Determinacin de la libre y total en cidos fenlicos Alimentos derivados de plantas por HPLC con deteccin de Diodo-Array Un lquido con

alto rendimiento de cromatografa (HPLC) con deteccin por red de diodos (DAD) fue utilizados para identificar y cuantificar los cidos fenlicos libre y total (m-hidroxibenzoico, p-hidroxibenzoico el cido, el cido protocatquico, cido glico, cido vanlico, cido sirngico, o-cumrico, m-cumrico, el cido p-cumrico, cido cafeico, cido ferlico, cido sinpico, cido clorognico y el cido elgico) en la planta los alimentos. cidos fenlicos libres se extrajeron con una mezcla de metanol y 10% de cido actico. Atado cidos fenlicos fueron liberados mediante alcalina y luego de hidrlisis cida seguida por extraccin con de ter dietlico / acetato de etilo (1:1). Todas las fracciones fueron cuantificadas por separado por HPLC. Despus de HPLC la cuantificacin, los resultados de lcali y los hidrolizados de cido se calcula que representan la totalidad de los cidos fenlicos. El cido elgico se cuantific por separado despus de largo (20 h) de hidrlisis cida Los mtodos desarrollados fueron eficaces para la determinacin de cidos fenlicos en los alimentos vegetales. DAD respuesta fue lineal para todos los fenlicos los cidos dentro de los rangos de evaluacin, con coeficientes de correlacin superiores a 0,999. Los coeficientes de variacin para 4 8 repeticiones de la muestra fueron consistentemente por debajo del 10%. Pruebas de recuperacin de los cidos fenlicos se realizado para todas las condiciones de hidrlisis usando varias muestras. Las recuperaciones eran buenas en general (media > 90%), con la excepcin del cido glico y, en algunos casos, las muestras de cido cafeico. INTRODUCCIN Los cidos fenlicos han recibido considerable atencin como posibles factores de proteccin contra el cncer y las enfermedades del corazn en parte debido a sus potentes propiedades antioxidantes y su ubicuidad en una amplia gama de alimentos de consumo habitual de la planta origen (1, 2). Los cidos fenlicos son derivados hidroxilados de cidos benzoico y cinmico (Figura 1). Los ms comunes hydroxycinnamic son derivados del cido p-cumrico, cafeico, y Los cidos ferlico, que ocurren con frecuencia en los alimentos como steres sencillos con cido qunico o glucosa. Probablemente el ms conocido de estos es el cido clorognico. A diferencia de hydroxycinnamates, hidroxibenzoico derivados de los cidos estn presentes principalmente en forma de glucsidos en los alimentos. Las formas ms comunes son p-hidroxibenzoico, vanlico, y los cidos protocatquico (3). El cido elgico es un dilactone de cido hexahydroxydiphenic, que a su vez es una condensacin dimrica - cin de productos de cido glico (4). Naturalezas qumicas diferentes y diferentes sensibilidades a la las condiciones de extraccin y la hidrlisis de complicar la determinacin de cidos fenlicos. Numerosos procedimientos de extraccin Se han descrito en la literatura. Una caracterstica comn de estos los mtodos de extraccin es su adecuacin a un solo material vegetal tipo de cido fenlico determinado (s) o de cierta forma (s) de fenlicos cido (s). Soluble en cidos fenlicos se han extrado por medio de mezclas de metanol, acetona, y / o agua (5 7), fro o caliente metanol (8 10), o mezclas de metanol, agua y cido actico cido (11, 12). Bound cidos fenlicos han sido liberados mediante hidrlisis cida (9, 13) o hidrlisis alcalina (5, 14 17), o dos (18, 19). Un nmero de tcnicas analticas han sido presentados para de la cuantificacin de los cidos fenlicos, como cromatografa en capa fina matography (19), el gas cromatografa de lquidos (5, 13, 20), el gas cromatografa espectrometra de masas (5, 21), capilar o elec Figura 1. Las estructuras qumicas de los cidos fenlicos analizados. mtodos trophoretic (22). Sin embargo, de lquidos de alto rendimiento de cromatografa (HPLC) es actualmente el ms utilizado mtodo de cuantificacin (8, 9, 15, 16, 23). A pesar de los numerosos mtodos para la determinacin de cidos fenlicos cin descrita en la literatura, un optimizado y validado mtodo para la determinacin de una variedad de cidos fenlicos en la diferentes tipos de alimentos vegetales es insuficiente. Por lo tanto, este estudio tiene como objetivo para desarrollar un mtodo optimizado para la determinacin de la cidos fenlicos (m-hidroxibenzoico, cido p-hidroxibenzoico, protocatquico cido, cido glico, cido vanlico, cido sirngico, o-cumrico, m-cumrico, cido p-cumrico, cido cafeico, el cido ferlico, cido sinpico, cido clorognico y el cido elgico) en el diferentes tipos de alimentos vegetales. MATERIALES Y MTODOS Normas. Normas de cidos fenlicos (Figura 1) se obtuvieron de dos fabricantes. Las normas siguientes se obtuvieron de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO): cido protocatquico (P-5630), cido p-hidroxibenzoico (H-5376), cido vanlico (V-2250), cido glico, (G-7384), cido sirngico (S-6881), cido p-cumrico (C-9008), m cumrico (C5017), O-cumrico (C-4400), TR-cido cinmico (C-6004), cido clorognico (cido 5-caffeoylquinic, C-3878), cido cafeico (C-0625), el cido ferlico (F-3500), y cido elgico (E-2250). cido sinpico fue adquirido a Fluka (Buchs, Suiza). Todas las normas se preparados como soluciones madre de 2 mg / mL en metanol, excepto elgico cido (1 mg / mL en dimetilsulfxido (DMSO) / metanol, 1:1, v / v). Stock las soluciones de las normas se almacena en la oscuridad en la 18 C. Estndar soluciones se mantuvo estable durante tres meses.

Muestras. Las muestras de papa (Nicola, 1 kg), manzana (Granny Smith, 4 manzanas), jugo de manzana (1 L), tomate (1 kg), (zanahoria 0,5 kg), rojo frambuesa (congeladas, 0,5 kg), fresas (congeladas, 0,5 kg), caf molido (1 kg), y pan tostado de centeno (7 submuestras, 300 500 g) se obtuvieron de locales puntos de venta de alimentos. Vino Rosado (Mateus, Portugal, 0,75 L) fue comprado en una tienda de vinos locales (ALKO Oy Ab). Zumo de manzana y las muestras de vino rosado Se analizaron como muestra de tal, la fresa se analiz despus de la descongelacin y la homogeneizacin, de manzana sin pelar muestras fueron analizadas despus de extraccin de testigos, y se analizaron muestras de pan crujiente despus de la puesta en comn y de homogeneizacin. Tomate picado, la zanahoria, y las muestras de color rojo frambuesa fueron liofilizadas, homogeneizada, y almacenadas a 18 C antes del anlisis. De muestras de papa se cocinan en agua hirviendo durante 20 minutos, a continuacin, pelados, homogeneizada, y almacenadas a 18 C antes del anlisis. De la muestra de caf fue fabricada con una cafetera convencional con 38 g de caf polvo y 700 ml de agua. La muestra se analiz el caf inmediatamente despus de la preparacin. In-House muestra de referencia. Para preparar una referencia en casa muestra que contiene una variedad de diferentes cidos fenlicos, 0,25 kg de de naranja, 0,5 kg de limn, 0,25 kg de arndanos, 0,38 L de vino tinto, 0,38 L de infusin de t verde, 0,5 kg de grosellero negro, y 0,5 kg de espinacas fueron mixtos, homogeneizada, y liofilizado. La referencia el material fue almacenado en contenedores hermticos de plstico en la oscuridad en la 20 C y comprobar que es muy estable para los flavonoides (24). Hidrlisis y extraccin de los cidos fenlicos. Un homogeneizada secos (0,2 0,5 g) o frescas (2 g) de la muestra (excepto manzana) fue pesado en un 50-ml tubo de ensayo graduado de plstico y homogeneizada en 7 ml de de la mezcla de metanol (con 2 g / L de 2, (3) - terc-butil-4 - hidroxianisol) y el 10% de cido actico (85:15) con un Diax Heidolph 600 homogeneizador (Heidolph, Alemania). Muestras de Apple fueron cortados en 4 piezas idnticas y una pieza de cada manzana se recogieron para su anlisis. Las piezas fueron posteriormente se pesa y el mismo peso que el peso de manzana de solucin de extraccin (vase ms arriba) fue aadido. La mezcla fue entonces homogeneizado utilizando un homogeneizador de Pamix. A 4-g de muestra de la mezcla homogeneizada se pesa entonces en un tubo de ensayo de 50 ml y 5 de ml de la solucin de extraccin se ha aadido. Homogenizacin realiza como se describe anteriormente. Despus de la homogeneizacin de la muestra todos los extractos de se ultrasonicated durante 30 minutos, hasta 10 ml con agua destilada, y mixtos, y 1 mL fue filtrada a travs de un filtro de membrana (0,45 m, 25 mm; Pall Gelman Laboratory) para el anlisis de HPLC de libre cidos fenlicos. Despus de tomar la muestra para el anlisis de cidos fenlicos, 12 ml de la de agua destilada y 5 ml de NaOH 10 M se han aadido en el tubo de ensayo, y su contenido fueron burbujas de nitrgeno, sellados, y se agita durante la noche a temperatura ambiente (alrededor de 16 h) utilizando un agitador magntico. La solucin se ajusta a un pH de 2, y liberado fenlicos Los cidos se extrajo tres veces con 15 mL de una mezcla de dietlico fro ter (DE) y acetato de etilo (EA, 1:1) manualmente agitacin y centrifugacin. DE / EA capas se combinan, se evapora a sequedad, y disuelto en 1,5 ml de metanol. Despus de las muestras fueron filtradas a travs de un filtro de membrana (vase ms arriba), se realiz la carrera de HPLC. Despus de la hidrlisis alcalina anterior fue efectuada, una hidrlisis cida, fue interpretado por la adicin de 2,5 ml de HCl concentrado en la tubo de ensayo y de incubacin del tubo en un bao de agua (85 C) durante 30 min. Despus de la hidrlisis cida, la muestra se enfra, y el pH se ajustado a 2. El DE / EA realiz la extraccin fue similar a la de la hidrlisis alcalina. Extracto evaporada fue disuelto en 1,5 ml de metanol, se filtra a travs de un filtro de membrana (vase ms arriba), y analizados por HPLC. Despus de la cuantificacin de HPLC, los resultados de lcali y los hidrolizados de cido se calcula que representan la totalidad de los cidos fenlicos. La hidrlisis de cido elgico. El mtodo de extraccin empleado para las determinaciones de cido elgico en las bayas se bas en el mtodo de Hkkinen et al. (25) con las siguientes modificaciones: a homogeneizada secos frambuesa roja (0,5 g) o de las fresas frescas (5 g) de la muestra se pes en un matraz de rotavapor y 10 ml (desecado frambuesa roja) o 5 ml (frescos de fresa) de agua, 20 ml de metanol y 5 ml de la misma HCl se han aadido. La mezcla se calienta a reflujo durante 20 horas a 85 C. El extracto se deja enfriar, compuesto por 50 ml con metanol, y parte de ella se filtra con un filtro de membrana (vase ms arriba) para la HPLC anlisis. La cuantificacin de los cidos fenlicos. El sistema analtico de HPLC empleados se compona de un lquido rendimiento Agilent serie 1100 de alto cromatgrafo equipado con un diodo Agilent 1100 Series-array detector (Agilent Technologies, Alemania). Las bombas de HPLC, au - tosampler, horno de columna, y el diodo sistema de matriz fueron supervisados y controlan usando el programa HP Chem. estacin de computadora (Agilent). Longitudes de onda utilizadas para la identificacin de los cidos fenlicos con el diodo detector de red fue de 254 nm para el cido protocatquico, p-hidroxibenzoico el cido, y el cido vanlico; 270 nm para el cido glico, 280 nm para el sirngico cido, cido p-cumrico, m-cumrico, o-cumrico, y TR - el cido cinmico, 329 nm para el cido clorognico, cido cafeico y ferlico + cido sinpico. Ferlico y cidos sinpico fueron cuantificados juntos como cido ferlico. La

separacin de cidos fenlicos fue realizada por una SAO Inertsil-3 (4,0 150 mm, 3 m; Ciencias GL, Inc., Japn) con una columna C-18 de la Guardia de la columna. Temperatura del horno de columna se fij en 35 C. Elucin en gradiente se emple con una fase mvil que consiste de 50 mm h 3 PO 4 , PH 2,5 (solucin A) y acetonitrilo (solucin B) como sigue: isocrtico elucin 95% A / 5% B, 0 5 min; gradiente lineal de 95% A / B 5% a Un 50% / 50% B, 5 55 min; elucin isocrtica 50% A/50% B, 55 65 min; gradiente lineal de 50 A/50% B% a 95% A / 5% B, 65 67 min; tiempo de post-6 min antes de la siguiente inyeccin. El cido elgico se cuantific por separado utilizando acortado elucin en gradiente: elucin isocrtica 95 A% / 5% B, 0 5 min; gradiente lineal de 95% A / B 5% a un 50% / 50% B, 5 35 min; elucin isocrtica 50% A/50% B, 35 40 min; gradiente lineal de 50 A/50% B% a 95% A / 5% B, 40 43 min; tiempo de post-6 min antes de la siguiente inyeccin. Flujo de la fase mvil fue de 0,7 mL / min, y la inyeccin de los volmenes fueron 10 L de las normas y los extractos de la muestra. Todos los fenlicos Los cidos se cuantificaron utilizando el mtodo estndar externo. Cuantificacin se basaba en el rea del pico. Las curvas de calibracin de las normas se hicieron mediante la dilucin de las normas de valores en el metanol para producir 30 300 (cido elgico) o 10 80 g / ml (otros cidos fenlicos). Validacin del mtodo. Linealidad de las respuestas del detector y el los lmites de deteccin fueron analizadas para determinar los niveles de cidos fenlicos. Recuperacin se realizaron pruebas para todas las condiciones de hidrlisis con alimentos varios muestras (Tabla 1). Repetibilidad del mtodo fue probado mediante el anlisis de todas las muestras de 4 8 veces y el anlisis de la muestra de referencia 7 veces. De identidad y pureza de los picos del cido fenlico fue monitoreada (adems de los tiempos de retencin para el seguimiento y la simetra de los picos), comparando los datos espectrales de los picos de la muestra con la obtenida para el fenlicos las normas de cido. Determinacin de los cidos fenlicos por HPLC RESULTADOS Y DISCUSIN La dificultad de la determinacin de cidos fenlicos surge de la de extraccin de estos compuestos a partir de matrices de alimentos. Anteriormente, muy complicados mtodos de extraccin han sido empleados para determinar libre, esterificados, y glycolysated cidos fenlicos en material vegetal (5, 7, 26). El presente estudio ha resultado en un mtodo simplificado para una variedad de muestras de alimentos. Este mtodo permite la determinacin de cidos fenlicos libres y totales, utilizando de tres procedimientos diferentes de hidrlisis en el mismo tubo de ensayo. cidos fenlicos libres fueron extrados utilizando metanol / actico de cido como la solucin de extraccin. Tiempos de ultrasonidos de 30 minutos eran adecuados, ya que, segn nuestros estudios, de 1 h de sonicacin o 30 minutos de sonicacin ms 30 minutos de agitacin se no dar lugar a mejores valores de extraccin. Tiempo de hidrlisis diferentes (2, 4, y 16 h) y alcalinas de fuerza (2,5, 5, y 7 mL de 10 M de NaOH) combinaciones fueron probados para de optimizar el procedimiento de hidrlisis alcalina (resultados mostrados). La combinacin ms eficaz para la mayora de los cidos fenlicos se 16 horas y 5 ml de 10 M NaOH. En estas condiciones, la ms resultados se han obtenido, y la recuperacin de aadido los cidos fenlicos fueron buenos en la mayora de los casos (Tabla 1). Sin embargo, Una excepcin fue el cido glico que fue inestable durante alcalinas condiciones. Por lo tanto, los resultados obtenidos para este cido fenlico despus de la hidrlisis alcalina eran demasiado bajos y no se muestra en la Cuadro 3. En condiciones alcalinas, clorognico y otros cidos caffeoylquinic son hidrolizados rpidamente a cido cafeico (27). En algunas muestras (por ejemplo, el caf), cido cafeico descomponerse como resultado del tratamiento alcalino (Tabla 1). En las plantas, sin embargo, la mayor parte del cido cafeico se produce como cidos caffeoylquinic (3) y Estos podran ser cuantificados despus de que el metanol / extraccin de cido actico cin. En general, la hidrlisis alcalina liber la mayor parte de la de la envolvente cidos fenlicos. Caa de azcar era necesario en los casos de manzana, zumo de manzana y papa debido a la hidrlisis liberados slo un contenido muy bajo de cidos fenlicos despus del lcali tratamiento. Despus de la hidrlisis alcalina, hidrlisis cida se llev a cabo para liberar al resto de los cidos fenlicos de la envolvente. Diferentes tiempos de hidrlisis (15 min, 30 min, 1 h, 16 h), los puntos fuertes de cido (2,5, 3, 5 y 10 ml de HCl concentrado y 5 ml de 6 M HCl) y temperatura (35 C y 85 C) combinaciones fueron probado para optimizar el procedimiento de hidrlisis cida (no los resultados de muestra). La combinacin de compromiso result ser de 2,5 ml de de HCl concentrado, 30 min y 85 C. Estas condiciones fueron suficientemente eficaz con prdidas mnimas. Sin embargo, la recuperacin del cido p-cumrico fue muy variable (Tabla 1). En el desarrollo del mtodo de extraccin de cidos fenlicos DE en la solucin de EA fue examinado por las pruebas de recuperacin. Estos pruebas de recuperacin puso de manifiesto que, en general, libre de cidos fenlicos extrados bien en DE / EA con la solucin de recuperacin que van desde 87 a 112%. Adems de los cidos fenlicos, tambin algunas formas de de la envolvente cidos fenlicos extrados en cierto grado en el DE / Solucin de EA. Por ejemplo, la recuperacin de cido clorognico (es - terified cido fenlico) fue de 5463% y la de cido elgico fue del 42%. Los mtodos de extraccin anteriormente no eran adecuados para elgico cido como este cido fenlico fue slo parcialmente soluble en la mezcla Tabla 1. La recuperacin de los cidos fenlicos (%) despus de diferentes

condiciones de hidrlisis Compuestos: 3-CQA, cido 3-caffeoylquinic; 5-CQA, el cido 5-caffeoylquinic (cido clorognico), 4-CQA, cido 4-caffeoylquinic; CAF, cido cafeico, p-coum, cido p-cumrico; Fer cido ferlico, p-OH-B, cido p-hidroxibenzoico; van, cido vanlico; SYR, cido sirngico, proto, cido protocatquico; gal, cido glico, tr-cin, TR-cido cinmico. b Procedimiento: 1, metanol y extraccin de cido actico, 2, hidrlisis alcalina; 3, la hidrlisis cida. c Las recuperaciones se presentan como rangos de si se han realizado ms de dos pruebas de recuperacin. de DE / EA (1:1). Para el cido elgico, una modificacin del mtodo de por Hkkinen et al. (25) fue utilizado. El cido elgico ha sido a menudo extrado por medio de soluciones de cido trifluoroactico (28, 29). Sin embargo, Hkkinen y colaboradores (25) compar el cido trifluoroactico y las extracciones de HCl y encontraron que sta sea mucho ms eficiente. Adems de probar las condiciones de la hidrlisis por la Hkkinen et al. (25), 5-H y 20-H hidroliza uso del doble de HCl mucho se probado en el presente estudio. Las condiciones ptimas de Hkkinen et al. (25) fueron los ms eficientes y estas condiciones pues, se seleccionaron. La carrera fue acortada para HPLC elgico cuantificacin de cido para acelerar el tiempo de anlisis. Todos los otros cidos fenlicos y separados de la matriz y la cada uno de los cidos, excepto elgico, ferlico, y sinpico, que eluyen en el mismo tiempo de retencin (Figuras 2 4). Porque el cido sinpico es bastante raro en comparacin con el cido ferlico, y el espectro las diferencias entre los cidos ferlico y sinpico a 329 nm son pequea, la cuantificacin de cido sinpico se realiz en conjunto con el cido ferlico como el cido ferlico. En cambio, la cuantificacin de ferlico Tabla 2. Contenido de cidos fenlicos libres en los alimentos probados, en mg / kg de peso fresco, media (clave de cidos fenlicos se da en la nota A de la tabla y los cidos sinpico es imposible si la muestra contiene grandes cantidades de cido elgico. As, en esa situacin, ferlico y cidos sinpico son obviamente menos importantes desde el nutricional punto de vista. Result ser posible combinar la DE / EA extractos obtenidos despus de la hidrlisis alcalina y cida antes de el anlisis de HPLC, si bien la separacin de los cidos fenlicos de la la matriz no era tan buena como la que mediante el anlisis de los extractos de por separado. La comparacin de los datos espectrales de los picos de la muestra con las obtenidos de las normas de cidos fenlicos confirmado la fiabilidad de de cuantificacin (90 partidos fueron en general 100%). Fiabilidad del mtodo fue an ms de manifiesto por la recuperacin y la repetibilidad pruebas. Se realizaron pruebas de recuperacin para cada hidrlisis de estado usando varias muestras. En general, la recuperacin fue buena (media > 90%, Tabla 1). Sin embargo, parece que cidos fenlicos fueron ms estables durante alcalino que cido hidrlisis. El mtodo demostr ser repetible: coeficiente de la variacin de la muestra de referencia vari de 4,0% (p-cumrico cido) al 14,1% (p-hidroxibenzoico). Para otras muestras, coeficientes de variacin fueron en su mayora menores de 10% (cuadros 1 y 2). Los lmites de deteccin de cidos fenlicos, definido como la seal de tres veces la altura del nivel de ruido, se estima en 0,02 Figura 2. Cromatogramas de HPLC de los cidos fenlicos mezcla patrn, registrados en 254, 270, 280 y 329 nm. Columna: ODS Inertsil-3 (4,0 150 mm, 3 m; Ciencias GL, Inc, Japn). Fase mvil: gradiente de elucin que consta de 50 mm h 3 PO 4 , PH 2,5, y acetonitrilo. abreviatura de p-OH-b, p-hidroxibenzoico cido; van, cido vanlico; gal, cido glico, SYR, cido sirngico, p-coum, cido p-cumrico; coum m-, m-cumrico, ocoum, o-cumrico; tr-cin, TR - cinmico cido, cloro, cido 5-caffeoylquinic (cido clorognico), la CAF, cido cafeico, Fer, el cido ferlico, sina, cido sinpico. 0,07 g / ml. Respuesta del detector fue lineal en el rangos de la prueba. Los coeficientes de correlacin se > 0,999 para todos los cidos fenlicos. Idoneidad del mtodo fue probado mediante el anlisis de alimentos de varios muestras. Los resultados de la cuantificacin de los cidos fenlicos (promedio de los valores de todos los anlisis replicado) se presentan en los cuadros 2 y 3. Total de los cidos fenlicos (Tabla 3) representan los resultados calculados obtenido despus de hidrlisis alcalina y cida. El fenlicos principal de cido en la mayora de las muestras analizadas (papa, manzana, manzana jugo de tomate, zanahoria, y el caf) es el cido clorognico (5 -- cido caffeoylquinic). Adems de cido clorognico, otras formas de los cidos caffeoylquinic tambin se encontraron, es decir, 3-caffeoylquinic cido y / o cido 4-caffeoylquinic. Se identificaron 3 - y 4-CAF cidos feoylquinic utilizando datos espectrales y los datos producidos por Brandl y Herrmann (30) y cuantificado como el 5caffeoylquinic cido. Las mejores fuentes de cidos fenlicos de las muestras analizadas fueron frambuesa, caf y pan crujiente. cidos Caffeoylquinic se cido abundante en el caf, y ferlico era abundante en pan tostado. Frambuesa roja tena un alto contenido de cido elgico: 1,6 (0,055 g / kg FW. Contenido de cido elgico en fresa fue de 0,31 ( 0,026 g / kg FW. Adems de cido elgico, algunos no identificados com libras con los espectros de absorcin muy similar a la de elgico El cido se detectaron en las bayas. Los compuestos no identificados fueron no se toman en cuenta al calcular los resultados de cido elgico. Moderadamente buena fuente de cidos fenlicos fueron la patata cocida con Figura 3. Cromatogramas de HPLC de la muestra de pan crujiente despus de la hidrlisis alcalina. Clave para los cidos fenlicos es igual que para la Figura 2. Determinacin de los cidos fenlicos por HPLC alto contenido de cido caffeoylquinic y la zanahoria con abundante caffeoylquinic y p-hidroxi contenido de cido benzoico. Informes espordicos sobre el contenido de cidos fenlicos en los alimentos artculos estn disponibles en la literatura. Los resultados del presente estudio son en comparacin con las publicaciones anteriores, en particular, con los por Radtke

et al. (31, Tabla 3). Al considerar que nuestra prueba de las muestras no eran representativas, y la variacin de alta probabilidad de cidos fenlicos contenidos en los alimentos vegetales, los datos de la presente estudio estuvieron de acuerdo con los valores moderados se inform anteriormente. CONCLUSIN Los mtodos de HPLC descrito aqu fueron muy apropiado para la determinacin de los cidos fenlicos ms libre y total en diversas plantas los alimentos. La excepcin fue el cido glico, y en algunos casos, cafeico el cido (en el caf), que se descomponen durante la hidrlisis alcalina. La sensibilidad, precisin y repetibilidad de los mtodos se aceptable.