CINTICA ENZIMTICA

La cintica de las reacciones catalizadas por las enzimas es muy similar a la de las reacciones en donde el agente catalizador no es protena, con excepcin de que las primeras exhiben el fenmeno de saturacin. La figura 6.10 nos ayudar a explicar saturacin. ayudar este concepto. En la grfica de la figura aludida se encuentra, como variable independiente, la concentracin de sustrato [S] y como variable dependiente la velocidad v 0 , de la reaccin. Hay que recordar que ya en captulos anteriores se ha definido a la velocidad de una reaccin como la cantidad de producto que se forma por unidad de tiempo.
v0

Vmax

1/2 Vmax

Figura 6.10 Grfica en la que se aprecia el efecto de la concentracin de sustrato [S], sobre la velocidad v0 de una reaccin catalizada por enzima.

Km

[S ]

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Este tipo de grficas se obtiene experimentalmente. Para ello, se disponen varios tubos en donde se coloca la mezcla de reaccin. Todos los tubos tienen la misma concentracin de enzima [E] y la temperatura, presin, y pH es idntica en todos los recipientes. Lo que vara en cada uno de los tubos es la concentracin de sustrato [S], la cual se va aumentando gradualmente. El tiempo inicial t 0, es el momento en que el sustrato entra en contacto con la enzima, inicindose as la reaccin, a la que se permite proseguir un determinado tiempo t n, (igual para todos los tubos), y al final la reaccin es detenida. A continuacin, por algn mtodo analtico, se mide cuantitativamente la cantidad de producto que se form en el lapso de t iempo t n , con lo que se puede obtener la velocidad de la reaccin en cada uno de los tubos. As se pueden agrupar parejas de puntos de concentracin de sustrato y velocidad: ( [ S ] , v 0 ), los cuales producen la grfica que se aprecia en la figura 6.10. C o n l os resultados de experimentos como el descrito y cuyos datos son representados en grficas como la de la figura 6.10, es como se ha llegado a la conclusin de que las reacciones enzimticas ocurren como se describe en la ecuacin 6.1 y la figura 6.1, en do nde se aprecia que la enzima E, reacciona con su sustrato S, para formar el complejo enzima - sustrato ES, el cual se disocia en la enzima E, mas el producto P.

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En la figura se han marcado con nmeros tres regiones de la grfica, la primera (1), se presen ta cuando se tienen bajas concentraciones de sustrato, en este intervalo se puede apreciar que a un aumento de la concentracin de sustrato, corresponde un aumento de la velocidad de la reaccin o sea que v 0 es directamente proporcional a [S]. A medida que sigue aumentando S, (2), la curva empieza a "doblarse" y aunque todava hay un aumento de v 0 , cuando aumenta [S], la relacin ya no es directamente proporcional. Cuando se llega a la fase 3, cuando se encuentran cantidades elevadas de sustrato, la velocidad ya no vara, por lo que se velocidad puede afirmar lo siguiente: a altas concentraciones de sustrato la velocidad de reaccin se hace independiente de [S] . Esto es lo que se observa experimentalmente, cmo podemos interpretar estos resultados?. La respuesta e s precisamente introduciendo el punto intermedio en la reaccin de la ecuacin y la figura 6.1, es decir la formacin de ES, antes de la obtencin del producto P. Este paso no existe en las reacciones que no son catalizadas por enzimas y, por lo tanto, la concentracin de reactivo es siempre directamente proporcional a la velocidad de la reaccin (su grfica proporciona una lnea recta en todas las concentraciones de reactivo).

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Para que se forme una molcula de ES, una partcula de S debe de chocar con otr a de E y esta colisin es completamente al azar, de tal manera que aumentando la concentracin (el nmero de molculas), se aumenta la probabilidad de que ocurra un choque y por lo tanto la formacin del complejo enzima sustrato. Figura 6.11.

Figura 6.11 Cintica enzimtica, cuando hay un nmero fijo de enzimas y una concentracin baja de sustrato (1), o cuando ste se encuentra a altas concentraciones. El sustrato se representa con las esferas y el producto con cubos.

Imagine el lector un nmero determinado y fijo de Imagine molculas de enzimas, recuerde que en el experimento se ha dejado constante la concentracin de enzimas ([E]), cuando hay pocas molculas de sustrato, con respecto a la cantidad de enzimas, la mayor parte de el las, en un tiempo determinado, van a estar en la forma libre E, muy pocas estarn unidas al sustrato formando el complejo ES. Figura 6.11.1. Cuando la concentracin de sustrato se hace mucho mayor que el nmero de enzimas, lo que va a ocurrir es que en cua nto una
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molcula de enzima se desocupa, debido a la formacin de producto, inmediatamente va a ser ocupada por un sustrato para formar ES, de tal forma que en estas condiciones, en un tiempo determinado, la concentracin de enzima libre va a ser muy baja y [ES] muy alta. (Figura 6.11.2) Se puede llegar a un punto en el que en cualquier momento todas las molculas de enzima existentes estn ocupadas por sustrato y entonces la velocidad de la enzima se hace mxima e independiente de la concentracin de sustra to (aunque la concentracin de sustrato aumente la velocidad de reaccin permanece constante).

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