2.

TINCIONES O COLORACIONES

COLORANTE: DEFINICIN
Son compuestos orgnicos que tienen alguna a ini!a! espec" ica por alg#n componente$ Los colorantes son compuestos qu"micos utili%a!os para aumentar

el contraste

a& Sales colorantes: ms comnmente

usados 'sicos: Consisten en un catin coloreado unido a un
anin incoloro. Tien la clula bacteriana uniformemente (cidos nucleicos y los polisacridos cidos )

COLORANTES: Tipos

(cromatina nuclear de pro y eucariotas) (ms usados en citologa bacteriana). !: clor"idrato (#) de a$ul de metileno (%). la sa ranina( la ucsina 'sica( el cristal )ioleta

ci!os: Tienen el catin incoloro unido a un anin

coloreado. &o tien la clula bacteriana' pueden usarse como color de contraste (coloracin negati(a). Tien

COLORANTES: estructurasTipos citoplasmticas de las clulas eucariotas()*

bsicas)
!: eosinato (#) de sodio (%)'la ucsina ci!a * el ro+o Congo$

COLORANTES: Tipos
'& Colorantes liposolu'les +e combinan con los componentes lipdicos de la clula' usados para re(elar la locali$acin de los depsitos de grasa. !. &egro +udn.

C,-,).C/,& + : Tipos
,itales
+on a0uellas 0ue se practican sobre clulas 0ue estn (i(as' mediante la introduccin de un colorante en la circulacin de un organismo (i(o. !em: el (erde 1ano y el a$ul de metileno.

Supra)itales
son a0uellas 0ue se reali$an sobre clulas o te!idos (i(os' pero 0ue estn aislados del organismo del 0ue proceden.

No )itales
se reali$an sobre clulas muertas.

T-CNICAS .ARA REALI/AR 0NA .RE.ARACIN COLOREADA

a) 2rotis o pelcula (e*tensin) b) -a fi!acin c)

Coloracin.

Tincin de clulas para la observacin microscpica

Ex ensin de una !ina capa de clulas sobre el por a

Adicin del coloran e lavado " secado Secado al aire

#i$acin por !lameado del por a

Se coloca una %o a de acei e de inmersin sobre el por a " se observa con el ob$e ivo de &''(

a) 2rotis o pelcula (e*tensin)

3tili$ar portaob!etos limpios y desengrasados

T-CNICAS .ARA REALI/AR 0NA .RE.ARACIN

'& La i+aci1n:
Los microorganismos que!en a!2eri!os al portao'+eto 3 coagula las sustancias proteicas&

TI.OS
C,& C.-,) (, 45T,6, 6 7,C8) 2/1.C/9& :3;4/C.: alco"ol metlico' formalina al < = ((>()' licor de 8offman (partes iguales

)e anol

de etanol absoluto y ter)

c& Coloraci1n$ SI4.LE : .ositi)a o

negati)a

Tincin simple de a*ul de me ileno.

#ro is " !i$acin

&.+ ,oner una %o a de a%ua en un por a

2.+ Tomar la mues ra con el asa de siembra

-.+Ex ender sobre el a%ua " !i$ar a la llama del mec.ero

Tincin

&.+ Cubrir la preparacin con A*ul de )e ileno /0

2.+ Lavar con a%ua1 de$ar secar " observar al microscopio Micrococcus luteus

Tincin ne%a iva.

&.+ Colocar una %o a Ni%rosina en un por a

de -.+ )e*clar con la Ni%rosina " ex ender por odo el por a. Secar al aire " observar

2.+ Tomar mues ra del microor%anismo con el asa1 !lamear el ubo " apar

cpsulas tanto bacterianas como de levaduras, esporas que se observan como cuerpos refringentes y espiroquetas

 5ongos
Tinci1n negati)a

T-CNICAS .ARA REALI/AR 0NA .RE.ARACIN COLOREADA

c& Coloraci1n$ Di erencial o
compuesta
se utili$an para distinguir entre tipos de microorganismos

tapas : 6$ tinci1n primaria

7$ Tinci1n !e contraste o secun!aria

E+emplo$: COLORACION 8RA4( COLORACION DE /IE5L9 NEELSEN( ES.ORAS

T )4/&,+
-os mor!ientes' aun0ue no son colorantes' intensifican la tincin por0ue aumentan la afinidad de la clula por el colorante. Tambin se pueden utili$ar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares e*ternas' como los flagelos' 0ue debido a su delgade$ no podran ser (isuali$ados de otra forma.

6iferencias en la pared celular

L+-.2.-.+ Tincin de 2ram

#ro is " !i$acin

Tincin

&.+ ,oner una %o a 2.+ Tomar la mues ra de a%ua en un por a con el asa de siembra

-.+ Ex ender sobre el a%ua " !i$ar a la llama del mec.ero

&.+ Cubrir la preparacin con Cris al 3iole a 20

2.+ A4adir Lu%ol 5mordien e6 duran e &0

-.+ 7ecolorar con Alco.ol 89: .as a ;ue no suel e coloran e

<.+ Lavar con a%ua

/.+ Te4ir con Sa!ranina &0

9.+ Lavar con a%ua1 de$ar secar " observar al microscopio

Tincin de 2ram
Tincin del !ro is ,aso &
,reviamen e !i$ado al calor1 con cris al viole a 7uran e & minu o. Todas las clulas se i4en de color a*ul+viole a.

,aso 2

A4adir Lu%ol1 de$ar ac uar 2 minu os Todas las clulas si%uen de color a*ul+viole a.

2ram =

7ecolorar con alco.ol ,aso Las clulas 2ram = si%uen de color a*ul+viole a. Las 2ram ne%a ivas se decoloran.

Tincin de con ras e

Con sa!ranina 2 minu os. Las clulas 2= se ven a*ul+viole a.

,aso <

Las 2+ rosas o ro$as.

2ram +

?),C 6/4/ &T, C,-,).C/,& @). 4

Tincin de 2ram Cocos 2ram + >acilos 2ram +

COLORACIN DE /IE5L9 NEELSEN

fundamento de esta tcnica diferencial se basa en la propiedad de la pared celular ,rden .ctinomycetales. (acidos miclicos) )esiste la decoloracin con alco"ol y un cido fuerte cuando A.)/.&T + Caliente : Mycobacterium n fro (o de 7inyoun) : Cryptosporidium' Cyclospora

Tincin de ?cido+alco.ol+resis en e.
#ro is " !i$acin Tincin

&.+,oner una %o a de a%ua en un por a

2.+ Tomar la mues ra de un cul ivo de Mycobacterium

-.+Ex ender sobre el a%ua " !i$ar a la llama del mec.ero &.+Cubrir la preparacin con #uc.ina !enicada

2.+Calen ar con un .isopo de al%odn empapado en alco.ol " prendido con la llama del mec.ero .as a la emisin de vapores. )an ener duran e / minu os.

-.+Lavar con a%ua " decolorar con alco.ol ?cido

<.+Te4ir con A*ul de )e ileno &0

/.+Lavar con a%ua1 de$ar secar " observar al microscopio

Tincin de esporas.
#ro is " !i$acin Tincin

&.+,oner una %o a de a%ua en un por a

2.+Tomar la mues ra de un cul ivo de Bacillus

-.+Ex ender sobre el a%ua " !i$ar a la llama del mec.ero

&.+Cubrir la preparacin con 3erde )ala;ui a

2.+Calen ar1 con un .isopo de al%odn empapado en alco.ol " prendido con la llama del mec.ero1 .as a la emisin de vapores. )an ener calien e duran e / minu os.

-.+Lavar con a%ua

<.+Te4ir con Sa!ranina &0

/.+Lavar con a%ua1 de$ar secar " observar al microscopio

Esporas

>ac erias

-a tincin de flagelos de -eifson

B.+e fi!a 0umicamente la suspensin bacteriana' mediante formol' y se "ace la e*tensin en un portaob!etos. C.+e de!a secar al aire' sin calentamiento alguno. D.+e cubre la preparacin con una me$cla de cido tnico y el colorante rosanilina' de preparacin e*tempornea. l cido tnico engruesa los flagelos y la rosanilina los tie. E.+e retira el e*ceso de colorante con agua. <. ?or ltimo' se de!a secar al aire' antes de su obser(acin al microscopio.

Figura :$66Tinciones especficas. (a) -a tincin de Firt$#ConGlin se utili$a para obser(ar endosporas. Bacilius cereus (b) -a tincin de -eifson re(ela 0ue este microorganismo posee flagelos' lo cual contribuye a su identificacin como Spirillum volutans..(c) -a tincin negati(a con tinta c"ina permite obser(ar 0ue esta bacteria posee cpsula' lo 0ue facilita su identiticacin como Klebsiella pneumoniae' agente causal de la neumona.

8,&@,+
.H3- 6 -.CT,2 &, T. 4 &T.@),?8IT +