REPLICACIN DEL ADN

Experimento de Avery (1944)

El neumococo tipo R (rough, rugoso) (colonias a la izda.) puede ser transformado en neumococo tipo S (smooth, liso) (colonias a la dcha.) por el DNA del neumococo S. Esta transformacin se transmite a la descendencia.
*

 En los aos 40, Oswald Avery, Colin MacLeod, y Maclyn McCarty revisaron el experimento de Griffith y concluyeron que el factor de transformacin era el ADN. Oswald Avery repitiendo el trabajo de Griffith con el agregado de una enzima que destrua el ADN, demostr que el factor de transformacin era el ADN. Cuando Avery agregaba esta enzima, no observaba la transformacin obtenida por Griffith.
Concluy que el material hereditario era ADN y no una protena.

Su evidencia era fuerte pero no totalmente concluyente, para esa poca el "candidato principal" para ser el material hereditario eran una protena.
*

En los aos 40 (19..), Oswald Avery, Colin MacLeod, y Maclyn McCarty revisaron el experimento de Griffith y concluyeron que el factor de transformacin era el ADN. Oswald Avery repitiendo el trabajo de Griffith con el agregado de una enzima que destrua el ADN, demostr que el factor de transformacin era el ADN. Cuando Avery agregaba esta enzima, no observaba la transformacin obtenida por Griffith. El concluy que el material hereditario era ADN y no una protena. Su evidencia era fuerte pero no totalmente concluyente, para esa poca el "candidato principal" para ser el material hereditario eran una protena.

Experimentos de Hershey y Chase

 En 1952, Hershey y Chase estaban estudiando el ciclo de vida del bacterifago T2. Dado que el T2 esta compuesto casi completamente de ADN y protena, el objetivo era determinar el destino del ADN y la protena durante la infeccin. Para ello, hicieron crecer clulas infectadas por T2 en presencia de istopos radiactivos (S35 y P32).
Cuando se hacan crecer clulas infectadas por T2 en presencia de S35, se producan virusT2 con protena marcada. Similarmente, cuando las clulas infectadas con T2 se hacan crecer en presencia de P32, el virus contena ADN marcado.

Los investigadores encontraron que casi toda la protena radiactiva permaneca fuera de la clula infectada y que poda ser eliminada sin que se interrumpiera la infeccin, mientras que el ADN del fago entraba en la clula infectada. Dado que los genes de T2 pueden controlar la maquinaria de una clula infectada, dedicndola a producir nuevos bacterifagos T2, se deduce que si es el ADN del fago, y no su protena, lo que entra al hospedador, el ADN debe llevar informacin gentica.
*

Replicacin del ADN

Es el proceso necesario para que se realice la divisin celular.

Ocurre en la fase S del ciclo celular.

El mecanismo de replicacin se basa en la complementariedad de bases. Inicialmente se plantearon tres posibles modelos de replicacin: o o o Modelo conservativo Modelo dispersivo Modelo semiconservativo

Posibles modelos en la replicacin del ADN

CONSERVATIV O

DISPERSIVO

SEMICONSERVA TIVO

Experimento de Meselson y Stahl

CONTROL (Centrifugacin del ADN conocido) ADN 14N ADN 15N ADN 14N y ADN 15N RESULTADOS DEL EXPERIMENTO
1 generacin 2 generacin 3 generacin

Descarta el modelo conservativo

Descarta el modelo dispersivo

Cultivo con 15N

INTERPRETACIN DEL EXPERIMENTO Cultivo con 14N

2 generacin 1 generacin

3 generacin

Replicacin del ADN Caractersticas generales

Proceso de duplicacin del ADN mediante un modelo semiconservativo. Comienza en sitios especficos (orgenes de replicacin) El proceso de replicacin es bidireccional Las dos hebras nuevas se van alargando progresivamente, por adicin secuencial de nucletidos

La replicacin siempre se produce en sentido 5' 3', siendo el extremo 3'-OH libre el punto a partir del cual se produce la elongacin del DNA.
Como las dos hebras de ADN son antiparalelas, una de las hebras se sintetiza de forma continua y otra de forma discontinua. El proceso de duplicacin est catalizado por las enzimas ADN polimerasas (aunque intervienen muchas otras enzimas en el proceso) Hay una correccin de errores para asegurar la fidelidad de las copias

Replicacin en procariotas
El proceso de replicacin de DNA es el mecanismo que permite al DNA duplicarse (es decir, sintetizar una copia idntica). Esta duplicacin se produce segn el modelo semiconservativo, lo que indica que las dos cadenas complementarias del DNA original, al separarse, sirven de molde cada una para la sntesis de una nueva cadena complementaria de la cadena molde.

El proceso se ha estudiado en la bacteria E. Coli

Consta de las siguientes fases: Iniciacin Elongacin Terminacin

Durante la elongacin se da una correccin de errores

Fase de iniciacin
La replicacin comienza en sitios especficos del ADN conocidos como origen de replicacin o regin oriC.

Los orgenes de replicacin son los puntos fijos a partir de los cuales se lleva cabo la replicacin, que avanza de forma secuencial formando estructuras con forma de horquilla. Procariontes: Un origen de replicacin. Eucariontes: Mltiples orgenes de replicacin.

El DNA se replica desenrollando la hlice y rompiendo los puentes de hidrgeno entre las hebras complementarias.

El DNA se replica desenrollando la hlice y rompiendo los puentes de hidrgeno entre las hebras complementarias. Se forma la burbuja de replicacin, con dos horquillas de replicacin, que se van extendiendo en las dos direcciones: replicacin bidireccional Comienza la fase de elongacin.

Fases de la replicacin: iniciacin

Consiste en el desenrollamiento y apertura de la doble hlice de ADN

Ori C Protenas especfica s

Girasa
Evitan las tensiones debidas a un superenrrollamiento

Topoisomerasa

Protenas SSB
Impiden que el ADN se vuelva a enrollar

Helicasa
Las protenas especficas se unen al punto de iniciacin La helicasa rompe los enlaces de hidrgeno entre las bases y abre la doble hlice Burbuja de replicacin

Resumen
Reconocimiento del OriC por protenas especificas Las helicasas rompen los puentes de H Las girasas y topoisomerasas alivian las tensiones del desenrollamiento. 4. Las protenas SSB evitan que se vuelvan a unir las cadenas sencillas y se enrollen de nuevo 5. Formacin de la burbuja de replicacin

Fase de elongacin
Se sintetiza la nueva hebra de ADN sobre la hebra original. Se debe a la actuacin de las ADN polimerasas. En procariotas hay tres y su funcin es doble: Actividad polimerasa. Va uniendo los desorribonucleotidos trifosfatos complementarios a la cadena original.

Actividad exonucleasa. Elimina nucletidos mal emparejados y trozos de ARN cebador

La ADN polimerasa no puede actuar desde un principio, necesita un pequeo fragmento sobre el que empezar a aadir nucletidos. Este primer fragmento es un trozo de unos 10 nucletidos de ARN llamado cebador o primer, que presenta el extremo 3 libre El primer es sintetizado por una ARN polimerasa o primasa, que acta en la zona donde comienza la replicacin. A partir de este fragmento, la ADN polimerasa comienza la adicin de nucletidos sobre el extremo 3 libre. Este enzima recorre la cadena molde en sentido 53 y sintetiza la nueva cadena en sentido 35 (las cadenas de ADN son antiparalelas)

El mecanismo de elongacin es distinto en las dos cadenas: En una de las cadenas, la hebra conductora, continua. la sntesis es

En la otra cadena, la hebra retardada, se produce una sntesis a base de pequeos fragmentos de ADN (fragmentos de Okazaki). La sntesis de cada uno de los fragmentos de Okazaki necesita de su cebador correspondiente (sintetizado por la primasa).

Los cebadores sern posteriormente eliminados por la ADN polimerasa I que rellena el hueco con desoxirribonucleotidos.
Finalmente una ligasa une los fragmentos sueltos.

El mecanismo de elongacin
La ADN polimerasa recorre las hebras molde en el sentido 3-5 uniendo los nuevos nucletidos en el extremo 3.
3 5 5

3 5
3
La ADN polimerasa necesita un fragmento de ARN (cebador o primer) con el extremo 3 libre para iniciar la sntesis.

Fragmentos de Okazaki

Una de las hebras se sintetiza de modo contnuo. Es la conductora o lider.

3 5

La otra hebra se sintetiza de modo discontinuo formndose fragmentos que se unirn ms tarde. Es la retardada.

El mecanismo de elongacin
1
La primasa sintetiza un cebador en cada hebra conductora de la burbuja de replicacin.
Cebador

Las ADN polimerasa comienzan la sntesis de la hebra conductora por el extremo 3 de cada cebador.

Primasas Cebador

La primasa sintetiza un nuevo cebador sobre cada hebra retardada. Hebra retardada

La ADN polimerasa comienza a sintetizar un fragmento de ADN a partir del nuevo cebador.

Hebra retardada Cuando la ADN polimerasa llega al cebador de ARN, lo elimina y lo reemplaza por ADN. Nuevo cebador Ligasas Nuevo cebador La ligasa une los fragmentos de ADN.

Terminacin del proceso

La replicacin termina cuando se unen todos los fragmentos de Okazaki de la hebra retardada

Correccin de errores
Durante la replicacin se puede producir un error en el apareamiento de bases con una tasa de 1/100.000 bases. Parte de estos errores se corrigen durante la replicacin. La ADN polimerasa acta como exonucleasa y elimina los nucletidos mal apareados y rellena el hueco con los nucletidos correctos. La ADN ligasa une los fragmentos resultantes. A pesar de todo, siempre quedan algunos errores (mutaciones)

Enzima

Accin

Funcin en la clula.

DNA Polimerasa I

Aade nucletidos a la molcula de DNA en formacin. Remueve cebadores de RNA.

Llena huecos en el DNA, para reparacin. Remueve los cebadores de RNA.

nucletidos a la Replica Existen cincoAade tipos de ADN polimerasas ( , DNA. , , , y ).molcula de DNA en DNA Polimerasa III formacin. Revisa y corrige la secuencia.

DNA girasa (topoisomerasa II)

Promueve el superenrrollamiento.

Mantiene la compactacin del DNA.

DNA helicasa

Se une al DNA cerca de la Promueve la separacin de horquilla de replicacin. las hebras de DNA.

Replicacin en los eucariontes

Es muy parecida a la de los procariontes, salvo en algunas diferencias debidos a las propias diferencias en el material gentico de procariotas y eucariotas:

El material gentico de eucariotas esta dividido en varios cromosomas, mucho mas largos que el cromosoma procariota.
La replicacin se origina simultneamente en muchos puntos: los replicones (puede haber mas de6000 en un solo cromosoma). Existen cinco tipos de ADN polimerasas ( , , , ,y ). El ADN eucariota est asociado a histonas, que se tienen que duplicar durante la duplicacin para formar los nucleosomas.

Replicacin en los eucariontes

Cuando se elimina el ltimo cebador, la ADN polimerasa no podr rellenar el hueco, al no poder sintetizar en direccin 3 - 5. Debido a esto el extremo del cromosoma (telmero) se va acortando cada vez que la clula se divide. Esto se asocia al envejecimiento y muerte celular.
La ADN polimerasa polimeriza desde el extremo 3 libre

3
5 Cebador 5 3 5

5
ltimo cebador

3 5

Eliminacin de cebadores

Hebra ms corta

3 5

Telmer o

MUERTE CELULAR
Se puede dar de dos formas: Necrosis y apoptosis Necrosis:

Se produce cuando la clula sufre un dao grave. Comprende un estado irreversible de la clula. No se puede mantener la integridad de la membrana plasmtica y hay un escape de elementos citoplasmticos, desnaturalizacin de las protenas por autlisis o proveniente de enzimas lticas de leucocitos vecinos, ya que la necrosis atrae los componentes de la inflamacin. Todos estos cambios condenan a la clula a perder su funcin especfica, y quedan restos celulares que sern fagocitados por los macrfagos.

MUERTE CELULAR
La apoptosis es una forma de muerte celular, que est regulada genticamente.

Es parte integral del desarrollo de los tejidos tanto de plantas como de animales pluricelulares. Cuando una clula muere por apoptosis, empaqueta su contenido citoplasmtico, lo que evita que se produzca la respuesta inflamatoria caracterstica de la muerte accidental o necrosis.

La apoptosis se puede producir en dos momentos: Durante el desarrollo embrionario: en este momento su funcin es eliminar las clulas innecesarias (como el tejido interdigital en la formacin de los dedos)

En un recambio y destruccin presentar organismo.

individuo adulto: para el renovacin de tejidos, o la de la clulas que pueden una amenaza para el

La apoptosis implica varios cambios en la clula:

Cuando las clulas reciben la seal del inicio de apoptosis se suicidan fabricando una serie de protenas letales como pueden ser: - Endonucleasas; que fragmentan el ADN - Hidrolasas y proteasas: que atacan al entramado celular.