GLUCOLISIS La gluclisis es una secuencia lineal de reacciones catablicas o degradativas, concretamente compuesta por 10 reacciones; son secuencias oxidativas

que liberan cierta cantidad de energa. Es el proceso por el cual de glucosa, compuesta por 6 tomos de carbono, se pasa a dos molculas de cido pirvico, de 3 tomos de carbono cada uno. Adems, durante el proceso se libera un balance neto de energa de 2 ATP. Por otra parte, al ser un proceso oxidativo, acompaando ha de ir una reduccin, por lo que se obtienen dos molculas de NADH + H+. Se trata de un proceso que se lleva a cabo en el citosol de la clula, por lo que los 10 enzimas que llevan a acabo las 10 reacciones se encuentran solubilizadas en el interior. Es un proceso independiente de la presencia de oxgeno, aunque algunas de las reacciones posteriores que sufre el pirvico si dependen de oxgeno. La gluclisis comprende dos etapas, cada una de ellas compuesta por 5 reacciones:

La primera etapa comprende las primeras cinco reacciones, en las cuales la molcula de glucosa inicial se transforma en dos molculas de 3fosfogliceraldehido o gliceraldehido-3-fosfato. Se trata de una fase que se suele llamar fase preparativa, donde la glucosa se va a romper en dos molculas de 3 carbonos cada una, con la particularidad de que se van a incorporar dos cidos fosfricos (dos molculas de gliceraldehido 3 fosfato; por lo que hay dos fosfatos, uno en cada molcula), lo que lleva al consumo de 2 molculas de ATP. En la segunda etapa comprende las siguientes 5 reacciones que llevan a la finalizacin del procedo, donde los dos gliceraldehido 3 fosfato se transforman en dos cidos pirvico. Es esta etapa la que conlleva la parte oxidativa, por lo que se produce la reduccin de las dos molculas de NAD+ a NADH + H+. Adems, en esta etapa se han de producir 4 molculas de ATP para dar lugar al balance neto de + 2 ATP, es decir, la liberacin de 2 ATP, por eso que esta segunda etapa recibe el nombre de fase de generacin de energa. Desde el punto de vista energtico, el rendimiento es muy bajo, solamente con la produccin de dos molculas de ATP; pero en este proceso se forma el cido pirvico, que participa en otras reacciones en las que la energa neta liberada es mucho mayor. El NADH + H+ en condiciones de aerobiosis, es decir, en presencia de oxgeno, da lugar a agua (reduce al oxgeno) y a la oxidacin del mismo a NAD+. Esto es la cadena respiratoria (cadena de transporte electrnico) llevada a cabo en las mitocondrias (por lo que el NADH + H+ ha de entrar en la misma), en la que se libera cierta cantidad de energa aprovechada para la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi en la llamada fosforilacin oxidativa.

El NADH + H+ producido en la gluclisis, con presencia de oxgeno, es utilizado para generar ATP, es decir, energa. Si existen condiciones de anaerobiosis, es decir, sin la presencia de oxgeno, el NADH + H+ ha de ser transformado en NAD+, utilizado en otras reacciones acopladas a las llamadas fermentaciones anaerbicas. De las 10 reacciones, 7 son reacciones reversibles, que van a ocurrir en el proceso contrario, la gluconeognesis (sntesis de glucgeno a partir de cido pirvico); mientras que 3 reacciones son irreversibles. Reacciones de la gluclisis La gluclisis comienza con la glucosa, donde la primera reaccin, irreversible, consiste en una fosforilacin en el carbono 6 de la glucosa, originando por tanto la glucosa-6-fosfato. Esto significa la utilizacin de una molcula de ATP que dona un Pi y queda liberado como ADP. Esta primera reaccin est catalizada por un enzima denominado hexokinasa (kinasa = cataliza reacciones de fosforilacin) La hexokinasa es un enzima que acta mediante un mecanismo de ajuste inducido, donde la unin del primer sustraa, la glucosa, induce a un cambio de conformacin, mediante el cual se produce un acercamiento de los dominios que engloban al sustraa, adquiriendo su centro activo un carcter apolar favorable para la reaccin de fosforilacin en el carbono 6 de la glucosa, con la liberacin de una molcula de agua. Como bien su nombre indica, hexokinasa, cataliza reacciones de fosforilacin de distintas hexosas. Presentan una amplia especificidad de sustraas, aunque presenta gran afinidad hacia la glucosa. Presenta una Km muy baja. Como mecanismo de regulacin, la hexokinasa se inhibe por altas concentraciones de glucosa-6-fosfato. En el hgado encontramos un isoenzima de la hexokinasa denominada glucoquinasa, que cataliza la misma reaccin pero con distintas caractersticas. Este enzima es especifico para la glucosa, pero en cambio tienen menor afinidad por la misma, debido a que su Km es ms alta. Esto significa que solo funciona al existir altas concentraciones de glucosa, lo que le permite al hgado ajustar o regular las concentraciones sanguneas de glucosa. La segunda reaccin de la gluclisis es reversible, donde se pasa de la glucosa-6fosfato (G6P) a fructosa-6-fosfato(F6P). Se trata de una reaccin de isomerizacin de aldosa a cetosa catalizada por la fosfoglucoisomerasa. Se trata de una reaccin en la cual primeramente, la G6P rompe su forma cclica, se abre, sufriendo unos procesos que dan lugar a la formacin de un intermediario de reaccin denominado cis-enol, con una corta vida, donde seguidamente se forma la cetosa que al ciclarse da lugar a la forma furanosa de la F6P. Al ser una reaccin de isomerizacin, se transfiere el grupo oxgeno que formaba el aldehdo (del carbono 1), al carbono 2, dando lugar a un grupo ceto. Todo esto es catalizado por el enzima.

La tercera reaccin, tambin irreversible, conlleva la presencia y consumo de ATP, originando la fructosa-1,6-bisfosfato(FBP). Se trata de una reaccin de fosforilacin, por lo que est catalizada por una kinasa, concretamente la fosfofructokinasa-1 (PFK-1), que fosforila el carbono 1 de la F6P. Esta reaccin irreversible constituye el principal punto de control o regulacin de la gluclisis. Se trata del enzima ms regulado. Al igual que la anterior reaccin irreversible, son ambas lo suficientemente exorgnicas (liberan demasiada energa) como para ser prcticamente irreversibles en el organismo in vivo. La cuarta reaccin es reversible, y consiste en la ruptura de la molcula de FBP para dar lugar a 3-fosfodihiroxiacetona(DHAP) y a 3-fosfogliceraldehido (G3P), ambas con 3 carbonos. La 3-fosfodihiroxiacetona corresponde a los tomos de carbono 1, 2 y 3 de la FBP; mientras que el tambin llamado gliceraldehido-3fosfato corresponde a los carbonos 4, 5 y 6, siendo el 6 el 1 de la nueva molcula. El enzima que cataliza esta reaccin es una aldolasa, concretamente recibe el nombre de fructosa bisfosfato aldolasa. La aldolasa presentan un su centro activo dos residuos cido-base de Lys e His. Lo primero que ocurre es la ruptura del anillo de la FBP, para dar lugar a la forma abierta, dejando al carbono 2 con el grupo ceto libre. El primer pasa de la aldolasa mediante un mecanismo de catlisis covalente, consiste en la formacin de un enlace entre el carbono 2 del sustrato y el nitrgeno del grupo amino del resto de Lys del centro activo del enzima. Esto conlleva la prdida de una molcula de agua, y da lugar a la denominada base de Schiff. Despus acta el enzima mediante una catlisis cido-base, concretamente, el a.a. acta como una base (generalmente la His) captando un protn. Capta el protn del OH del carbono 3, desencadenando procesos en el que el oxigeno con carga negativa del carbono 3 ataca nucleoflicamente al carbono 4, rompiendo la fructosa por el enlace entre los carbonos 3-4. El resultado son dos molculas de 3 carbonos, una de las cuales queda an unida al enzima por el enlace base de Schiff, mientras que la otra molcula es liberada como gliceraldehido-3-fosfato. La molcula unida al enzima es liberada mediante la hidrlisis de la base de Schiff, donde el oxgeno queda como grupo ceto y los dos hidrgenos en el nitrgeno del enzima, cerrando as el ciclo. La quinta y ltima reaccin de la primera etapa de la gluclisis, tambin reversible, consiste en una isomerizacin catalizada por la triosa-fosfato isomerasa, cuyo sustrato son las triosas (las dos molculas anteriores). La funcin de este enzima es la transformacin de uno de los productos de la reaccin anterior en el otro. Concretamente, la triosa-fosfato isomerasa cataliza la isomerizacin del 3-

fosfodihiroxiacetona a 3-fosfogliceraldehido, dado que este es el sustrato de la siguiente reaccin glucoltica. Esto quiere decir que de una molcula de glucosa, en cinco reacciones obtenemos dos molculas de gliceraldehido-3-fosfato, dando por terminada la primera etapa o fase de la gluclisis.

Una vez terminada la etapa de preparacin, comienza la fase de generacin de energa, es decir, las cinco siguientes reacciones que finalizan la gluclisis, con el objetivo fundamental de aprovechas los fosfatos de las dos molculas de G3P para sintetizar ATP. Hasta el momento, los enlaces de fosfato del gliceraldehido no son enlaces ricos en energa, por lo que en esta fase se va a dar lugar a ellos, de ah lo que generacin de energa. Para ello, partiendo de las dos molculas de G3P, se lleva a cabo la sexta reaccin, una reaccin reversible, de la gluclisis, donde ambas molculas se transforman en dos molculas de cido-1,3-bisfosfoglicerico (BPG). Se trata de una reaccin compleja, de una oxidacin que requiere por tanto una reduccin, adems de producirse la incorporacin de un Pi por cada molcula de G3P, el cual va a quedar unido mediante un enlace rico en energa. Es por tanto en esta reaccin donde se generan los dos poderes reductores a consecuencia de la oxidacin, es decir, se forman dos molculas de NADH + H+ (el NAD+ se reduce oxidando al sustrato) Se trata de una reaccin catalizada por un enzima denominado fosfogliceraldehido deshidrogenasa, el cual presenta un centro activo con un resto de -SH, es decir, de Cis, que acta por un mecanismo de catlisis covalente. El enzima, con su grupo -SH va a reaccionar con el carbono 1 del G3P, formando un enlace covalente S-C (los enlaces entre azufre-carbono reciben el nombre de enlaces tiohemiacetal), dando lugar a un grupo OH en ese mismo carbono. Los dos hidrgenos del carbono 1 pasan al coenzima NAD+, el cual es reducido a NADH + H+, mientras que se forma un doble enlace C = O. Se trata de una deshidrogenacin u oxidacin del sustrato. Este intermediario recibe el nombre de tioster. Acto seguido se produce la fosforilacin por un Pi, que ataca al carbono 1 unindose a l mediante un enlace rico en energa, y permitiendo la liberacin del enzima. Esto da lugar al 1,3-fosfoglicerato. La sptima reaccin consiste en la transferencia del fosfato unido por un enlace rico en energa a una molcula de ADP para formar ATP y el cido 3fosfoglicrico (3PG). El BPG libera con el enlace rico en energa 11 Kcal/mol, suficientes como para formar el ATP.

Por tanto se producen dos molculas de ATP, compensando as el gasto energtico de la primera etapa. Se trata de una reaccin reversible, la cual ocurre cuando la concentracin de ATP es pequea, ya que en presencia de una alta concentracin de ATP puede ocurrir el proceso inverso. El nombre del enzima que cataliza esta reaccin es el de fosfoglicerato kinasa. La siguiente reaccin, la octava, es tambin reversible, en la cual se produce la transformacin del 3PG en el cido 2-fosfoglicrico (2PG), catalizado por el enzima fosfoglicerato mutasa, cuyo mecanismo de accin es el siguiente: en su centro activo posee una His con el nitrgeno 3 de su radical fosforilado, de tal modo que reacciona con el fosfato del carbono 3 de 3PG y cede su fosfato al carbono 2 del sustrato, originando un intermediario 2,3-bisfosfoglicerato. Enzima-P + 3PG ! [Enzima-2,3-bisPG] ! Enzima-P + 2PG La siguiente reaccin, la novena, tambin reversible, es una deshidratacin, con prdida de una molcula de agua procedente del OH libre (que ya no esta fosforilado) del carbono 3 y el H del carbono 2. Esto da lugar a un doble enlace entre el carbono 2 y el 3, dejando el fosfato del carbono 2 unido mediante un enlace rico en energa, para dar lugar alcido fosfoenolpirvico (PEP). El enzima encargado de catalizar esta reaccin es una deshidratasa denominada enolasa. Este enlace rico en energa es aprovechado en la dcima y ltima reaccin para sintetizar ATP a partir de ADP, para dar lugar al cido pirvico. El enlace rico en energa libera 14'8, Kcal/mol suficientes como para formar el ATP. Esto quiere decir que ya se han sintetizado las dos molculas de ATP que faltaban. Se trata de una reaccin catalizada por la piruvato kinasa, formando un intermediario de reaccin inestable llamado enol pirvico, que rpidamente pasa a piruvato. Adems, es una reaccin irreversible; constituye el tercer punto de control de la gluclisis. Resumiendo:

Regulacin de la gluclisis Si la concentracin de ATP es baja, esto implica una alta concentracin de ADP y AMP. Son en estas condiciones cuando la gluclisis debe estar muy activada. Si ocurre lo contrario, donde la concentracin de ATP es muy elevada y por tanto la de ADP y AMP es baja, la gluclisis no funciona.

El estado energtico intracelular es el principal mecanismo por tanto de regulacin de la gluclisis. Por ello que ha de estar este estado energtico regulado, de lo cual se encargan los tres enzimas que catalizan las reacciones irreversibles. El primer punto de control lo encontramos a nivel de la hexokinasa, la cual como bien se dijo, es inhibida por altas concentraciones de G6P. Es independe de las concentraciones de ATP. El segundo y ms importante punto de control se establece a nivel de la PFK-1, la cual es inhibida, como acabamos de decir, por altas concentraciones de ATP, ya que entonces se inhibe la gluclisis, por lo que este enzima no funciona. Una alta concentracin de ADP y AMP favorece por tanto la actuacin de al PFK1. Por otro lado, este mismo enzima est inhibido por el citrato, ya que si existe abundante ATP se inhibe las enzimas que degradan el cido ctrico (para el que se necesita el piruvato), por lo que su concentracin aumenta y por tanto inhibe la gluclisis a nivel de la PFK-1. Otro mecanismo de reaccin es el que da lugar a la fructosa-2,6-bisfosfato (F2,6BP), que a pequeas cantidades activan fuertemente a la PFK-1. Es un mecanismo en el que se encuentra implicada una regulacin hormonal a travs de segundos mensajeros, y tambin implica una modulacin covalente. La F6P en la gluclisis se transforma en FBP; pero para que esto ocurra de manera ms favorable, una pequea parte de la F6P se transforma en F2,6BP, que activa fuertemente a la transformacin anterior, es decir, activa a la PFK-1. La reaccin de F6P a F2,6BP est catalizada por la PFK-2, la cual puede estar activa o inactiva.

Este enzima presenta en su forma activa un centro activo con un grupo OH de una Serina, el cual se puede fosforilar obteniendo PFK-2 - P, que no es ms que la forma inactiva. Esto quiere decir que la fosforilacin de la PFK-2 inactiva la gluclisis. La fosforilacin de este enzima est catalizada por la proten Kinasa A, la cual est activada por segundos mensajeros, por el c-AMP, y por tanto por hormonas. El c-AMP activa a la Kinasa A que fosforila a la PFK-2, la cual no lleva a cabo la transformacin hacia FBP, y por tanto inhibe la gluclisis. Por otro lado, la PFK-2 es un enzima bifuncional. En su estructura encontramos claramente dos dominios: un dominio Kinasa; y un dominio Fosfatasa. Presenta actividad PFK-2, y tambin actividad contraria, una actividad fosfatasa, una actividad fructosa-2,6-bisfosfato fosfatasa. Ambos dominios nunca estn activadas a la vez, sino que estn alternados, uno si y el otro no. Cuando el dominio kinasa presenta un grupo OH de una Serina libre, este dominio kinasa est activado y el dominio fosfatasa inactivado.

La fosforilacin de ese grupo OH llevada a cabo por la proten kinasa A, da lugar a la prdida de la actividad kinasa y a la adquisicin de la actividad del dominio fosfatasa, es decir, no solamente se inactiva la kinasa, sino que se activa la fosfatasa que cataliza la degradacin de la F2,6BP que haba a F6P, inactivando, podramos decir, an ms la gluclisis. El glucagn es un factor hiperglucemiante pancretico como vimos, producido cuando hay una baja concentracin de glucosa en sangre, da tal modo que restablece los valores normales. Una disminucin de concentracin de glucosa producira un aumento de la concentracin de glucagn, una hormona que activara a segundos mensajeros como el c-AMP, aumentando por tanto su concentracin, y activando a la proten kinasa A, la cual fosforilara a la PFK-2, provocando un aumento de la actividad fosfatasa. Esto lleva a una disminucin de la concentracin de F2,6BP, que disminuye la actividad de la PKk-1, y por tanto de la gluclisis, como resultado de la disminucin de glucosa en sangre, adems de favorecer el proceso inverso, es decir, la formacin de glucosa en la gluconeognesis. Cuando ocurre el proceso contrario, un aumento de glucosa en sangre, se favorece la gluclisis. El tercer punto de control se establece a nivel de la piruvato kinasa, la cual est controlada de varias maneras. En primer lugar, sta enzima est inhibida por un aumento de la concentracin de ATP, aunque tambin se encuentra inhibida por una alta concentracin de AcetilCoA, igual que el citrato en la PFK-1. El Acetil-CoA de manera directa del piruvato al introducirse en la mitocondria, pero tambin procede de cidos grasas en su mayor parte, por lo que una acumulacin de grasas tambin inhibe la gluclisis a nivel de la piruvato kinasa. Adems, un aumento de Acetil-CoA, provoca tambin una mayor actividad del ciclo de krebs, y por tanto un aumento de concentracin del citrato, que inhibe la gluclisis a nivel de la PFK-1. Tambin se encuentra inhibida por Alanina, ya que su estructura est relacionada con el propio pirvico, que por transaminacin con glutamato da lugar a la alanina.

La nica activacin la produce un aumento de concentracin de FBP, ya que entre el segundo punto de control y el tercero, todas las reacciones intermedias son reversibles, por lo que cuando llegan a PEP pueden volver a FBP, el cual activa a la piruvato kinasa para evitar un estancamiento y poder consumir el PEP. Por otro lado la piruvato kinasa est sometida tambin a una modulacin hormonal, aunque solamente la piruvato kinasa del hgado de mamferos. En su centro activo presenta un OH libre que al ser fosforilado inactiva el enzima. Esta fosforilacin est catalizada tambin por la proten kinasa A, activada por el cAMP.