Cultivo de clulas y tejidos vegetales

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INTRODUCCION

El cultivo de tejidos, consiste escencialmente en aislar una porcin de la planta (explante) y proporcionarle artificialmente las condiciones fsicas y qumicas apropiadas para que las clulas expresen su potencial intrnseco o inducido. Es necesario adems adoptar procedimientos de asepsia para 4/28/12 ING. ALONDRA OCOTL

cultivo in vitro es un trmino muy genrico que se refiere ms bien a la metodologa usada que al propio objetivo de ese mtodo. En sentido estricto, in vitro quiere decir dentro de vidrio. Es decir, el cultivo de plantas o de algunas de sus partes dentro de recipientes de vidrio en condiciones estriles de ambiente controlado, (pero tambin de clulas 4/28/12 ING. ALONDRA y tejidos animales). OCOTL

La investigacin en cultivo de tejidos puede cubrir un rango amplio de actividades, por ejemplo la investigacin bsica sobre los procesos biolgicos y morfolgicos de la diferenciacin celular Laboratorios que se dedican a la investigacin aplicada y al desarrollo de las tecnologas para utilizar esta investigacin en el cultivo de tejidos 4/28/12 ING. ALONDRA OCOTL

Laboratorio

Disponer de un rea destinada al establecimiento, crecimiento y multiplicacin de las plantas producidas. Requiere de un estudio y anlisis critico. Un laboratorio se puede dividir esquemticamente en reas separadas para las diferentes 4/28/12 ING. se desarrollan funciones que ALONDRA OCOTL

rea de preparacin

Preparar los medios de cultivo, debe proveer tambin un espacio para almacenar los materiales de vidrio y de plstico, y los reactivos qumicos. Debe contar con mesas de trabajos para la preparacin de los medios y la utilizacin de balanzas, medidor de pH, los platos calientes con agitacin, debe contar con vitrinas, equipos de refrigeracin, incubadora, 4/28/12 ING. ALONDRA OCOTL

rea de lavado y esterilizacin

Dos areas conectadas o una sola, puede localizarse dentro del area de preparacin. Debe incluir, un lavadero, con agua caliente y fria, una fuente de agua de alto grado de pureza, preferiblemente agua doblemente destilada, un desionizador de agua. El area de esterilizacion debe tener 4/28/12 espacio para el autoclave, etufas, ING. ALONDRA OCOTL un

rea de transferencia

En esta rea se realiza el trabajo de excisin, inoculacin y transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Se recomienda la instalacin de gabinetes de flujo de aire filtrado bajo presin, controlar un rea estril.
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rea de incubacin

Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o cmaras de crecimiento, en donde hay control ambiental, esta rea de incubacin o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control de la temperatura, iluminacin y de la humedad.
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rea de observacin y examen

El objetivo de esta rea es realizar observaciones peridicas de los cultivos, tanto en medios slidos como en lquidos. Se localizan microscopios

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rea de crecimiento

Las plantas que se generan en el rea de incubacin se puede acondicionar o aclimatar y luego trasplantar en macetas, bandejas. Se lleva acabo en casas de malla o invernaderos, dependiendo de las condiciones climaticas

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reas de cuarentena y de control fitosanitario

Es rea de recepcin de las muestras o plantas destinadas a la limpieza clonal, generalmente protegida contra insectos. Es el rea de control sanitario, se realizan pruebas necesarias para comprobar la sanidad de material vegetal, especialmente de enfermedades causadas por virus, bacterias y hongos. OCOTL 4/28/12 ING. ALONDRA

rea de oficina

Se lleva todo el control de todo el laboratorio. Debe contar con extintores, botiqun, equipos de primeros auxilios.

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Equipos de laboratorio

Refrigerador Balanzas Potencimetro Material vidrio Destilador Gabinete de flujo laminar Mecheros Microscopios ALONDRA OCOTL ING.

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Medios de cultivo

Una vez que se ha definido el objetivo perseguido con el cultivo in vitro de un determinado explante, es necesario elegir un medio de cultivo apropiado de cultivo, el cual hay que considerar no solo sus componentes sino su preparacin

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Componentes del medio

Existen innumerables formulaciones cada una de las cuales contiene entre 15 y 35 compuestos qumicos. Carbono Nutrientes minerales Vitaminas Agente gelificante ( medios semislidos) Sustancias ING. ALONDRA OCOTL de reguladoras

A) B) C) D)

E)

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Fuente de carbono

Muy pocos cultivos in vitro son autotrofos, por lo tanto es necesario agregar al medio una fuente de carbono. La sacarosa (2%-5%) es el azcar que mas se utiliza.

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Nutrimentos minerales

Cualitativamente los medios de cultivo aportan los mismos elementos (macro y micronutrimentos) que se consideran esenciales para el crecimiento de las plantas.

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Vitaminas

Si bien los medios de cultivo contiene comnmente varias vitaminas, es probable que en forma general solo sea esencial la incorporacin de tiamina.

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Agente gelificante

En los medios semislidos comnmente se adiciona agar (0.6%1.0%). Se debe considerar la pureza del agar. Ya que es frecuente la presencia de impurezas de naturaleza variada.

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Reguladores de crecimiento
En algunos casos se obtiene en los cultivos in vitro las respuestas deseadas mediante el empleo de MB sin reguladores de crecimiento En el cultivo de meristemas es necesario agregar al medio sustancias reguladores de crecimiento, generalmente de tipo de las auxinas o las citocianinas.
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