Universidad Le Cordon Bleu Ing.

Industrias Microbiologa II Alimentarias Filtracin a travs de membrana

(recuento de coliformes totales) Rosa Ma. Rodrguez Lpez Haga clic para modificar el estilo de subttulo del patrn

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Coliformes

Enterobacteriaceas lactosa positivas Pruebas: aislamiento por criterios taxonmicos Fermentar la lactosa con produccin de acido y gas, 48 h e incubacin entre 30 y 37C

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Filtros de membrana

Son filtros de superficie, muestra en una estructura micro porosa Durante la filtracin las partculas mayores que los poros de la membrana son retenidas de forma fiable en la superficie misma.

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Filtros a travs de membrana

Determinacin de coliformes totales Ofrece resultados comparables a los de tubos mltiples Ventaja: prontitud de resultados Tambin podemos usarlo en anlisis de leche. FILTROS:
Esteres de celulosa con poros de 0.45mm dimetro 6/28/12

Aparatos y tcnicas

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Muestras 30250ml, se aaden al tubo de filtracin

Volumen de agua analizada Coliformes totales Tipos de agua

Potable de consumo publico Envasadas Manantiales Lagos, depsitos Acometidas De playas De ros 100 ml 250ml 15;60; 100ml 4;15; 60; 100 ml 0,08: 0,15; 0,5; 1,4ml 0.08; 0,15; 0,5; 1,4ml 0,003; 0,01; 0,02; 0,08ml

Muestras 130ml, se pasan primero en embudo de 2030ml de solucin tamponada estril y encima 6/28/12

Residuales cloradas0,003; 0,01; 0,02; 0,08ml Residuales sin tratar 0,0001; 0,0003; 0,001; 0,003; 0,01ml

Preparacin de diluciones
Para realizar una dilucin 1/10(10 ), se pipetea aspticamente 1ml de muestra en un tubo con 9ml de solucin tamponada estril y se agita Muestra 1ml + Diluyente = 9ml Dilucin 1/10(10)

Para realizar una dilucin 1/100(10), Dilucin + Diluyente = Dilucin se pipetea 1ml de la dilucin 1/1 en 1/10(10) 9ml 1/100(10 otro tubo con 9ml de solucin ) tamponada estril y se agita As sucesivamente se van haciendo las diluciones que se necesiten, dependiendo del grado de contaminacin esperado de la muestra

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Toma de muestra

La tcnica de muestreo depender del lugar donde se realiza dicho muestreo:

Retirar accesorios, flamear y desinfectar Frasco esterilizado 6/28/12

Bomba de captacin Se introduce frasco, agitando

Lejos orilla En fuentes de Sumergiendo caudal de forma continuo se invertida tomara la dando vuelta ymuestra cerrar directamente

Acoplamientos especiales como en el caso del grifo

Material y equipo

Membranas filtrantes de 0.45m de tamao de poro Soporte de filtro con embudo Sistema de vacio Pipetas estriles de 10 y 1ml Estufa de cultivo Asa de siembra Pinzas estriles 6/28/12

Lauril sulfato y desoxicolato permite crecimiento de coliformes lactosa positivo. Las colonias lactosa positivo se colorean por la liberacin de fucsina del sulfato de fucsina. Las E. coli muestran un brillo metlico.
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Medio de cultivo selectivo: Caldo Endo, MF

Medio solido selectivo placas

Preparacin de medio

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Composicin

Peptona de casena Peptona de carne Extracto de levadura Ph: 7.2 aprox Lactosa a 25C Cloruro sdico Fosfato potsico Lauril Sulfato Desoxicolato

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Tcnica de filtracin sobre

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Expresin de los resultados

> 200 colonias, debemos volver a muestrear el agua y analizar muestras mas diluidas < 10 20 colonias, poco fiable; repetir el anlisis filtrando un volumen de muestra mayor. Resultados entre 20 y 200

Muestra sin diluir RC= UFC/vol.muestra

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Ejercicios

a)ausencia de Agua UFC de embotellada coliformes 250ml totales en 100 mL de agua problema

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b)ausencia de UFC de coliformes totales en 250 mL

Agua embotellada 250ml filtrados

a)ausencia de UFC de coliformes totales en 1.000 mL de agua problema

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b)ausencia de UFC de coliformes totales en 250 mL

a)ausencia Agua de una de UFC de fuente 100ml coliformes totales en 100 mL de agua problema

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b)2 UFC de coliformes totales por 100 mL de

Agua de piscina

a)ausencia de UFC de coliformes totales en 100 mL de agua problema b)ausencia de UFC de coliformes

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Bibliografa

Universidad de Salamanca Espaa

http://fundacion.usal.es/microaguas

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