PROYECTO DE DOCENCIA

La microbiologa basada en evidencias: un enfoque desde el aprendizaje basado en problema

M en C. Beatriz A. Rodas Junco y M. en M. Mnica M. Galicia Jimnez

MEDIDA DE CRECIMIENTO DE UNA POBLACIN MICROBIANA Introduccin El crecimiento bacteriano se define como un aumento en el nmero de clulas, en otras palabras, se refiere al crecimiento en poblacin y no al crecimiento en tamao. Existen diferentes mtodos para medir el crecimiento bacteriano, en esta practica solo nos enfocaremos a dos tcnicas Recuento directo del nmero de clulas al microscopio y Medida de la turbidez del cultivo. Objetivo 1. 2. 3. Compara las ventajas y desventajas de las tcnicas de cuantificacin Realizar una curva de crecimiento de cada tcnica y extrapolar el nmero Calcular el tiempo de generacin del organismo bacteriano. directa e indirecta de microorganismos. de clulas con los valores de D.O.

Para ello recordemos que el tiempo de generacin (g) es: el tiempo requerido para que una clula se divida dando lugar a dos clulas. Si consideramos que entre el tiempo inicial (t0) y otro final (tf), han transcurrido n generaciones, entonces: g = tf-to/n donde n es el nmero de generaciones, y viene dado por los ciclos de divisin ocurridos en la poblacin en un tiempo dado.
inculo primera divisin Segunda divisin Tercera divisin n divisiones 1 clula 2 clulas 4 clulas 8 clulas n clulas 20 21 22 23 2n

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Por tanto el nmero de clulas final (Nf) ser Nf= nmero de clulas x 2n A partir de esta frmula obtendremos n y podremos sustituirla en g = tf-to/n n= log Nf N0 / log 2 Material de laboratorio Espectrofotmetro 4 Celdas para espectrofotmetro Parrilla de agitacin 4 Matraces de 2500 ml con 100 ml LB 4 Agitadores magntico estril 10 tubos con 8 ml de agua destilada + 1 ml de glicerol y una gota de azul de metileno 1 Microscopio compuesto. 1 Cmara de Neubauer 1 Mechero 1 Campana de extraccin. Preinculo del microorganismo Pinzas de diseccin 1 vaso precipitado de 250 ml Alcohol Azul de metileno Glicerol Vortex Actividad Practica En el matraz de 250 ml colocaremos el preinoculo. Mediremos por ambos mtodos para observar el nmero inicial de clulas. Y seguiremos las mediciones cada hora durante 11 hrs. y en alguno de estos puntos haremos diluciones para realizar las mediciones. Tcnica del turbidimtrica 1. Homogenizar la muestra cuidadosamente agitando el matraz e inmediatamente tomar una muestra de 1 ml con una pipeta estril y vaciarla a una

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celda de espectrofotmetro a una absorbancia de 600 nm. Esta muestra corresponder al tiempo cero (t=0). No olvidar utilizar siempre una celda control (mismo cultivo estril sin inocular) 2. 3. Se proceder a colocar el matraz en agitacin (parrilla de agitacin con un De la misma manera se repetir el paso 1 y 2 cada hora, y al siguiente da agitador magntico estril) tomar dos medidas ms. Tcnica de cuenta directa en cmara de Neubauer. 1. Lavar cuidadosamente la cmara de Neubauer sin frotar la zona brillante del centro. Secar con papel suave. Homogenizar la muestra perfectamente en un vortex, tomar inmediatamente una muestra con una pipeta Pasteur de punto fino y depositar una gota entre la cmara y el cubreobjeto por el borde de la cmara. Dejar que la muestra se distribuya por capilaridad. Colocar el cubreobjeto sobre la zona central limitada por dos excavaciones laterales, donde se aprecian una zona cuadriculada a simple vista. 2. Dejar reposar durante 5 min. Colocar la cmara en la platina del microscopio y localizar la zona cuadriculada con el objetivo 10X. 3. Localizar el cuadro central grande (C1) que miden 1.0 mm por lado, que se encuentra dividido en 25 cuadros pequeos (C2) limitados por triple lnea que miden 0.2 mm por lado. Estos cuadros pequeos a su vez se encuentran divididos en 16 cuadros ms pequeos (C3) de 0.05 mm de lado. 4. Hacer la cuantificacin de clulas con el objetivo 40X contando el nmero 1.0mm de clulas que hay en el ultimo cuadro (C3). Se cuentan solo las clulas que toquen la parte superior y el lado derecho del cuadro, para evitar C1 contar doblemente una clula. Ver ejemplo. Nmero de clulas C2
0.2 mm

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C3

C3

87

48

54

Cuantas clulas hay en el C3? 87+48+54=189 /3 (# de cuadros contados) = 63 (63)(16 cuadros de C3)(25 cuadros de C2)(0.1 mm de la profundidad x 10 4) = # de clulas/ml En caso de dilucin (63)(16 cuadros de C3)(25 cuadros de C2)(0.1 mm de la profundidad x 104)(10n el factor de dilucin) = # de clulas/ml Resultados. Reportar los resultados de la cuantificacin de los cultivos, aplicando las tcnicas descritas. Indicar los clculos hechos para cada metodologa.

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de

Graficar la curva de crecimiento de ambas tcnicas. Y extrapolar valores. Calcular el tiempo de generacin. Turbidez (D.O) Cmara de Neubauer (# clulas totales/ml) Matraz A Matraz B Matraz C Matraz A Matraz B Matraz C

Tiempo muestreo 8:00 am 9:00 am 10:00 am 11:00 am 12:00 am 13:00am 14:00 am 15:00 am 16:00 am 17:00 am 18:00 am

Suposiciones. De lo que hiciste con tu experimento, realiza una lista de suposiciones el porque te dio ese resultado. Conclusiones. Realiza una lista de conclusiones y analiza cuales de las suposiciones que escribiste en el prrafo anterior estn de acuerdo con la lista de conclusiones.

ANEXO I Rbrica: Reporte de resultados

CATEGORIA 10-9 8-7 6-4 3-0

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La microbiologa basada en evidencias: un enfoque desde el aprendizaje basado en Todos los elementos requeridos problema Un elemento requerido est Varios elementos requeridos estn presentes. omitido, pero elementos han sido omitidos. M en C. Beatriz A. Rodas Junco y M. en M. Mnica M. Galicia Jimnez adicionales que aaden al reporte (por ejemplo, comentarios Todos los elementos requeridos estn atentos, grficas) han sido presentes y elementos adicionales que incluidos. aaden al reporte (por ejemplo, comentarios atentos y grficas) han sido incluidos.
Se incluye diagramas claros y Se incluye diagramas que estn Se incluye diagramas y stos precisos que facilitan la comprensin etiquetados de una manera ordenada estn etiquetados. del experimento. Los diagramas estn y precisa. etiquetados de una manera ordenada y precisa. El reporte representa un preciso y minucioso entendimiento de los conceptos cientficos esenciales en el laboratorio. El reporte representa un preciso entendimiento de la mayora de los conceptos cientficos esenciales en el laboratorio. Unas pocas fuentes de antecedentes de renombre son usadas y citadas correctamente. El material es traducido por los estudiantes en sus propias palabras. El reporte ilustra un entendimiento limitado de los conceptos cientficos esenciales en el laboratorio. Unas pocas fuentes de antecedentes son usadas y citadas correctamente, pero algunas fuentes no son de renombre. El material es traducido por los estudiantes en sus propias palabras. Faltan diagramas importantes o faltan etiquetas importantes.

Componentes del reporte

Dibujos / diagramas

Conceptos cientficos

El reporte representa un entendimiento incorrecto de los conceptos cientficos esenciales en el laboratorio. El material es directamente copiado en lugar de ponerlo en palabras propias y/o las fuentes de antecedentes estn citadas incorrectamente.

Fuentes de antecedentes Varias fuentes de antecedentes de renombre son usados y citados correctamente. El material es traducido en las propias palabras de los estudiantes.

Datos

Una representacin profesional y precisa de los datos en tablas y/o grficas. Las grficas y las tablas estn etiquetadas y tituladas.

Una representacin precisa de los Una representacin precisa de los Los datos no son demostrados o datos en tablas y/o grficas. Las datos en forma escrita. no son precisos. grficas y tablas estn etiquetadas y tituladas.

Apariencia/organizacin

El reporte de laboratorio est mecanografiado y usa ttulos y subttulos para organizar visualmente el material.

El reporte de laboratorio est escrito a mano con esmero y usa ttulos para organizar visualmente el material.

El reporte de laboratorio est escrito o mecanografiado con esmero, pero el formato no ayuda a organizar visualmente el material.

El reporte de laboratorio est escrito a mano y se ve descuidado y con tachones, mltiples borrones y/o desgarres y pliegues.

Ortografa, puntuacin Uno o pocos errores de ortografa, Dos tres errores de ortografa, y gramtica puntuacin y gramtica en el reporte. puntuacin y gramtica en el reporte.

Cuatro errores de ortografa, puntuacin y gramtica en el reporte.

Ms de 4 errores de ortografa, puntuacin y gramtica en el reporte.

RUBRICA: PROCEDIMIENTO EN EL LABORATORIO CATEGORIA 10-9 8-7 El alumno conoce la informacin del procedimiento en forma suficiente el cul le permite saber qu y cundo hacer uso de l, pero le cuesta trabajo saber en que condiciones usarlo y qu decisiones 6-4 El alumno conoce la informacin del procedimiento en forma insuficiente que le permita saber qu y cundo hacer uso de l, no le permite saber en que condiciones usarlo y qu 3-0 El alumno no conoce la informacin del procedimiento en forma suficiente. Espera a que sus compaeros realicen la actividad por el.

La adquisicin de la El alumno conoce la informacin del informacin sobre el procedimiento en forma suficiente y procedimiento. relevante le permite saber qu y cundo hacer uso de l, as como saber en que condiciones usarlo y qu decisiones tomar.

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La microbiologa basada en evidencias: un enfoque desde el aprendizaje basado en problema debe tomar. tomar. decisiones
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El sentido otorgado al El alumnos es capaz de valorar su El alumnos es capaz de valorar su El alumnos no es capaz de valorar El alumnos no es capaz de procedimiento. actuacin al ejecutarlo, dndole un actuacin al ejecutarlo, pero no le su actuacin al ejecutarlo, pero se valorar su actuacin al sentido. da un sentido. las ingenia para darle un sentido. ejecutarlo, dndole un sentido.

El uso o conocimiento El alumno sabe cmo ejecutar y logra y el grado de un dominio apropiado de las acciones comprensin de los que lo componen. pasos involucrados en el procedimiento.

El alumno sabe cmo ejecutar, pero le falta practica para lograr un dominio apropiado de las acciones que lo componen.

El alumno no sabe cmo ejecutar y pero se fija en sus compaeros y logra un dominio apropiado de las acciones que lo componen.

El alumno no sabe cmo ejecutar y no logra un dominio apropiado de las acciones que lo componen.