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N
B1 Generador de frecuencias Detector
Iman
Computadora
Iman - Normamente superconductor. Algunos electroimanes e imanes permanentes (XL-100, T-60) se siguen usando. Generador de frecuencias - Crea la corriente alterna (a o) que induce al campo B1. Banda continua o pulsada. Detector - Substrae la frequencia base (constante y muy cercana a o) de la frequencia de salida. Nos da una seal con frecuencias mas bajas y mas simples de analizar. Computadora - Procesado, impresion, integrales, etc., etc.
o o Bo
o o Bo tiempo Obtenemos un efecto del dominio del tiempo en el espectro de frecuencias (el famoso ringing) porque no podemos barrer lo suficientemente lento.
S() =
- S(t) e
-it dt
S(t) = 1/2
0 S() e
it dt
Si nuestros datos en el tiempo son periodicos, basicamente nos da las coponentes de frecuencia. Extremadamente util en RMN, donde todas las seales son periodicas.
TF
Para sen( * t )
TF
Se dice que los cosenos dan lineas absortivas, mientras que los senos dan lineas dispersivas. Nos vamos a referir a esto cuando hablemos de la fase del espectro. Tambien nos tenemos que acordar de esto para entender deteccion de seales por cuadratura.
*
tp TF: 1 a o = 1 TF:
=
sen(tp) tp
o sinc(tp)
Esta es la forma del pulso en el eje de los tiempos. Para ver todas las frecuencias que tiene, hacemos una TF:
TF o
El resultado es una seal centrada en o que cubre un rango de frecuencias. Dependiendo del ancho de pulso tenemos rangos mas anchos (tp corto) o finos (tp largo). Hay que acordarse que f 1 / t.
Mo B1
y
tp
y
tp
x
Mxy
tp = * tp * B1
Como el ancho de puslo para cierto angulo tp va a depender del equipo (B1), siempre nos referimos a los pulsos en terminos de cuanto rotan a la magnetizacion (tp). Tenemos pulsos de / 4 (o 45), / 2 (o 90), (o 180), etc., etc.
Mo
/2
Mxy
y
El pulso tambien es importante, ya que tiene el efecto de invertir las poblaciones del sistema de espines...
z z
Mo
-Mo
Controlando el espectrometro podemos obtener basicamente pulsos de cualquier duracion y angulo que se nos ocurra.
- o > 0
Mxy
tiempo
tiempo
FID (continuado)
En una muestra real tenemos decenas de sistemas de espines con frecuencias distintas, y distintas a la de B1 (la frecuencia portadora). Como usamos un pulso logramos excitar a todas estas frequencias simultaneamente, y por lo tanto todas estan combinadas en la bobina receptora. A esta seal la llamamos Free Induction Decay (o FID):
Adquicision de datos
Eso fue un poco rapido. Hay ciertas cosas que tenemos que tener en cuenta antes y despues de tomar una FID (o el espectro, la FID no es tan util depues de todo...). Algunas dependen del sistema de deteccion. Como vamos a usar una computadora para adquirir los datos, solo podemos tomar cierto numero de muestras de la seal (velocidad de sampleado o sampling rate, SR). Cuantas va a depender de las frecuencias que tengamos en la FID. El Teorema de Nyquist dice que tenemos que samplear al menos dos veces mas rapido que la seal mas rapida (o el ancho de espectro o spectral width, SW):
SR = 1 / (2 * SW)
Si sampleamos al doble de la frecuencia, donde estan los puntos , no hay problema. Ahora, si vamos muy lento y sampleamos a la mitad de la velocidad (los puntos ), la seal queda digitada en la computadora a 1/2 de la frecuencia real. Estos picos se meten en el espectro con fuera de fase (fold-over). Esto se conoce como aliasing.
Deteccion en cuadratura
En los primeros equipos de RMN-TF, la frecuencia de B1 (portadora) se ponia mas arriba (o abajo) de las posibles frecuencias del espectro. Esto se hacia para que todas las seales fuesen o mas rapidas o mas lentas que la portadora, de modo que la computadora siempre supiese el signo de las frecuencias en la FID.
portadora
Dos problemas. Uno es ruido, que siempre esta ahi, y que si no lo sampleamos bien se mete en el espectro. Tambien, para exitar seales lejos de la portadora necesitamos pulsos de muy buena calidad, cosa que no siempre se puede hacer. Considerando esto, el mejor lugar para la portadora es en el medio del espectro:
portadora
Fase = 0
Fase = 90
La fase de la seal Rapida es opuesta a la de la seal Lenta, y la computadora usa esto para determinar los signos.
Generalmente, el ruido es de alta frecuencia, y por eso es que los espectros de RMN tienen la linea de base que tienen. Que tal si pudiesemos filtrar seales con frecuencias mas altas que cierto valor? Usamos filtrado digital. Intuitivamente, mutiplicamos la FID con algo que haga disminuir el ruido al final: 1
F(t) = 1 * e - ( LB * t )
-o-
F(t) = 1 * e - ( t / )
Porque elimina el ruido de alta frecuencia? En realidad, lo que hacemos es una convolucion de los datos en el dominio de frecuencias con la TF de una exponencial que decae. La TF de esta funcion es una Lorentziana con ancho de pico a media altura (APMA) igual a la constante de decaimiento, o ensanchado de linea (line broadening, LB), en Hz.
LB
La convolucion hace que todo lo que tenga APMA menor que el LB desaparezca del espectro (mas o menos).
Si usamos un LB negativo, la exponencial crece en vez de decaer, y deja que seales mas finas pasen, mejorando la resolucion pero empeorando el cociente seal/ruido.
LB = 5.0 Hz
LB = -1.0 Hz
TF
TF
La funcion de ventana adecuada depende del experimento, y hay que jugar mucho con los parametros...
DR = SW / SI
Entonces, con un SW de 5 KHz y una FID de 16K, tenemos una resolucion digital de 0.305 Hz/punto. Un problema obvio es que si tenemos un SW grande y un SI chico, la resolucion puede no ser suficiente para distinguir algunas lineas en el espectro.
Zero-filling (continuado)
Hay alguna forma en que podamos mejorar la resolucion digital (i.e., el numero de puntos) sin tener que samplear por periodos largos? El truco se llama zero-filling. Lo que hacemos es aumentar el numero de puntos antes de hacer la TF agregando ceros al final de la FID. Generalmente agregamos una potencia de 2 de ceros (8K, 16K, etc.). FID de 8K 8K de ceros
FID de 8K
FID de 16K
Asi aumentamos el radio de Hz/punto, y en muchos casos podemos mejorar el espectro. Ahora, si la FID es una chanchada para empezar, no podemos mejorarla mucho (la resolucion real no mejora sin samplear lo suficiente).
Fenomenos de relajacion
Hasta ahora no hablamos del fenomeno que retorna a la magnetizacion al equilibrio. La relajacion se encarga de esto. Hay dos tipos, y los dos son procesos de decaimiento exponencial en funcion del tiempo. Relajacion longitudinal o espin-red (T1): Afecta componentes de la magnetizacion alineados con el eje z (Mz). Mz
z x
y - Perdida de energia del sistema a los alrededores (red) como calor. - Acople dipolar con otros espines, interaccion con particulas paramagneticas, etc...
Relajacion transversa o espin-espin (T2): Actua sobre componentes de la magnetizacion que esten en el plano <xy> (Mxy). - Interacciones espin-espin (J) hacen que Mxy se desfase. - Inhomogeneidades del campo del iman (fanning out). - No puede ser mayor a T1.
z x y
Mxy
Para entender los procesos de relajacion desde un punto de vista fenomenologico usamos las ecuaciones de Bloch, que describen la evolucion de un sistema de espines en el tiempo bajo los efectos de campos magneticos y relajacion.
Equaciones de Bloch
Los campos magneticos interactuan con la magnetizacion (o el momento angular) generando un torque que la hace girar. Generalmente pensamos en B1 en el plano <xy> y Mo en el eje z. Las ecuaciones de Bloch son para cualquier caso, y describen variacion de M con el tiempo: dMx(t) / dt = [ My(t) * Bz - Mz(t) * By ] - Mx(t) / T2 dMy(t) / dt = [ Mz(t) * Bx - Mx(t) * Bz dMz(t) / dt = [ Mx(t) * By - My(t) * Bx
] - My(t) / T2
] - ( Mz(t) - Mo ) / T1
El aparece porque es L (el momento angular) que genera el torque. Sin tratar de entender muy bien de donde vienen, vemos que la variacion de M en un eje depende de lo que pase en los otros dos. Analizamos las soluciones de las ecuaciones diferenciales para un caso ideal en el que tenemos magnetizacion solo en el plano <xy> (despues de un pulso / 2 y para cierta ): Mx(t) = Mo * cos( efft ) * e - t / T2 My(t) = Mo * sen( efft ) * e - t / T2 Mz(t) = Mo * ( 1 - e - t / T1 )
(eff = o - )
Mz(t) = Mo * ( 1 - e - t / T1 )
De estas ecuaciones se puede deducir que el mejor factor de LB que podemos usar es 1 / T2...
IS ()
W1I () IS W1S W0IS W1I W2IS W1S
IS ()
IS ()
W representa la probabilidad de transicion, o la velocidad a la que cierta transicion sucede. Para el sistema en equilibrio podemos tener transiciones W1I y W1S, que representan procesos de un solo cuanto. W0IS y W2IS son transiciones de cero y dos cuantos, que estan prohibidas y tienen probabilidad mucho menor.
I S ( )
W1I () IS W1S W0IS W1I W2IS W1S
IS ()
IS ()
Las transiciones W1S no son posibles (tenemos las mismas poblaciones en estos niveles), y las W1I no ocurren (no afectamos al equilibrio de este espin). Las transiciones W0IS y W2IS son la unica forma en que S se puede relajar. Estas rutas de relajacion de S involucran transiciones de I, y por eso la seal de I intensifica. Si W2IS domina, tenemos intensificacion positiva de I, y si W0IS domina, negativa.
= I / S *
Primero, si la molecula se mueve/reorienta rapido (cosas de los organicos), vemos que si saturamos las transiciones de I W2IS va a dominar, y la inensificacion maxima para S es I / S. Si estamos mirando 13C y desacoplando (saturando) los 1H, tenemos un NOE teorico de ~ 4. Si la molecula se mueve lento (proteinas), el W0IS domina y tenemos un NOE maximo de - I / S. Como aca estamos interesados en 1H - 1H, el NOE teorico maximo es ~ -1.