ESCUELA PREPARATORIA FEDERAL POR COOPERACIÓN “SOR JUANA INÉS

DE LA CRUZ”, CLAVE: EMS-2/44

NOMBRE DE LOS INTEGRANTES DEL EQUIPO: García Magaña Fatima Griselda

García Orozco Miriam Jenny
Negrete Cruz Pedro Maximino
Vela Cruz Lizbeth
GRUPO: 402 MESA: 4 FECHA: 07/abril/2011

PACTICA NO. 4. “TECNICAS GENERALES DE TRABAJO EN EL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGÍA”

REPORTE DE LO REALIZADO EN EL LABORATORIO A LO

LARGO DE LA PRACTICA NÚMERO 4

a) Lunes 28 de marzo:

El profesor de laboratorio nos dio una breve explicación de los tipos de esterilización que
existen, los aparatos que se usan para la esterilización (autoclave: esterilización con calor
húmedo, y estufa: esterilización con calor seco), también nos indicó que para esterilizar
con el autoclave requeríamos de:
Un tiempo de 15 minutos de esterilización
Con una capacidad de 1.4kg/cm² de presión
A una temperatura de 121°C
Y para la esterilización con la estufa:
Un tiempo de 2 horas
A una temperatura de 160°C

Con base a la explicación que nos dio antes de la clase envolvimos 3 cajas de Petri en papel
manila, las sellamos con maskin tape y les pusimos nuestro nombre, grupo y número de
mesa. Posteriormente el profesor les pego una cinta testigo (nos indica cuando el material
ya está esterilizado).

b) Jueves 31 de marzo:

Durante este día preparamos el Agar para nuestros medios de cultivo, preparamos de dos
tipos:
Agar-Agar (de un color amarillo cerveza)
Agar Mc Conkey (de un color rojo intenso)
1.- Primero se lavó perfectamente con agua y jabón todo el material a utilizar y se secó de
la misma manera.

2.- Se pesaron 13g de Agar Mc Conkey y otros 13g de Agar-Agar (para cada agar se hizo
el mismo procedimiento por separado).
3.- El Agar se disolvió en 250ml de agua destilada, se vació en un matraz de 250ml y se
tapó el mismo.

4.- El agar se llevó al fuego hasta que llego a su punto de ebullición, cuando esto sucedió se
sacó del fuego y se dejó enfriar, para posteriormente llevarlo de nueva cuenta al fuego y
repitiendo el paso anterior, hasta que el Agar-Agar tomase un color amarillo cerveza y el
Agar Mc Conkey tomase un color rojo intenso.

Después de esto el profesor llevo el Agar a esterilizar en la autoclave durante 15 minutos a

121°C, para posteriormente vaciar los Agares en las cajas de Petri esterilizadas.

c) Lunes 4 de abril:

Nos fueron entregados los medios para cultivar, y realizamos el exudado faríngeo siguiendo
los siguientes pasos:
1. Se toma un depresor de lenguas de la punta saliente de la bolsa que lo
contiene (no se toca la parte que va a tener contacto con la muestra
biológica), y se realiza la misma operación con un hisopo; esto siempre se
realiza cerca del mechero.
2. Con el depresor de lengua se presiona la lengua, se localiza lo úvula y
precisamente a un lado de ella, con el hisopo se tocan suavemente las
amígdalas (donde se encuentran bacteria) intentando evitar contacto con la
lengua u otras zonas.
3. Con el hisopo, en uno de los medios para cultivar de Agar-Agar
depositamos la muestra extraída ( que en ese momento se convertirá en
nuestro inóculo); se debe tener mucho cuidado de no perder de vista la
localización del inóculo.
4. El depresor de lengua y el hisopo son depositados en una solución contra
restante.

Al término del exudad faríngeo comenzamos a hacer la estría cruzada en el medio de

cultivo:
1. Se acerca al mechero todo el material a utilizar (medio de cultivo y asa
bacteriológica), este mismo material no deberá de salir de un radio de 15cm del
mechero.
2. Esterilización del asa bacteriológica llevándola al mechero en la zona oxidante
hasta que obtenga un color rojo vivo (se deja enfriar por 3 segundos en lo que se
destapa el medio de cultivo)
3. Se destapa la caja (en este momento, ninguna persona debe de hablar) ya
localizado el inóculo, y se enfría el asa en una de las esquinas de nuestro medio; de
preferencia un poquito cerca del inóculo, y se comienza a hacer la estría.
4. Se repite el mismo procedimiento desde el paso número 3, con la diferencia de que
ahora no se partirá del inóculo, sino de la punta final de la última estría realizada,
así hasta hacer 5 estrías; se debe cuidar el no tomar más de 2 estrías.
Y en los otros dos medios de cultivo que nos quedaban (Agar Mc Conkey y Agar-Agar),
sembramos otros dos tipos de microorganismos de 2 medios de cultivo que nos fueron
entregados; de igual manera, por estría cruzada.
Cuando se terminaba de realizar el sembrado, cada caja era cerrada con maskin tape y se le
puso el nombre, el grupo y el número de mesa.

d) Frotis:

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o

cultivo con el objetivo de separar lo más posible los microorganismos.

Los pasos para hacer un frotis de bacterias son:

1. Coloca una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.

2. Flamear el asa bacteriológica, tomar una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en
medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa
bacteriológica hasta formar una suspensión homogénea que quede muy bien
extendida para facilitar su secado.
3. Esperar hasta que el líquido se evapore dejándolo secar, posteriormente pasar el
portaobjetos a la llama del mechero rápidamente 3 ocasiones (ten mucho cuidado de
no calentar demasiado el portaobjetos pues las células pueden deformarse o
romperse), palpa el porta objetos en tu mano, la muestra estará lista hasta que
nuestra mano pueda resistir el calor transmitido por el portaobjetos.

e) Diferencias entre una bacteria Gram+ y Gram-:

GRAM+:

Cuando se lleva a cabo la tinción de Gram las bacterias Gram positivas se tiñen de violeta
debido a que:
1. El cristal violeta tiene la función de teñir a la bacteria.
2. El lugol mete el colorante cristal violeta que no alcanzo a teñir de manera
completa y uniforme la bacteria.
3. El alcohol-acetona deshidrata la pared celular, cerrando así los poros
existentes en ella y atrapando al cristal violeta-yodo dentro de la pared
celular.
4. Al agregar la safranina ya no puede teñirse la bacteria con este colorante
porque su pared celular está cerrada.

GRAM-:

Cuando se lleva a cabo la tinción de Gram las

bacterias Gram negativas se tiñen de rojo o rosa
debido a que:
1. El cristal violeta tiene la función de teñir a la bacteria.
2. El lugol mete el colorante cristal violeta que no alcanzo a teñir de manera completa
y uniforme la bacteria.
3. El alcohol-acetona decolora la célula debido a que su pared celular es muy delgada
y es incapaz de retener el colorante cristal violeta-yodo.
4. La safranina colora nuevamente la bacteria dejándola de un color rosado o rojo. Se
queda de ese color puesto que ya no se decolora y tiñe de nuevo.