comprenden toda la sección de la membrana. Una serie de residuos Asp y Glu. Macronutrientes en los medios de cultivo Becerril Román María del Mar J. formando las ficobiliproteínas. (Son como antenas) En estos ensamblajes los pigmentos de ficobilina se unen a proteínas específicas que forman pigmentos llamados ficoeritrina (PE). y moléculas de agua asociadas aportan la vía transmembranal para los protones (flechas rojas).

.2. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Factores de crecimiento Becerril Román María del Mar J. Micronutrientes en los medios de cultivo 3.

las pruebas de movilidad. son suaves y permiten observar la movilidad de los microorganismos. 1. Semisólidos. suelo. Ejemplos: •Agar DNAsa •Agar almidón •Agar cromogénico para Candida Diferenciales y selectivos.  Estado Medios líquidos. Sangre.  Composición Naturales o complejos. Esta consistencia es utilizada en los medios de transporte. Sólidos. Contiene componentes y condiciones que permiten el desarrollo de un tipo microbiano y disminuyen la velocidad de crecimiento de la flora acompañante. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Ejemplos: •Agar cetrimida •Caldo bilis verde brillante •Agar Bacillus cereus •Agar Sabouraud cicloheximida Diferenciales. Contiene componentes que permiten el desarrollo de un tipo microbiano e inhiben el crecimiento de los demás microorganismos.4. 0. consistencia dura y forman un soporte para el crecimiento microbiano. Contiene componentes que permiten diferenciar las actividades metabólicas de los microorganismos inoculados. No tienen una composición definida. consistencia líquida pero la presencia de agar disminuye la velocidad de disolución de O2 ambiental. como en los medios empleados para investigación.0% de agar. Enterobacter sakazakii y Yersinia enterocolitica Selectivos. Contienen agar aprox. Generalmente tienen componentes completamente solubles. 0.2 genéticas. Se emplean para cultivo. Clasificación. a 0. diferenciación. etc. Son útiles en la propagación de microorganismos pero tienen la desventaja de que no se pueden detectar contaminaciones. cuantificación. aislamiento.  Agar sal y manitol •Agar eosina azul de metileno (EMB) Becerril Román María del Mar J. Contienen componentes ricos nutritivamente y permite el crecimiento de microorganismos no exigentes.5 a 2.8% de agar. Se emplea generalmente en el cultivo de microorganismos anaerobios y microaerofílicos.1%. peptonas o el agua de la llave. o medios que contengan ingredientes cuya composición no esté completamente definida como el extracto de levadura. La presencia de indicadores o el uso de reveladores después de la incubación ponen de manifiesto la actividad. Ejemplos: •Agar cuenta estándar (cuenta en placa) •Infusión cerebro y corazón (BHI) •Agar Soya Tripticaseína (TSA) •Agar nutritivo (AN) •Agar sangre (AS) De enriquecimiento. pruebas biquímicas y pruebas . componentes son extrapuros. frutas. Composición completamente conocida. pruebas de sensibilidad y en algunos casos para conservación (inclinados). Medios fluidos. Ejemplos: •Agua peptonada pH 9: Detección de V.  Uso Enriquecidos. Sintéticos. cholerae •Caldo tetrationato: Pre-enriquecimiento para Salmonella  Caldo selenito: Detección de Salmonella.

la caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco. Las colonias típicas de S. 3. El medio de Baird Parker es empleado para el aislamiento y cuantificación de estafilococos coagulasa positivos. Producto: Aminoácidos. Son medios que se emplean para el transporte de muestras sin alterar la viabilidad y la proporción de microorganismos. Becerril Román María del Mar J. como son: •Medio sólido en caja a 4ºC (hasta 1 semana). Revelador: No requiere. Pruebas bioquimicas Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Revelador: No requiere.•Agar XLD •Agar Endo •Agar Mc Conkey De conservación. •Medio fluido de tioglicolato con carne molida con sello de aceite mineral estéril a temperatura ambiente (varios meses dependiendo del microorganismo). Agar yema de huevo/Agar Baird Parker. Revelador: Lugol que forma un complejo color café-púrpura que desaparece cuando el almidón ha sido degradado.     Sustrato (contenido en el medio de cultivo) Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del microorganismo) Producto Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean) 1. Sustrato: Caseína Enzima: Caseinasa (Proteasa. Sustrato: Lecitina. exoenzima). Agar Leche Descremada. •Medio de agar inclinado 4ºC (hasta 2 semanas) con sello de glicerol estéril a 4ºC (varios meses dependiendo del microorganismo). 2. Hidrólisis de la lecitina y reducción del telurito. Son empleadas principalmente la identificación y clasificación de bacterias y hongos. Agar almidón. Enzima: Lecitinasa hidroliza la lecitina (fosfolípido). Partes. Las muestras se recolectan con asas o con hisopos de alginatos que no inhiben a los microorganismos. Sustrato: Almidón Enzima: Amilasa (exoenzima). Polímero de glucosa compuesto de amilosa (poco ramificada) y amilopectina (más ramificada). aureus son oscuras por la reducción del telurito (TeO32-) a Teo. Producto: Fosforilcolina. además presentan el halo de hidrólisis de la lecitina. . Hidrólisis del almidón. Algunos medios de cultivo son empleados para la conservación temporal de microorganismos. Son medios de cultivo que tienen los nutrientes para poner en evidencia la actividad metabólica de un microorganismo puro. al que se adicionan componentes que lo hacen selectivo. Producto: Glucosa. Tienen consistencia semisólida. con amortiguador de pH y reducidos en nutrientes para preservar la proliferación de microorganismos por varias horas. Pueden emplear reveladores y/o indicadores. Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de proteínas. Las colonias productoras de lecitinasa forman una zona opaca a su alrededor. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. •Medio Amies •Medio de Stuart De transporte. cuando la caseína es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano. De transporte.En la liofilización también se emplea la leche descremada (años). Degradación de la caseína.

1 y rojo pH por debajo de 4. rojo. Enzima: Gelatinasa (Proteasa. Becerril Román María del Mar J. 6. luego se le añade (KOH 40%) que desaparece el aspecto lechoso. parte del acético pasa a etanol y parte del fórmico a CO2 y H2 . Para determinar la presencia de los productos neutros (acetoína) (prueba de VogesProskauer): Se agrega un poco de a-naftol al 5% en etanol (medio adquiere aspecto lechoso). Fermentación. (Prueba positiva color rosado . 7. fermenta o es facultativo. quiere decir que hubo degradación. Fermentación ácido mixta: Los productos son ácidos orgánicos que provocan un descenso del pH inicial (indicador: amarillo pH por encima de 5. Sustrato: Carbohidratos. violeta. exoenzima). Gelatina Nutritiva (base nutritiva en caldo y después se agrega el gelificante) Sustrato: Gelatina (proteína). si únicamente vira el indicador se trata de prueba posistiva (ácido). Sustrato: Carbohidrato o polialcohol. . La gelatina es una proteína que cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminoácidos que la componen. Producto: Aminoácidos. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. productos que son neutros. si éste se esparce por todo el medio. parte del piruvato se metaboliza produciendo cantidades menores de ácido láctico. Otra opción es con carbón activado. algunos requieren de ser degradados en monómeros y transportados a la célula para posteriormente en condiciones anaerobias ser metabolizados por la vía fermentativa. y produce un cromóforo rojo en presencia de oxígeno. Medio base caldo rojo de fenol (indicador pH). amarillo) o cualquier indicador de pH. Hugh and Leifson.4. Indicador: Rojo de fenol (bugambilia. se reducen dos a ácido láctico y dos las metabolizan para formar ácido acético y fórmico. Prueba para determinar si el microorganismo oxida. Fermentación ácida o neutra. amarillo). con campana de fermentación (Durham). Prueba positiva (ácido y gas). Indicador: Azul de bromotimol u otro indicador ácido/base. fermentativo u oxidativo. Vías: Fermentativa y/u Oxidativa. pierde su característica de gelificar.4). que es reducido a 2. la mayor parte del piruvato se condensa formando acetilmetilcarbinol. Producto: Ácidos orgánicos. Estos microorganismos por cada 4 moléculas de ácido pirúvico (piruvato) formadas. La fermentación (degradación) de un compuesto orgánico se observa por la acidez en el medio de cultivo y la formación de gas capturado en la campana de fermentación. púrpura de bromocresol (púrpura.violáceo en la parte superior del tubo. Oxidación/fermentación. Vía: Fermentativa. Fermentación butilenglicólica: en ésta. Revelador: No requiere o puede emplearse el carbón activado en polvo. Si al refrigerar el medio en donde se incubó por 7 días el microorganismo la gelatina cuaja. Prueba negativa no tiene coloración). La acetoína reacciona con el a-naftol. Las bacterias obtienen energía a partir de hidratos de carbono por uno de dos procesos metabólicos. 5. Se inoculan dos tubos de medio y uno de ellos se sella con aceite mineral o parafina para impedir la entrada de oxígeno. Producto: Acido pirúvico. se agita fuertemente. Los compuestos de carbono (carbohidratos o polialcoholes) deben ser incorporados.3-butilenglicol. el microorganismo creció pero no la degradó. fórmico y acético. Licuefacción de la gelatina.

Medio SIM (Sulfhídrico Indol Movilidad). 8. Becerril Román María del Mar J. Vía: Varias dependientes del pH del medio. Las bacterias incapaces de fermentar utilizan las peptonas y liberan aminas que alcalinizan el medio. fermentan la glucosa 0. Reveladores: Solución de Rojo de Metilo. 2. Las bacterias que solo fermentan la glucosa. Producto: H2S e Indol. El gas incoloro H 2S se forma en condiciones ácidas y reacciona con el citrato de amonio férrico para producir un precipitado negro insoluble de sulfuro ferroso metálico. fermentan la lactosa 1%. inicialmente también utilizan aeróbicamente la glucosa y debido a la baja concentración de glucosa (0. Enzimas: Tiosulfato reductasa. Las bacterias fermentadoras de glucosa y lactosa. Alcalino: rojo/bugambilia. Un microorganismo que puede utilizar el citrato como única fuente de carbono también utiliza las sales de amonio del medio como única fuente de nitrógeno. cisteína desulfurilasa y tiptofanasa. Reducción del azufre (precipitado negro). Movilidad (si se esparce por el tubo de ensaye o si sólo se presenta en la parte donde se inoculó). Utilización del citrato. Indicadores: Rojo de fenol y sales de Fe2+. algunos microorganismos forman H2S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa. Vías: Fermentación ácida o neutra. lactato/Acetoína en condiciones ácidas. Agar Hierro de Kligler (KIA). metabolizan las peptonas alcalinizando la superficie del medio (el pico de flauta). 1. La extracción de nitrógeno de las sales de amonio producen amoniaco y se alcaliniza el medio virando el indicador al alcalino. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.1%). Alfa Naftol y KOH 40%. Medio de Citrato de Simmons Sustrato: Citrato de sodio. Agar hierro de Kligler Sustratos: Glucosa 0. Identificación de enterobacterias y otras bacterias Gram negativas. Formación de indol a partir de triptófano (se forma un cromóforo rojo en la superficie) y 3. En presencia de tiosulfato en el medio o la degradación de proteínas liberando aminoácidos azufrados. Vía: Fermentativa Enzimas: Tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa Productos: Ácidos mixtos y H2S. (medio semisólido) Sustratos: Tiosulfato o grupos –SH de la cisteína y triptófano. Derivación del de Kligler. Producto: Ácidos orgánicos o acetoína.Rojo de Metilo/Voges Proskauer (Caldo RM/VP) Sustrato: Glucosa. 2. permitiendo la acidificación completa del medio. lactosa 1% y Tiosulfato o grupos –SH de la cisteína. Ácido: amarillo. Producto: Acetato/formato en condiciones alcalinas y Acetato.1% y al término de esta. 10. Revelador: Sales de Fe2+ y p-Dimetilaminobenzaldehído (DMABA).1%. Indicador: Azul de bromotimol. 3. CO2. 9. . Resultados: 1.

Sustrato: Urea. Enzima: Coagulasa (estafilocoagulasa). después de 24 horas de la incubación. Enzima: Ureasa. y si sale positiva. 6. NO reductasa (NOR). Plasma de conejo. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. ver fosforilación oxidativa). 8.agar) o MIO (algo con quitina. Ureasa. reduce nitrato a nitrito. Caldo nitratos Sustrato: Nitrato de sodio. amarillo es negativo. Y fuente de carbono) u otros medios como LIA (lisina. Producto: Compuesto oxidado. Las descarboxilasas son útiles en la diferenciación de enterobacterias. Anaerobios y asimiladores de nitrógeno. Caldo urea o agar urea de Cristensen. La hidrólisis de la urea por la ureasa libera dos moléculas de amoniaco que alcaliniza el medio. Becerril Román María del Mar J. (factor de virulencia) esta enzima actúa sobre los factores de la coagulación presentes en el plasma y forma un coagulo visible con las proteínas del hospedero para evadir a sistema inmune. reducido) formándose un producto colorido. Oxidasa. Reducción de nitratos. Se debe a un sistema de citocromo oxidasa (complejo IV.5. Reducción asimilativa: los nitratos pasan a -NH2 Reducción desasimilativa: se reduce hasta formar N2     Nitrato reductasa (NAR). 9. El zinc. fucsia y azul marino es prueba positiva.hierro. ornitina o arginina). Medio base de descarboxilasas (caldo con aa. Producto: Amoníaco y diaminas. Indicador: Rojo de fenol.. Coagulasa. Enzima: Nitrato reductasa. Revelador: No requiere. Los aminóacidos al perder el grupo carboxilo se convierten en diaminas (prueba positiva)lo que incrementa el pH del medio y el indicador (púrpura del bromocresol) vira a violeta. quiere decir que la bacteria no logró reducir el nitrato. Enzima: Oxidasa. N2 reductasa (N2OR). Generación: intervalo que transcurre en la formación de dos células. Exoenzima producida por S. Crecimiento Bacteriano Crecimiento: incremento en el # de células Bipartición (fisión binaria): una célula se divide para formar dos iguales. Producto: Coagulo. Revelador: Reactivo de Kovacs: diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina (TPD) al 1%. Producto: Nitritos. Sustrato: Factores de la coagulación. ya que es posible que la bacteria haya logrado reducir aún más el nitrito hasta N2 (donde se observaría la presencia de un gas). 7. .) Sustrato: Aminoácidos (lisina. Descarboxilasa. Cultivo de medio nutritivo Sustrato: Compuesto reducido. en presencia del nitrito. (la que se quiere medir) Nitrito reductasa (NIR). Indicador: Púrpura de bromocresol. La prueba positiva se observa por la oxidación del reactivo de Kovacs (incoloro. aureus. Revelador: Reactivos de Griess (a y b) (ácido sulfanílico y dimetil-a-naftilamina (a-naftilamina) que forman un cromóforo rojo. Producto: Amoníaco. Cuando la prueba resulta negativa para nitritos se utiliza la campana de fermentación o la prueba del zinc. Enzimas: Lis.

Tipos de cultivo. en el periplasma interactúa con la enzima que inserta los precursores de pared celular y cataliza la formación del enlace glucosídico. desaparece crecimiento exponencial. Tiempo de generación (G): tiempo requerido para que una célula se divida o una población se duplique. El ADN se ancla a la membrana y así. Proteinas Fts (filamentous temperature sensitive): forman el aparato de división (divisoma) o FtsZ polimeriza y forma un anillo en el centro de la célula. G = t/n n= numero de generación t=tiempo No= número inicial de microorganismos N = No2n lg N = lg No + n lg 2 El crecimiento se produce en progresión geométrica: 1 generación -------------> 2 células 2 generaciones -------------> 4 células 3 generaciones -------------> 8 células Bacteria que se duplica más rápido: E. La transpeptidasa forma el enlace peptídico entre las cadenas de aminoácidos de las unidades de mureína. crecimiento asincrónico. Varios matraces. Replicación del ADN Previo a la formación del anillo FtsZ que se forma en el espacio entre los cromosmas duplicados. se construye una curva. método analítico analítico a pequeña escala. Cultivo en lote. también llamada proteína de unión a penicilina (su actividad es bloqueada). . (de donde empieza a sintetizar la célula hija su propio péptidoglucano) La abertura y síntesis deben ser coordinadas para evitar la autolisis de la célula. El bactoprenol (proteína en el periplasma de gran negativas) acarrea los precursores de la pared celular. Bactoprenol y transpeptidacion. o FtsA es una enzima ATP hidrolasa que provee la energía para ensamblar proteínas en el divisoma. o MreB actina bacteriana. o FtsI es una proteína involucrada en la síntesis de peptidoglucano. E (Fase de muerte). Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Retardo. o MinC: inhibidor de la división celular y previene que FtsZ ensamble el anillo hasta que el centro se encuentre formado. Se forma un septo que dará lugar a cada una de las células. Crecimiento bacteriano: duplicación de un cultivo de manera regular durante un intervalo de tiempo. sincrónico y se alcanza la máxima velocidad de crecimiento. o FstZ: tiene actividad de GTP hidrolasa. El equilibro desaparece y predominan los microorganismos muertos. complejos macromoleculares. D (Fase estacionaria). coli Más lenta: Treponema pallidum Curva de crecimiento: A (Fase Lag). Autolisinas: realizan pequeñas aberturas. C (Fase pre-estacionaria). ribosomas. muestrear de cada uno en el tiempo. o FstK participa en la elongación. microorganismos en estrés. Latencia/adaptación: no aumento significativo d densidad celular. o FtsZ tubulina bacteriana. Crecimiento exponencial. No hay nutrientes para el recambio y las condiciones del medio de cultivo son adversas para el crecimiento. libera energía para la polimerización y despolimerización. Estacionario: equilibrio entre los microorganismos vivos y muertos. así como monómeros y iones inorgánicos para existir como una célula independiente. cada célula hija se queda con una copia. las envolturas rodean a cada copia del ADN y finalmente se da la separación de las células. B (Fase Log).Fisión binaria: cada célula hija recibe una copia del cromosoma. presentes en el complejo divisoma. Proteína MreB y la forma de las bacterias. puede calcularse el tiempo de generación. o ZipA ancla a FtsZ a la membrana citoplasmática. Becerril Román María del Mar J. o Grafica logarítmica: muestra el crecimiento exponencial. así como para el ensamblaje y desensamblaje del anillo. La presencia de esta proteína se ha relacionado con las bacterias no cocoides. La síntesis del nuevo peptidoglocano deja en las células Gram positivas una cicatriz. o MinE: inhibe la actividad de MinC y se ancla al centro de la división.

Cambiar condiciones. cada enzima tiene su temperatura óptima). . Lisis térmica. Becerril Román María del Mar J. Desnaturalización de proteínas y membrana citoplasmática. La cepa se inocula en fase log. debe depurarse y utilizar más medio de cultivo a modo de evitar que entren en fase estacionaria y su producción sea eficiente. cuando entra en fase preestacionaria. Gelificación de la membrana. pH Microorganismos patógenos. (4). inducir algún sistema. Cultivo en continuo. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Temperatura (1). Las reacciones enzimáticas se llevan a cabo a su máxima velocidad. los procesos de transporte se llevan a cabo lentamente y no hay crecimiento. (no todas. Las reacciones enzimáticas aumentan su velocidad. (3). Fermentador (bioreactor) para cultivo. (2).Cultivo en lote alimentado. Acidofilos 1-6 Neutrofilos 7-10 Alcalofilos 11-14 Oxigeno.

+ H+ → H2O + OH. O2.+ e.+ O2. (para poder vivir en medios hipertónicos) Aminoácidos: Glicina-betaína y ectoina Carbohidratos: Sacarosa y trehalosa Poli alcoholes: Manitol y glicerol Otros: KCl y propionato dimetilsulfonico (PDS) TABLA DE EXTREMOFILOS Becerril Román María del Mar J.→ O2.Radical hidroxilo Superoxido dismutasa (SOD) Enzima detoxificante que se hace cargo del superóxido. .+ 2H+ → H2O2 + O2 Catalasa. O2 + e. Se lleva a cabo en jarra de anaerobiosis. NaHCO3 + NaBH4 + O2 → CO2 + H2O + H2 Radicales generados en respiración aerobia.Cultivo de anaerobios. H2O2 + H2O2 → 2H2O + O2 Peroxidasa. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. H2O2 + NADH + H+ → 2H2O + NAD+ Concentración de solutos. Enzima detoxificante que se hace cargo del peróxido.Superoxido O2. Actividad del agua (aw ): disponibilidad del agua para los microorganismos.Osmófilos y xerófilos pueden vivir en bajas aw Solutos compatibles: Los forman los microorganismos para compensar la concentración de solutos exterior.+ 2H+ → H2O2 Peróxido de hidrógeno H2O2 + e.

Las placas son divididas en sectores. Se toman en cuenta los sectores donde hay menos de 20 UFC. La membrana de celulosa retiene a los microorganismos en su malla con poros de 0. . 1 Viables. Se emplean diluciones de una muestra concentrada para que cada colonia formada provenga de un solo microorganismo (Criterio: 25 a 250 UFC por placa). extendido (se extiende la muestra sobre el agar ya preparado) Miles y Misra.rit. Preparación de diluciones seriadas de una suspensión bacteriana. Becerril Román María del Mar J. Asa calibrada. El número de bacterias viables se obtiene calculando la media de cada dilución en las repeticiones realizadas. Este grupo no incluye una especie determinada. Escherichia. que fermentan la lactosa con producción de gas en un lapso máximo de 48 h a 35°C.Medición del crecimiento microbiano.25-0. Principalmente cuantificación de bacterias y hongos. Tomar volúmenes pequeños. inoculados en la superficie del agar mediante la técnica de siembra masiva.htm TECNICAS DE CUENTA EN PLACA: Vaciado (se vacia la muestra y después se pone el agar). Se emplean medios de cultivo generales.edu/~gtfsbi/IntroMicro/20081MicrobialGrowthCh6. Filtración. Esta membrana se transfiere a un medio de cultivo para el desarrollo de colonias. También llamada técnica de dilución en tubo: estimación estadística de la densidad microbiana presente con base a que la probabilidad de obtener tubos con crecimiento positivo disminuye conforme es menor el volumen de muestra inoculado. enriquecidos selectivos y diferenciales dependiendo de los microorganismos a cuantificar.  Número más probable. UFC (Unidades Formadoras de Colonias). Al menos 24 horas incubación e interpretación de resultados. http://people. Se determinan las UFC/g o mL de muestra. no esporulados. Presencia de microorganismos vivos. Este grupo esta conformado por 4 géneros principalmente: Enterobacter. Las colonias son contadas y se multiplican por el factor de dilución del asa empleada. Se reporta como: #UFC/unidad de volumen o peso. la más prominente es Escherichia coli.45µm. Coliformes totales: bacilos Gram negativos aerobios o anaerobios facultativos. Citrobacter y Klebsiella. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B.  Cuenta en placa. Microorganismos COLIFORMES. El grupo de coliformes fecales: bacterias Gram-negativas capaces de fermentar la lactosa con producción de gas a las 48 h de incubación a 44 °C.

Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. observadas al microscopio.  Recuento microscópico. No es muy sensible. objetivo calibrada o micropipeta       micrométrico. asa Área de la muestra = bxh y convertir a µm2 Determinar el área del campo: A= πxr2(µm2) Observar 10 campos. Cuenta de Breed. Cámaras de Petroff-Hausser y de Neubauer.2 Totales. se necesitan al menos 106 bacterias/mL para que sean No distinguen células vivas de muertas. 1.01mL Becerril Román María del Mar J. contar las bacterias de cada uno de ellos y obtener el promedio X Factor= Am/Ac Calcular el número de bacterias por mL x Factor x 100 = bacterias_____ /mL 100 es la dilución inicial al tomar 0. Microorganismos vivos y muertos no se pueden distinguir. Se usa: muestra a evaluar (directa o diluida). no es práctico para un gran número de muestras. . Son rápidos pero se requiere contar en algunos casos con curvas de calibración. 2.    Es muy tedioso.

La muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado. Útil para grandes volúmenes. Becerril Román María del Mar J.    CO2 + 2NaOH → Na2CO3 + H2O Na2CO3 + BaCl2 → BaCO3 + 2NaCl NaOH (residual) + HCl → NaCl + H2O  Peso seco y determinación de proteína. Longitud de onda (λ) •Bacterias 540nm •Protozoarios 580nm •Levaduras 600nm  Actividad metabólica (producción de CO2). más células. . El peso seco (contenido de sólidos) de las células bacterianas se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105°C hasta peso constante. Nefelometría (Turbidimetría). Desventaja: componentes volátiles pueden perderse y puede existir degradación. La turbidez producida por el crecimiento microbiano e determina por la densidad óptica (DO) que puede ser expresada como Absorbancia. Más proteína. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. % de Transmitancia o Unidades Klett (UK).

lavado quirúrgico y lavado antiséptico. . CLORO. Agentes químicos. Biguanidas. Biocida: mata a los microorganismos Bio-estático: detiene el crecimiento de los microorganismos. Clorhexidina. Esterilización: destrucción de toda forma de vida microbiana. Becerril Román María del Mar J. Esterilización comercial: destruye esporas de Clostridium botulinum. •Mecanismo de acción •Concentración •Tiempo de exposición •Factores ambientales •Susceptibilidad de los microorganismos •Edad de los microorganismos •Presencia de materia orgánica Fenoles y sus derivados. Bactericida no tóxico. Halógenos. Solubiliza lípidos y desnaturaliza proteínas. Se emplea en infecciones bucales. Alcoholes. Técnicas asépticas: minimizan la contaminación en áreas y equipos. en la prevención de infecciones tras cirugía bucal. Antiséptico no afecta esporas y virus envueltos. Sepsis: indica contaminación por bacterias. Antiséptico y desinfectante.Factores que afectan la sobrevivencia de los microorganismos. combate y reduce la formación de la placa dental. Destrucción de la membrana citoplasmática y desnaturalización de enzimas. Biolítico: tiene acción sobre membrana o pared celular. Se une a residuos de tirosina y desnaturaliza proteínas. Etanol e isopropanol. agua y equipos. 1. Desgerminación: eliminación de microorganismos en un área limitada. Desinfección: destrucción de formas vegetativas en superficies inertes. Usado como desinfectante de superficies. Agente oxidante. En medicina describe una infección en el torrente sanguíneo. SOLUCIONES DE IODO. Destrucción de la membrana citoplasmática. Antisépsis: tratamiento químico en tejidos vivos. Bactericida y funguicida. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Sanitización: eliminación de microorganismos patógenos. Asepsis: ausencia de contaminación significativa.

No tóxico. Biocida. Glutaraldehído. Su mecanismo de acción es la oxidación de moléculas. Desnaturalización de proteínas. Colorantes. tuberculosis. Biostáticos. utensilios y gomas. antisépticos locales. Combinación específica con ácidos nucleicos principalmente. Desinfectante en agua. Equipo de procesamiento de alimentos. inhibición de enzimas y destrucción de la membrana citoplasmática. Eliminación de bacterias y virus en vacunas. Antiséptico de piel. no corrosivo. Biocida de bacterias incluyendo a M. Jabones aniónicos ácidos. ácido benzoico. probable inactivación o destrucción de enzimas. Peróxido de hidrógeno H2O2. Inactivan proteínas por la formación de enlaces covalentes con grupos funcionales (-NH2. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. ácido ascórbico) Inhibición metabólica. OH. Esterilizante. Costoso. Sanitizante. Remoción mecánica de microorganismos. Esporocida. Ácidos orgánicos. Interacción con la membrana citoplasmática cargada. Becerril Román María del Mar J. destruye virus envueltos. esporas y virus. Usado en heridas y superficies. instrumentos. 3. Aldehídos. Detergentes aniónicos ácidos. Algunos contienen otros antimicrobianos. Antifúngicos. ácido cítrico. Bactericidas. actúa rápidamente y es de amplio espectro.Metales pesados. eosina. Cristal violeta. . Ozono. bacteriostático. Antifúngicos en alimentos y cosméticos. Cloruro de Benzalconio. inhibidores en los medios de cultivo selectivos. Peróxido de benzoilo. Peroxigénos. 1. Conservadores (ácido sórbico. Conservación de especímenes biológicos. Detergentes catiónicos. verde brillante. Antiséptico y desinfectante. -COOH y –SH) Formaldehído. Surfactantes. ácido ortofosfórico. Germicida de piel. 2. Antiséptico contra bacterias anaerobias en el tratamiento del acné. funguicida y virucida.

Esterilizante. Antibióticos.Ácido peracético. Becerril Román María del Mar J. Moléculas similares a material celular. Desinfectante de equipo médico y de procesamiento de alimentos. Desnaturalizan proteínas. endoesporas y virus. . No tóxico. Esterilizantes de plásticos y materiales termosensibles. Esterilizantes gaseosos. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Análogos. Biocida para hongos y bacterias.

Esterilización comercial 70ºC. Calentar la leche entre 62 y 64ºC y mantener durante 30 minutos. Resistencia. Natural Adquirida Una cruzada Una asociada Factores Físicos.73ºC en un tiempo de 15 a 20 segundos. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. Tiempo variable y temperatura constante. •Periodo térmico mortal. inyección de vapor purificado. en donde ocurre una expansión del líquido con la siguiente separación del vapor. Esterilización 121ºC. Llamada también pasteurización continua o bien HTST (High Temperature Short Time). con la cual se eleva la temperatura. La temperatura que destruye a los microorganismos en un tiempo determinado. consiste en aplicar a la leche una temperatura de 72 . •Punto térmico mortal. Desnaturaliza los componentes celulares. Una leche ultrapasteurizada: 110ºC y 115ºC por 4 segundos. 20 minutos. mientras que la leche esterilizada : 140-150ºC en 2 s. Tindalización. Temperatura variable y tiempo constante. Pasteurización lenta.Antibiograma. Proceso de destrucción de formas vegetativas por medio de vapor de agua y una incubación para favorecer la germinación de endosporas. 15lb. Todo tratamiento térmico a temperaturas inferiores al 100°C son considerados métodos de pasteurización. Becerril Román María del Mar J. Pasteurización rápida. Calor húmedo Ebullición. El tiempo que tardar en destruir a los micoorganismos en una muestra a una temperatura determinada. . la leche pasa inmediatamente a una cámara de vacío. para posteriormente repetir el proceso. Autoclave. Luego enfriar entre 4 y 10ºC .

Ventajas:    No es corrosivo para metales e instrumentos. •Métodos químicos. Para el control del proceso existen: •Métodos físicos. Transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos. Es característico de cada microorganismo. •Métodos biológicos. Es el tiempo que una población se reduce en 10 ordenes a una temperatura determinada. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal. que al dilatarse por el calor. reactivos y muestras biológicas. no hace falta que sean porosos pero sí que resistan altas temperaturas. Becerril Román María del Mar J. •Congelación -20ºC* •Ultracongelación -96ºC* Tiempo de reducción decimal D. Temperaturas bajas. Estufas de esterilización (horno). Disminuye la velocidad de crecimiento de los microorganismos. •Refrigeración 4ºC. durante prolongados periodos de tiempo. Doble cámara. Gutiérrez Hernández Bernardo Novelo Carmona Milton B. es esto tóxico por los niveles elevados de electrolitos y fusión de membranas. .Calor seco    Produce desecación de la célula. La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja. Desventajas: Requiere mayor tiempo de esterilización respecto al calor húmedo. Cinta testigo y tiras reactivas. cortan el circuito eléctrico. el aire caliente generado por una resistencia circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cámaras. Materiales que se pueden esterilizar: materiales no alterables por el calor. Conservación de alimentos. subtilis. Uso del termómetro interno vs externo. Bioindicadores de B. Provoca la formación de cristales*.