UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MXICO

FACULTAD DE QUMICA

Prctica #5: Reacciones de las Protenas.

Laboratorio de Bioqumica Bsica.

Profesor: Dr. Jos Benito Smano Njera

QFB

GPO 43

18/03/2013

RESULTADOS: Desnaturalizacin de protenas Sol Proteica Albmina Albmina Albmina Albmina Albmina Albmina Albmina Agente Desnaturalizante Resultado Calor cido pcrico Acetato de plomo Acetona Etanol HCl CuSO4 Precipitado transparente Precipitado amarillo Precipitado blanco Precipitado blanco Precipitado blanco Precipitado blanco Precipitado blanco Precipitado beige Precipitado amarillo Precipitado amarillo Precipitado naranja claro Precipitado amarillo Precipitado amarillo muy claro Precipitado blanco Precipitado amarillo Precipitado amarillo Precipitado beige Precipitado beige Precipitado amarillo Precipitado naranja claro Precipitado transparente

Suero sanguneo Calor Suero sanguneo cido pcrico Suero sanguneo Acetato de plomo Suero sanguneo Acetona Suero sanguneo Etanol Suero sanguneo HCl Suero sanguneo CuSO4 Jugo de carne Jugo de carne Jugo de carne Jugo de carne Jugo de carne Jugo de carne Jugo de carne Calor cido pcrico Acetato de plomo Acetona Etanol HCl CuSO4

ACIDO PICRICO

SULFATO DE COBRE

CIDO CLORHIDRICO

ACETATO DE PLOMO

ACETONA

ETANOL

CALOR

CONCLUSIONES: De las tres protenas ensayadas, albmina de huevo, suero sanguneo y jugo de carne, encontramos que cambian su aspecto fsico, esto se deba a que las protenas sufren el fenmeno de DESNATURALIZACIN es decir que cambia alguna de sus ESTRUCTURAS.

Cuando a una protena le agregamos una cantidad de sales inorgnica como esta se precipita a este fenmeno se le llama SALTING OUT.

Los agentes desnaturalizantes que podemos utilizar para identificar a una protena pueden ser clasificados como: FSICOS (calor, radiaciones UV, altas presiones) y QUMICOS (acidos, bases, sales, solventes, etc).

EVALUACIN: 1.- Describa qu es una desnaturalizacin proteica. Los cambios ambientales o los tratamiento qumicos pueden causar una desorganizacin en la conformacin nativa de una protena, con la prdida de la actividad biolgica. Esta desorganizacin de llama desnaturalizacin. Como la conformacin nativa solo es estable de manera marginal, la energa necesaria para causar la desnaturalizacin es con frecuencia pequea, quiz equivalente a la desorganizacin en tres o cuatro puentes de hidrogeno. Cuando las protenas se encuentran en su estado natural reciben el nombre de protenas nativas, despus del cambio de llaman protenas desnaturalizadas. Dependiendo de si la protena es oligomrica o no, de si la prdida de conformacin es parcial o completa, y de si se pierde o no la actividad biolgica, el trmino posee varios significados. Las protenas pueden ser desnaturalizadas de diferentes formas, ya sea por aumento de calos, irradiacin o por contacto con agentes qumicos. El calentamiento de la disolucin de una protena causa un incremento en la energa de vibracin y rotacin que puede rebasar el delicado equilibrio de interacciones dbiles que estabilizan la conformacin plegada funcional. Las temperaturas elevadas o el tratamiento con cidos o lcalis fuertes pueden causar la inactivacin irreversible por medio de cambios covalentes, por ejemplo, la desamidacin de residuos de asparagina o de glutamina y la destruccin de puentes disulfuro. Cuando se ha desnaturalizado una protena se pierde la estructura natural junto con muchas de sus propiedades especficas. La cadena desplegada es un ovillo

aleatorio, con libertad de rotacin alrededor de los enlaces tanto en el armazn polipeptdico como en las cadenas laterales. Ya no tiene la conformacin nica, sino que flucta continuamente entre un gran nmero de conformaciones extendidas. La secuencia de las protenas involucra los siguientes pasos: Destruccin de los puentes disulfuro por reduccin. Determinar la composicin aminocida de la protena o pptido. Esto requiere de una completa hidrlisis, la cual puede lograrse mediante la adicin de calor, hasta los 120C en un medio cido seguida por el anlisis de aminocidos. Determinar los grupos amino y carboxilo terminales. Seleccionar toda la informacin que sea posible de los diferentes fragmentos de la protena.

2.- En qu consiste el efecto "saltin in, saltin out" de una protena Si se agrega a una solucin de protena en agua pura pequeas cantidades de sal, disminuye el coeficiente de actividad de la protena y su solubilidad aumenta. Este fenmeno, llamado disolucin salina o salting in, se debe a las fuerzas de atraccin entre los iones de la protena y los iones de la sal. A concentracin de sal baja el aumento en el logaritmo de la solubilidad de la protena es proporcional a la fuerza inica del disolvente. El salting in se explica porque al aadir una pequea cantidad de iones extraos se aumenta el desorden molecular con ello la entropa se hace mayor y no habiendo variacin de entalpia, el cambio de energa libre es negativo y esto supone una tendencia espontnea al aumento de la solubilidad. Ahora bien, a concentraciones elevadas de sales muy solubles, como sulfato amnico, se observa precipitacin salina o salting out de las protenas, la cual depende de la disminucin de la actividad del agua, lo que a su vez disminuye las interacciones solubilizantes entre el agua y los grupos de la protena. Es decir, que cuando aumenta mucho la cantidad de iones extraos, la interaccin protenaprotena se hace mayor que la interaccin protena-agua, baja la movilidad de las cargas proteicas y las protenas precipitan.

3.- En que consiste el fenmeno de renaturalizacin proteica y bajo qu condiciones es posible que se lleve a cabo. El proceso mediante el cual la protena desnaturalizada recupera su estructura nativa se llamare naturalizacin. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificacin de protenas, ya que no todas las protenas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalizacin conduce a la prdida total de la solubilidad, con lo que la protena precipita. La formacin de agregados fuertemente hidrofbicos impide su renaturalizacin, y hacen que el proceso sea irreversible, por ejemplo, en el caso de la desnaturalizacin de la enzima ribonucleasa por aumento de la temperatura, se pierden sus estructuras secundaria y terciaria y no puede actuar como catalizador para la fragmentacin del RNA, sin embargo, esta desorganizacin total de la estructura de la ribonucleasa es completamente reversible, ya que si sta vuelve a las condiciones fisiolgicas normales de temperatura y disolvente, se plegara espontneamente en sus estructura nativa. 4.- Escriba una clasificacin de las protenas de acuerdo a su funcin. De accin enzimtica: Las enzimas son protenas que catalizan las reacciones qumicas en los seres vivos, acelerndolas generalmente. Estructurales: Forman parte de la piel, los huesos, el cabello y los tejidos conectivos, brindndoles soporte; ejemplos de este tipo son el colgeno y la queratina. Contrctiles: Afectan el movimiento de los seres vivos. Los msculos estn formado por protenas contrctiles como la miosina, la actina y la tubulina. De accin hormonal: Son protenas de comunicacin qumica que permiten que en los organismos las clulas, los rganos o los sistemas funcionen de manera precisa, por ejemplo la insulina, que regula la oxidacin de glucosa en los tejidos y tambin el nivel de ese azcar en la sangre. De transporte: Llevan sustancias de un lugar a otro, por ejemplo la hemoglobina, que transporta oxgeno y bixido de carbono. Inmunoglobulinas: Son protenas de defensa que utiliza el cuerpo para eliminar o neutralizar sustancias extraas. Receptoras: Este tipo de protenas se encuentran en la membrana celular y llevan a cabo la funcin de recibir seales para que la clula pueda realizar

su funcin, contraccin.

como acetilcolina que

recibe

seales

para

producir

la

5.- Explique las cuatro estructuras que presentan las protenas. La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria. Cada una de estas estructuras informa de la disposicin de la anterior en el espacio. Estructura primaria: La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Nos indica qu aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aminocidos se encuentran. La funcin de una protena depende de su secuencia y de la forma que sta adopte. Estructura secundaria: La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los aminocidos, a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y gracias a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la estructura secundaria. Existen dos tipos de estructura secundaria: La a(alfa)-hlice: Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria. Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un aminocido y el -NH- del cuarto aminocido que le sigue. La conformacin beta: En esta disposicin los aminocidos no forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag, denominada disposicin en lmina plegada. Presentan esta estructura secundaria la queratina de la seda o fibrona.

Estructura terciaria: La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular. En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto la terciaria. Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones de transporte, enzimticas, hormonales, etc. Estructura cuaternaria: Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes) de varias cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero. El nmero de protmeros vara desde dos, como en la hexoquinasa; cuatro, como en la hemoglobina, o muchos, como la cpsida del virus de la poliomielitis, que consta de sesenta unidades proteicas.

BIBLIOGRAFIA: Lehninger, Albert L., 1991, Bioqumica: Las bases moleculares de la estructura y funcin celular, Edit. Ediciones Omega S.A., p.p. 59-63, 97101. Teijn J.M., 2001, Bioqumica Estructural, Casa Editorial Mares, S.L. Madrid, pp. 84 y 85. Garrido A., Teijn J.M., 2006, Fundamentos de Bioqumica Estructural, 2 edicin, Editorial TBAR, S.L. Madrid, pp. 71-73